CC BY
40
Хлыбова С.В., Циркин В.И., Дворянский С.А., Ежов А.В., Роман В.В.
СОДЕРЖАНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОМ И ОСЛОЖНЕННОМ ТЕЧЕНИИ ГЕСТАЦИОННОГО ПРОЦЕССА ГОУ ВПО «Кировская ГМА Росздрава», ЦНИИ микробиологии МО РФ, г. Киров
Известно, что течение физиологической беременности с первых дней сопровождается комплексом адаптационных изменений в организме матери, направленных на поддержание гомеостаза с целью обеспечения роста и развития плода. Это касается деятельности сердечно-сосудистой (Серов
В.Н., Маркин С.А., 2003; Ауик Р., 2006), эндокринной
(Lacroix M. et al., 2002; Сидельникова В.М., 2004) и иммунной систем (Milasinovic L. et al, 2002; Aluvihare V, Betz A., 2006), а также функции клеток крови (Макацария А.Д. и др., 2002; Сидельникова В.М., Шмаков Р.Г., 2004; Ayuk P., 2006; Хлыбова С.В., 2007). В последнее время введено понятие нутритивной адаптации во время беременности (Saugstad L., 2004; McArdle H. et al., 2006), нарушение которой рассматривается как причина развития ряда акушерских осложнений - гестоза, плацентарной недостаточности, задержки развития плода (Серов В .Н., 2003; Сидорова И.С.. 2004; Ayuk P., Matijevic R., 2006; Myatt L., 2006). Кроме того, нарушение нутритивного статуса матери может способствовать формированию у потомства социально значимых заболеваний (артериальная гипертония, ожирение, сахарный диабет) во взрослой жизни, что позволило сформулировать теорию эмбрионального программирования (Gluckman P. et al., 2005; McArdle H. et al., 2006; Myatt L., 2006; Yamashita T. et al., 2006). В тоже время сведения о содержании свободных аминокислот (как основного элемента эмбрионального питания) в биожидкостях системы мать-плод, а также данные о физиологическом значении свободных аминокислот при неосложненном течении беременности и развитии акушерских осложнений, немногочисленны и противоречивы (Ribarova F. et al., 1996; Васильева О.В., Иванов В.П., 1999; Goodrum L.et al., 2003; Myatt L., 2006).
С учетом вышесказанного целью исследования явилось изучение содержания свободных аминокислот (АК) у женщин при физиологическом течении гестационного процесса и ряде акушерских осложнений. Была исследована сыворотка венозной крови 90 здоровых женщин и 151 женщины с экстрагенитальной (гипертоническая болезнь, синдром вегетативной дисфункции по гипертоническому типу) и акушерской патологией (гестоз, плацентарная недостаточность, угрожающие преждевременные роды, слабость родовой деятельности), а также сыворотка крови 15 новорожденных и околоплодные воды 10 рожениц (всего - 266 образцов биожидкостей). Формирование клинических групп осуществляли по общепринятым критериям. Содержание свободных АК определяли по стандартной методике (Бенсон Дж., Патерсон Дж., 1974) с помощью анализатора аминокислот LC5001 фирмы Биотроник (Германия), оснащенного автоматической системой обработки данных Cromatopac C-R3A фирмы Шимадзу (Япония). Пробы готовили по методу De Wolfe M. и соавторов (Бенсон Дж., Патерсон Дж., 1974). Элюирование АК, нанесенных на ионообменную смолу с помощью инъектора, осуществляли по программе разделения гидролизатов белков, задаваемой процессором анализатора. Расчет площадей пиков, определение концентрации и идентификацию АК осуществляли с помощью системы обработки данных С^3А, программирование которой проводили по результатам анализа стандартной смеси АК (фирма Сигма-олдрич)
для калибровки анализаторов AA-S-18 и A-2S08. Обработку данных проводили методом вариационной статистики и регрессионно-корреляционного анализа с помощью пакета прикладных программ «Primer of Biostatistics Version 4.03 by Stanton A. Glantz» (Гланц
С., 1999). Различия оценивали по критерию Стьюдента, считая их достоверными при р<0,05. С помощью регрессионного анализа, с применением программы «Биостат» рассчитывали коэффициент корреляции Пирсона и параметры уравнения линейной регрессии.
Анализ содержания 17 AK в сыворотке венозной крови матери показал (табл.), что при беременности и родах их содержание меняется. Содержание 15 AK из 17 снижалось при беременности. Это наблюдалось во всех триместрах (цистин, тирозин, аспарагин, серин, глутамин, глицин, валин, метионин) или в первых двух триместрах (аланин, фенилаланин, лизин), или только в одном триместре, в частности в I (гистидин, треонин) или во II (изолейцин и лейцин). Содержание двух AK возрастало при беременности, но этот рост носил транзиторный характер (повышение содержания триптофана наблюдалось в I триместре, аргинина - во II триместре). В родах содержание 13 AK из 17 достигало значений, характерных для небеременных женщин; содержание 4 AK (аспарагина, цистина, тирозина и триптофана) еще в большей степени снижалось (по сравнению с III триместром). Полагаем, что выявленные при беременности изменения в содержании AK в крови матери отражают не только утилизацию AK плодом, но и их участие в синтезе белка, процессах транспорта аммиака (аспарагин, аланин), а также свидетельствуют о роли свободных AK в регуляции физиологических функций организма матери. Так, снижение аспарагина, треонина, глутамина I триместре беременности с учетом данных об их способности активировать клетки иммунной системы (Goldstein G. et al., 1997; Reeds P. et al., 2000; Северин Е.С., 2003; Boelens P. et al., 2004; Cai G. et al., 2006), мы рассматриваем как проявление иммунологической толерантности, необходимой для вынашивания беременности. Постепенное восстановление уровня аланина по мере прогрессирования беременности, с учетом данных литературы (Dekker E. et al., 1997; Cetin I. et al., 2005; Lopez-Quesada E. et al., 2005), мы связываем с его участием в глюконеогенезе, интенсивность которого, как известно, при беременности возрастает. Существенный (в 2,2 раза) рост содержания аргинина во II триместре беременности, вероятно, отражает повышение потребности в нем как предшественнике синтеза NO, играющего, как показано в литературе (Хлыбова С.В. и соавт., 2007), важную роль в поддержании адекватного кровотока в системе мать-плод и в регуляции сократительной деятельности матки (СДМ). Изменение содержания ряда AK в родах отражает их участие в этом процессе. Так, снижение уровня триптофана (как компонента эндогенного сенсибилизатора b-адренорецепторов) приводит, по
нашему мнению, к активации СДМ. Кроме того, снижение уровня триптофана и цистеина отражает их использование в синтезе соответственно серотонина и окситоцина как основных стимуляторов СДМ в родах. Повышение содержание глицина в активную фазу I периода, с учетом данных литературы (Даниловой Е.И. и соавт., 1997; 8еШигашап Р. et а1., 2006), указывает на проноцицептивную роль глицина в схватках в родах.
Показано (табл.), что содержание 10 АК в сыворотке пуповиной крови здоровых доношенных новорожденных такое же, как и в сыворотке венозной крови роженицы (треонин, серин, глутамин, глицин, аланин, валин, изолейцин, тирозин, фенилаланин и триптофан), содержание 3 АК - выше (цистин, метионин, лизин), а содержание 4 АК - ниже (аспарагин, лейцин, гистидин и аргинин). В околоплодных водах, полученных в активную фазу неосложненных срочных родов, содержание большинства АК было ниже, чем в сыворотке крови матери; содержание тирозина и триптофана было таким же, в то время как содержание цистина и метионина было выше, что указывает на важную роль серусодержащих АК в жизнедеятельности плода.
Установлено, что содержание свободных АК в сыворотке крови матери при развитии акушерских меняется, а характер изменений определяется видом патологии. Так, при гипертонической болезни у беременных повышено содержание изолейцина, лейцина и тирозина, но снижено содержание триптофана. При синдроме вегетативной дисфункции снижено содержание треонина и аргинина. При водянке беременных повышено содержание триптофана и снижено содержание 12 АК (аспарагин, треонин, серин, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, гистидин). При гестационной гипертензии повышено содержание аспарагина, глутамина, тирозина, триптофана и снижено содержание цистина, лизина и аргинина. При угрожающих преждевременных родах увеличено содержание глутамина, валина, лейцина и триптофана, но уменьшено содержание цистина, тирозина и аргинина. При отдельных формах гестоза повышено содержание аспарагина, глутамина, лейцина, тирозина, триптофана и снижено содержание треонина, серина, аланина, цистина, валина, метионина, фенилаланина, лизина и аргинина. При отдельных формах плацентарной недостаточности (ПН) повышено содержание аспарагина, глутамина и триптофана и снижено содержание треонина, серина, аланина, валина, метионина, изолейцина, фенилаланина, лизина и аргинина; содержание цистина, тирозина и гистидина при одних формах ПН повышено, а при других -снижено. При слабости родовой деятельности повышено содержание аспарагина, тирозина, гистидина, триптофана и снижено содержание метионина.
В целом, при трех акушерских осложнения -водянке беременных, ПН с нарушением созревания
плаценты и ПН на фоне хронических урогенитальных инфекций (ХУГИ) наблюдается снижение большинства АК в крови матери (соответственно 12, 9 и 10 АК), что объясняется выходом АК в ткани (водянка), усиленным поступлением АК к плоду (ПН с нарушением созревания плаценты) или утилизацией микроорганизмами (ПН на фоне ХУГИ). Полагаем, что часть изменений в содержании АК при акушерской патологии отражает механизмы адаптации с участием АК (например, повышение гистидина при ПН, сопровождающейся гипоксией плода), а часть изменений является одной из причин развития патологии, т.е. проявлением дизадаптации (например, снижение аргинина при гестозе и ПН и повышение тирозина, гистидина, триптофана при СРД). Последнее подтверждается, в частности, результатами регрессионно-корреляционного анализа, согласно которым, ряд клинических показателей у женщин с гестозом и ПН зависит от уровня аргинина в крови. Так, с уменьшением содержания аргинина в сыворотке крови линейно повышается общая прибавка массы тела за беременность, значения АД, систолодиастолического отношения в артериях пуповины, протромбиновый индекс, гематокрит, содержание фибриногена и сахара крови и линейно снижаются такие параметры как время свертывания крови, содержание белка в крови, число эритроцитов, оценка
функционального состояния плода по данным КТГ, масса и длина новорожденного, его оценка по шкале Апгар, а также диаметр, толщина и масса плаценты.
Практически при всех видах изученной нами акушерской патологии наблюдалось повышение содержания триптофана. С позиций гипотезы о триптофане как участнике механизма создания иммунологической толерантности при беременности (Gutierrez G. et al., 2003; Platten M. et al. 2005), выявленное нами повышение содержания триптофана при гестозе, ПН, угрозе преждевременных родов мы расцениваем как следствие недостаточного использования триптофана в иммунологической защите, в частности, вследствие недостаточной активности индоламин-2,3-диоксигеназы. Такой подход согласуется с иммунологической теорией развития перечисленных осложнений. С точки зрения представлений о Р-адренергическом механизме, повышение содержания триптофана - это компенсаторный процессе, усиливающий эффективность активации Р-АР миометрия, миокарда и других образований.
В целом результаты исследования указывают на необходимость и важность оценки содержания свободных АК в сыворотке крови матери с целью мониторинга течения беременности, ранней диагностики акушерских осложнений и определения тактики их коррекции с помощью АК.
Таблица 1
Содержание аминокислот (М±т, мг/л) в сыворотке венозной крови женщин, СПК новорожденных и _____________________________________околоплодных водах_________________________________________
Аминокислота Группы
Сыворотка крови Воды
1 2 3 4 5 6 7
Число наблюдений 15 30 15 15 15 15 10
Срок гестации, нед. - 8,1±0,3 28,2±0,7 38,3±0,2 38,8±0,4 38,3±0,5 38,0±0,5
Аспарагин 19,37±2,25 7,44±0,69‘ 9,85±0,951-2 10,11±1,391 14,15±1,191-2-3-4 7,20±1,335 4,60±0,955
Треонин 24,31±2,08 18,14*1,29' 22,46±1,88 30,10±2,462,3 31,09±3,242,3 28,94±3,31 14,16±2,505,6
Серин 23,05±1,42 14,87±0,85‘ 14,32±1,35‘ 17,43±1,78‘ 20,38±1,742,3 21,19±2,79 6,03±0,765,6
Г лутамин 63,05±3,97 37,05±1,86‘ 37,37±1,57‘ 39,37±4,41‘ 68,65±7,762-3-4 72,05±8,64 16,41±2,725-6
Г лицин 17,19±0,98 11,92±0,561 11,73±1,241 12,32±1,33‘ 19,18±1,742,3,4 20,92±2,00 10,81±1,385,6
Аланин 26,54±1,63 18,70±1,35‘ 20,40±1,671-5 25,85±2,732 31,50±2,662 34,09±5,17 10,07±1,415-6
Цистин 6,75±0,42 3,03±0,36‘ 5,71±0,67 2,51±0,381-3 1,33±0,391-2-3-4 3,07±0,555 6,06±0,805-6
Валин 20,95±1,54 13,84±1,08‘ 14,71±1,38‘ 15,44±1,39‘ 24,39±3,852,3,4 18,62±2,21 9,22±1,255,6
Метионин 8,32±1,22 4,08±0,40‘ 4,99±0,60‘ 5,43±0,461-2 9,78±1,282-3-4 17,41±1,245 13,15±0,8856
Изолейцин 7,76±0,74 7,67±0,66 5,44±0,761,2,4 7,59±0,72 10,61±1,192,3,4 9,63±2,06 6,68±0,985
Лейцин 17,50±1,38 16,21±1,13 12,03±0,77‘ 16,95±1,363 18,98±1,973 11,69±1,365 12,10±2,615
Тирозин 15,34±0,79 11,30±0,811 13,24±1,18 10,01±0,601-3 12,26±1,21‘ 12,50±1,80 10,00±1,21
Фенилаланин 19,05±0,97 15,00±0,72‘ 14,99±0,96‘ 18,59±1,64 21,18±1,502,3 17,41±2,45 12,47±1,165
Г истидин 27,91±1,60 23,80±0,88‘ 25,28±1,32 25,33±1,67 26,41±2,37 17,41±1,245 13,15±0,8856
Триптофан 9,71±0,99 16,54*1,03“ 9,07±0,992 10,24±0,852 6,17±0,311-2-3-4 8,33±1,07 4,72±0,415-6
Лизин 26,36±1,83 20,85±0,94‘ 20,34±1,151 26,04±2,403 23,31±1,49 31,03±3,395 14,33±1,555,6
Аргинин 24,08±1,38 23,06±2,29 51,93±5,251-2-4-5 29,76±3,53 24,95±1,94 12,70±1,205 5,42±0,965-6
Примечание: 1 - небеременные женщины; 2,3,4 - женщины соответственно в I, II и III триместрах беременности; 5 и 7 - роженицы (I период); 6 - новорожденные (пуповинная кровь). 1’2’-6- достоверные (р<0,05 по Стьюденту) различия с соответствующей группой.
