CC BY
68УДК 615.322.015: 665.526.8 https://doi.org/10.29296/25877313-2021-03-04
© Коллектив авторов, 2021
СОДЕРЖАНИЕ И АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ
В ТРАВЕ ТИМЬЯНА МАРШАЛЛА И ТИМЬЯНА ПОЛЗУЧЕГО
A.C. Шереметьева
ст. преподаватель, кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники,
Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского (г. Саратов, Россия)
E-mail: [email protected]
A.B. Фролкова
студентка,
Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского (г. Саратов, Россия) E-mail: [email protected] О.Г. Шаповал
ст. преподаватель, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии, Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского (г. Саратов, Россия) E-mail: [email protected] H.A. Дурнова
д.б.н., доцент, кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники,
Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского (г. Саратов, Россия) E-mail: [email protected] М.А. Березуцкий
д.б.н., профессор, кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники,
Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского (г. Саратов, Россия)
E-mail: [email protected]
Эфирные масла представителей рода тимьян (Thymus L.) характеризуются высокой вариабельностью качественного состава и количественного содержания, а также разнообразием биологической активности, что обуславливает актуальность их изучения. Цель работы - сравнительный анализ содержания эфирного масла в траве тимьяна Маршалла (Thymus marshallianus Willd.) и тимьяна ползучего (Thymus serpyHum L.) и изучение антимикробной активности паров их эфирных масел. Объектами исследования явились трава тимьяна Маршалла и трава тимьяна ползучего. Измерение количественного содержания эфирного масла проводили перегонкой с водяным паром. Антимикробную активность эфирных масел изучали в отношении стандартных штаммов трех видов: Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus FDA 209P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Статистическую обработку проводили при помощи пакета программного обеспечения StatSoft «Statistica» 10.0. Установлено, что содержание эфирного масла в траве тимьяна Маршалла превышало аналогичные показатели у тимьяна ползучего в 3 раза (1,00±0,11 и 1,81±0,19% против 0,22±0,07 и 0,62±0,20%) и варьировалось в зависимости от кпиматогеографиче-ских условий произрастания.
Изучение антимикробной активности показало, что оба испытуемых эфирных масла полностью подавили видимый рост бактерий при его наличии в контрольных вариантах штаммов Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus FDA 209P в течение всего периода инкубации. В отношении Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 отмечен видимый рост в присутствии каждого из эфирных масел.
Ключевые слова: эфирное масло, тимьян Маршалла, тимьян ползучий, антимикробная активность.
Для цитирования: Шереметьева А.С., Фролкова А.В., Шаповал О.Г., Дурнова Н.А., Березуцкий М.А. Содержание и антимикробная активность эфирных масел в траве тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2021;24(3):27-32. https://doi.org/10.29296/25877313-2021-03-04
Род тимьян (Thymus L.) - один из наиболее крупных в семействе Lamiaceae. Основными химическими составляющими растений этого рода являются эфирное масло, фенольные соединения,
тритерпеновые соединения, полисахаридные комплексы, минеральные элементы, аминокислоты, карбоновые кислоты [1, 2]. Для терапевтического применения из растительного сырья, обогащенно-
го эфирными маслами, как и из других лекарственных растений, часто готовят экстракты, но эфирные масла можно использовать самостоятельно, например ингаляционно [3, 4].
Эфирные масла представителей рода тимьян характеризуются высокой вариабельностью качественного состава и количественного содержания. Колебания наблюдаются как внутри видов, так и между ними, и зависят от климатогеографических условий произрастания растений, времени сбора, условий сушки, хранения и т.д. [2, 5-7]. В связи с этим установление количественного содержания эфирных масел в растительном сырье, произрастающего на территории региона, является важной задачей.
Тимьян ползучий (Thymus serpyllum L.), являющийся официнальным видом, на территории Саратовской области встречается в качестве редкого заносного вида и ресурсного значения в регионе он не имеет [6]. Наиболее распространенным на территории Саратовской области является тимьян Маршалла (Thymus marschallianus Willd.) -перспективный вид для расширения ресурсного потенциала представителей рода тимьян. Во многих случаях точное определение видов рода тимьян весьма затруднительно. Это связано с тем, что общий габитус тимьянов очень изменчив и зависит не только от места произрастания особей, но и от времени сбора. Некоторые виды в местах перекрывания их ареалов легко гибридизируют между собой, образуя широкий спектр промежуточных форм [8]. Поэтому при сборе сырья виды тимьянов часто не дифференцируются [9].
Ранее проведенные исследования показали, что трава тимьяна Маршалла превосходит траву тимьяна ползучего по количественному содержанию эфирных масел в сырье этих растений [2, 6]. Кроме того, для травы тимьяна Маршалла, произрастающей на территории Саратовской области, был исследован компонентный состав эфирного масла [10]. Для эфирного масла тимьяна Маршалла была показана антимикробная активность [2, 11, 12], но по методике эксперимента эфирное масло разводили в спирте и вводили питательный бульон. В связи с тем, что эфирные масла применяют ингаляционно, вероятно, такой метод исследования не является показательным для точной оценки антимикробной активности паров эфирного масла.
Цель работы - сравнительный анализ содержания эфирного масла в траве тимьяна Маршалла (Thymus marshallianus Willd.) и тимьяна
ползучего {Thymus serpyllum L.) в зависимости от климатогеографических условий произрастания, а также изучение антимикробной активности паров их эфирных масел.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Объектами исследования служили трава тимьяна Маршалла и трава тимьяна ползучего. Трава тимьяна Маршалла собрана вручную на Лысой горе (г. Саратов) в июне 2019 г. и 2020 г. в фазе цветения. Определение вида проводили по ключу В.Н. Гладковой и Ю.Л. Меницкого во «Флоре европейской части СССР» [13]. Сырьё сушили в сухом, хорошо проветриваемом, прохладном месте в течение трёх суток. Затем сырьё измельчили до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм. Измельченная трава тимьяна ползучего двух производителей - АО «Красногорск-лексредства» (серия 60420, место сбора Краснодарский край) и ООО «Фирма КИМА» (серия 0420, место сбора Алтайский край) куплена в аптечной сети г. Саратова. Подлинность сырья подтверждена микроскопическим анализом.
Измерение количественного содержания эфирного масла в указанном сырье проводили перегонкой с водяным паром методом 1, согласно требованиям ГФ XIV ОФС.1.5.3.0010.15 «Определение содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах». Эксперимент проведен в трехкратной повторности.
Антимикробную активность эфирных масел изучали в отношении стандартных штаммов трех видов: Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus FDA 209P, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. С этой целью на основе суточных агаровых культур опытных штаммов готовили суспензии в стерильном физиологическом растворе хлорида натрия, доводя до конечной концентрации 500 КОЕ/мл для штаммов Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus FDA 209P и 200 КОЕ/мл - для штамма Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. По 1 мл полученной суспензии равномерно распределяли стерильным шпателем по поверхности мясо-пептонного агара в чашке Петри. После подсушивания инокулированных агаров 0,1 мл эфирного масла равномерно распределяли стерильным шпателем по внутренней поверхности крышки чашки Петри. Посевы инкубировали в термостате дном вверх в течение 72 ч при температуре 37 °С, ежесуточно подсчитывая количество
выросших колоний. В качестве контроля использовали посевы, инкубированные без добавления эфирного масла.
Статистическую обработку проводили при помощи пакета программного обеспечения StatSoft «Statistica» 10.0 путем определения средней арифметической и стандартного отклонения (M±m), а также достоверности различий между полученными значениями в опытном и контрольном варианте. Различия группах считались достоверными при уровне значимости /><0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Проведенный количественный анализ показал разное содержание эфирных масел в траве тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего.
В собранной в 2019 г. траве тимьяна Маршалла установлено меньшее содержание эфирных масел (1,00±0,11%), чем в траве 2020 г. сбора (1,81±0,19%) (табл. 1). Также выявлены существенные различия по количественному содержанию эфирных масел в образцах сырья тимьяна ползучего разных производителей: наибольшее содержание установлено в сырье ООО «Фирма КИМА» (0,62±0,20%), а наименьшее - в сырье АО «Красногорсклексредства» (0,22±0,07%). Таким образом, содержание эфирного масла в траве ти-
мьяна Маршалла превышало аналогичные показатели в траве тимьяна ползучего в 3 раза.
Таким образом, количественное содержание эфирных масел варьировало не только между разными видами рода тимьян, но и внутри вида. Внутривидовой полиморфизм, вероятно, можно объяснить, разными климатогеографическими условиями произрастания растений, а также условиями заготовки, сушки и хранения указанного растительного сырья.
Ю.А. Банаевой и др. (1999 г.) было определено количественное содержание эфирного масла в траве тимьяна ползучего, собранного в местах естественного произрастания в различных районах Алтайского края и Республики Алтай, которое составило 0,5-1,0% [14]. В сырье тимьяна ползучего ООО «Фирма КИМА», заготавливаемого в Алтайском крае, установлено 0,62% эфирного масла, что согласуется с литературными данными. Кроме того, результаты исследований согласуются с данными, полученными ранее, которые показали большее содержание эфирных масел в траве тимьяна Маршалла по сравнению с тимьяном ползучим в 3 раза (табл. 2) [2, 6]. Таким образом, представители рода Thymus L. характеризуются полиморфизмом по количественному составу эфирных масел как на межвидовом, так и на внутривидовом уровне.
Таблица 1. Количественное содержание эфирного масла в траве тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего
Вид сырья Содержание эфирного масла, %
Тимьян Маршалла 2019 г. 1,00±0,11
Тимьян Маршалла 2020 г. 1,81±0,19
Тимьян ползучий АО Красногорсклексредства» 0,22±0,07
Тимьян ползучий ООО «фирма КИМА» 0,62±0,20
Вид сырья Содержание эфирного масла, %
По данным Ю.А. Старчак, 2016 [2] По данным A.C. Шереметьевой и др., 2017 [6] Собственные результаты (среднее)
Тимьян Маршалла 1,72 1,15 1,41
Тимьян ползучий 0,56 0,34 0,42
Таблица 2. Сравнительный анализ количественного содержания эфирного масла в траве тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего с литературными данными
Таблица 3. Антимикробная активность эфирных масел тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего
Вид сырья Количество выросших колоний
Escherichia coli АТСС 25922 Staphylococcus aureus FDA 209Р Pseudomonas aeruginosa АТСС
Тимьян Маршалла Нет роста (р<0,05) Нет роста (р<0,05) 38±Ю (р<0,05)
Тимьян ползучий Нет роста (р<0,05) Нет роста (р<0,05) 124±9 (р>0,05)
Контроль (без эфирного масла) 654±70 677±45 166±24
В процессе изучения антимикробной активности установлено, что оба испытуемых эфирных масла полностью подавили видимый рост при его наличии в контрольных вариантах штаммов Е. coli (654±70 выросших колоний), S. aureus (677±45 выросших колоний) в течение всего периода инкубации. В отношении Р. aeruginosa отмечен видимый рост в присутствии каждого из эфирных масел. Однако достоверные различия между опытом и контролем установлены только для эфирного масла тимьяна Маршалла: значения антимикробной активности составили 38±Ю и 166±24 выросших колоний соответственно. В присутствии эфирного масла тимьяна ползучего количество выросших колоний оказалось несколько ниже - 124±9, однако достоверных различий между контрольным и опытным значениями не установлено (табл. 3).
Сравнительный анализ результатов антимикробной активности тимьянов, полученных с помощью разных экспериментальных методик, затруднен, так как в исследовании воздействие на микроорганизмы проводили парами эфирных масел без разведения в растворителях и без введения в питательную среду. Так, в работе [11] указана только интенсивность роста микроорганизмов (есть рост, слабый рост, нет роста). При этом введение разведенных эфирных масел тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего в 96%-ном этиловом спирте (в соотношении 0,1 мл : 0,9 мл) в питательный бульон в обоих случаях приводило к слабому росту колоний Е. coli [11], а пары этих эфирных масел полностью подавляли видимый рост Е. coli. Введение в среду эфирного масла тимьяна Маршалла подавляло рост, а тимьяна ползучего - приводило к слабому росту колоний S. aureus [11], в отличие от паров этих двух эфирных масел, которые вызывали полное подавление видимого роста
колоний S. aureus. В отношении Р. aeruginosa введение в питательный бульон 0,1 мл эфирного масла тимьяна Маршалла показало отсутствие антибактериальной активности [11], тогда как воздействие его парами приводило к достоверному снижению роста микроорганизмов, а введение в среду эфирного масла тимьяна ползучего полностью задерживало рост колоний Р. aeruginosa [11], в отличие от паров этого эфирного масла, которые достоверно не влияли на рост колоний.
Сравнить антимикробную активность эфирного масла тимьяна Маршалла при его разведении в 90%-ном этаноле в соотношении 1:5 и введении в питательный бульон в концентрации 0,02 г/мл в отношении Е. coli и S. aureus [12] не представляется возможным, поскольку концентрация эфирного масла в [12] была измерена в массо-объемных единицах (г/мл), а в рассматриваемом исследовании - в объемных (мл).
В отличие от ранее проведенных экспериментов по изучению антимикробной активности эфирных масел тимьяна Маршалла и тимьяна ползучего [11, 12], в данном исследовании присутствует негативный контроль - контрольный посев без добавления всех исследуемых компонентов в питательный бульон (как эфирных масел, так и этилового спирта), который позволил исключить антимикробное воздействие этанола на культуры микроорганизмов.
ВЫВОДЫ
Содержание эфирного масла в траве тимьяна Маршалла и превышало аналогичные показатели у тимьяна ползучего - 1,00±0,11 и 1,81±0,19% против 0,22±0,07 и 0,62±0,20%.
Впервые показана антимикробная активность паров эфирных масел тимьяна Маршалла и тимьяна
ползучего в отношении S. aureus и Е. coli. В отношении P. aeruginosa достоверное снижение роста микроорганизмов (38±10 выросших колоний, /><0,05) наблюдали только при воздействии парами эфирного масла тимьяна Маршалла. Несмотря на то, что тимьян Маршалла не включён в ГФ XIV, он является доступным и перспективным источником лекарственного растительного сырья, произрастающим на территории Саратовской области.
ЛИТЕРАТУРА
1. Винокурова О.А., Тринееа О.В., Сливкин АЛ. Сравнительная характеристика различных видов тимьяна: состав, свойства, применение (обзор). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016; 4: 134-150.
2. Старчак Ю.А. Фармакогностическое изучение растений рода тимьян (Thymus L.) как перспективного источника получения фитопрепаратов: Дисс. ... докт. фарм. Наук. Курск. 2016; 470 с.
3. Немоляева Е.К., Дурнова Н.А., Шереметьева А.С., Райкова С.В. Сравнительный анализ антибактериальной и антимикотической активности трех образцов эфирного масла Origanum vulgare L. Бюллетень ботанического сада Саратовского государственного университета. 2018; 16(1): 13-24.
4. Немоляева Е.К., Шереметьева А.С., Дурнова Н.А., Райкова С.В. Сравнительный анализ противогрибковой активности эфирных масел мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.) и душицы обыкновенной (Origanum vulgare L.). Гармонизация подходов к фармацевтической разработке. Сборник тезисов Международной научно-практической конференции. Российский университет дружбы народов. 2018; 130-132.
5. Стоянова А., Георгиева А., Георгиев Е. Содержание эфирного масла в сырье чабера горного и тимьяна ползучего. Известия вузов. Пищевая технология. 2000; 5-6: 2.
6. Шереметьева, A.C., Дурнова, H.A., Березуцкий М.А. Содержание эфирных масел в траве разных видов рода тимьян (Thymus L.). Ботаническое ресурсоведение. 2017; 15(2): 15-19.
7. Бубенчикова В.Н., Старчак Ю.А. Исследование эфирного масла тимьяна блошиного. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014; 82: 116-118.
8. Маевский П.Ф. Флора средней полосы европейской части. М.: Товарищество научных изданий КМК, 2014; 635 с.
9. Худоногова Е.Г., Киселева Т.В. Содержание эфирных масел в надземной части тимьяна ползучего. Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2010; 7: 110-113.
10. Дурнова H.A., Романтеева Ю.В., Ковтун А.Н. Химический состав эфирного масла Thymus marshallianus willd. и Thymus pallasianus H. Br., произрастающих на территории Саратовской области. Химия растительного сырья. 2014; 2: 115-119.
11. Старчак Ю.А., Бубенчикова В.Н. Антимикробная активность водных извлечений и эфирных масел тимьянов флоры средней полосы европейской части России. Ученые записки Орловского государственного университета. Серия: Естественные, технические и медицинские науки. 2014; 6: 144-147.
12. Торина, А. К., Бисеноеа, Г. Н., Шегебаева, А. А., и др. Антимикробная активность основных компонентов эфирных масел и их некоторых производных. ЕЫЛЫМ ЖАРШЫСЫ. 2014; 3(82): 54-62.
13. Федоров A.A., Меницкий Ю.Л. Флора европейской части СССР. Л.: Наука, 1978. Т. 3. 259 с.
14. Банаева Ю.А., Покровский Л.М., Ткачев A.B. Исследование химического состава эфирного масла представителей рода Thymus L., произрастающих на Алтае. Химия растительного сырья. 1999; 3: 41^18.
Поступила после доработки 13 января 2021 г.
THE CONTENT AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS
IN THE HERBTHYMUS MARSHALLIANUS WILLD. AND THYMUS SERPYLLUM L.
© Authors, 2021 A.S. Sheremetyeva
Senior Lecturer, Department of General Biology, Pharmacognosy and Botany, Saratov State Medical University named after V.I. Razumovsky (Saratov, Russia) E-mail: [email protected] A.V. Frolkova Student,
Saratov State Medical University named after V.I. Razumovsky (Saratov, Russia) E-mail: [email protected] O.G. Shapoval
Senior Lecturer, Department of Microbiology, Virology and Immunology, Saratov State Medical University named after V.I. Razumovsky (Saratov, Russia) E-mail: [email protected]
N.A. Durnova
Dr.Sc. (Biol.), Associate Professor, Department of General Biology, Pharmacognosy and Botany, Saratov State Medical University named after V.I. Razumovsky (Saratov, Russia) E-mail: [email protected] M.A. Berezutsky
Dr.Sc. (Biol.), Professor, Department of General Biology, Pharmacognosy and Botany, Saratov State Medical University named after V.I. Razumovsky (Saratov, Russia) E-mail: [email protected]
Essential oils of representatives of the genus thyme (Thymus L.) are characterized by a large variability in the qualitative composition and quantitative content, as well as a variety of biological activity, which determines the relevance of their study. The aim of this work is a comparative analysis of the content of essential oil in the herb Thymus marshallianus Willd. and Thymus ser-pyllum L. and the study of the antimicrobial activity of the vapors of their essential oils.
The objects of research are the herb Thymus marshallianus Willd. and Thymus serpyllum L. The quantitative content of the essential oil was measured by steam distillation. The antimicrobial activity of essential oils was studied against standard strains of three types: Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus FDA 209P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Statistical processing was performed using the StatSoft Statistics 10.0 software package. The content of essential oil in the herb Thymus marshallianus exceeded similar indicators in Thymus serpyllum by 3 times (1,00±0,11 and 1,81±0,19% vs. 0,22±0,07 and 0,62±0,20%) and varied depending on the climatic and geographical conditions of growth it was found. And during the study of the antimicrobial activity, it was found that both tested essential oils completely suppressed the visible growth when it was present in the control variants of Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus FDA 209P strains during the entire incubation period. Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 showed visible growth in the presence of each of the essential oils.
Key words: essential oil, Thymus marshallianus Willd., Thymus serpyllum L, antimicrobial activity.
For citation: Sheremetyeva A.S., Frolkova A.V., Shapoval O.G., Durnova N.A., Berezutsky M.A. The content and antimicrobial activity of essential oils in the herb Thymus marshallianus Willd. and Thymus serpyllum L. Problems of biological, medical and pharmaceutical chemistry. 2021;24(3):27-32. https://doi.org/10.29296/25877313-2021-03-04
REFERENCES
1. Vinokurova O.A., Trineva O.V., Slivkin A.I. Sravnitel'naya harakteristika razlichnyh vidov tim'yana: sostav, svojstva, primenenie (obzor). Razrabotka i registraciya lekarstvennyh sredstv. 2016; 4:134-150.
2. Starchak Yu.A. Farmakognosticheskoe izuchenie rastenij roda tim'yan (Thymus L.) kak perspektivnogo istochnika polucheniya fitopreparatov: Diss. ... dokt. farm. Nauk. Kursk. 2016; 470 s.
3. Nemolyaeva E.K., Durnova N.A., Sheremet'eva A.S., Rajkova S.V. Cravnitel'nyj analiz antibakterial'noj i antimikoticheskoj aktivnosti trekh obrazcov efirnogo masla Origanum vulgare L. Byulleten' botanicheskogo sada Saratovskogo gosudarstvennogo universiteta. 2018; 16(1): 13-24.
4. Nemolyaeva E.K., Sheremet'eva A.S., Durnova N.A., Rajkova S.V. Sravnitel'nyj analiz protivogribkovoj aktivnosti efirnyh masel melissy lekarstvennoj (Melissa officinalis L.) i dushicy obyknovennoj (Origanum vulgare L.). Garmonizaciya podhodov k farmacevticheskoj razrabotke. Sbornik tezisov Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. Rossijskij universitet druzhby narodov. 2018; 130-132.
5. Stoyanova A., Georgieva A., Georgiev E. Soderzhanie efirnogo masla v syr'e chabera gornogo i tim'yana polzuchego. Izvestiya vuzov. Pishchevaya tekhnologiya. 2000; 5-6: 2.
6. Sheremet'eva, A.S., Durnova, N.A., Berezuckij M.A. Soderzhanie efirnyh masel v trave raznyh vidov roda tim'yan (Thymus L.). Botanicheskoe resursovedenie. 2017; 15(2): 15-19.
7. Bubenchikova V.N., Starchak Yu.A. Issledovanie efirnogo masla tim'yana bloshinogo. Mezhdunarodnyj zhurnal prikladnyh i fundamental'nyh issledovanij. 2014; 8-2: 116-118.
8. Maevskij P.F. Flora srednej polosy evropejskoj chasti. M.: Tovarishchestvo nauchnyh izdanij KMK, 2014; 635 s.
9. Hudonogova E.G., Kiseleva T.V. Soderzhanie efirnyh masel v nadzemnoj chasti tim'yana polzuchego. Sibirskij vestnik sel'skohozyajstvennoj nauki. 2010; 7: 110-113.
10. Durnova N.A., Romanteeva YU.V., Kovtun A.N. Himicheskij sostav efirnogo masla Thymus marshallianus willd. i Thymus pallasianus H. Br., proizrastayushchih na territorii Saratovskoj oblasti. Himiya rastitel'nogo syr'ya. 2014; 2:115-119.
11. Starchak Yu.A., Bubenchikova V.N. Antimikrobnaya aktivnost' vodnyh izvlechenij i efirnyh masel tim'yanov flory srednej polosy evropejskoj chasti Rossii. Uchenye zapiski Orlovskogo gosudarstvennogo universiteta. Seriya: Estestvennye, tekhnicheskie i medicinskie nauki. 2014; 6:144-147.
12. Torina, A. K., Bisenova, G. N., Shegebaeva, A. A., i dr. Antimikrobnaya aktivnost' osnovnyh komponentov efirnyh masel i ih nekotoryh proizvodnyh. FYLYM ZHARSHYSY. 2014; 3(82): 54-62.
13. Fedorov A.A., Menickij YU.L. Flora evropejskoj chasti SSSR. L: Nauka, 1978. T. 3. 259 s.
14. Banaeva Yu.A., Pokrovskij L.M., Tlrachev A.V. Issledovanie himicheskogo sostava efirnogo masla predstavitelej roda Thymus L, proizrastayushchih na Altae. Himiya rastitel'nogo syr'ya. 1999; 3: 41-48.
