CC BY
327
УДК 615.322:582.736.3:547.587 '814.05.06:543
СОДЕРЖАНИЕ И СОСТАВ ПОЛИФЕНОЛОВ, КУМАРИНОВ АСТРАГАЛА СЕРЛ0ПЛ0ДН0Г0, ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В ПЯТИГОРСКОМ ФЛОРИСТИЧЕСКОМ РАЙОНЕ
В надземной части астрагала серпоплодного (А.]'а1са1ич1 лт) семейства бобовые РаЪасеае О.едиттасеае), произрастающего в Пятигорском флористическом районе, с использованием специфических реактивов были обнаружены оксикоричные кислоты, флаво-ноиды, кумарины. С использованием адсорбционной колоночной хроматографии на полиамиде и силикагеле были выделены кофейная, хлорогеновая, феруловая кислота, флавоноиды: 3>5>7>4'~ тетраоксифлавон (кемпферол), 3,5,7,з'4'-пентаоксифлавон (кверце-тин), кемпферол-3-глюкопиранозид (астрагалнн), кемпферол-3-о-Р-Б-галактопиранозид (трифолин), кверцетин-3-рутинозид (рутин), робинии, кемпферол-3-о-Р-рутинозил-7-о-а-Ь-рамнозид, из кума-рпнов: умбеллпферон, скополетин, скополнн, скимин.
Выделенные вещества были идентифицированы по данным физико-химического анализа (температура плавления, оптическое вращение, результаты кислотного, ферментативного гидролизов, УФ- и ИК-спектроскопии).
Ключевые слова: оксикоричные кислоты, флавоноиды, кумарины, УФ-, ИК-спектроскопия, кислотный и ферментативный гидролиз, температура плавления, экстракция, физико-химические свойства, количественное определение.
С целью выявления растений, наиболее перспективных по содержанию биологически активных веществ, мы продолжили изучение химического состава растений рода Астрагал, произрастающих в Предкавказье [1].
Изучение полифенольных соединений в растениях играет важную роль в выявлении их хе-мотаксономических признаков. Чаще всего в качестве биохимических признаков используется флавоноиды, оксикоричные, кумарины, с помощью которых успешно определяют видовую самостоятельность, а также систематику видового характера [2].
Растения рода Астрагал с давних времен привлекали к себе внимание исследователей. Так, грузинскими учеными было предложено для наработки полифенолов использовать только цветки астрагала серпоплодного, произрастающего в данной стране [3].
Целью настоящего исследования является изучение состава и количественного содержания оксикоричных кислот, флавоноидов, кумаринов в надземной части астрагала серпоплодного, произрастающего в Пятигорском флористическом районе, для разработки технологии получения сухого экстракта.
Материалы и методы. Сырье - надземная часть А.серпоплодного. Астрагал серпоплод-ный - A. FalcatusLam - многолетнее растение высотой 55-85 см, с непарноперистыми листьями, листочки продолговатые, 10-20 мм в длину, цветки поникающие, беловатые, со слабым пурпурным оттенком, собраны в продолговатые кисти.
Бобы сидячие, серповидно-изогнутые, кожистые. Цветет в июне-июле, плоды созревают в июле-августе [4].
Сырье собрано в 2010 году на южном склоне горы Верблюдка во время цветения.
Данный астрагал произрастает на остепненных склонах гор-лакколитов Пятигорья, на Ставропольской горе, в предгорном районе Предкавказья. Встречается на опушках и в окнах редких дубовых лесов, расположенных на южных склонах гор-лакколитов, а также среди зарослей кустарников. Гербарные образцы находятся на кафедре ботаники.
Выделение и разделение суммы биологически активных веществ на индивидуальные вещества проводили следующим образом (см. рис.).
Для получения биологически активных веществ 1,0 надземной части астрагала серпоплодного (7-10 см), собранного в фазу цветения и измельченного до 3-5 мм, экстрагировали 8о% этанолом, контакт-фаз - 3: 1-я - 1 час, 2-я - 40 минут, 3-я - 30 минут. Соотношение сырья и экстрагента 1:10 - 1:12, температура экстракции 6o-ó5°C, извлечение объединяли, экстрагент отгоняли, сгущали
Н.Н.ППКВД
Пятигорская государственная фармацевтическая академия
e-mail: guzhvanikolai@rambler.ru
до 1/3 объема и оставляли на холоде при температуре не выше 8 градусов на 2-3 суток. Выпаренный осадок отфильтровывали, фильтр промывали горячей водой [1].
Рис. Схема выделения кумаринов, оксикоричных кислот, флавоноидов
Сырье в экстракторе заливали горячей водой (1:10, затем 1:5 и вновь 1:5) и нагревали при 90-92°С - 3 раза время контакта по 1 часа. Извлечения объединяли, отфильтровывали, упаривали под вакуумом при температуре 45"50°С (разряжение 2,6*104 кг/мс2). Полисахариды и белковые вещества осаждали 3-кратным объемом 8о% этанолом, осадок отфильтровывали. Из профильтрованной жидкости отгоняли этанол, сгущали под вакуумом до 1/3 объема и объединяли с водной вытяжкой, полученной после отгона 8о% этанола. Очистку от липофильных веществ проводили отстаиванием и экстракцией пентаном, гептаном.
Для разделения БАВ из сгущенного извлечения нами была использована избирательная экстракция «жидкость-жидкость» различными специфическими растворителями: бензол, хлороформ, этилацетат, бутилацетат, бутанол [1].
Полученные извлечения изучали методом одно- и двумерной хроматографии на бумаге (Ленинградская марки «С», FN-ii) и на «Silufol» и «Сорбфил» в следующих системах растворителей: i) 15% уксусная кислота; 2) бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2); 3) хлороформ-формамид (3:1); 4) толуол-н-бутанол-вода (3:1:2); 5) н-гексан-бензол-метанол (5:4:1). Хроматограммы экстрактов просматривали в видимом и УФ-свете до и после проявления их различными реагентами. Индивидуальные оксикоричные кислоты и флавоноиды получали на колонке с полиамидным сорбентом и методом препаративной хроматографии на бумаге, кумарины - методом колоночной хроматогра-
фии на снлнкагеле и препаративной хроматографии с использованием ТСХ. Конфигурацию глико-зидных связей и величины окисных циклов в углеводной части флавоноидов определяли по результатам ферментативных и кислотных гидролизов и по данным УФ- и ИК-спектров. УФ-спектры снимали на спектрофотометре «Specord», ИК-спектры - на UR-20.
Были обнаружены: кумарины, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды, сапонины.
Идентификация кумаринов.
Индивидуальные вещества кумариновой природы выделяли из бензольной и хлороформной фракций, которые после отгона растворителей объединяли и выпаривали, получили ю,8 сухого объединенного экстракта, который наносили на колонку с силикагелем в соотношении i:io и элюи-ровали последовательно гексаном, смесью гексан-хлороформ, с увеличением концентрации хлороформа. Было выделено три вещества. На основании качественных реакций, хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента выделенные вещества отнесли к производным кумарина (у-пирона). Вещество Ki имеет синюю окраску до обработки ю% раствором гидроксида калия и аммиака в УФ-свете, а после обработки ярко-синюю.
Вещества К2 и Кз в УФ-свете имеют голубую окраску до обработки хромогенными реактивами и ярко-голубую после обработки [5].
При растворении данных веществ в растворах едких щелочей и последующем подкислении растворов выпадают осадки исходных соединений - и это характеризует их как лактоны кумариновой природы.
Таблица 1
Физико-химические свойства выделенных кумаринов
Кумарин Общая Тпл, Флюоресценция в УФ-свете Величина Rf в системах растворителей
формула оС до обработки 1096 р-ром КОН после обработки 1096 р-ром КОН Система Rf
К1 С9Н6О3 231-233 синяя ярко-синяя 1 3 0,63 (VíK
К2 C10H8O4 204-206 голубая ярко-голубая 1 3 0.51 О.^Н
кз C16H8O8 215-219 ярко-голубая усиление окраски 5 0,40
К4 C14H18O9 212-215 ярко-голубая усиление окраски 4 0,25
Вещество К1 - С9Н6О3 - белые игольчатые кристаллы, т. пл. 231-233°С (из СН3ОН). М 0.63 (система I), 0.38 (система 3). УФ-спектр (С2Н5ОН, Лтах, нм) 258, 326. При добавлении натрия ацетата наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы (240, 378 нм). ИК-спектр (КВг, и, см-1) 1616-1575, (-С=С-), 3300 (-ОН), 1718, (>С=0). На основании данных хроматографического анализа, температуры плавления, УФ- и ИК- спектральных характеристик, отсутствия депрессии, температуры плавления смешанной пробы со стандартным образцом вещество К1 было охарактеризовано как 7-гидроксикумарин - умбеллиферон.
Вещество К2- С10Н8О4 - белый кристаллический порошок с красноватым оггенком, т. пл. 204-20б°С (из СН3ОН). Я! 0.51 (система I), 0.58 (система 3). В УФ-спектре вещества имеются максимумы поглощения 256, 300, 315, 340 нм, если добавить натрия ацетат, то наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы (240, 378 нм). В ИК-спектре наблюдаются полосы поглощения при 1708 (>С=0), 3300-3350 см-1 (-ОН), 2930, 2845(-ОСНз).
При сравнении данных хроматографического анализа, температуры плавления, УФ- и ИК-спектральных характеристик, по отсутствию депрессии температуры плавления смешанной пробы со стандартным образцом вещество К2 было охарактеризовано как 7-гидрокси-б-метоксикумарин - скополетин.
Вещество Кз - С16Н8О8 - белые игольчатые кристаллы с т. пл. 215-219°С (из СН3ОН), растворяется в воде, метаноле, этаноле. [а]20Б - 84,50. В УФ-свете флуоресцирует ярко-голубым цветом, усиливающимся после обработки щелочью. УФ-спектр: (С2Н5ОН, лтах, нм) 250, 315 нм. ИК-спектр: зюо(ОН), 1725 (карбонил у-пирона), 1610 (Аг), 1580, 1520, 1460. При кислотном гидролизе образуется агликон с I пл. 230—231°С, имеющий на бумажной хроматограмме такую же подвижность, как и достоверный образец умбеллиферона. Хорошо растворим в этаноле, ацетоне, в этиловом эфире, нерастворим в воде. УФ-спектр: (С2Н5ОН, лтах, нм) 255, 324 нм. ИК-спектр агликона полностью идентичен таковому умбеллиферона. В углеводной части кислотного гидролизата бумажной хроматографией в системе «н-бутанол-вода-пиридин» (6:4:3) обнаружили глюкозу; проявитель — кислотный фталат анилина ^ 100-Ю5°С). Сопоставляя полученные нами данные с литературными, приходим к выводу, что вещество Кз представляет собой 7(3-глюкозид-умбеллиферона, или скимин.
Вещество К4 - С14Н18О9 - белые тонкие кристаллы-призмы с т. пл. 212-215°С (из СН3ОН), растворяющиеся в воде, метаноле и этаноле. В УФ-свете флуоресцирует ярко-голубым цветом. УФ-спектр: (С2Н5ОН, Лтах, нм) 285, 310 нм. После кислотного гидролиза выделили агликон в виде белых игольчатых кристаллов. Агликон на бумажной хроматограмме проявляется на уровне достоверного образца скополетина; с т. пл. 201-203°С, депрессии температуры плавления не показывает. УФ-спектр: (С2Н5ОН, лтах, нм) 300, 345 нм. В ИК-спектре отмечены полосы поглощения, характерные для скополетина. В сахарной части гидролизата с использованием БХ установили наличие глюкозы - проявитель - свежеприготовленный кислотный анилинфталат (И00-1050С). Сопоставляя полученные нами данные с литературными, приходим к выводу, что вещество К4 - 7(3-глюкозид-скополетина, или скополин.
Таблица 2
Кумарины, выделенные из астрагалов, и их физико-химические параметры
Индекс Вещество Брутто формула Топл. С УФ-спектр /.тах, нм Кислотный гидролиз Растворимость
агликон сахарная часть
К1 Умбеллиферон С9Н6О3 233 255, 324 В этаноле, ацетоне, этиловом эфире
К2 Скополетин С10Н8О4 202204 ЗОО, 315 В этаноле, ацетоне, этиловом эфире
КЗ Скимин С16Н8О8 215" 217 250, 315 умбеллиферон глюкоз а В воде, этаноле, метаноле
К4 Скополин С14Н18О9 218219 285, 310 скополетин глюкоза В воде, метаноле, этаноле
Выделение и идентификация оксикоричных кислот и флавоноидов.
Этилацетатное и бутилацетатное извлечения сушили безводным сульфатом натрия, фильтровали и затем отгоняли растворители. После отгона растворителей их объединяли. Сумму полифе-нольных соединений осаждали 3-5 кратным объемом «сухого» хлороформа, при этом выпадал осадок желтого цвета, который отфильтровывали на стеклянном фильтре №3 и высушивали при температуре 45-50°С в вакуум-сушильном шкафу. Сумма полифенольных соединений представляет собой порошок желтого цвета, легко растворимый в метаноле, этаноле, ацетоне, нерастворим в хлороформе.
Для подтверждения наличия флавоноидов и оксикоричных кислот полученный порошок (од г) растворили в 70% этаноле и исследовали методом одно- и двумерной хроматографии на наличие флавоноидов и коричных кислот с использованием бумажной (БХ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ)[1,6]
Для проведения БХ использовали бумагу РЫ-п, Ленинградская марки С, РЫ-6. Система растворителей для флавоноидов: н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2) (БУВ), 15% уксусная кислота. Для оксикоричных кислот - 2% уксусная кислота, БУВ. Хроматограммы высушивали и просматривали в видимом и УФ-свете. После высушивания обнаружили ю пятен, их отмечали, а затем обрабатывали парами аммиака; 5% раствором алюминия хлорида в этаноле и ю% раствором гидро-ксида калия в метаноле. Окраска пятен до обработки парами концентрированного раствора аммиака перешла от желтой до темно-коричневой. После обработки интенсивность увеличилась. А при обработке 5% раствором алюминия хлорида - от желтой до желто-зеленой. При обработке 10% раствором гидроксида калия - от желтой до оранжевой. По результатам проведенных качественных реакций 7 соединений были отнесены к флавоноидам, которые можно отнести как к агликонам, так и к гликозидам. Так как при проведении цианидиновой реакции до гидролиза суммы флавоноидов образуется красное окрашивание, которое частично переходит в октанол, что говорит о наличии как агликонов, так и гликозидов. При обработке пятен специфическими для коричных кислот реактивами Гепфнера, Паули, Шмитда на хроматограммах были обнаружены 3 оксикоричные кислоты [6].
Для выделения и идентификации отдельных фенольных соединений применяли разделение их суммы на колонке с полиамидным сорбентом или препаративное разделение хроматографиче-ское на бумаге в нескольких системах растворителей с последующей дробной кристаллизацией выделенных соединений. Полученную сумму полифенольных соединений (35,0 г) наносили на колонку с полиамидным сорбентом, активированным 1% раствором хлороводородной кислоты. Экстрагировали последовательно водой и этанолом с повышением концентрации последнего. Колонку про-
сматривали в УФ-свете, наблюдали четкие зоны разделения соединений на сорбенте, собирали отдельные фракции. Процесс элюирования контролировали хроматографией на бумаге в системах 2 и 1. Одинаковые фракции объединяли, растворитель полностью отгоняли, вещества перекристалли-зовывали из метанола, этанола.
Вещества анализировали после высушивания в вакуум-эксикаторе (1,з»Ю4Н/м2) при температуре 1150С над Р2О5 в течение 12-14 часов. УФ-спектры выделенных индивидуальных веществ сняты на спектрометре СФ-56 в кювете с толщиной слоя ю мм. В качестве растворителя использовали метанол и 95% этанол. Температуру плавления веществ определяли на блоке Кофлера [1].
ИК-спектры соединений сняты в таблетках бромида калия на спектрофотометрах UR-20 «Specord» (с призмами NaCl и NaF в области 800-3600 см-i, концентрация вещества 0,5%).
Удельное вращение гликозидов флавоноидов определяли на колориметре круговом «модель СМ» в кюветах с рабочей длиной 0,5 дм.
С целью установления качественного состава агликонов, которыми представлены флавоно-идные гликозиды, проводили кислотный гидролиз 1-10% H2SO4, 50% НС1. Для доказательства (определения количества свободных гидроксильных групп) вещества подвергали ацетилированию свежеперегнанным уксусным ангидридом в присутствии натрия ацетата и метилированию диме-тилсульфатом в присутствии безводного калия карбоната, а затем молекулярный вес полученных веществ определяли по методу О.Расте и определяли температуру плавления. Для доказательства гликозидной связи проводили ферментативный гидролиз с использованием ферментного препарата из гриба Aspergillusoryzae и (3-глюкозидазой и эмульсином [2].
При сравнении хроматографической подвижности достоверных образцов свидетелей и пятен из флавоноидов были обнаружены: з,5,7,4'-тетраоксифлавон (кемпферол), 3,5,7,34'-пентаоксифлавон (кверцетин), кемпферол-3-глюкопиранозид (астрагалин), кемпферол-з-о-(3-Б-галактопиранозид (трифолин), кверцетин-3-рутинозид (рутин), робинии, кемпферол-3-0-(3-рутинозил-7-о-а-Ь-рамнозид.
Вещество Ai - вещество желтого цвета, t пл. 194-196^ (из СН3ОН), УФ-спектр (С2Н5ОН, Атах, нм) 217, 234, 299ПЛ, 235 нм, (CH3COONa, Атах, нм) 310, 280; (CH3C00Na+H3B03, Атах, нм) 320, 295, (AICI3, Л in ах, нм) 350, 290. (C2H50Na, Лтах, нм) 360, 240, 315ПЛ. Элементный анализ: найдено % С - 60,04, Н - 5,45; вычислено % С - 59,67, Н - 5,02; Rf - 0,83 (система I), 0,28 (система III). ИК-спектр (КВг, и, см-i): 3400, 3235, 2975 (ОН), 1647, 1630 (>С=0), 1607, 1540 (Аг), 88о, 86о (замещенный бензол). Ацетилпроизводное имеет температуру i83-i87°C. Щелочное плавление дает про-токатеховую кислоту с температурой плавления 201-203°С. Температура плавления полученного вещества соответствует температуре плавления кофейной кислоты. Также не наблюдается депрессии температуры плавления. Сравнивая полученные данные с литературными, вещество Ai идентифицировано как кофейная кислота.
Вещество А2 - С16Н18О9, т. пл. 203-20б°С (из СН3ОН), УФ-спекгр (С2Н5ОН, лтах, нм) 325,300, 246. (CH3COONa, лтах, нм) 330, 248; (CH3C00Na+H3B03, Атах, нм) 350, 330, 255. (AICI3, Лтах, нм) 360, 315, 240. (C2H50Na, Лтах, нм) 380, 260. Элементный анализ: найдено % С - 53,87, Н - 5,01; вычислено С - 54,52, Н - 5,08. Rf - 0,63 (система I), 0,66 (система III). ИК-спектр (КВг, и, см-i) 2970, 2900, 278о(ОН), 1740-1710 (сложноэфирная группировка), 1660,1б25(>С=0), 1б05-1550(Аг), 840 (замещенный бензол). Щелочной гидролиз приводит к образованию кофейной кислоты (т. пл. 194-19б°С) и D-хинной кислоты (т. пл. i82-i84°C). На хроматограмме смешанная проба вещества А2 и хлорогеновой кислоты дает одно пятно, также не наблюдается депрессии температуры плавления вещества А2 и хлорогеновой кислоты. Данное вещество идентифицировано как хлорогеновая кислота.
Вещество A3 - С10Н10О4, т. пл. 1б7-1б8°С(из МеОН), УФ-спектр (EtOH, Атах, нм): 319, 234, 325, 300, 246, (CH3C00Na, Атах, нм) 310, 280; (CH3C00Na+H3B03, Атах, нм) 345, 230. (AICI3, Лтах, нм) 345, 230. (C2HsONa, Лтах, нм) 342, 245. Элементный анализ: найдено % С - 61,12, Н -4,98; вычислено С - 61,86, Н - 5,15. Rf - 0,34 (система I), 0,87 (система II). ИК-спектр (КВг, vmax, см-l): 3100-2995 (-ОН), 1б90-1бб0(С=0), 1600,1575,1540 (-С=С- Аг-кольца), 1225,1190,1130 (-СН3). При щелочном сплавлении образуется з-метокси-4-оксибензойная кислота. Не наблюдается депрессии температуры плавления вещества A3 и феруловой кислоты. Данное вещество идентифицировано как феруловая кислота.
Вещество Fi - С15Н10О6, т. пл. 273-275°С (из СН3ОН), УФ-спектр (С2Н5ОН, Атах, нм) 368, 267 нм; (CH3C00Na, Атах, нм) 380, 273; (CH3C00Na+H3B03, Атах, нм) 365, 267. (AICI3, Атах, нм) 425, 274; (А1С1з»НС1, Атах, нм) 425, 273; (C2HsONa, Атах, нм) 408, 276. Элементный анализ: найдено % С - 62,48, Н - 3,25; вычислено % С - 62,58, Н - 3,48. Rf - о.82(система I), 0.08 (система II). ИК-спекгр (КВг, и, см-i) 3340(ОН), i66o(>C=0), 1615, 1570, 1515(Аг), 810, 840 (п-замещение в кольце "В"). При щелочном плавлении образуется флороглюцин и п-оксибензойная кислота (т. пл. 210-212°С). На основании полученных данных и данных литературы вещество Fi идентифицировали как 3,5,7,4'-тетраоксифлавон (кемпферол).
Таблица 3
Качественные исследования оксикоричных кислот на бумажных хроматограммах со специфическими реактивами
Окраска пятен при действии
В-во УФ-свет УФ-свет и КОН 0,5н в Реактив Реактив 396 FeCl3 Реактив
NH4OH СН3ОН Гепфнера Паули в С2Н5ОН Милона
Al светло- усиление красно- красно- коричневая серо- желтая
голубая окраски коричневая окраска коричневая зеленая
А2 голубая зеленая красная желто-коричневая желто-коричневая зеленая -
A3 голубовато-фиолетовая ярко-голубовато-фиолетовая желто-коричневая желто-коричневая фиолетовая коричневая желтая
Вещество F2 - С15Н10О7, т. пл. 3io-3i2°C (из СН3ОН), УФ-спектр (С2Н5ОН, Хтах, им) 372,
264, 256 им; (СНзСОСШа, Хтах, им) 384, 374; (СНзСОСШа+НзВОз, Хтах, им) 390, 259. (AICI3, Хтах, им) 458, 252; (А1С1з»НС1, Лтах, им) 430, 271 (C2HsONa, Лтах, им) 333, 270. Элементный анализ: найдено % С - 59,36, H - 2,83; вычислено % С - 59,61, H - 3,33. Rf - 0,б4(система I), 0,04 (система II). ИК-спектр (КВг, и, см-i) 3380, ззоо(ОН), i66s(>C=0), 1615, 1565, 1515 (Ar), 815, 840 (п-замещение в кольце "В"). При щелочном плавлении образуется флороглюцин, протокатеховая кислота (т. пл. 201-203°С). Ацетилирование дает вещество с т. пл. 19б-197°С. Метилирование дает вещество с т. пл. 152-153°С. Не наблюдалось депрессии температуры плавления вещества F2 и достоверного образца кверцетина. Вещество идентифицировали как з,5,7,з'4'-пентаоксифлавон (кверце-
Вещество F3 - С21Н20О11, т. пл. 178-i8o°C (из СН3ОН), УФ-спектр (С2Н5ОН, Хтах, нм) 357, 255, 32б нм; (СНзСОСШа, Хтах, нм) 380, 275; (CH3C00Na+H3B03, Хтах, нм) 349, 267. (AICI3, Хтах, нм) 397, 275; (А1С1з»НС1, Лтах, нм) 387, 275; (C2HsONa, Лтах, нм) 401, 275. Элементный анализ: найдено % С - 56,43, H - 4,12; вычислено % С - 56,25, H - 4,46. [a]20D= -560 (с o.i; ДМФА), Rf -0,72(система I), 0,43 (система II). ИК-спектр (КВг, и,см-1) 3425, 3i8o(OH), 1665 (>С=0), 1610, 1575, 1510, 1455(Аг), 1095,1055,1030, 902, 885 (сахарный компонент), 815, 835 (п-замещение в кольце "В"). При кислотном (i% H2SO4) и ферментативном (Aspergillusoryzae) гидролизе образуется кемпферол и D-глюкоза, что было доказано БХ с использованием достоверных образцов свидетелей. На основании полученных данных вещество F3 идентифицировали как кемпферол-3-глюкопиранозид (аст-рагалин).
Вещество F4 - С21Н20О11, т. пл. 229-231°С (из МеОН), УФ-спектр (EtOH, Хтах, нм): 359, 257, [a]2iD -45,1 (с 1,00 МеОН). В результате кислотного гидролиза получили агликон кемпферол и D-галактозу. Данное вещество идентифицировали как кемпферол-з-о-Р-Б-галактопиранозид (трифо-лин).
Вещество F5 - С21Н30О16, т. пл. 190-192°С (из СН3ОН), УФ-спектр (С2Н5ОН, Хтах, нм) 256, 264ПЛ, 355 нм; (CH3C00Na, Хтах, нм) 391, 273; (CH3C00Na+H3B03, Хтах, нм) 270, 362. (AICI3, Лтах, нм) 416, 276; (А1С1з»НС1, Лтах, нм) 394, 272 (C2HsONa, Лтах, нм) 411, 274. Элементный анализ: найдено % С - 53,10, H - 5,20; вычислено % С - 53,11, H - 4,92. Rf - 0.45 (система I), 0.51 (система II). ИК-спектр (КВг, и, см-i) 3595, 3400(ОН), i66o(>C=0), 1605, 1575,1510 (Ar), 1085,1062,1025, 980, 900 (сахарный компонент), 815, 840 (п-замещение в кольце "В"). При жестком кислотном гидролизе 10% H2SO4 образуется кверцетин и рутиноза (т. пл. 187-1880С). При кислотном гидролизе 1% H2SO4 (ступенчатый гидролиз) образуется кверцетин (т.пл. 312-3130С), D-глюкоза, L-рамноза, что было подтверждено БХ с достоверными образцами свидетелей. Ферментативный гидролиз дал кверцетин, D-глюкозу и L-рамнозу. Идентифицировано как рутин (кверцетин-3-рутинозид).
Вещество F6 - С33Н40О19, т. пл. i88-190°C (из МеОН), УФ-спектр (EtOH, Хтах, нм): 350,
265. [a]2iD -120,40 (Руг, EtOH). При кислотном гидролизе получили агликон кемпферол, рамнозу и робинозу, идентифицированные методом хроматографии на бумаге. На основании полученных данных вещество F6 идентифицировали как робинии.
Вещество F7 - С33Н40О19, т. пл. 190-194°С, [a22D]-6i,70 (с од; этанол), УФ-спектр (EtOH, Xmax, нм): 350, 260; (Zr(N03)4) 360, 270; (гг(Шз)4+лимонная кислота) 345, 260; (C2HsONa) 395, 270. ИК-спектр (в вазелиновом масле) 3600-3200 (ОН), 1610-1600 (у-пирон), 1380 (-СН-), 920, 980 cm-i(-CH-CH-). При кислотном гидролизе образуется агликон кемпферол, а в сахарной части обнаруживается D-глюкоза и L-рамноза. Ферментами расщепляется до монозида - кемпферол-7-рамнозида и биозы, идентичной рутинозе.
По полученным результатам вещество ¥7 идентифицировали как кемпферол-з-о-(3-рутинозил-7-о-а-Ь-рамнозид.
Таблица 4
Качественные исследования флавоноидов на бумажных хроматограммах со специфическими реактивами
В-во Окраска пятен
До обработки После обработки в УФ-свете
В видимом свете В УФ-свете Конц. р-р МН3 5% р-рА1С1з в с2н5он КОН 1096 в сн3он Р-в Херхаммера
До гидролиза После гидролиза
Fl бледно-желтая желто-зеленая желтая желто-зеленая ярко-желтая + +
f2 бледно-желтая желтая желто-зеленая ярко-желтая желтая + +
F3 бледно-желтая коричневая желтая желто-зеленая оранжевая - +
F4 бледно-желтая коричневая желтая желто-зеленая оранжевая - +
f5 бледно-желтая коричневая желто-зеленая желто-зеленая оранжевая - +
f6 бледно-желтая коричневая желтая желто-зеленая оранжевая - +
f7 бледно-желтая коричневая желтая желто-зеленая оранжевая - +
Количественное содержание кумаринов определяли в пересчете на умбеллиферон. Оно составило 0,47%. Содержание оксикоричных кислот в пересчете на кофейную кислоту - 3,2%, содержание флавоноидов в пересчете на робинии составило 2,57%.
Выводы:
1. Проведено фитохимическое исследование надземной части астрагала серпоплодного, произрастающего в Пятигорском флористическом районе. С использованием колоночной и препаративной хроматографии были выделены и идентифицированы: кофейная, хлорогеновая, феруло-вая кислота, флавоноиды: з,5,7,4'-тетраоксифлавон (кемпферол), з,5,7,з'4'-пентаоксифлавон (квер-цетин), кемпферол-3-глюкопиранозид (астрагалин), кемпферол-з-о-Р-Б-галактопиранозид (трифо-лин), кверцетин-3-рутинозид (рутин), робинии, кемпферол-3-0-Р-р\тинозил-7-о-а-Ь-рамнозид, из кумаринов: умбеллиферон, скополетин, скополин, скимин.
2. Количественное содержание кумаринов в пересчете на умбеллиферон составило 0,47%. Содержание оксикоричных кислот в пересчете на кофейную кислоту - 3,2%, содержание флавоноидов в пересчете на робинии составило 2,57%.
3. На основании полученных данных надземная часть астрагала серпоплодного, произрастающего в Пятигорском флористическом районе, может быть использована для наработки сухого экстракта.
4. Данные соединения из надземной части астрагала серпоплодного, произрастающего в Пятигорском флористическом районе, были выделены впервые.
Литература
1.Гужва, H.H. Биологически активные вещества астрагала эспарцетного, произрастающего в Предкавказье / H.H. Гужва // Химия растительного сырья - 2009.- № 3. - с. 123-132.
2. Клышев, Л. К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина //Алма-Ата : Наука, 1978.- 219 с.
3. Алания, М.Д. Флавоноиды и циклоартаны астрагалов, произрастающих в Грузии : автореф. дис. ... д-ра фарм. наук / М.Д. Алания.- Харков, 1990.- 41 с.
4. Гроссгейм, A.A. Растительные богатства Кавказа / A.A. Гроссгейм. - М.: Медицина, 1952- -486 с.
5. Гужва, H.H. Кумарины Astragalusasper / H.H. Гужва // Химия природных соединений. - 2008.- № 6.
6. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растения, их эфиры и гликозиды / В.А. Бандюкова // Химия природных соединений. - 1983. - № 3. - с. 263-273.
CONTENT AND COMPOSITION OF POLYPHENOLS, COOMARINES OF ASTRAGALOS FALCATOS, GROWING IN THE PYATIGORSK FLORISTIC DISTRICT
N.N. GUZHVA
Piatigorsk State Pharmaceutical Academy
e-mail: guzhvanikolai@rambler.ru
Oxycinnamon acids, flavonoids, coumarines were found by means of the specific reagents in the upground part of astragal falcum (A. Falca-tus Lam) of Fabaceae family (Leguminaceae), growing in the Pyatigorsk Holistic district. With the application of adsorbcionic column chromatography on the polyamide and silicagel we separated cofeinic, chlorogenic, ferulic acids, flavonoids: 3,5,7,4'-tetraoxyflavon (cempferol), 3,5,7,34'" pentaoxyflavon (quercetin), cempferol-3-glucopyranosid (astragalin), cempferol-3-o-P-D-galactopyranosid (trifolin), quercetin-3-rutinosid (rutin), robinin, cempferol-3-o-P-rutinosil-7-o-a-L-ranmosid, from the cou-marins: umbelliferon, scopoletin, scopolin, scimin.
Separated substances were identified by the data of physico-chemical analysis (temperature of melting, optical spin, results of acidic, enzymatic hydrolisis, UV-, and IR-spectroscopy).
Key words: oxycinnamon acids, flavonoids, coumarines, UV-, IR-spectroscopy, acidic and enzymatic hydrolisis, temperature of melting, extraction, physico-chemical properties, quantitative determination.
