CC BY
27
© О.И. Кит, Е.М. Франциянц, Л.С. Козлова, Е.В. Вереникина, Ю.А. Погорелова, Н.С. Чугунова, И.С. Таварян, 2017
УДК 618.11-006.67:577.15
СИСТЕМА ФИБРИНОЛИЗА В ЦИСТАДЕНОМЕ И НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ РАЗВИТИЯ ЦИСТАДЕНОКАРЦИНОМЫ ЯИЧНИКОВ
О.И. Кит, Е.М. Франциянц, Т.И. Моисеенко, Л.С. Козлова, Е.В. Вереникина, Ю.А. Погорелова, Н.С. Чугунова, И.С. Таварян
ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» МЗ РФ, г. Ростов-на-Дону
FIBRINOLYSIS SYSTEM IN CYSTADENOMA
AND AT DIFFERENT STAGES OF OVARIAN CYSTADENOCARCINOMA
O.I. Kit, E.M. Frantsiyants, T.I. Moiseenko, L.S. Kozlova, E.V. Verenikina, Yu.A. Pogorelova, N.S. Chugunova, I.S. Tavaryan
Rostov Cancer Research Institute of the Ministry of Health of Russia, Rostov-on-Don
Козлова Лариса Степановна — кандидат биологических наук, доцент, старший научный сотрудник ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» МЗ РФ
344037, г. Ростов-на-Дону, ул. 14 линия, д. 63, тел. +7-909-427-74-71, e-mail: super.gormon@ya.ru, 79094277471@ya.ru Kozlova L.S. — Cand. Biol. Sc., Associate Professor, Senior Researcher of the Rostov Cancer Research Institute of the Ministry of Health of Russia
6314 Line Str., Rostov-on-Don, Russian Federation, 344037, tel. +7-909-427-74-71, e-mail: super.gormon@ya.ru, 79094277471@ya.ru
Реферат
Введение. Злокачественные опухоли яичников не имеют явных клинических признаков, отличающих их от доброкачественных. Изучение системы фибринолиза важно для понимания биологических свойств рака яичников и поможет конкретизировать некоторые теоретические моменты, необходимые для разработки новых подходов противодействия распространению заболевания и малигнизации доброкачественных образований.
Цель работы — изучение плазмина (П), плазминогена (ПГ), его активаторов (uPA и tPA), ингибитора PAI-1 в ткани рака яичников на I-IV стадиях развития в сравнении с доброкачественной опухолью.
Материал и методы. Методом ИФА исследован операционный материал 76 больных серозной цистаденокарциномой (T1N0M0; T2N0M0; T3NxM0; T4Nx1M0; 51,5±1,7 лет), 47 больных цистаденомой, 48,8±2,7 лет. Контролем служила морфологически неизмененная ткань яичников, удаленных по поводу миомы матки у 20 больных, 52,3±1,9 лет.
Результаты. Установлено снижение содержания ПГ во всех исследованных тканях; рост активности свободного П при T1N0M0 и T2N0M0, истощение ПГ и свободного П при T3NxM0 и T4Nx-1M0; увеличение комплекса П-а2-антиплазмин (РАР) во всех тканях, кроме T4Nx-1M0 и непораженного яичника при T,N0M0. Найдено увеличение uPA-АГ и uPA-акт во всех исследованных тканях, относительно контроля; снижение tPA-АГ во всех тканях и увеличение tPA-акт при T2N0M0 и T3NxM0. PAI-1-АГ увеличивался во всех тканях, относительно контроля, при T4Nx1M0 — вдвое выше, чем в остальных опухолях. PAI-1-акт снижен во всех тканях, кроме T3NxM0.
Заключение. Обнаружено сходство изменений ПГ, РАР, uPA, tPA, PAI-1 при злокачественных и доброкачественных опухолях яичников. Предполагается, что эти компоненты могут быть участниками прогрессии цистаденокарциномы и малигнизации цистаденомы.
Ключевые слова: цистаденома и цистаденокарцинома яичников, система фибринолиза. Abstract
Introduction. Malignant ovarian tumors have no obvious clinical signs that distinguish them from benign ones. Study of fibrinolysis system is important to understand the biological properties of ovarian cancer; it helps to specify some theoretical aspects necessary to develop new approaches to prevent the disease spread and benign tumors malignancy. Goal — study of plasmin (P), plasminogen (PG), its activators (uPA and tPA), PAI-1 inhibitor in the ovarian cancer tissue at I-IV stages of development in comparison with benign tumors.
Material and methods. Operating material of 76 patients with serous cystadenocarcinoma (T1N0M0; T2N0M0; T3NxM0; T4Nx1M0; 51,5±1,7 years), 47 patients with cystadenoma, 48,8±2,7 years, was studied using ELISA method. Morphologically unaltered tissue of the ovaries removed on the occasion of the uterine fibroid in 20 patients, 52,3±1,9 years, was used as the control. Results. Reduction in the PG content in all the tissues studied, increase in the free P activity with T1N0M0 and T2N0M0, PG and free P depletion with T3NxM0 and T4Nx-1M0; increase in P-a2-antiplasmin (PAP) complex in all the tissues except for T4Nx-1M0 and unaffected ovary with T1N0M0, were established. Increase in uPA-AG and uPA-act in all the tissues studied, with respect to the control; reduction in tPA-AG in all the tissues and increase in tPA-act with T2N0M0 and T3NxM0, were found. PAI-1-AG increased in all the tissues with respect to the control, with T4Nx1M0 - twice as high as in other tumors. PAl-1-act reduced in all the tissues, except for T3NxM0. Conclusion. Similarity of PG, pAp, uPA, tPA, PAI-1 changes in malignant and benign ovarian tumors was found. It is assumed that these components can participate in the progression of cystadenocarcinoma and cystadenoma malignancy. Key words: cystadenoma and ovarian cystadenocarcinoma, fibrinolysis system.
Введение
Злокачественные новообразования яичников не имеют явных клинических признаков, отличающих их от доброкачественных опухолей. Лечение оперативное, прогноз зависит от стадии заболевания, морфологической структуры опухоли и ее дифференци-ровки. Заболевание бывает двусторонним в 30-100% случаев. При двусторонних опухолях, как правило, появляется асцит. 5-летняя выживаемость составляет при I стадии — 60-90%, в зависимости от морфологической принадлежности опухоли; при II стадии — 40-50%; при III стадии — 11%; при IV стадии — 5%. Около 90% всех злокачественных опухолей яичников относятся к эпителиальноклеточным. Серозные злокачественные эпителиальные опухоли (серозные цистаденокарциномы) — самые распространенные злокачественные эпителиальноклеточные опухоли. Считается, что около 50% этих карцином развивается из доброкачественных предшественников (серозных цистаденом) и к моменту клинического проявления в 30% случаев они оказываются двусторонними [23]. Серозные цистаденокарциномы имеют, как правило, многокамерную структуру и часто прорастают на наружную поверхность капсулы. Злокачественные новообразования гонад относятся к числу агрессивных форм рака, отличающихся быстрым стихийным развитием путем имплантационного роста, возникновением гематогенных и лимфогенных метастазов.
Давно доказано непосредственное и опосредованное участие компонентов системы фибринолиза в развитии и инвазии злокачественных новообразований [13, 16]. Большое количество трудов свидетельствует о том, что дисрегуляция любого из компонентов этой системы может привести к формированию опухоли и метастазов [9]. Компоненты фибринолити-ческой системы стали адекватными диагностическими и прогностическими маркерами, например, в раке эндометрия, молочной железы, легких, поджелудоч-
ной железы и др. [8, 9, 24]. Несмотря на многочисленность сообщений, сведения о некоторых компонентах фибринолитической системы и их взаимодействии часто весьма противоречивы. Изучение системы фибринолиза важно для понимания биологических свойств рака яичников и поможет конкретизировать многие теоретические моменты, необходимые для разработки новых подходов противодействия распространению заболевания, улучшению результатов лечения на разных стадиях его развития.
Целью настоящего исследования являлось комплексное изучение плазмина, плазминогена, его активаторов и ингибитора РАН в ткани рака яичников на
стадиях развития в сравнении с доброкачественной опухолью.
Материал и методы
До начала исследования получено разрешение этического комитета РНИОИ и добровольное информированное согласие всех больных на использование удаленной ткани опухолей для проведения научных исследований. Исследован операционный материал 76 больных эпителиальным раком яичников (серозная цистаденокарцинома: Т1И0М0; Т2Ы0М0; Т3ЫхМ0; Т4Ых-1М0; возраст 51,5±1,7 лет), 47 больных доброкачественными опухолями яичников (цистаденома, возраст 48,8±2,7 лет), поступивших на оперативное лечение в отделение онгогинекологии РНИОИ. Гистологический контроль осуществлялся во всех случаях. В ходе оперативного вмешательства производилось удаление новообразований яичников с последующим биохимическим исследованием образцов ткани опухоли. В качестве условно здоровой (контрольной) использовали ткань яичников, удаленных по поводу миомы матки (п=20, возраст 52,3±1,9 лет). Ткань опухоли гомогенизировали в стерильном физиологическом растворе, однократно замораживали/размораживали
при -20°С, центрифугировали и в супернатанте определяли содержание проурокиназы, урокиназы, про-тромбокиназы, тромбокиназы (uPA-АГ, uPA-акт, tPA-АГ, tPA-акт), а также их ингибитора PAI-1 (PAI-1-АГ и PAI-1-акт) и плазмина, связанного с а2-антиплазмином (РАР) методами ИФА ПесЬпос!опе, Австрия). Содержание плазминогена (ПГ) и свободного плазмина (П) определяли спектрофотометрическим методом. Результаты пересчитывали на 1 мг влажной ткани, статистическую обработку осуществляли с помощью сертифицированной программы Statistica 10, достоверность различий определяли, используя t-критерий Стьюдента. Различия считали значимыми при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Установлено, что наибольшим содержание ПГ было в контрольной условно здоровой ткани яичников при миоме матки, в ткани цистаденомы оно снижено в 1,7 раза, в тканях цистаденокарциномы — на 5,213,1 раз на разных стадиях развития, относительно контроля (табл. 1). Только при T2N0M0 его содержание выше в 2,5 раза, чем при T1N0M0, но это ниже, чем в контроле и ткани цистаденомы в 5,2 и 3 раза, соответственно.
На всех стадиях рака яичников приходилось констатировать истощение тканевого ПГ: коэффициент соотношения «предшественник/фермент» ПГ/П был 0,1-0,2 против 1,8 в контроле. D. Butera et a!. [4] объясняют снижение ПГ плазмы крови расходом на образование ангиостатина и считают ПГ прямым его прекурсором. Возможно, это объяснение применимо и для тканевого плазминогена, т.к. он является единственным источником ангиостатина. Тем не менее, нарушение физиологического равновесия ПГ и П в ткани на всех стадиях развития рака яичников неблагоприятно сказывается на активности смежных ферментных систем, стабильности межклеточного матрикса и может прямо способствовать злокачественной прогрессии [8, 9]. Особенно активно происходило образование тканевого плазмина при T2N0M0. Коэффициенты соотношений ПГ/П и ПГ/РАР при раке на всех его стадиях на порядок ниже, чем в ткани цистаденомы, хотя в последней они в 1,8 и в 3 раза, соответственно, ниже контроля (табл. 1).
По содержанию плазмина, связанного с а2-антиплазмином (РАР), можно судить как о количестве связанного фермента, так и о содержании ингибитора. При T1N0M0 в непораженном яичнике и при T4Nx-1M0 количество образовавшегося комплекса практически совпадало с содержанием РАР в контрольной ткани,
а при T,N0M0 в пораженном яичнике, T2N0M0 и T3NxM0 было повышено, в среднем в 1,7 раза во всех случаях. При этом активность свободного П повышалась от T1N0M0 (в ткани пораженного яичника) к T2N0M0 — это была максимальная величина из всех определенных случаев. В тканях T,N М„и TN ,M„активность П сопо-
' 3 x 0 4 x-1 0
ставима с таковой в контроле и цистаденоме. Плаз-мин, находящийся в связанном с фибрином и/или клеточными мембранами состоянии, гораздо меньше подвержен ингибированию а2-антиплазмином: эффективность его инактивации уменьшается в 430 раз и, соответственно, многократно увеличивается время его полужизни [14].
При сравнении количества свободного и связанного плазмина в исследованных тканях яичников обращает на себя внимание постепенное нарастание активности свободного плазмина в злокачественно измененной ткани с одновременным истощением количества предшественника и, как следствие, — понижением активности свободного фермента при TjN^ и T^^ (табл. 1). Количество РАР, напротив, оказалось относительно стабильным во всех тканях с небольшими, иногда достоверными колебаниями. Это отражено коэффициентом соотношения двух форм плазмина П/РАР в таблице 1. В цистаденоме невысокое содержание свободного плазмина с преобладанием связанной формы РАР может свидетельствовать о защитной протеолитической реакции, связанной с реализацией санирующих и биологических свойств плазмина в межклеточных пространствах и мобилизацией а2-антиплазмина. В цистаденокарциноме, на стадии T1N0M0, в непораженном яичнике наблюдался его дефицит, относительно контрольной ткани, мы считаем возможным перераспределение фракций этого ингибитора в пораженный яичник для блокирования освобождающегося фермента. Отсутствие повышения концентрации а2-антиплазмина (комплекса РАР в табл. 1) при росте активности свободного плазмина может быть связано и с токсическим влиянием злокачественной опухоли [20]. Авторы исследовали нарушение стабильности легочной ткани после лобэктомии и зафиксировали снижение уровня комплекса РАР в плевральном выпоте, повышение активности противосвертывающей системы у больных с нарушенной целостностью альвеолярных структур. На основании полученных данных F. Shoji et al. [20] пришли к выводу о недостаточности а2-антиплазмина и участии плазмина в продолжающемся послеоперационном повреждении альвеолярной ткани больных после лобэктомии.
Таблица 1. Плазминоген и плазмин в ткани яичников (M±m)
Показатель Контроль (яичники при миоме матки, n=20) Цистаденома яичника (n=47) Цистаденокарцинома яичника
T1N0M0 (n=14) T2N0M0 (n=18) T3NxM0 (n=27) T4NX-1M0 (n=17)
Пораженный Непораженный
1 2 3 4 5 6
ПГ мг/л 627,8±49,1 364,1±28,21 47,88±3,912 89,28±6,8123 121,3±9,81'2-3-4 84,07±6,2123 76,71±5,21-2-3-4-5
П мг/л 359,5±29,2 380,4±31,7 630,7±47,112 444,6±34,513 1247±96,11-2'3-4 372,1±29,13-4-5 405,3± 27,235
РАР мкг/л 206,4±15,1 352,3±26,11 337,7±26,81 193,3±15,223 332,1±26,414 345,3±28,514 200,2±12,62-3-5-6
Коэффициенты соотношений
ПГ/П 1,8±0,1 1,0±0,071 0,1±0,00712 0,2±0,01123 0,1±0,08124 0,2±0,011-2'3'5 0,2±0,01123'5
ПГ/РАР 3,0±0,2 1,0±0,081 0,1±0,00712 0,5±0,03123 0,4±0,031234 0,2±0,0112-3'4'5 0,4±0,031-2-3-4-6
П/РАР 1,7±0,1 1,1±0,081 1,9±0,1212 2,3±0,15123 3,8±0,2712-3-4 1,1±0,0713-4'5 2,0±0,12А6
Примечание: индекс достоверности различий соответствует номеру столбца, с которым сравнивали числовые значения (р<0,01)
Именно плазмин, помимо своей основной функции растворения фибрина, разжижает межклеточный матрикс, повреждает гистогематические барьеры и клеточные мембраны, является непосредственным активатором прекалликреина, трипсиногена, про-эластазы и остальных проферментов сериновых про-теиназ, в том числе факторов роста, а также матрикс-ных металлопротеиназ, коллагеназ и др. [3, 8]. Elena I. Deryugina, James P. Quigley [8] в своем обзоре сообщили, что плазмин необходим для активации практически всех матриксных металлопротеиназ, включая ММП-1, ММП-2, ММП-3, ММП-9, ММП-12, ММП-13 и ММП-14. Опосредованно этому способствуют активаторы плазминогена uPA и tPA, содержание и активность которых изменялись во всех исследованных образцах ткани (табл. 2).
В интерстиции uPA — преобладающий фактор активации плазминогена, он способствует околоклеточному протеолизу и активации клеток через рецептор uPAR [7, 8, 19]. В исследованных нами тканях яичников его антигенная форма uPA-АГ достоверно увеличена в 1,8-4,0 раза, включая и ткань непораженного яичника при T1N0M0 (табл. 2). В ткани цистаденомы его содержание превышало таковое в ткани непораженного яичника в 1,3 раза. Содержание активной формы uPA-акт также было повышенным во всех исследованных тканях яичников в 1,3-2,2 раза, но при цистаденоме это увеличение было наименьшим и достоверно отличалось от изменений при цистаденокарциноме. В содержании uPA-акт ткани цистаденомы не установлено достоверных различий только с тканью непо-
раженного яичника при T1N0M0, в обоих случаях оно превышало контрольные значения в 1,3 раза.
Система урокиназного пути активации плазминогена тесно связана с адгезией и миграцией клеток. Локализация урокиназы и плазминогена на клеточных мембранах посредством соответствующих рецепторов и сайтов связывания обеспечивает околоклеточный протеолиз, необходимый для инвазии. Урокиназа и образующийся плазмин обладают одинаковым непосредственным стимулирующим действием на клетки и опосредованным, которое связано с активацией латентных факторов роста, цитокинов, коллагеназ, ММП, а также с прямым действием этих молекул на клетку [19, 25]. Урокиназа изменяет адгезию клеток на внеклеточном и фибриногеновом матриксе, при этом действие урокиназы определяется ее протеолитиче-скими свойствами [8]. Jingli Zhuo et al. [12] исследовали гельсолин, актинсвязывающий белок цитоскелета, ответственный за пластичность и сократительную способность клеток. Было показано, что он индуцирует экспрессию урокиназы при колоректальном раке. Раскрывая новые функции гельсолина, авторы одновременно доказали важную роль каскада uPA/uPAR в распространении опухоли прямой кишки и образования метастатических узлов. Min H.J. et al. [17] установили, что активация плазмином матриксных металлопротеиназ вызывает инвазию раковых клеток через активацию uPA. Elena I. Deryugina, James P. Quigley [8] представили доказательства того, что uPA участвует в туморогенезе рака эндометрия, причем высокая экспрессия uPA ассоциируется с быстрым прорастани-
Таблица 2. Активаторы плазминогена и ингибитор PAI-1 в
яичников (M±m)
Показатель Контроль (яичники при миоме матки, п=20) Цистаденома яичника (п=47) Цистаденокарцинома яичника
T,N0M0 (п=14) T2N0M0 (п=18) T3NxM0 (п=27) T4Nx-1M0 (п=17)
Пораженный Непораженный
1 2 3 4 5 6
uPA-АГ нг/л 2,5±0,2 5,7±0,51 8,1±0,612 4,4±0,3123 9,7±0,8123-4 10,0±0,812'3'4 5,4±0,413-4-5-6
uPA-акт ед/л 0,36±0,002 0,45±0,0351 0,8±0,06512 0,5±0,04113 0,7±0,057124 0,7±0,055124 0,5±0,04213-5-6
tPA-АГ нг/л 53,3±3,9 30,9±2,31 44,3±3,412 27,9±2,113 47,3±3,8124 47,0±3,5124 4,7± 0,38123А5-6
tPAакт ед/л 4,9±0,4 3,8±0,31 5,2±0,42 3,8±0,313 7,1±0,61-2'3'4 11,9±0,91-2'3'4 0,5±0,04012А5-6
PAI-1-АГ нг/л 290,8±21,9 413,1±31,51 420,3±31,91 414,3±30,51 408,1±32,11 423,0±31,31 799,6±59,2123А5-6
PAI-1-акт ед/л 17,9±1,3 9,2±0,71 9,0±0,71 8,2±0,61 8,4±0,712 20,5±1,62-3-4-5 15,9±1,223А5-6
Коэффициенты соотношений
uPA-АГ/uPA-акт 6,9±0,5 12,7±0,91 10,1±0,812 8,8±0,612 13,9±1,113,4 14,3±1,11234 10,8±0,91,2'4'5'6
tPA-АГ/tPAакт 10,9±0,8 8,1±0,61 8,5±0,71 7,3±0,51-3(ра0.05) 6,7±0,5123 4,0±0,3123-4-5 9,4±0,812-4-5-6
PAI-1-АГ/PAI-1-акт 16,3±1,2 44,9±3,41 46,7±3,71 50,5±3,71 48,6±3,71 20,6±0,5123А5 50,3±4,116
PAI-1-акт/uPA-акт 50,0±3,8 20,4±1,61 11,3±0,912 16,4±1,213 12,0±0,9124 29,3±2,1123А5 31,8±2,51-2'3'4'5
PAI-1-акт/tPA-акт 3,7±0,3 2,4±0,21 1,7±0,112 2,2±0,213 1,2±0,11-2'3-4 1,7±0,112-4-5 31,8±2,4123А5-6
Примечание: индекс достоверности различий соответствует номеру столбца, с которым сравнивали числовые значения (р<0,01)
ем и метастазированием опухоли. Chia-Yen Huang et al. [6] подтвердили их выводы, доказав, что при раке эндометрия высокая экспрессия uPA повышает инва-зивную способность опухолевых клеток. В своем исследовании авторы сообщают, что uPA в тканях рака экспрессируется более высоко, чем в гиперпластических и нормальных тканях эндометрия. Перечисленные исследования демонстрируют прямую связь между увеличением экспрессии uPA и способностью опухоли и метастазов рака эндометрия к прогрессии. L. Tang, X. Han [22], изучая рак молочной железы, пришли к выводу об участии урокиназы в его метаста-зировании. Урокиназа имеет очень низкое сродство к фибрину, однако присутствие фибрина, клеточных мембран и микровезикул, выделяемых клетками эндотелия, повышает ее активность в отношении плазминогена [14].
J. Halamkova et al. [11], B.J. McMahon, H.C. Kwaan [15] считают феномен резкого увеличения внутри-опухолевой урокиназы универсальным для многих злокачественных новообразований. Активность урокиназы контролируется серпином PAI-1, который имеет сродство не только к uPA, но и к tPA [11, 21].
Тромбокиназа (tPA) является трансмембранным гликопротеином и локализована, в основном, в эн-дотелиальных клетках. Баланс «профермент/фермент» tPA^/tPA^^ был достоверно понижен во всех исследованных тканях яичников, включая непораженный яичник при T1N0M0, при этом степень его снижения резко увеличивалась на стадиях T2N0M0 и T3NkM0. При T4Nk-1M0 мы наблюдали внезапное повышение коэффициента tPA^/tPA^^ за счет резкого снижения содержания tPA-АГ и, как следствие, наличия практически следовых количеств tPA-акт в ткани, по-видимому, в связи с прекращением его образования (табл. 1, 2). Опираясь на эти данные, можно утверждать, что в злокачественно перерожденной ткани яичников, по мере развития опухоли, образование tPA-акт активизируется на ранних стадиях и прекращается на стадии T4Nk-1M0, в связи с истощением профермента.
В ткани цистаденомы также регистрировалось снижение tPA-АГ и tPA-акт с уменьшением коэффициента соотношения неактивной и активной форм в 1,4 раза, и достоверными его отличиями от коэффициентов tPA^/tPA^^ на стадиях T^M^N^M^
Тканевой активатор плазминогена теперь рассматривается многими исследователями как один из ферментов, вовлекаемых в процессы деструкции ба-зальной мембраны, внеклеточного матрикса и инвазии клеток, в настоящее время уточняются детали его взаимодействия с РА1-1 [19, 21, 26].
РА1-1 является чрезвычайно важным серпином со сложными свойствами, сообщалось, что его избыточная экспрессия связана с высоким риском образования метастазов [18]. Авторами измерена биодоступность РА1-1 и сделан вывод о том, что быстрее всего РА1-1 связывается с иРА, теряя при этом значительную часть своей активности. В наших исследованиях баланс РА1-1-акт/иРА-акт уменьшался в 2,5 раза в доброкачественной опухоли яичников, сравнительно с контролем, и в 1,6-4,4 раза при раке, включая и непораженный яичник при Т1Ы0М0(табл. 2). Наименьшим соотношение РА1-1-акт/иРА-акт было в пораженном яичнике при Т1Ы0М0, последовательно увеличиваясь к стадии Т4Ых-1М0. Соотношение РА1-1-актАРА-акт также уменьшалось во всех исследованных тканях, кроме Т4Ых-1М0, где оно было увеличено на порядок, сравнительно с контролем. При этом данные РА1-1-актАРА-акт непораженного яичника при Т1Ы0М0 не имели достоверных отличий от таковых в ткани цистаденомы.
Собственный баланс антигенной формы РА1-1 с активной (РА1-1-АГ/РА1-1 -акт) был достоверно увеличенным во всех исследованных тканях за счет повышенного содержания РА1-1-АГ в 1,4-2,8 раза, относительно контроля, включая и непораженный яичник при Т^Д,.
Из данных литературы следует, что содержание РА1-1 в туморозном очаге при многих локализациях рака достоверно повышено, сравнительно с гистологически неизмененной тканью [5, 10]. Авторы подчеркивают, что высокая концентрация РА1-1 в опухолевой ткани не только не снижает ее агрессивность, но ухудшает течение заболевания у больных раком толстой и прямой кишки, желудка, молочной железы, яичников и др., и предлагают использовать РА1-1 в качестве прогностического маркера течения злокачественного процесса. Наши результаты согласуются с наблюдениями этих и других исследователей и подтверждают возможность защиты опухолевых клеток ингибитором РА1-1 от разрушения эндогенными и ассоциированными с опухолью протеиназами. В свете последних сообщений, резко повышенное содержание РА1-1 в исследованных нами тканях цистаденомы и циста-денокарциномы яичников скорее может служить показателем агрессивности злокачественных опухолей
и возможности малигнизации доброкачественных, чем фактором эндогенной защиты. Ранее мы регистрировали дисбаланс между тканевыми серпинами, а также серпинов с активаторами плазминогена при аденокарциноме толстой кишки [1], а также в ликворе больных глиобластомой головного мозга [2]. Во всех случаях повышение содержания серпинов ткани и ликвора было связано с ухудшением состояния больного, а значения, близкие к нормальным, встречались только у больных с благополучным течением послеоперационного периода.
Заключение
Анализируя полученные результаты, мы пришли к выводу о том, что в развитии и цистаденомы, и цистаденокарциномы есть общие черты, заключающиеся в повышении антигенных форм uPA, PAI-1, снижении ПГ, tPA-АГ, вплоть до их истощения при Т4Ых-1М0 и нарушении физиологического равновесия всех изученных предшественников с их активными формами в исследованных тканях. Изменения свободного и связанного плазмина, обоих активаторов ПГ и PAI-1 в непораженном яичнике при T1N0M0 практически аналогичны таковым при цистаденоме яичника. По многим данным плазмин многократно более эффективен, чем трипсин, в лизисе белков экс-трацеллюлярного матрикса in vivo [8]. В развитии и цистаденомы, и цистаденокарциномы яичников uPA, PAI-1 и свободный плазмин играют, по-видимому, ведущую роль. Изменения фибринолиза при раке яичников отражаются в показателях активности не только ферментов системы общего и специфического протеолиза, но и белков, ограничивающих про-теолитические реакции. Активированные ферменты сами оказываются активаторами других белков, формируя тем самым сложные и многокомпонентные активационные каскады, регулирующие важнейшие пути метаболизма на стадиях развития рака яичников. Возможно, направленное избирательное воздействие на uPA, PAI-1, плазмин на ранних стадиях может быть полезно в лечении цистаденомы и рака яичников.
Выводы
1. Концентрация uPA-акт и PAI-1 в тканях цистаденомы и цистаденокарциномы яичников была достоверно выше, чем в контрольной ткани яичников, во всех случаях нарушен баланс между проферментом
и ферментом, а также между антигенной и активной формами ингибитора.
2. Содержание tPA было снижено от контроля в цистаденоме, на стадиях T,N0M0 и T4Nx-1M0 цистаденокарциномы, но на стадиях T2N0M0 и T3NxM0 — выше, чем в остальных образцах ткани.
3. При цистаденоме и цистаденокарциноме яичников uPA, tPA, PAI-1 и свободный плазмин могут стать мишенями лекарственной терапии.
Литература
1. Кит О.И., Франциянц Е.М., Никипелова Е.А., и др. Изменения маркеров пролиферации, неоангиоге-неза и системы активации плазминогена в ткани рака прямой кишки // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. — 2015. — 114 (2). — С. 40-45.
2. Козлова Л.С., Франциянц Е.М., Атмачиди Д.П., Горбунова Т.А. Ингибиторы протеолиза в ликворе больных злокачественными глиомами после двух видов локальной интраоперационной химиотерапии // Злокачественные опухоли (J. of Malignant Tumours). — 2014. — 10 (3). — С. 15-21.
3. Aisina R.B., Mukhametova L.I. Structure and functions of plasminogen/plasmin system // Bioorg. Khim. — 2014 Nov-Dec. — 40 (6). — P. 642-657.
4. Butera D., Wind T., Lay A.J., et al. Characterization of a reduced form of plasma plasminogen as the precursor for angiostatin formation // J. Biol. Chem. — 2014. — 289 (5). — P. 2992-3000. DOI: 10.1074/jbc. M113.539924.
5. Chen H., Peng H., Liu W., et al. Silencing of plasminogen activator inhibitor-1 suppresses colorectal cancer progression and liver metastasis // Surgery. — 2015. — 158 (6). — P. 1704-1713. PMID: 26275833 DOI: 10.1016/j.surg.2015.04.053
6. Chia-Yen Huang, Ming-Cheng Chang, Wei-Yun Huang, et al. Urokinase-type plasminogen activator resulting from endometrial carcinogenesis enhances tumor invasion and correlates with poor outcome of endometrial carcinoma patients // Sci Rep. — 2015. — 5. — P. 10680. Published online 2015 June 2. DOI: 10.1038/srep10680
7. Del Rosso M., Margheri F., Serrat! S., et al. The urokinase receptor system, a key regulator at the intersection between inflammation, immunity, and coagulation // Current Pharmaceutical Design. — 2011. — 17 (19). — P. 1924-1943.
8. Deryugina Elena I., James P. Quigley. Cell Surface
Remodeling by Plasmin: A New Function for an Old Enzyme // J. Biomed. Biotechnol. — 2012. — 564259. Published online 2012 October 14. DOI: 10.1155/2012/564259
9. Didiasova Miroslava, Lukasz Wujak, Malgorzata Wygrecka, Dariusz Zakrzewicz. From Plasminogen to Plasmin: Role of Plasminogen Receptors in Human Cancer // Int. J. Mol. Sci. — 2014. — 15 (11). — P. 21229-52. DOI: 10.3390/ijms151121229
10. Duffy M.J., McGowan P.M., Harbeck N., et al. uPA and PAI-1 as biomarkers in breast cancer: validated for clinical use in level-of-evidence-1 studies // Breast Cancer Res. — 2014. — 16 (4). — P. 428.
11. Halämkovä J., Kiss I., Tomäsek J., et al. Significance of urokinase and its inhibitors in the invasiveness and metastasing of malignant tumors // Vnitr. Lek. — 2012. — 58 (2). — P. 129-34.
12. Jingli Zhuo, Ee Hong Tan, Benedict Yan, et al. Gelsolin Induces Colorectal Tumor Cell Invasion via Modulation of the Urokinase-Type Plasminogen Activator Cascade // PLoS One. — 2012. — 7 (8). — P. e43594. Published online 2012 August 21. DOI: 10.1371/ journal.pone.0043594
13. Kwaan H.C., McMahon B. The role of plasminogen-plasmin system in cancer // CancerTreat. Res.—2009. — 148. — P. 43-66. PMID: 19377918 DOI: 10.1007/978-0-387-79962-9_4 [PubMed]
14. Romaric Lacroix, Florence Sabatier, Agnes Mialhe, et al. Activation of plasminogen into plasmin at the surface of endothelial microparticles: a mechanism that modulates angiogenic properties of endothelial progenitor cells in vitro // Blood. Author manuscript; available in PMC. — 2008. — 110 (7). — P. 2432-2439. DOI: 10.1182/blood-2007-02-069997 [PubMed]
15. McMahon B.J., Kwaan H.C. Components of the Plasminogen-Plasmin System as Biologic Markers for Cancer // Adv. Exp. Med. Biol. — 2015. — 867. — P. 145-56.
16. Miles L.A., Parmer R.J. Plasminogen receptors: The first quarter century // Semin. Thromb. Hemost. — 2013. — 39. — P. 329-337. DOI: 10.1055/s-0033-1334483. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]
17. Min H.J., Lee M.K., Lee J.W., Kim S. TMPRSS4 induces cancer cell invasion through pro-uPA processing // Biochem. Biophys. Res. Commun.—2014.—446 (1). — P. 1-7. DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.01.013
18. Qureshi T., Goswami S., McClintock C.S., et al. Distinct Encounter Complexes of PAI-1 with Plasminogen Activators and Vitronectin Revealed by Changes in the Conformation and Dynamics of the Reactive Center
Loop // Protein Sci. — 2016. — 25 (2). — P. 499-510.
19. Schuliga M. The inflammatory actions of coagulant and fibrinolytic proteases in disease // Mediators Inflamm. — 2015. — P. 4376-95.
20. Shoji F., Yano T., Yoshino I., et al. The dynamics and clinical significance of alpha 2 plasmin inhibitor-plasmin complex and thrombin-antithrombin complex in postoperative pleural effusion following a pulmonary lobectomy // Surg. Today. — 2009. — 39 (4). — P. 320-5. PMID: 19319640 DOI: 10.1007/s00595-008-3865-9
21. Suh Y.S., Yu J., Kim B.C., et al. Overexpression of Plasminogen Activator Inhibitor-1 in Advanced Gastric Cancer with Aggressive Lymph Node Metastasis // Cancer Res. Treat. — 2015. — 47 (4). — P. 718-26. DOI: 10.4143/crt.2014.064
22. Tang L., Han X. The urokinase plasminogen activator system in breast cancer invasion and metastasis // Biomedicine and Pharmacotherapy. — 2013. — 67 (2). — P. 179-182. PMID:23201006 D0I:10.1016/j. biopha.2012.10.003
23. Thomson C.A., Crane T.E., Miller A., et al. A randomized trial of diet and physical activity in women treated for stage II-IV ovarian cancer: Rationale and design of the Lifestyle Intervention for Ovarian Cancer Enhanced
Survival (LIVES): An NRG Oncology/Gynecologic Oncology Group (GOG-225) Study. Contemp. Clin. Trials. 2016, Jul 6; pii: S. 1551-7144 (16): 30105-7. [Epub ahead of print] PMID: 27394382 DOI:10.1016/j. cct.2016.07.005
24. Wang C.Y., Chen C.L., Tseng Y.L., et al. Annexin A2 silencing induces G2 arrest of non-small cell lung cancer cells through p53-dependent and -independent mechanisms // J. Biol. Chem. — 2012. — 287. — P. 32512-24. doi: 10.1074/jbc.M112.351957. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]
25. Witzel I., Milde-Langosch K., Schmidt M., et al. Role of urokinase plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor mRNA expression as prognostic factors in molecular subtypes of breast cancer // Onco. Targets Ther. — 2014. Nov. 28. — 7. — P. 2205-13. DOI: 10.2147/OTT.S65344. eCollection 2014.
26. Yamashita D., Kondo T., Ohue S., et al. miR340 suppresses the stem-like cell function of glioma-initiating cells by targeting tissue plasminogen activator // Cancer Res. — 2015. — 75 (6). — P. 1 123-33.
