CC BY
86
МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА, № 2, 2011
© Коллектив авторов, 2011
УДК 615.322.074:581.43:582.711.71(470.6)
СОДЕРЖАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В КОРНЯХ ШИПОВНИКА (ROSA CANINA L.) ФЛОРЫ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА
Н. Н. Вдовенко-Мартынова, Н. В. Кобыльченко, Т. И. Блинова Пятигорская государственная фармацевтическая академия
Сырьё шиповника сотни лет применяется в научной и народной медицине. Плоды шиповника являются фармакопейным сырьём, которое используется в качестве витаминного средства. Получаемые из шиповника препарат «Холосас» и масло обладают ранозаживляющим и желчегонным действием. Перспективным и важным направлением развития фармации является всестороннее изучение и рациональное использование всего растения. Подземная часть (корни) в официнальной медицине не используется, хотя содержит ряд ценных биологически активных соединений и издавна применяется в народной медицине. Шиповник собачий Rosa canina (L.) семейства Rosaceae достаточно распространен на территории Северного Кавказа [4].
Цель исследования заключалась в изучении биологически активных веществ и минерального состава корней шиповника.
Материал и методы. Корни шиповника Rosa canina (L.) для исследования заготавливались осенью в пределах естественного ареала.
Внешние признаки исследуемого сырья: неочищенные высушенные корневища с корнями шиповника собачьего - узловатые, ветвистые, длиной 20-25 см, толщиной 10-12 см, с гладкой, блестящей поверхностью, красновато-бурого цвета; корни по форме цилиндрические, изогнутые и слабоветвистые, цвет - коричневатосерый с бурым оттенком, на изломе желтовато-белый, длина корней достигает 30 см, толщина - 0,3-1,0 см; вкус вяжущий; запах слабый, терпкий.
При фитохимическом исследовании проводили общий анализ качественного состава основных групп биологически активных соединений (БАС), определяли их количественное содержание. Дубильные вещества определяли по реакциям с железоаммонийными квасцами, 10% раствором свинца ацетата, с желатином и бромной водой; полисахариды - по осаждению спиртом этиловым 96%. Наличие органических кислот устанавливали хроматографическим анализом на бумаге. Определение аскорбиновой кислоты проводили на пластинках с закреплённым слоем силикагеля Silufol UV 254 (Чехия). Наличие аминокислот в водных извлечениях определяли нингидриновой пробой по появлению красно-фиолетового окрашивания, усиливающегося при охлаждении, и хроматографически. Применяли метод тонкослойной хроматографии. Для
Вдовенко-Мартынова Наталия Николаевна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармакогнозии ФПО Пятигорской государственной фармацевтической академии, тел.: 89283620222; e-mail: martynovann@yandex.ru.
Кобыльченко Надежда Васильевна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармации ФПО Пятигорской государственной фармацевтической академии, тел.: 89624061730; e-mail: nio.09@mail.ru.
Блинова Татьяна Ивановна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармации ФПО Пятигорской государственной фармацевтической академии, тел.: 89286358096; e-mail: tablinova@yandex.ru.
подтверждения хроматограграфического анализа проводили качественное и количественное определение на аминокислотном анализаторе ААА-339 (колонка ОСТИОН ЛГ АНБ, диаметром 8мм, длиной 35мм) [3]. Для изучения микроэлементного состава сырья использовали метод спектрального анализа, основанный на полном испарении аналитической навески из кратера угольного электрода в плазме электрической дуги переменного тока (ДГ-2). Качественный состав и количественное содержание элементов устанавливали на приборе ДфС-8-1. Содержание макро- и микроэлементов определяли на спектрограммах с погрешностью не более 2% в пересчете на золу.
Содержание полисахаридов определяли по методике Н.К. Кочеткова и M. Sinner. Количественное определение органических кислот производили ти-триметрическим методом, используя пермангона-тометрическое титрование, определяли содержание дубильных и легкоокисляемых веществ [1]. Для определения танина использовали микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром А-02». Анализ проводили методом изократического элюирования при комнатной температуре. Для определения содержания сапонинов использовали гравиметрический метод. Количественное определение суммы аминокислот проводили спектрофотометрическим методом в пересчете на аланин. Регистрацию проводили на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 570 нм [3].
Результаты и обсуждение. Качественным анализом в корнях шиповника Rosa canina (L.) установлено присутствие органических кислот, полисахаридов, дубильных веществ (гидролизуемых), сапонинов, аминокислот. Количественное содержание суммы органических кислот составило 8,06±0,047%, аскорбиновой кислоты - 0,26±0,004%. Идентифицированы органические кислоты: винная (Rf0,41); лимонная (Rf0,47); яблочная (Rf 0,37); щавелевая (Rf 0,49); янтарная (Rf 0,69). Идентификацию проводили по величинам Rf, сопоставляя с Rf аутентичными образцами. Установлено содержание водорастворимых полисахаридов - 5,29%, пектиновых веществ (ПВ) - 8,1%, гемицеллюлозы (ГЦ) - 2,8%. Выделенные водорастворимые полисахариды (ВРПС) по внешнему виду представляли собой буро-зеленоватый порошок, без запаха, хорошо растворимый в воде, ПВ -светло-коричневый порошок со своеобразным запахом, растворим в воде с опалесценцией, ГЦ - порошок тёмнокоричневого цвета со специфическим запахом. Исследование фракционного состава полисахаридов показывает преобладание пектиновых веществ. Содержание дубильных и легкоокисляемых веществ, определяемое фармакопейным методом, составило 10,77±0,03% . Относительная ошибка при доверительной вероятности не превышает ±0,28%. В связи с тем, что фармакопейный перманганатометрический метод позволяет определить в растительном сырье не только содержание дубильных веществ, а сумму всех легкоокисляемых соединений, переходящих в водное извлечение, для стандартизации сырья был использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, которым определили содержание в сырье танина (1,46±0,026%) [2]. Метрологические
и ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
Таблица
Содержание биологически активных соединений в корнях шиповника Rosa canina (L.)
Биологически активные соединения Метод анализа Метрологические характеристики
Свободные органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту Алкали- метрия S = 0,0474342 Sx = 0,0212138 ЛХ = 0,0471414 X ±ЛХ = 8,06±0,047 £ = ±0,58%
Аскорбиновая кислота Титриметрия S = 0,0035637 Sx = 0,0015938 ЛХ = 0,0035417 X ±ЛХ = 0,262±0,0035 £ = ±1,35%
Полисахариды Гравиметрия, после осаждения спиртом ВРПС-5,29% ПВ-8,1%, гемицеллюлозы - 2,8%.
Дубильные и легкоокисляемые вещества Перманга- натометрия S = 0,0303315 Sx = 0,0135651 ЛХ = 0,0301443 X ±ЛХ = 10,77±0,03 £ = ±0,28%
Танин ВЭЖХ N=5 f=4 S=0,02645 Sx = 0,011832 ЛХ=0,0262942 X ±ЛХ =1,46±0,026 £ = ±1,80%.
Сапонины Гравиметрия S = 0,0238747 Sx = 0,0106774 ЛХ = 0,0237273 X ±ЛХ = 4,66±0,0237 £ = ±0,51%
Аминокислоты в пересчете на аланин Спектрофо- тометрия S = 0,015379 Sx = 0,006878 ЛХ = 0,015284 X ±ЛХ = 3,788±0,015 £ = ±0,40%
характеристики количественного определения танина методом ВЭЖХ представлены в таблице. Качественным определением в корнях шиповника установлено присутствие тритерпеновых сапонинов, содержание которых составило 4,66±0,02%. Исследование аминокислотного состава позволило установить присутствие в корнях шиповника Rosa canina (L.) 15 аминокислот (аспарагиновая
кислота, треонин, серин , глутаминовая кислота, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, гистидин, лизин, аргинин), из которых семь являются незаменимыми. Спектрофотометрическое определение в сырье суммы аминокислот в пересчете на аланин составило 3,788±0,0153%. Результаты исследований представлены в таблице. При изучении элементного состава исследуемого сырья установлено наличие 30 макро- и микроэлементов, таких, как кальций, магний, железо, кремний, цинк, марганец, и др. Среди условнотоксичных присутствуют: серебро 0,00005 мг% (в пересчете на золу), олово 0,0006 мг%, цирконий 0,002 мг%, галлий 0,001 мг% . В образце не обнаружены следующие элементы: ртуть, рений, висмут, мышьяк, сурьма, вольфрам, кадмий, индий, таллий, литий, церий, лантан, уран, торий, тантал, золото, гафний, гадолиний, платина.
Заключение. В результате фитохимического исследования корней шиповника Rosa canina (L.), произрастающего в условиях Северного Кавказа, установлено присутствие и определено содержание биологически активных соединений: органических кислот, водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ, аскорбиновой кислоты, дубильных и легкоокисляемых веществ, танина, тритерпеновых сапонинов, аминокислот. В аминокислотном составе корней шиповника собачьего преобладают аргинин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, лизин. Определен макро- и микроэлементный состав. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования сырья и получения лекарственных препаратов.
Литература
1. Государственная фармакопея СССР: Вып.1 Общие методы анализа / МЗ СССР.-11 изд.доп.-М.:Медицина, 1987. - 336 с.
2. Кисилёва, А.Н. Определение дубильных веществ сливы колючей Prunus spinosa (L.) в подземных органах / А.Н. Кисилёва, Н.Н. Вдовенко-Мартынова, Н.В. Кобыльченко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции:сб. науч.тр. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - C. 62-63.
3. Кисилёва, В.Н. Аминокислотный состав шиповника собачего корней / В.Н. Киселева, Н.В. Кобыльчен-ко, Н.Н. Вдовенко-Мартынова, А.Н. Сепп // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции:сб.науч.тр. - Пятигорск, 2009. - Вып.64. - С. 61-62.
4. Соколов, С.Я. Ареалы деревьев и кустарников СССР: гречишные - розоцветные / С.Я. Соколов, О.А. Связева, В.А. Кубли. -Л.:Наука, 1980. - 134 с.
СОДЕРЖАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В КОРНЯХ ШИПОВНИКА (ROSA CANINA L.) ФЛОРЫ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА
Н. Н. ВДОВЕНКО-МАРТЫНОВА,
Н. В. КОБЫЛЬЧЕНКО, Т. И. БЛИНОВА
Изучены биологически активные соединения и минеральный состав корней шиповника Rosa canina(L.), семейства Rosaceae, произрастающего в условиях Северного Кавказа. При фитохимическом анализе установлено присутствие в исследуемом сырье органических кислот, пектиновых веществ, водорастворимых полисахаридов, тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ, аминокислот, определен макро- и микроэлементный состав. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования сырья и получения лекарственных препаратов.
Ключевые слова: корни шиповника, фитохимический анализ, качественный и количественный состав, биологически активные соединения
CONTENT OF BIOLOGICALLY ACTIVE
COMPOUNDS IN ROSE ROOTS (ROSA CANINA L.)
OF NORTH CAUCASUS
VDOVENKO-MARTYNOVA N. N.,
KOBILCHENKO N. V., BLINOVA T. I.
The aim of the investigation was to study the biologically active compounds and mineral composition of roots Rosa canina (L) of Rosaceae family, growing in the North Caucasus. The phytochemical analysis of the studied raw material has allowed to determine the presence of organic acids, pec-tic substances, water-soluble polysaccharides, triterpented saponins, tanning substances and aminoacids. We have established macro- and micro-elemental composition. The data received testify about the availability of the raw material future investigation and preparations production.
Key words: Rose roots, phytochemical analysis, quantitative and qualitative composition, biologically active compounds
