CC BY
53
10
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПАТОФИЗИОЛОГИИ
М.М. Юринская1, 2, М.Г. Винокуров1, 2, Е.И. Асташкин1, С.В. Грачёв1, Н.С. Орехова1, А.Н. Новикова1,
И.Н. Соколова1
1 Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Российская Федерация 2 Институт биофизики клетки РАН, Московская обл., Пущино, Российская Федерация
Снижение нейротоксического эффекта пероксида водорода в эксперименте на перевиваемых нейронах человека при действии гемодиализата крови телят
Цель исследования: изучить влияние гемодиализата крови телят (ГКТ) на апоптоз и внутриклеточные сигнальные пути клеток нейробластомы SK-N-SH человека. Методы: апоптоз клеток регистрировали методом флуоресцентной микроскопии с использованием Hoechst 33342. Некроз клеток контролировали с помощью пропидия йодида. Флуоресценцию клеток регистрировали на инвертированном флуоресцентном микроскопе Keyence BZ8100(Япония). Образование активных форм кислорода (АФК) в клетках SK-N-SHопределяли по оптической плотности при 620 нм с использованием нитросинего тетразолия на планшетномридере «Униплан». Результаты: при добавлении пероксида водорода на фоне действия ГКТ происходило снижение апоптоза этих клеток с 43 до 17% по сравнению с апоптозом в присутствии одного пероксида водорода. В этих условиях ГКТ значительно снижал образование активных форм кислорода в клетках нейробластомы человека SK-N-SH при действии пероксида водорода. В этих клетках было исследовано влияние ГКТ на апоптоз и внутриклеточные сигнальные пути с участием митогенактивируемых протеинкиназ (p38MAPK), экстраклеточных регуляторных киназ (ERK), фосфатидилинозитол-3-киназы (PI-3K) и с-Jun-N-терминальной киназы (JNK) с использованием их селективных ингибиторов. Заключение: впервые показано, что в механизме защитного действия ГКТ в отношении пероксидиндуцированного апоптоза клеток SK-N-SH доминантная роль принадлежит p38 MAPK и PI-3K.
Ключевые слова: апоптоз, гемодиализат крови телят, пероксид водорода, нейробластома SK-N-SH, ингибиторы p38MAPK, ERK, PI-3K, JNK.
(Вестник РАМН. 2014; 9-10:10-14)
#
Обоснование
В клинической практике в качестве лекарственного препарата широко применяют Актовегин — безбелковый гемодиализат крови телят (ГКТ). Этот препарат оказывает инсулиноподобное действие, усиливает энергетический обмен клеток при нарушениях кровообраще-
ния и питания центральной нервной системы (ЦНС) — ишемических инсультах, черепно-мозговых травмах. Его применяют для улучшения периферического кровотока (ангиопатии и трофические язвы голеней), при лечении ран (вялотекущие раны и пролежни) и ожогов, а также при лучевых поражениях [1]. ГКТ характеризуется низкой токсичностью и отсутствием побочных эффектов.
M.M. Yurinskaya1, 2, M.G. Vinokurov1, 2, E.I. Astashkin1, S.V. Grachev1, N.S. Orekhova1, A.N. Novikova1,
I.N. Sokolova1
1 Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow, Russian Federation 2 Institute of Cell Biophysics, Moscow Region, Pushchino, Russian Federation
Calf Blood Gemodializat Reduces Neurotoxic Effect of Hydrogen Peroxide on Human Neuroblastoma Cells
Objective: Our aim was to study the effect of calf blood gemodializat on apoptosis and intracellular signaling pathways of neuroblastoma cells SK-N-SH human. Methods: Apoptosis was recorded by fluorescent microscopy using Hoechst 33342. Necrosis cells was monitored by propidium iodide. The fluorescence of the cells was recorded on a fluorescence inverted microscope Keyence BZ8100 (Japan). Formation of reactive oxygen species (ROS) in the cells of SK-N-SH was determined using nitroblue tetrazolium by absorbance at 620 nm on a plate reader «Uniplan». Results: When adding hydrogen peroxide to the background of the calf blood gemodializat been decreasing apoptosis of these cells with 43 to 17% relative to apoptosis in the presence of a hydrogen peroxide. Under these conditions, the calf blood gemodializat significantly reduced ROS formation in human neuroblastoma cells SK-N-SH by the action of hydrogen peroxide. In these cells, we investigated the influence of calf blood gemodializat on apoptosis and intracellular signaling pathway involving mitogen-activated protein kinase (p38MAPK), extracellular regulatory kinase (ERK), phosphatidylinositol 3-kinase (PI-3K) and-Jun-N-terminal kinase (JNK) using their selective inhibitors. Conclusion: It was shown that the mechanism of the protective effect of calf blood gemodializat against peroxide-induced apoptosis in SK-N-SH dominant role is played by p38 MAPK and PI-3K.
Key words: apoptosis, calf blood gemodializat, hydrogen peroxide, neuroblastoma, inhibitors p38MAPK, ERK, PI-3K, JNK.
(Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk — Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2014; 9-10:10-14)
#
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПАТОФИЗИОЛОГИИ
В его состав входят низкомолекулярные пептиды, производные нуклеиновых кислот, инозитолфосфоолиго-сахариды и другие компоненты с молекулярной массой менее 5 кДа.
Известно, что многие нейродегенеративные заболевания сопровождаются гибелью нейронов по механизму некроза и апоптоза [2]. В случае некроза наблюдается воспалительная реакция, связанная с участием провоспалительных клеток и цитокинов [3]. К таким клеткам в ЦНС относятся клетки микроглии и фагоциты крови при ишемическом инсульте. Показано, что ГКТ снижает содержание радикалов кислорода, продуцируемых фагоцитами крови у пациентов с сердечной недостаточностью [4].
Повреждение клеток под действием оксидативно-го стресса играет важную роль в патогенезе различных нейродегенеративных заболеваний, в т.ч. болезни Альцгеймера и Паркинсона [5]. Эти повреждения часто происходят под действием радикалов кислорода, а также факторов, образуемых непосредственно нейронами, например в-амилоидных пептидов [6]. В конечном итоге такие воздействия приводят к изменению структуры и нарушению функционирования нейронов и индукции их гибели по механизму апоптоза [2]. Показано, что ГКТ снижает некроз нейронов, индуцированный амилоидным пептидом Лв-(25-35), а также образование активных форм кислорода в цитоплазме этих клеток [6].
При нейродегенеративных заболеваниях, а также в случае гипоксии / ишемии мозга в ЦНС образуются значительные количества пероксида водорода, а гибель нервных клеток индуцируется гидроксил-радикалами [7, 8]. Высокие концентрации пероксида водорода (H2O 2) также обнаруживают в мозге после ишемии-реперфузии [9]. Ранее нами было установлено, что ГКТ снижает гибель клеток нейробластомы человека SK-N-SH, индуцированную пероксидом водорода [4].
В настоящее время описан ряд внутриклеточных сигнальных процессов, участвующих в регуляции запуска апоптоза нейронов под влиянием пероксида водорода [10]. Однако внутриклеточные сигнальные процессы, с которыми связано защитное действие ГКТ, остаются неизвестными.
Целью исследования было изучение участия различных внутриклеточных сигнальных путей регуляции апоптоза, индуцированного пероксидом водорода в клетках SK-N-SH, в защитном действии ГКТ.
Методы
Исследовано влияние ГКТ на апоптоз и внутриклеточные сигнальные пути с участием митогенактивируе-мых протеинкиназ (p38MAPK), экстраклеточных регуляторных киназ (ERK), фосфатидилинозитол-3 киназы (PI-3K) и с^ип-^терминальной киназы (JNK) с использованием их селективных ингибиторов.
В работе использовали культуральную среду RPMI 1640, эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС), про-пидия йодид, Hoechst 33342, HEPES, раствор Хенкса (HBSS), DMSO, нитросиний тетразолий (НСТ), пенициллин, стрептомицин, фосфатный буфер (PBS), SB203580 (ингибитор р38МАРК), PD98059 (ингибитор ERK), Wortmannin (ингибитор PI3K), SP600125 (ингибитор JNK; все производства Sigma, США).
Клетки SK-N-SH выращивали в среде RPMI 1640 c 10% ЭТС, 2 мМ L-глутамина, 1% стрептомицина, 100 ед. пенициллина при 37 °С и 5% СО2. За 48 ч до добавления ГКТ клетки собирали центрифугированием, определяли
их число. Затем клетки помещали в 24-луночные планшеты по 200 тыс. клеток на лунку в 1 мл 10% культуральной среды. За 24 ч до добавления ГКТ у клеток заменяли 10% культуральную среду на субстрат без ЭТС. После культивирования экспериментальных проб в течение 24 ч к клеткам добавляли ГКТ, а через 1 ч в пробы добавляли 100 мкМ Н2О2. Эти пробы культивировали в течение 24 ч в СО2-инкубаторе при 37 °С. В экспериментах с ингибиторами последние добавляли к клеткам за 30 мин до внесения ГКТ.
Апоптоз клеток регистрировали методом флуоресцентной микроскопии с использованием Hoechst 33342. Некроз клеток контролировали с помощью пропидия йодида. По окончании культивирования клетки окрашивали 30 мин в темноте с 10 мкг/мл Hoechst 33342 при 37 °С [10], затем добавляли 30 мкМ пропидия йодида. Свечение клеток регистрировали на инвертированном флуоресцентном микроскопе Keyence BZ8100 (Япония). Результаты регистрации апоптоза представлены на рисунках в процентах как доля от общего количества клеток (100%).
Образование активных форм кислорода (АФК) в клетках SK-N-SH определяли с использованием нитросинего тетразолия (НСТ). По окончании культивирования к клеткам на 2 ч при 37 °С и 5% СО2 добавляли 0,1% НСТ. Затем клетки 2 раза отмывали PBS, фиксировали метанолом и сушили. Внутриклеточный НСТ растворялся в 240 мкл 2 М КОН и 280 мкл DMSO на лунку. Далее оптическую плотность полученного раствора измеряли при 620 нм на планшетном ридере «Униплан» [11].
Статистический анализ
Для регистрации апоптоза и некроза клеток SK-N-SH во всех экспериментах анализировали не менее 20 полей зрения, в каждом из которых находилось 200—250 клеток. Каждая проба была в четырех повторениях.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с применением программы SigmaPlot. Данные представлены в виде средних значений и стандартных отклонений. Межгрупповые различия оценивали по значению t-критерия Стьюдента для независимых выборок. Различия считали статистически значимыми прир <0,05.
Результаты
Обработка Н2О2 нейронов SK-N-SH сопровождалась достоверным (р<0,001) увеличением содержания радикалов кислорода в цитоплазме клеток по сравнению с контрольными необработанными клетками (рис. 1). Этот результат хорошо согласуется с данными других авторов [12]. Стимулирующий эффект пероксида водорода на фоне действия ГКТ снижался до значений генерации АФК контрольными клетками (см. рис. 1).
В следующих сериях экспериментов было изучено влияние ГКТ на клеточную гибель клеток SK-N-SH, вызываемую действием H2O2. На рис. 2 (А, Г) видно, что пероксид водорода увеличивал долю некроз-ных и апоптозных клеток по сравнению с контролем (см. рис. 2 Б, Д). Численная обработка этих результатов показала, что доля некрозных клеток увеличивалась до 5—10%, а доля апоптозных клеток — до 43%. При сравнении результатов апоптоза контрольных клеток (см. рис. 2 Б, Д), клеток с пероксидом водорода (см. рис. 2 А, Г), а также проб, обработанных ГКТ и пероксидом водорода и ГКТ (см. рис. 2 В, Е), хорошо видно, что ГКТ значительно снижает долю апоптозных клеток (см. рис. 2 В, Е) по сравнению с действием только одного пероксида водорода (см. рис. 2 А, Г). На рис. 3 показан
#
11
ВЕСТНИК РАМН /2014/ № 9-10
0,40-,
1 2 3
Рис. 1. Влияние гемодиализата крови телят (ГКТ) на образование активных форм кислорода в клетках SK-N-SH при действии пероксида водорода.
Примечание. 1 — контроль (без ГКТ и пероксида водорода); 2 — 100 мкМ пероксида водорода; 3 — инкубация клеток с 5 мг/мл ГКТ (1 ч), а затем — добавление 100 мкМ пероксида водорода и культивирование в течение 24 ч. OD — оптическая плотность (п =6,р <0,001).
киназ не изменяло долю клеток, подвергшихся апоптозу, по сравнению с контрольными клетками (рис. 4, столбики а и б). В то же время на фоне действия H2O2 доля апоп-тозных клеток резко возрастала (см. рис. 4, контрольные клетки (КС), столбик в). Если до пероксида к клеткам добавляли ингибиторы разных протеинкиназ, то все они в разной степени снижали защитный эффект ГКТ. Однако некоторые ингибиторы полностью отменяли защитное действие ГКТ (SB203580 — ингибитор р38МАРК, Wortmannin — ингибитор PI-3K), в то время как другие ингибиторы (PD98059 — подавляет активность ERK-киназы, SP600125 — ингибитор JNK-киназы) блокировали защитный эффект ГКТ только частично. На основании этих результатов было предположено, что защитный эффект ГКТ обусловлен главным образом его влиянием на две ключевые протеинкиназы — PI-3K и р38МАРК.
Таким образом, все изученные протеинкиназы участвуют в регуляции апоптоза, активированного пероксидом водорода, однако только ингибиторы р38МАРК и PI-3K блокируют защитный эффект ГКТ полностью (рис. 5).
Обсуждение
ингибиторный эффект разных доз ГКТ, добавленных до 12 воздействия пероксида водорода, который не оказывал значительного влияния на величину апоптоза клеток в отсутствии пероксида водорода. При добавлении пероксида водорода на фоне действия ГКТ происходило снижение интенсивности апоптоза этих клеток с 43 до 17% по сравнению с таковой в присутствии одного H2O2 (см. рис. 3). Достоверный (р <0,001) защитный эффект ГКТ наблюдался уже в дозе 1 мг/мл, а максимальная защита была зарегистрирована на дозах 5 и 10 мг/мл (см. рис. 3).
Следует отметить, что добавление одного ГКТ или ГКТ вместе с ингибиторами соответствующих протеин-
Болезнь Альцгеймера и другие нейродегенеративные заболевания характеризуются когнитивными нарушениями, которые наступают в результате гибели нейронов по механизму апоптоза. В настоящее время, к примеру, известно, что в патогенезе болезни Альцгеймера ключевую роль играет оксидативный стресс, индуцированный амилоидным пептидом Ав [13]. Этот процесс относится к наиболее ранним процессам в патогенезе болезни Альцгеймера. Важно отметить, что воздействие в-амилоидных пептидов также вызывает увеличение образования АФК нейронами и клетками микроглии. Известно, что АФК участвуют в повреждениях нейронов при
#
В
Е
Рис. 2. Действие 5 мг/мл гемодиализата крови телят (ГКТ) и 100 мкМ пероксида водорода на клетки SK-N-SH. Клетки окрашены флуоресцентными зондами Hoechst 33342 (10 мкг/мл) и 30 мкМ пропидия йодида.
Примечание. А, Г — клетки, обработанные пероксидом водорода; Б, Д — контрольные клетки; В, Е — клетки, обработанные ГКТ и пероксидом водорода. Г, Д, Е — увеличенные фрагменты A, Б, В, соответственно.
#
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПАТОФИЗИОЛОГИИ
других нейродегенеративных заболеваниях [5]. Наряду с провоспалительными цитокинами (фактор некроза опухоли а и др.), клетки микроглии продуцируют H2O2, который является одним из сильнейших индукторов апоптоза в нейронах и других типах клеток [7, 8]. Полученные нами результаты показывают, что ГКТ практически полностью ингибировал образование АФК в клетках нейробластомы под действием пероксида водорода. В то же время защита клеток ГКТ от апоптозактивирующего действия пероксидом водорода была неполной. Это свидетельствует о том, что одним их механизмов защиты клеток ГКТ от пероксидиндуцированной клеточной гибели является воздействие ГКТ на механизмы активации образования АФК в клетках. В этих процессах в клетках особое место отводится НАДФН-оксидазе, активация которой приводит к образованию АФК. В механизмах активации НАДФН-оксидазы важная роль принадлежит различным протеинкиназам, в т.ч. р38МАРК, PI-3K, JNK и другим механизмам. Эти ферменты также принимают участие в регуляции апоптоза в разных типах клеток. Ранее в ряде работ было показано, что в механизме апоптоза, индуцированного пероксидом водорода в нейронах, локализованных в разных отделах мозга, а также в клетках нейробластомы, принимают участие различные внутриклеточные сигнальные пути, в т.ч. связанные с протеинкиназами р38МАРК, PI-3K, JNK, ERK [14, 15].
Защитное действие ГКТ на клетки нейробластомы при действии пероксида водорода реализуется путем снижения содержания АФК в клетках, а также путем воздействия ГКТ на различные механизмы регуляции апоптоза клеток нейробластомы. Важно отметить, что сам ГКТ практически не влияет на апоптоз и некроз клеток SK-N-SH и в достаточно высоких дозах не вызывает увеличения продукции АФК этими клетками. В присутствии ингибиторов ГКТ также практически не влияет на апоптоз этих клеток. Значительное действие ГКТ оказывает на апоптоз клеток нейробластомы, индуцированный пероксидом в присутствии и отсутствии ингибиторов. Полученные результаты говорят о том, что ключевую роль в активации апоптоза клеток под действием пероксида водорода играют сигнальные пути с участием MEK, ERK, JNK, p38MAPK, PI-3K, что не исключает участия других внутриклеточных механизмов в защите ГКТ клеток нейробластомы SK-N-SH от действия пероксида водорода.
Заключение
Нейродегенеративные заболевания занимают третье в мире место в качестве причины потери трудоспособности и смерти, обусловленной поражением ЦНС. Поиск новых подходов для защиты нейронов при этих заболеваниях имеет важное не только теоретическое, но и практическое значение. Один из таких подходов может быть связан с использованием Актовегина — безбелкового гемодиализата крови телят, применение которого в течение многих лет в лечебной практике не продемонстрировало серьезных побочных эффектов.
Конфликт интересов
Е.И. Асташкин читает лекции для ООО «Такеда Фар-масьютикалс».
Остальные авторы данной статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки / конфликта интересов, о которых необходимо сообщить
50
40
^ 30
СО
о
Ё 20
о
^ 10 0
КС
1111
_ 1 5 10 _ 1
111
+ + +
3 5 10
100 мкМ H2O2 Актовегин, мг/мл
Рис. 3. Действие ГКТ на апоптоз клеток нейробластомы человека SK-N-SH, индуцированный пероксидом водорода.
Примечание. КС — культуральная среда. ГКТ — в концентрации от 1 до 10 мг/мл. Препарат добавляли в указанных концентрациях за 60 мин до добавления Н2О2. Сравнивали между собой действие Н2О2 с результатами действия пероксида водорода после ГКТ (п =6,p <0,001).
Рис. 4. Действие ГКТ (5 мг/мл), пероксида водорода (100 мкМ) и различных ингибиторов на апоптоз клеток нейробластомы человека SK-N-SH.
Примечание. ГКТ — гемодиализат крови телят; КС — культуральная среда; SB — 30 мкМ SB203580 (ингибитор р38МАРК); PD — 50 мкМ PD98059 (ингибитор ERK); Wort — 100 нМ Wortmannin (ингибитор PI-3K); SP — 10 мкМ SP600125 (ингибитор JNK). Обозначения столбиков: а — клетки без Н2О2 и ГКТ; б — клетки без Н2О2 и с 5 мг/мл ГКТ; в — клетки с 100 мкМ Н2О2 без ГКТ; г — клетки с 5 мг/мл ГКТ и 100 мкМ Н2О2 (п =8,p <0,001).
Пероксид водорода \
SK-N-SH
Рис. 5. Схема влияния гемодиализата крови телят на механизмы регуляции апоптоза клеток нейробластомы при действии пероксида водорода.
13
#
#
ВЕСТНИК РАМН /2014/ № 9-10
14
ЛИТЕРАТУРА
1. Buchmayer F., Pleiner J., Elmlinger M.W., Lauer G., Nell G., Sitte H.H. Actovegin: a biological drug for more than 5 decades. Wien. Med. Wochenschr. 2011; 161 (3-4): 80-88.
2. Saeidnia S., Abdollahi M. Toxicological and pharmacological concerns on oxidative stress and related diseases. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2013; 273 (3): 442-455.
3. Neumann J., Sauerzweig S., Ronicke R., Gunzer F., Dinkel K., Ullrich O., Gunzer M., Reymann K.G. Microglia cells protect neurons by direct engulfment of invading neutrophil granulocytes: a new mechanism of CNS immune privilege. J. Neurosci. 2008; 28 (23): 5965-5975.
4. Асташкин Е.И., Глезер М.Г., Винокуров М.Г., Егорова Н.Д., Орехова Н.С., Новикова А.Н., Грачев С.В., Юринская М.Н., Соболев К.Э. Актовегин снижает уровень радикалов кислорода в образцах цельной крови пациентов с сердечной недостаточностью и подавляет развитие некроза перевиваемых нейронов человека линии SK-N-SH. Доклады Академии наук. 2013; 448 (2): 232-235.
5. Butterfield D.A., Swomley A.M., Sultana R Amyloid |3-peptide (1-42)-induced oxidative stress in Alzheimer disease: importance in disease pathogenesis and progression. Antioxid. Redox Signal. 2013; 19 (8): 823-835.
6. Elmlinger M.W., Kriebel M., Ziegler D. Neuroprotective and anti-oxidative effects of the hemodialysate actovegin on primary rat neurons in vitro. Neuromolec. Med. 2011; 13 (4): 266-274.
7. Cui W., Li W., Zhao Y., Mak S., Gao Y., Luo J., Zhang H., Liu Y., Carlier P.R., Rong J., Han Y. Preventing H2O2-induced apoptosis in cerebellar granule neurons by regulating the VEGFR-2/Akt signaling pathway using a novel dimeric antiacetylcholinesterase bis(12)-hupyridone. Brain Res. 2011; 1394: 14-23.
8. Zhao Z.Y., Luan P., Huang S.X., Xiao S.H., Zhao J., Zhang B., Gu B.B., Pi R.B., Liu J. Edaravone protects HT22 neurons from H2O2-induced apoptosis by inhibiting the MAPK signaling pathway. CNS Neuroscience & Ther. 2013; 19 (3): 163-169.
9. Hyslop P.A., Zhang Z., Pearson D.V., Phebus L.A. Measurement of striatal H2O2 by microdialysis following global forebrain ischemia and reperfusion in the rat: correlation with the cytotoxic potential of H2O2 in vitro. Brain Res. 1995; 671 (2): 181-186.
10. Peng Y., Hu Y., Feng N., Wang L., Wang X. L-3-n-butyl-phthalide alleviates hydrogen peroxide-induced apoptosis by PKC pathway in human neuroblastoma SK-N-SH cells. Naunyn. Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2011; 383 (1): 91-99.
11. Wang X., Hu D., Zhang L., Lian G., Zhao S., Wang C., Yin J., Wu C., Yang J. Gomisin A inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory responses in N9 microglia via blocking the NF-kB/ MAPKs pathway. Food Chem. Toxicol. 2014; 63: 119-127.
12. Ezoulin M.J., Ombetta J.E., Dutertre-Catella H., Warnet J.M., Massikot F. Antioxidative properties of galantamine on neuronal damage induced by hydrogen peroxide in SK-N-SH cells. Neurotoxicology. 2008; 29 (2): 270-277.
13. Jovanovid Z. Mechanisms of neurodegeneration in Alzheimer’s disease. Med. Pregl. 2012; 65 (7-8): 301-307.
14. Kwon S.H., Hong S.I., Jung Y.H., Kim M.J., Kim S.Y., Kim H.C., Lee S.Y., Jang C.G. Lonicera japonica THUNB. Protects 6-hydroxydopamine-induced neurotoxicity by inhibiting activation of MAPKs, PI3K/Akt, and NF-kB in SH-SY5Y cells. Food Chem. Toxicol. 2012; 50 (3-4): 797-807.
15. Filomeni G., Piccirillo S., Rotilio G., Ciriolo M.R. p38(MAPK) and ERK1/2 dictate cell death/survival response to different prooxidant stimuli via p53 and Nrf2 in neuroblastoma cells SH-SY5Y. Biochem. Pharmacol. 2012; 83 (10): 1349-1357.
#
КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Юринская Марина Михайловна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории экстремальных состояний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, ведущий научный сотрудник Института биофизики клетки РАН
Адрес: 142290, Московская обл., Пущино, ул.Институтская, д. 3, тел.: +7 (4967) 73-26-83, e-mail: marinayurin@mail.ru Винокуров Максим Григорьевич, доктор биологических наук, главный научный сотрудник лаборатории экстремальных состояний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, заведующий лабораторией регуляции апоптоза Института биофизики клетки РАН
Адрес: 142290, Московская обл., Пущино, ул.Институтская, д. 3, тел.: +7 (4967) 73-26-83, e-mail: mgvinokurov@rambler.ru
Асташкин Евгений Иванович, доктор биологических наук, профессор кафедры патологии, заведующий лабораторией экстремальных состояний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова
Адрес: 119992, Москва, ул. Трубецкая д. 8, стр. 1, тел.: +7 (495) 622-96-01, e-mail: 287ast@mail.ru
Грачёв Сергей Витальевич, доктор медицинских наук, академик РАН, заведующий кафедрой патологии Первого
МГМУ им. И.М. Сеченова
Адрес: 119992, Москва, ул. Трубецкая д. 8, стр. 1, тел.: +7 (499) 248-31-22, e-mail: grachevscience@gmail.com Орехова Наталья Стефановна, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории экстремальных состояний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Адрес: 119992, Москва, ул. Трубецкая д. 8, стр. 1, тел.: +7 (495) 622-96-01
Новикова Антонина Николаевна, лаборант-исследователь лаборатории экстремальных состояний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова
Адрес:119992, Москва, ул. Трубецкая д. 8, стр. 1, тел.: +7 (495) 622-96-01
Соколова Ирина Николаевна, кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории функциональных методов исследования и рациональной фармакотерапии сердечно-сосудистых заболеваний НИЦ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова
Адрес: 119992, Москва, ул. Трубецкая д. 8, стр. 1, тел.: +7 (499) 972-96-12, e-mail: 287ast@mail.ru
#
