CC BY
34
ВЕСТНИК ВолГМУ
12
2004
В ткани почек, где изменения тканевого обмена липидов при ЭТ в целом сходны с тканью легких, за исключением относительно более высокого уровня липолитической активности, применение Тауфона вызывало весьма умеренные изменения в сторону нормальных показателей. Применение Эссенциале оказывало еще менее выраженное влияние.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При хроническом ЭТ применение Тауфона способно оказывать положительное влияние на тканевой обмен липидов, частично нормализуя состав липидов, активность липолитических ферментов и выраженность свободнорадикаль-ного окисления липидов. По своему эффекту он сопоставим, а по отдельным моментам превосходит метаболическое действие препарата Эс-сенциале. Положительные метаболические эффекты Тауфона наиболее активно проявляются в ткани печени и легких, в меньшей степени - в ткани почек.
ЛИТЕРАТУРА
1. Журавлев А.И. // Вопр. мед. химии - 1996. -№ 1. - С. 9-15.
2. Камышников В.С. Руководство по клинико-биохимической лабораторной диагностике. В 2 т. -Минск, 2000. - Т. 1. - 495 с.
3. Малахова М.Я. Метод оценки эндогенной интоксикации. - СПб., 1995. - 72 с.
4. Новочадов В.В. Патология липидного обмена при эндотоксикозе: Автореферат дисс. ... доктора мед. наук. - Волгоград, 2001. - 35 с.
5. Новочадов В.В. // Вестник Волгоградской медицинской академии. - № 7. - Волгоград, 2001. - С. 26-28.
6. Новочадов В.В. // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 1. - С. 113-114.
7. Фролов В.И., Жуков С.А., Новочадов В.В. Способ определения токсичности химических веществ: АС СССР № 1163264. - Опубл. 23.10.91. Бюлл. № 39.
8. Eppler B., Dawson R. Jr. // Biochem. Pharmacol. -2002. - Vol. 63, № 6. - P. 1051-1060.
9. Kim S.K., Kim Y.C. // Food Chem. Toxicol. -2002. - Vol. 40, № 4. - P. 545-549.
10. Sato S, Yamate J., Saito T, et al. // Naunyn. Schmiedebergs. Arch. Pharmacol. - 2002. - Iss. 365 (4). -P. 277-283.
Novochadov V.V. Disturbances of tissue lipid metabolism in chronic experimental endotoxicosis, and their correction by Taufon // Vestnik of Volgograd state medical University. - 2004. - № 12. - P. 10-12.
Modeling the endotoxicosis by chronic administration of low doses of bacterial lipopolysaccharide it was shown that Taufon (beta-sulfoaminoethane acid) might partially correct disturbances of tissue lipid metabolism. Taufon improved the alterations of lipid content, activity of lipases, and free radical oxidation in tissues of inner organs. liver, lungs, kidneys. Their metabolic effects were compared to Essenciale drug.
УДК 616.381-002.001.6-092:599.323
СОДЕРЖАНИЕ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 а В КРОВИ И ТКАНЯХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ У МЫШЕЙ
И.А. Фастова, И.Ф. Ярошенко
Кафедра патологической физиологии ВолГМУ
Как известно, интерлейкин-1 (ИЛ-1) продуцируется моноцитами, макрофагами, естественными киллерами, В-клетками, нейтрофила-ми, фибробластами, клетками Лангерганса, дендритными, эндотелиальными, синовиальными и гладкомышечными клетками. Они индуцируют лихорадку, анорексию, продукцию и секрецию других цитокинов и острофазных белков, экспрессию интегринов, хемотаксис грану-лоцитов [4].
Развитие острого гнойного перитонита, безусловно, сопровождается увеличением содержания ИЛ-1 в крови [6]. В то же время данные о содержании ИЛ-1 в других органах практически отсутствуют.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Провести сравнительное изучение содержания ИЛ-1 в различных органах и жидких средах у мышей при остром перитоните.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проводили под нембутало-вым наркозом на 25 белых мышах-самцах, средней массы 22,5 г, с соблюдением принципов гуманного обращения с лабораторными животными (приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77). Среди экспериментальных животных выделяли 5 групп. В контрольной группе были 4 интактные мыши, того же генотипа, пола и возраста. В остальных 4 группах было по 5 мышей. 2 группа была выведена из эксперимента через 1 час от начала опыта; 3-я - через 3 ч; 4 - через 6 ч; 5 - через 24 ч. Перитонит вызывали путем интраперитонеально-го введения 1 мл 7 %-й аутокаловой смеси с 1 каплей скипидара в физиологическом растворе [2, 5]. Биоптаты тканей массой 10 мг гомогенизировали на холоде и центрифугировали в пробирочном буфере при 2000 д в течение 10 мин [1, 3]. Для анализа отбирали супернатант. Кровь собирали в стеклянные пробирки без стабилизаторов при
12
2004
Таблица
Среда Контроль Время, ч
1 3 6 24
Сыворотка 40,91±2,06 137,30±10,11 * * * 71,02±7,92 * * 86,84±4,55 * * * 121,60±19,85 * * *
Печень 394,20±11,81 +++ 763, 8± 17,06 * * * +++ 2602±53,58 * * * +++ 2286±42,09 * * * +++ 2014±260,60 * * * +++
Легкие 247,8±1,88 +++ 403,70±15,27 * * * +++ 308,90±10,26 * * * +++ 236,60±19,05 +++ 489,90±37,59 * * * +++
Сердце 175,10±1,94 +++ 204,50±12,58 * * +++ 286,40± 16,74 * * +++ 202,40±14,57 * * +++ 190,80±12,19 * ++
Кишечник 279,10±9,50 +++ 384,50±41,41 * * +++ 636,60±49,20 * * * +++ 1185±75,97 * * * +++ 880,30±58,62 * * * +++
Примечание. Различия достоверны:
по сравнению с контролем*- р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001; по сравнению с сывороткой + - р < 0,05; ++ - р < 0,01; +++ - р < 0,001.
декапитировании животных. Образцы сыворотки, прозрачной мочи, супернатанты затем отбирали в пластиковые ампулы-эпендорфы в объеме 1 мл и хранили при -20 °С в течение суток. Содержание ИЛ-1 определяли в супернатантах и других биологических жидкостях тест-системой mouse ИЛ-11 ELISA Cat-№BMS611 (Bender MedSystems Diagnostics GmbH, Vienna, Austria) в контроле и через 1, 3, 6 и 24 часа с момента моделирования перитонита в иммунологической лаборатории железнодорожной больницы г. Волгограда (зав. - канд. мед. наук Э.Б. Белан).
Все выведенные из эксперимента и погибшие животные подвергались патологоанатоми-ческому исследованию.
Результаты обрабатывали статистически с помощью компьютерной программы "Biostat".
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Пять мышей погибло через 7-18 ч после моделирования перитонита. У выживших мышей, начиная с 6 ч от начала эксперимента, отмечали ухудшение общего состояния, адинамию, снижение выраженности безусловных рефлексов, в дальнейшем наблюдали дыхательную аритмию и отсутствие двигательного возбуждения в ответ на пальпацию вздутого живота. При патологоанато-мическом исследовании через 1-3 ч были выявлены гиперемия париетальной и висцеральной брюшины, вздутие петель кишечника, наличие мутного выпота, а у животных IV и V групп было отмечено наличие гнойного экссудата, гиперемия брюшины с наложениями фибрина и паретически вздутый кишечник.
Как видно из таблицы, у интактных животных содержание ИЛ-1а в тканях был достоверно выше, чем в крови, причем наибольшее количество его регистрировалось в печени. В легких и кишечнике содержание его, по сравнению с печенью, было уменьшено и практически одинаково.
Через 1 ч от начала эксперимента содержание ИЛ-1а достоверно увеличивалось во всех исследуемых средах, однако в наибольшей степени в сыворотке крови. Через 3 ч в сыворотке крови ИЛ-1а уменьшался, в то время как в печени резко увеличивался. Значительно, но в меньшей степени ИЛ-1а увеличивался в кишечнике. Через 6 ч продолжалось увеличение его в тканях кишечника, в то время как в печени он резко уменьшался. Снижение происходило и в остальных тканях, за исключением сыворотки крови, где он практически оставался на том же уровне. Через 24 ч содержание ИЛ-1а увеличивалось в сыворотке крови и в тканях легких.
Таким образом, если начало развития перитонита сопровождалось наиболее резким увеличением ИЛ-1а в сыворотке крови и тканях печени, то в дальнейшем через 24 ч наиболее активно содержание ИЛ-1а увеличивалось в легких, что свидетельствует о более поздней активации иммунологической активности легочной ткани по сравнению с тканью печени.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты исследований свидетельствуют о том, что начало развития перитонита сопровождается резкой активацией функций печени и поступлением ИЛ-1а кровь, в то время как через 24 ч происходит увеличение содержания ИЛ-1а в легких, что свидетельствует об усилении их иммунологической активности.
12
ВЕСТНИК ВолГМУ
ЛИТЕРАТУРА
1. Маркушева Л.И. Метаболизм предшественников нуклеиновых кислот при псориазе: автореферат док. биол. наук. - М., 1998. - С. 8-12.
2. Маслякова Г.Н. // Хирургия. - 2002. - № 1. - С. 21-23.
3. Саватеева М.В., Савина М.И., Маркушева Л.И. Самсонов В.А. // Бюлл. экспер. биол. и медицины. -2002. - Т. 134, № 8. - С. 202-204.
4. Тополян А.А. // Лаборатория. - 1999. - № 1. -С. 20-22.
5. Fantuzzi G., Dinarello C.A. // Eur. Cytokine Netw. -1998. - Vol. 9, № 1. - Р. 85-92.
6. Gurlich R., Maruna P., Peskova M. // Immunology. - 2000. - Vol. 79, № 12. - Р. 585-588.
Fastova I.A., Yaroshenko I.F. Interlenkine-1 content in blood and tissues duving experimental perifont+TS in mice // Vestnik of Volgograd state medical University. - 2004. - № 12. - P. 12-14.
In the experiments carried out on 25 white mice after modeling of acute peritonitis the quantity of IL-la in the blood serum, the tissues of the liver, lungs, heart and small intestines of intact animals and within 1, 3, 6 and 24 hours of modeling was determined. At the beginning of peritonitis the strong activation of liver functions and transport of IL-la were observed whereas 24 h later the quantity of IL-la in the lung tissue increased.
УДК 616.98:576.8.097.29/3
ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЭКЗОТОКСИНУ А СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ И ОЦЕНКА ИХ ПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ
М.А. Ободова, Н.П. Храпова, М.В. Ломтатидзе, Л.В. Ломова, В.М. Самыгин, Л.К. Жога
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт
Нозокомиальные инфекции остаются актуальной проблемой в стационарах во всех странах мира, несмотря на проведение регламентированных санитарно-эпидемиологических мероприятий и успехи в антимикробной терапии [6]. Одной из основных причин госпитальной инфекции с высоким уровнем летальности является синегнойная палочка. При этом антибактериальная терапия чаще всего недостаточно эффективна вследствие увеличения числа антибиоти-корезистентных штаммов Pseudomonas aeruginosa, что делает очевидной необходимость разработки новых средств профилактики и лечения синегнойной инфекции [5]. В связи с этим, обсуждается вопрос целесообразности возврата к идее применения специфических антител в качестве иммунопрофилактических и иммунотерапевтиче-ских средств. За рубежом исследования по оценке протективных свойств моноклональных антител (МКА) к различным антигенам P. aeruginosa проводят с середины 80-х годов. Протективная активность выявлена у ряда мышиных МКА к белку F наружной мембраны P. aeruginosa и человеческих МКА к липополисахариду (ЛПС) и экзотоксину А (ЭТА) P. aeruginosa [3]. Хотя экспериментальное моделирование может лишь частично воспроизвести клиническую ситуацию, настоящие эксперименты дают возможность уверенно говорить о целесообразности применения МКА в качестве дополнительного терапевтического средства при синегнойной инфекции [4].
В нашей стране подобные исследования не проводят ввиду отсутствия отечественных коллекций гибридом-продуцентов МКА против антигенов P.aeruginosa. В настоящее время в Волгоградском НИПЧИ создан набор гибридных клонов, продуцирующих мышиные МКА к водорас-
творимым антигенам клеток, ЛПС P.aeruginosa, проводится работа по получению МКА к ЭТА синегнойной палочки, изучению их свойств [1].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Получение моноклональных антител к экзотоксину А P.aeruginosa, оценке их протективных свойств на модели синегнойного сепсиса в эксперименте.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
В работе использовали типовой токсигенный штамм P.aeruginosa 103Р из коллекционного центра ВолгНИПЧИ, который выращивали методом глубинного культивирования в жидких питательных средах различного состава. Препарат экзотоксина А выделяли из жидкой среды культивирования методом осаждения белка ацетатом цинка и сульфатом аммония. В качестве источника иммунных спленоцитов, подкормочных клеток и резервуара для наращивания гибридомных клеток использовали мышей линии ВДЬВ/о. На этапе подготовки иммунных спленоцитов животных иммунизировали препаратами ЭТА. Схемы иммунизации инбредных мышей состояли из 3-4 инъекций антигена. При этом варьировали дозы, способы введения антигена и интервалы между инъекциями. Опыты по гибридизации иммунных спленоцитов и клеток мышиной миеломы осуществляли через 2-3 суток после бустирующей инъекции антигена.
Вторым партнером при гибридизации служили клетки мышиной миеломы P3-X63.Ag8.653 и Бр2/0 . Линии мышиных миеломных клеток P3-X63.Ag8.653 и Бр2/0 были получены из "Банка клеточных культур" института цитологии АН РФ (г. Санкт-Петербург).
