Содержание некоторых цитокинов в сыворотке крови и оксипролина в моче при гломерулонефрите у детей Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Актуальн проблеми сучасно! медицини

УДК: 616 - 006.66 - 092.9:577.125

СОДЕРЖАНИЕ НЕКОТОРЫХ ЦИТ0КИН0В В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И 0КСИПР0ЛИНА В МОЧЕ ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ У ДЕТЕЙ

Гордеева А. А., Одинец Ю. В., Горбач Т. В.

Харьковский национальный медицинский университет

Обследовано 27 детей, больных различными видами ГН: 1) ОГН с изолированным мочевым синдромом, острый период; 2) ОГН с изолированным мочевым синдромом, ремиссия; 3) ХГН, нефро-тическая форма, период обострения; 4) ХГН, нефротическая форма, период ремиссии. Пятую группу составили здоровые дети. Установлено, что при ОГН в остром периоде значительно увеличено содержание ИЛ - 1соотношение ИЛ - /ТФР - $ возрастает, в моче достоверно повышено содержание оксипролина; в период ремиссии при ОГН уровень ИЛ - 1(1 значительно снижается, но остается выше контрольного уровня, достоверно увеличивается содержание ТФР - Р, в моче уровень оксипролина значительно снижается (однако, несколько выше, чем в контрольной группе); при ХГН в период обострения значительно увеличено содержание как ИЛ - 1$, так и ТФР - р, содержание оксипролина в моче детей практически не отличается от уровня его в контрольной группе; у детей с ХГН, в период клинико-лабораторной ремиссии соотношение ИЛ - 1Р / ТФР - р снижается за счет повышенного уровня ТФР - содержание оксипроли-на в моче в 1,7 раза ниже, чем в контрольной группе. Полученные данные позволяют сделать вывод, что снижение уровня оксипролина в моче свидетельствует о хронизации заболевания, увеличение соотношения между ТФР - $ и ИЛ - является фактором, способствующим увеличению синтеза основного вещества базальной мембраной.

Ключевые слова: гломерулонефрит, дети, цитокины, оксилролин.

Патологический иммунный ответ, вызывающий повреждение почечной ткани (клубочков, интерстиция и канальцев), нередко принимает хроническое течение и приводит к формированию гломерулосклероза - основе прогрессиро-вания почечной недостаточности. Механизм репарации почечной ткани в ответ на иммунное (или другой природы) повреждение интенсивно изучается, так же как и причины различий в исходах - восстановлении или фиброза. Развитие прогрессирующего почечного фиброза представляется сегодня сложной цепью событий, включающие в себя межклеточные взаимодействия гломерулярных и инфильтрирующих клубочки клеток крови [1]. Исследуются изменения функционального состоняния гломерулярных клеток: 1) развитие их пролиферации и избыточного накопления матрикса; 2) развитие гломерулосклероза из - за недостаточной утилизации избытка матрикса [2, 3].

Известно, что источником белков матрикса являются собственные клетки клубочков. Исследования in vitro выявили биосинтетический профиль этих клеток: мезангиальные клетки продуцируют коллаген I, II, IV и V тиопв, лами-нин, фибронектин, протеогликаны, эпителиальные клетки клубочков - чаще всего белки базальной мембраны, коллагены IV и V типов, ла-минин, протеогликаны [4]. По данным С. Ю. Бо-гомазовой и соавт. [5], хронизация гломеруло-нефрита сопровождается выраженным накоплением мезангиального матрикса за счет коллагена IV типа и ламинина. Современные представления о регуляции фиброгенеза позволяют предположить, что различие между заживлением с восстановлением нормальной структуры и

функции и развитием фиброза ткани являются следствием баланса между эндокринными, па-ракринными и аутокринными факторами, которые регулируют пролиферацию и синтетическую функцию фибробластов [6]. Особая роль в регуляции фиброгенеза принадлежит факторам роста: трансформирующий фактор роста, тромбо-цитарный фактор роста, основной фактор роста фибробластов, а также ИЛ - 1 р [7]. Известно, что характерной особенностью коллагена является то, что 12 - 14 % его аминокислотных остатков приходится на оксипролин - аминокислоту, не найденную в других белках животных тканей. Поэтому об интенсивности гидролиза коллагена можно судить по содержанию оксипролина в суточной моче. Однако, работ по изучению факторов, влияющих на содержание оксипролина в моче, и связи его уровня с количеством цитокинов нет.

Целью нашей работы явилось изучение содержания факторов, влияющих на обмен коллагена (ИЛ - 1 р и ТФР-р), в сыворотке крови и концентрации продукта гидролиза коллагена (оксипролин) в моче детей при различных видах ГН.

Материалы и методы

Обследовано 27 детей, находившихся на лечении в детской городской клинической больнице № 16 г. Харькова. Среди обследованных у 5 детей (4 мальчика и 1 девочка) диагностирован ОГН с изолированным мочевым синдромом (ИМС), период начальных кпинико-лабораторных изменений (без нарушения функции почек), у 6 детей (3 девочки и 3 мальчика) - ОГН с ИМС, период кпинико-лабораторной ремиссии. У 6 детей

* Работа является фрагментом плановой научно-исследовательской работы по теме: «Нефропатп у дтей з позицп раннього онтогенезу /' теоретичне обфунтування м<р проф!лактики».( № держреестрацп: 010би001638)

BtCHHK Украгнсъког медичног стожатологЬчног академш

(4 мальчика и 2 девочки) диагностирован ХГН, нефротическая форма с сохраненной функцией почек, период клинико-лабораторной ремиссии. У 5 детей (3 мальчика и 2 девочки) диагностирован ХГН, нефротическая форма, период обострения (функция почек сохранена). Длительность заболевания ХГН 5 - 7 лет. Диагноз поставлен в условиях стационара на основании данных кпини-ко-лабораторных исследований. Контрольную группу составили 5 детей (3 мальчика и 2 девочки), не имеющих заболевания почек. Возраст обследованных детей 6 - 11 лет.

Определение оксипролина проводили по методу Т. В. Замарева, спектрофотометрически: окисление оксипролина до соединения, близкого по строению к пирролу, последующая конденсация с пара - диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного в красный цвет продукта, колориметрия на СФ - 46 при Л = 558 нм. Определение содержания интерлейкина 1 р проводилась иммуноферментным методом с помощью наборов реагентов фирмы «Протеиновый контур» (Россия). Определение содержания ТФР - р производилось иммуноферментным методом с помощью наборов РРС (Германия). Кровь для исследования собиралась утром натощак из локтевой вены. Сыворотку получали по стандартной процедуре. Материалом для исследования была также моча больных ГН.

Результаты

Установлено, что у больных в периоде начальных проявлений ОГН с ИМС значительно увеличено содержание в сыворотке крови ИЛ -1р, уровень ТФР - р ниже, чем у детей контрольной группы (табл. 1), в моче достоверно увеличено содержание оксипролина (табл. 1). В период ремиссии при ОГН с ИМС уровень ИЛ -

Содержание некоторых цитокинов в сыво;

1р значительно снижается, но остается выше контрольного уровня, достоверно увеличивается содержание ТФР - р, в моче уровень оксипролина значительно снижается (однако, несколько выше, чем в контрольной группе). По-видимому, в начальном периоде ОГН с ИМС высокий уровень ИЛ - 1р при низком содержании ТФР - р связан с преобладанием гидролиза коллагена над синтезом, поэтому в моче увеличивается содержание оксипролина. В период ремиссии уровень ИЛ - 1р снижается, а ТФР - р увеличивается, что, по-видимому, связано с активацией процессов синтеза коллагена при снижении ( по сравнению с острым периодом) гидролиза коллагена. Наличие в моче увеличенного (по сравнению с физиологической нормой) количества оксипролина может свидетельствовать о том, что и в период ремиссии процессы гидролиза коллагена преобладают над синтезом.

У больных ХГН в период обострения значительно увеличено содержание в сыворотке крови как ИЛ - 1р, так и ТФР - р, по сравнению с физиологической нормой (контрольная группа, табл. 1). Содержание оксипролина в моче детей в этот период практически не отличается от уровня его в контрольной группе. У детей сХГН, нефротиче-ской формой в период кпинико-лабораторной ремиссии уровень ИЛ - 1р ниже, чем у детей контрольной группы, уровень ТФР - р почти в два раза выше, чем у детей контрольной группы, содержание оксипролина в моче в 1,7 раза ниже в сравнении с контролем. Можно предположить, что при обострении заболевания увеличивается распад коллагена, что связано с увеличением (по сравнению с периодом ремиссии) содержания оксипролина в моче. В период ремиссии при ХГН синтез коллагена преобладает над распадом.

Таблица 1.

з крови и оксипролина в моче детей при гломерулонефрите

Группы больных Содержание в сыворотке крови Содержание в моче оксипролина, мг/ сутки

ИЛ - 1(3, нг/ мл ТФР - (3, нг/ мл

ОГН с изолированным мочевым синдромом, острый период, п=5 18,43±1,35 *Pi <0,001 **P2<0,01 7,38±0,45 P1<0,001 155,16±6,22 P1<0,05

ОГН с изолированным мочевым синдромом, ремиссия, п=6 9,63±0,44 P1<0,02 39,64±2,11 P1<0,001 P2<0,001 137,16±10,03 P1<0,05 P2<0,05

ХГН, нефротическая форма, период обострения, п=5 10,48±0,97 Р1<0,001 Р2<0,001 29,67±1,03 P1<0,02 P2<0,01 109,62±7,45 P1<0,05 P2<0,02

ХГН, нефротическая форма, период ремиссии, п=6 3,42±0,17 P1<0,01 45,18±1,77 P1<0,001 67,24±1,68 P1<0,001

Контрольная группа 5,78±0,34 22,55±1,12 114,28±9,32

Примечание. *p-i - достоверность отличий по отношению к ко ремиссии.

По всей видимости, соотношение ИЛ - 1р и ТФР - р совместно с другими регуляторными факторами, не изучаемыми в данной работе, оказывает влияние на соотношение гидролиза и синтеза коллагена. Border W. A., Nolte W. A. еще в 1994 г. привели убедительные факты о центральной роли факторов роста в патогенезе

1ьной группе; **р2 - достоверность отличий по отношению к

прогрессирования почечной недостаточности [8]. В настоящее время известные эффекты ТФР - р можно разделить на 4 группы: 1) ТФР - р обладает антимитотическим действием, подавляя проферменты паренхиматозных и соединительнотканных клеток; 2) стимулирует продукцию коллагена и других белков, а также проте-

Актуальт проблеми сучасно! медицини

огликанов, которые формируют основное вещество соединительной ткани; 3) подавляет секрецию протеиназ, участвующих в ремоделирова-нии соединительной ткани; 4) стимулирует продукцию антиринов.

Роль ТФР - р при почечной недостаточности впервые изучена посредством Thy - 1 - модели мезангиопролиферативного ГН (7). В выделенных клубочках был повышен синтез коллагена и протеогликанов гломерулярными клетками. Добавление в культуральную среду антител против ТФР - р практически полностью подавляло синтез коллагена и протеогликанов, что свидетельствовало о регулировании ТФР - р синтеза компонентов соединительной ткани. Известно, что ИЛ - 1 р способствует активации апоптоза, гидролизу коллагена. Поэтому содержание его на уровне физиологической нормы при высоком уровне ТФР - р у детей с ХГН в фазу ремиссии можно рассматривать как показатель преобладания синтеза коллагена над его распадом, что в условиях ХГН несомненно является неблагоприятным прогностическим фактором.

Следует отметить наличие высокой корреляционной связи уровней оксипролина и ТФР - р (r=-0,75) и менее выраженной положительной корреляционной связи уровней ИЛ - 1 р и оксипролина (r = +0,57).

Проведенные нами исследования свидетельствуют о возможной диагностической ценности определения оксипролина в моче у детей при ГН. Однако, количество обследованных детей, не позволяет сделать достаточно документированное заключение. Предполагается дальней-

Реферат

BMICT ДЕЯКИХ ЦИТОК1Н1В В СИРОВАТЦ1 KPOBI ТАОКСИПРОЛ1НУВСЕЧ1 ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТ1УД1ТЕЙ

Гордеева А.А., Одинець Ю.В., Горбач T.B.

Ключов1 слова: гломерулонефрит, д1ти, цитокши, оксипролЫ.

Обстежено 27 д1тей, хворих рЬними видами ГН: 1) ГГН ¡з ¡зольованим сечовим синдромом, гострий перюд; 2) ГГН ¡з ¡зольова-ним сечовим синдромом, ремют; 3) ХГН, нефротична форма, nepiofl загострення; 4) ХГН, нефротична форма, nepiofl ремюп. П'яту грулу склали здоров1 д1ти. Встановлено, що при ГГН у гострому nepiofli значно збтьшений змют 1Л - 1р, сп1вв1дношення 1Л - 1р /ТФР - р зростае, у ce4i BiporiflHO пщвищений зм1ст оксипрол1ну; у nepiofl ремюп при ГГН р1вень 1Л - 1р значно знижуеться, але залишаеться вище контрольного р1вня, BiporiflHO збтьшуеться зм1ст ТФР - р, у ce4i р1вень оксипрол1ну значно знижуеться (однак, трохи вище, жж у контрольнш rpyni); при ХГН у nepiofl загострення значно збтьшений змютяк 1Л - 1р, так i ТФР - р, змют оксипролшу в ce4i д1тей практично не вщрЬняеться Bifl р1вня його в контрольна rpyni; у д1тей ¡з ХГН, у nepiofl кл1н1ко-лабораторноТ peMicii сп1вв1дношення 1Л - 1р / ТФР - р знижуеться за рахунок пщвищеного р1вня ТФР - р, змют оксипролЫу в ce4i в 1,7 рази нижче, н1ж у контрольна rpyni. Отримаж дан1 дозволяють зробити висновок, що зниження р1вня оксипролшу в ce4i свщчить про хрожзац1ю захворювання, збтьшення сп1вв1дношення м1ж ТФР - р i 1Л - 1 р е чинником, що сприяе збтьшенню синтезу ochobhoi речовини базальною мембраною.

Summary

CONTENTS OF CERTAIN CYTOKINES IN BLOOD SERUM AND OF OXIPROLINE IN URINE IN CHILDREN WITH

GLOMERULONEPHRITIS

Hordeyeva A.A., Odynets Yu.V., Horbatch T.V.

Key words: glomerulonephritis, children, oxyproline, cytokines.

27 children with various forms of glomerulonephritis (Gln) were inspected and distributed into 4 groups. 1st group was constituted by children with acute Gln and isolated urinary syndrome in acute condition; 2nd group included children with acute Gln and isolated urinary syndrome in remission; 3rd group included children with chronic Gln, its nephrotic form in acute condition; 4th group was represented by children with chronic Gln, its nephrotic form in remission. 5th group was formed by healthy children. It has been found out under acute Gln in acute condition 1p- IL contents were considerably increased, 1p- IL/TGF - p correlation was elevated, and urinary oxyproline was reliably increased as well. In remission under acute Gln IL- 1p significantly reduced, however, this was above the control level; TGF - p contents reliably grew, urinary oxyproline considerably lowered, but, nevertheless, was slightly higher than in control group. Under chronic Gln in acute period we may note the growth of both IL - 1p and TGP - p, while urinary oxyproline is the same as in health children. In children with chronic Gln in remission the IL - 1p / TGP - p ratio drops due to the increased TGP - p contents, urinary oxyproline is in 1,7 times lower as this in control group. Data obtained allow to conclude the urinary oxyproline decreasing proves the disease develops into chronic stage, and the TGP - p / IL - 1 p ratio increasing may be considered as a factor promoting the activation of basal substance synthesis with a basic membrane.

шее изучение вопроса, обследование детей с различными видами ГН, изучение содержания оксипролина в моче при моделировании ГН.

Полученные результаты позволяют сделать следующие выводы:

1) увеличение содержания оксипролина в моче при ОГН (в остром периоде и при ремиссии) и снижение его уровня в моче при ХГН дает основание предположить, что снижение уровня оксипролина в моче свидетельствует о хронизации заболевания;

2) фактором, способствующим увеличению синтеза основного вещества базальной мембраны, является увеличение соотношения между ТФР - ри ИЛ - 1 р.

Литература

1. Богомазова С. Ю., 1ванов А. А., Гладких О. П. Цитокины и внеклеточный матрикс при экспериментальных гломе-рулопатиях. //Архив патологии - 1997 - № 6.- С. 75 - 81.

2. Клшнна нефролопя (за редакцюю акад. АМН УкраТни, члена - кор. НАН УкраТни Л. А. Пирога) - Кшв: «Здо-ров'я».- 526 с.

3. Рябов С. И., Наточин Ю. В. Функциональная нефрология

- СПб, 1997 - 220 с.

4. Рябов С. И. Хронический гломерулонефрит // Клиническая медицина. - 1984. - № 1.- С. 24 - 30.

5. Тареева И. Е. Механизмы прогрессирования гломеруло-нефрита // Терапевтический архив. - 1996. - № 6. - С. 5

- 10.

6. Border W. A., Nolte N. A. Transforming growth factor - in tissue fibrosis. // New. Engl. J. Med. - 1994. - Vol. 331. - P. 1286 - 1292.

7. Couser W. G. Pathogenesis of glomerulonephritis // Kidney Int. - 1993. - Suppl.42 - P. 519 - 525.

8. Schene F. P. Cytokine networkand resident renal cells in glomerular deseases. // Nephrol. Dial. Transplant. - 1999. -№ 14. - Suppl. 1. - P. 22 - 26.