CC BY
85
УДК 541.69:542.91:577.150.4
СИНТЕЗ, СТРОЕНИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФОСФОРИЛИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ АНАБАЗИНА
© Б.Н. Бабаев, Д.Н. Далимов, З. Тилябаев, Р. Т. Тлегенов
Институт биоорганической химии им. А.С. Садыкова АН РУз, пр. Мирзо Улугбека, 83, Ташкент, 100125 (Республика Узбекистан) e-mail: Bahrom-nur@rambler.ru
Синтезированы О-алкил-О-(анабазиноизопропил)- и О-алкил-О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфонаты и дифенилфос-финаты. Строение соединений подтверждено ИК-, ПМР- и масс-спектрами. Исследование биологических свойств соединений показало, что они превосходят по антимонооксигеназной активности стандартный ингибитор SKF-525A как в отношении инсектицида (параоксона), так и лекарственного препарата (амидопирина); антиферментная активность веществ зависит от строения фосфорильной части, алкильного радикала и источника фермента. Выявлены эффективные ингибиторы ферментов.
Ключевые слова: фосфорилированные производные анабазина, фенилфосфонаты и дифенилфосфинаты, синтез, строение, ингибиторы эстераз и монооксигеназ.
Введение
Узбекистан располагает большими ресурсами лекарственных растений. Многие из них с древних времен используются в народной медицине, быту и сельском хозяйстве, а в настоящее время они представляют богатейший источник для получения физиологически активных веществ. Особое место в этом отношении занимает ежовник безлистый (Anabasis aphylla L.), произрастающий в пустынных и полупустынных зонах республики. Из 10 алкалоидов, выделенных из этого растения [1], три относятся к пиридиновому (анабазин, анабазамин, основание 9) и семь к хинолизидиновому (лупинин, афиллин, оксоафиллидин, метиловый эфир афиллиновой кислоты, оксиафиллин, афиллидин, N-оксид афиллина) рядам.
Использование анабазина, представляющего собой отход фармацевтического производства, привело к получению целого ряда высокоэффективных препаратов. Так, сульфат анабазина на протяжении ряда лет использовался для борьбы с членистоногими - вредителями хлопчатника [2] и других сельскохозяйственных культур [3], а после открытия никотиноподобных свойств гидрохлорид анабазина был рекомендован как средство против курения [4].
Анализ литературных сведений позволяет предположить, что специфика структуры анабазина может служить основой для поиска регуляторов активности ферментов [5]. Поэтому с целью выяснения данного предположения, а также установления зависимости «строение-активность» синтезированы новые фосфори-лированные производные анабазина, изучены кинетические параметры их взаимодействия с ферментами метаболизма, в частности, с холинэстеразами и монооксигеназами теплокровных и членистоногих.
Экспериментальная часть
Индивидуальность синтезированных соединений контролировали методом тонкослойной хроматографии (носитель - Al2O3 II степени активности). В качестве элюента использовали систему растворителей - бензол : эфир : этанол (10 : 5 : 2). Проявитель - пары йода. Вещества очищены методом колоночной хроматографии (Al2O3 II степени активности, элюент - абсолютный эфир). ИК-спектры полученных соединений сняты на прибо-
* Автор, с которым следует вести переписку.
ре «Specord IR-71» в вазелиновом масле и в таблетках KBr. Спектры ПМР регистрировали на приборе «XL-200 Varian» (США) с рабочей частотой 200 МГц, растворитель - СС14. Масс-спектры соединений измерены на приборе «MAT-311» фирмы «Varian» (США), система прямого ввода при температуре ионизирующей камеры 100120 °С, ионизирующем напряжении 70 В, ионизирующем токе 300 мкА и температуре испарителя 20-40 °С.
По ранее описанным методикам получены хлорангидриды О-алкилфенилфосфоновых [6-8] и дифенил-фосфиновой [9, 10] кислот, а также анабазиноизопропанол и анабазинобутин-2-ол [11].
Синтез О-алкил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфонатов (1-3, 5-7) и О-алкил-О-[анабазино-бутин-2-ил]фенилфосфонатов (4, 8). В колбу, снабженную обратным холодильником и капельной воронкой, помещали раствор 0,03 моля хлорангидрида О-алкилфенилфосфоновой (или дифенилфосфиновой) кислоты в 70 мл абсолютного эфира. При интенсивном перемешивании и охлаждении прикапывали смесь 0,03 моля N-p-оксипропиланабазина (или анабазинобутин-2-ола) и 0,03 моля триэтиламина, растворенную в 80 мл абсолютного эфира. Добавив реагент, реакционную смесь перемешивали в течение 1-2 ч при температуре кипения растворителя. После отделения от выпавшего осадка хлоргидрата триэтиламина и отгонки растворителя конечный продукт очищали методом колоночной хроматографии.
Изучение активности производных анабазина. Основным методом исследования каталитической активности эстераз служил калориметрический метод Эллмана [12], основанный на изменении скорости образования тиохолина при ферментативном гидролизе ацилтиохолиновых субстратов с помощью 5,5'-дитиобис(2-нитробензойной кислоты). В качестве источников ферментов применяли очищенные препараты ацетилхолинэстеразы (КФ 3.1.1.7 - АХЭ) эритроцитов человека и бутирилхолинэстеразы (КФ З.1.1.8. - Бу-ХЭ) сыворотки крови лошади с удельной активностью соответственно 1,2 и 9,6 ед. (производства Пермского НИИ вакцин и сывороток) и водные гомогенаты (45 мг/мл) тканей насекомых (ситатрога Sitatroga cerealella
O. и восковая моль Galleriae mellonella L..), полученные центрифугированием при 5000 об/мин (15 мин). Определение констант ингибирования активности ферментов проводили по [13]. Источником монооксиге-назы служила печень мыши, активность которой определяли как в [14]. Антимонооксигеназная активность соединений в опытах in vitro оценивалась по величине концентрации ингибитора, снижающей скорость окисления субстрата на 50% (I50, M). Ферментативную реакцию окисления субстратов определяли по методу Омура и Сато [15].
Обсуждение результатов
Производные фенилфосфоновой (1-3, 5-7) и дифенилфосфиновой (4, 8) кислот, содержащие остатки анабазина, синтезированы взаимодействием соответствующих хлорангидридов с анабазиноизопропанолом или анабазинобутин-2-олом в среде абсолютного эфира:
O
Ph-P-OCH(CH3)CH2-N R
1-4
N
HOCH(CH3)CH2R
0
II
Ph-P-Cl
1
R
HOCH2C=CCH2R
-2P
Выходы, показатели преломления и данные элементного анализа фосфорилированных производных анабазина (1-8) приведены в таблице 1.
В ИК-спектре О-пентил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфоната (1) имеются полосы поглощения следующих функциональных групп (V, см-1): (Р-О-С5Нп) 990-1000, (Р=О) 1250, (Р-С6Н5) 1450, (С-Ы в цикле) 1550. В ИК-спектре О-изопентил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфоната (3) наблюдаются полосы поглощения (V, см-1): (Р-О-С5Нп -изо) 975-990, (Р=О) 1240, (Р-С6Н5) 1460, (С-Ы в цикле) 1560. Для ИК-спектра О-анабазиноизопропилдифенилфосфоната (4) характерны сигналы (V, см-1): (Р=О) 1220-1230, (Р-С6Н5) 1450, (С-Ы) 2850-2860, (С6Н5) 1520-1540. В ИК-спектре О-гексил-О-[анабазинобутин-2-ил]фенилфосфоната (6) зарегистрированы следующие полосы поглощения (V, см-1): (Р-О-С6Н13) 990-1000, (Р=О) 1245, (Р-С6Н5) 1450, (С-Ы в цикле) 1540-1550, (С-Н) 1850.
В спектре ПМР О-пентил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфоната (1) в области слабого поля, помимо мультиплета протонов (7,18-7,29 м.д.), наблюдаются характерные сигналы р-замещенного пиридина:
На - 8,46; На - 8,40; Ну - 7,62 и Нр - 7,13 м.д. Метиновый протон резонирует при 4,63 м.д. в виде мультипле-та. Сигнал метильной группы проявляется в виде дублета при 1,25 м.д. (3Н, J=6,5 Гц). Сигналы пиперидинового цикла анабазина имеют следующие параметры: Н2а - 3,27, Н<5е - 2,78, Н& - 2,45 м.д., а остальные протоны (6Н, м, СН2) резонируют в области 1,10-1,90 м.д. Концевая метильная группа резонирует при 0,87 м.д. В ПМР спектре О-анабазиноизопропилдифенилфосфоната (4) в области слабого поля (7,15-7,86 м.д.) наблюдаются сигналы протонов двух фенильных радикалов (10Н, м) и характерные сигналы р-замещенного пиридина: Щ - 8,45; На - 8,40; Ну - 7,62 и Нр - 7,14 м.д. При 4,56 м.д. в виде мультиплета резонирует метиновый протон. Сигнал метильной группы проявляется в виде дублета при 1,25 м.д. (3Н, J=6,5 Гц). Сигналы пиперидинового цикла анабазина имеют следующие параметры: Н2а - 3,27; Н6е - 2,78; Н6а - 2,45 м.д., а остальные протоны (6Н, м, СН2) резонируют в области 1,10-1,90 м.д. В спектре ПМР О-анабазинобутин-2-илдифенилфосфината (8) в области слабого поля помимо сигналов двух фенильных радикалов наблюдаются сигналы р-замещенного пиридина, характерного для молекулы анабазина: На - 8,46; На - 8,41; Ну - 7,60 и Нр - 7,15 м.д. Двойной триплет при 4,70 м.д. и триплет при 3,05 м.д. принадлежат сигналам соответственно ОСН2 и Ы-СН2 групп, разделенных тройной связью. Сигналы пиперидинового цикла анабазина имеют следующие химические сдвиги: Н2а -3,27; Н6е - 2,78; Н6а - 2,45 м.д., а остальные протоны (6Н, м, СН2) резонируют в области 1,10-1,90 м.д. [16].
Масс-спектрометрическая фрагментация молекулярного иона фосфорилированных производных анабазина зависит как от природы заместителей у центрального атома фосфора, так и самого анабазина [17]. Пик молекулярного иона О-гексил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфоната (2) (рис. 1) обладает средней интенсивностью. В масс-спектре данного соединения присутствует сигнал [М-Н]+ иона, образованного при удалении одного атома водорода из гетероциклической системы. Этот ион [т^ 443 (1,0)] уступает по интенсивности молекулярному иону, хотя при изучении масс-спектрометрического распада самого анабазина получены и противоположные результаты [18].
Фрагментация молекулярного иона протекает в различных направлениях. Так, в результате разрыва С-С связи в анабазиноизопропильной части вещества образуется ион с т^ 202, который обладает высокой интенсивностью. Образование таких аммонийных ионов отмечалось и ранее [19]. При удерживании положительного заряда в фосфорсодержащей части молекулы подобный разрыв приводит к малоинтенсивным фрагментам - О-гексил-О-винилфосфонату (т^ 268) и оксивинилфосфоновой кислоте (т^ 185).
Таблица 1. Выходы, показатели преломления и данные элементного анализа производных фенилфосфоновой (1-3, 5-7) и дифенилфосфиновой (4, 8) кислот
№ Название R Выход, Найдено % Формула Вычислено %
соеди- нения % С Н Р С Н Р
1 О-амил-О- [анабазино-изопропил]фенилфосфонат С5Н11О 41 1,5117 67,12 8,10 7,30 СМН35О3Р^ 66,95 8,19 7,19
2 О-гексил-О-[анабазино- изопропил]фенилфосфонат СбНізО 39 1,5128 67,61 8,29 7,05 С25Н37О3Р^ 67,54 8,38 6,96
3 О-изоамил-О-[анабазино- изопропил]фенилфосфонат і-С5Н„О 44 1,5112 66,80 8,30 7,10 СМН35О3Р^ 66,95 8,19 7,19
4 О- [анабазиноизопро-пил]дифенилфосфинат Ph 48 1,5599 71,45 7,03 7,40 С25Н29О2Р^ 71,40 6,95 7,36
5 О-амил-О- [анабазинобут-2-инил] фенилфосфонат С5Н11О 44 1,5365 68,23 7,48 6,95 С25Н33О3Р^ 68,16 7,55 7,03
6 О-гексил-О-[анабазинобут-2-инил] фенилфосфонат СбНізО 45 1,5350 68,59 7,80 6,90 СМН35О3Р^ 68,70 7,76 6,81
7 О-изоамил-О-[анабазино-бут-2-инил] фенил-фосфонат і-С5Н„О 46 1,5165 68,03 7,47 7,11 С25Н33ОР^ 68,16 7,55 7,03
8 О- [анабазинобут-2 -инил]дифенилфосфинат Ph 54 1,5692 72,60 6,37 7,26 СмН27О2Р^ 72,54 6,32 7,19
Разрыв связи между пиперидиновым атомом азота анабазина и а-углеродом дает ион О-гексил-О-пропиленфенилфосфоната (т^ 282), обладающий довольно высокой интенсивностью. В дальнейшем этот фрагмент переходит в ион О-пропилфенилфосфоновой кислоты (т^ 198). Вследствие разрыва С-О-связи в отщепляющейся части молекулы вещества образуются пары ионов. При этом пики азотсодержащих ионов (т^ 175 и 202) обладают высокой интенсивностью.
Фосфорсодержащая часть образует ион протонированной формы О-гексил-фенилфосфоновой кислоты (т^ 243), который в свою очередь дает ион протонированной фенилфосфоновой кислоты (т^ 159) и ион с т^ 225. Эти и с т^ 349 ионы приводят к иону фенилфосфония (т^ 141).
В отличие от фрагментации данного соединения, при масс-спектрометрическом распаде О-изоамил-О-[анаба-зинобутин-2-ил]фенилфосфоната (5) образуется сравнительно малое количество фосфорсодержащих ионов (рис. 2). Надо отметить, что при распаде обоих соединений образуются ионы, характерные для распада молекулы анабазина.
Полученные данные по масс-спектрометрическому распаду фосфорилированных производных анабазина показывают, что при фрагментации О-гексил-О-[анабазиноизопропил]фенилфосфоната (2) образуется больше фосфорсодержащих ионов, чем при распаде О-изоамил-О-[анабазинобутин-2-ил]фенилфосфоната (5). Спектры этих соединений отличаются еще и интенсивностью образованных аммонийных ионов, в частности, иона с т^ 175.
По мнению большинства исследователей, в основе токсичности фосфорорганических ядов лежит их способность избирательно, в очень низких концентрациях блокировать ацетилхолинэстеразу (АХЭ) - фермент, участвующий в холинергической медиации. Исследование взаимодействия с холинэстеразой ряда фосфорорганиче-
ских соединений, имеющих логически изменяющуюся структуру, позволяет получить новые данные о механизме угнетения этого важного фермента, а также выявить особенности строения участка активной поверхности холинэстеразы (ХЭ), к которому присоединяется молекула фосфорорга-нического ингибитора [11]. Поэтому полученные соединения (1-8) исследованы в качестве ингибиторов ацетилхолинэстеразы (АХЭ) эритроцитов крови человека и бутирилхолинэстеразы (БуХЭ) сыворотки крови лошади, а также аналогичных ферментов вредителей зерновых культур - восковой моли и ситатроги (табл. 2).
Из полученных данных следует, что активность ферментов теплокровных, особенно БуХЭ наиболее эффективнее тормозится этими соединениями. Замена в структуре А насыщенной изо-пропильной группировки на фрагмент с тройной связью сопровождается некоторым снижением ингибирующей активности полученных веществ. Например, О-пентил- (1) и О-гексил- (2) О-(ана-базиноизопропил)фенилфосфонаты почти в 1,1 раза эффективнее по сравнению с О-пентил- (5) и О-гексил- (6) О-(анабазинобутин-2-ил)фенил-фосфонатами. В ряду этих соединений наименее активными являются О-изопентил-О-(ана-базиноизопропил)- (3) и О-пентил-О-(анабазино-бутин-2-ил)- (5) фенилфосфонаты. В данном случае БуХЭ слабо чувствует изменения в структуре А. Величины рК наиболее высоки для О-гексил-О-(анабазиноизопропил)- (2) и О-гексил-О-(ана-базинобутин-2-ил)- (6) фенилфосфонатов, хотя разница в избирательности составляет чуть больше единицы.
О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфоната (5)
Рис. 1. Распад О-гексил-О-(анабазино-изопропил)фенилфосфоната (2)
159(100,0)
Рис. 2. Масс-спектрометрический распад О-изоамил-
Для АХЭ наблюдается почти такая же картина изменения чувствительности фермента: разница только в количественных параметрах, которые выше в случае БуХЭ и ниже в отношении АХЭ. О-алкил-О-(анна-базинобутин-2-ил)фенилфосфонаты (5-7) были исследованы на способность сдерживать ферментативную активность восковой моли и ситатроги - вредителей злаковых культур. Чувствительность ферментов вредителей несколько снижается у О-гексил-О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфоната (6), а при смене алкильного радикала на изопентильный вновь отмечается увеличение ингибирующей активности соединения. При сопоставлении ферментов восковой моли и ситатроги можно отметить, что pKj АХЭ и БуХЭ последней от
1,5 до 1,8 раза выше при действии О-пентил-О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфоната (5). В 2,3 и 1,6 раза эффективнее действие О-гексил-О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфоната (6) в отношении к БуХЭ, чем АХЭ. Если сравнить чувствительность БуХЭ теплокровных и вредителей, то их можно расположить в ряд БуХЭ теплокровных > БуХЭ ситатроги > БуХЭ восковой моли. А в отношении АХЭ изученных организмов чувствительность уменьшается от АХЭ ситатроги, далее АХЭ теплокровных и на последнем месте АХЭ восковой моли. Наблюдаемые различия, вероятнее всего, связаны с отличиями в структуре активной поверхности ферментов, на которых происходит сорбция синтезированных соединений.
На основании полученных данных можно заключить, что чувствительность ферментов ситатроги существенно выше АХЭ и БуХЭ теплокровных и восковой моли, что делает возможным использование их в качестве избирательных ингибиторов АХЭ ситатроги.
Как уже сказано, одним из центральных звеньев метаболизма ксенобиотиков в организме животных является их окисление под действием цитохром Р-450 зависимых микросомальных монооксигеназ (ММ, К.Ф. 1.14.14.1.). Результатом этого окисления является повышение гидрофильности соединений, их ускоренное выделение из организма и детоксикация (лекарственные препараты, карбаматы и пиретроидные инсектициды) или, наоборот, усиление токсичности (фосфорорганические инсектициды) и приобретение канцерогенных свойств (полицикли-ческие углеводороды) [20]. Ингибирование ММ может быть использовано для пролонгирования действия лекарственных препаратов и повышения эффективности инсектицидов в борьбе с насекомыми-вредителями, особенно в случае возникновения резистентности, связанной с повышением активности ММ.
Полученные данные (табл. 3) показывают, что исследованные соединения обладают высокой активностью и по способности ингибировать ММ in vitro значительно превосходят SKF-525A, который является стандартным ингибитором ММ.
Наблюдаются различия во влиянии соединений на скорость окисления субстратов. Реакция О-деме-тилирования и-нитроанизола была заметно менее чувствительна, чем реакции О-деацетилирования параок-сона и N-деметилирования амидопирина. Видимо, это объясняется тем, что исследованные ингибиторы имеют большее структурное сходство с двумя последними субстратами.
Таблица 2. Константы обратимого конкурентного ингибирования АХЭ и БуХЭ О-алкилфенилфосфонатами Ph(OR)P(O)-A-R'
Соеди- нение R A pKi
Теплок ровные Восковая моль Ситатрога
АХЭ БуХЭ АХЭ БуХЭ АХЭ БуХЭ
1 CHll OCH(CH3)CH2 3,89 б,3б
2 СбН1з - // - 5,07 б,71
З i-CHll - // - 3,0б 5,58
5 C5H11 OCH2C=CCH2 3,75 5,71 3,247 3,4бб б,04 5,20
б СбН1з - // - 4,24 б,49 2,995 2,20 4,74 5,18
7 1-C5H11 - // - 3,91 б,3 3,б99 3,518 б,52 5,23
R' - остаток анабазина (во всех таблицах).
Таблица 3. Ингибирующая активность фосфорилированных производных анабазина Ph(R)P(O)-А-R' в отношении реакции окисления субстратов (150Т0-5 М) под действием ММ печени мыши
Соединение R A Субстрат
п-нитроанизол амидопирин параоксон
1 C5H11O OCH(CH3)CH2 0,10±0,02 4,l±0,5
2 CaHl3O - // - 8,2±l,2 30,0±0,7 77±l,l
3 1-C5H11O - // - 0,l3±0,02 4,3±0,б
4 Ph - // - 0,30±0,7 95,0±0,б 82±l,l
5 C5H11O OCH2C=CCH2 8,9±l,5 l,4±0,l
б CaHl3O - // - б,0±1,0 40,0±0,б
7 1-C5H„O - // - 8,5±l,4
8 Ph - // - 0,24±0,3 35,0±0,l б2±0,8
SKF-525A 0,25±0,7 3,б±0,3 3,0±0,3
Зависимость ингибирующей активности веществ от их строения слабо выражена. В целом соединения, содержащие тройную связь, несколько сильнее своих p-оксипропильных аналогов, за исключением опыта с амидопирином. Удлинение О-алкильных радикалов от амильного до гексильного у фенилфосфоновых производных приводит к усилению ингибирующего действия, особенно в опытах с параоксоном. Изоамильные производные практически не отличаются по силе действия от амильных. Производные дифенилфосфиновой кислоты (4 и 8) слабее производных О-гексилфенилфосфоновой кислоты (2, 6) в опытах с п-нитроанизолом и практически не уступают им в опытах с параоксоном и амидопирином.
Полученные данные показывают, что фосфорилированные производные анабазина обладают значительной антимонооксигеназной активностью, превосходящей активность стандартного ингибитора SKF-525A как в отношении инсектицида параоксона, так и лекарственного препарата амидопирина.
Заключение
Таким образом, синтезированы новые О-алкил-О-(анабазиноизопропил)- и О-алкил-О-(анабазинобутин-2-ил)фенилфосфонаты и дифенилфосфинаты. При исследовании антиферментативной и антимонооксиге-назной активности соединений выявлено, что среди них имеются вещества, которые являются избирательными ингибиторами АХЭ ситатроги, а ряд соединений по антимонооксигеназной активности превосходит стандартный ингибитор SKF-525A.
Список литературы
1. Садыков А.С., Асланов Х.А., Кушмурадов Ю. Алкалоиды хинолизидинового ряда (химия, стереохимия, биогенез) М., 1975. 292 с.
2. Мельников Н.Н. Химия пестицидов. М., 1968. 440 с.
3. Газалиев А.М., Журинов М.Ж., Фазылов С.Д. Новые биоактивные производные алкалоидов. Алма-Аты, 1992. С. 3-87.
4. Насыров С.Х., Хазбиевич И.С. Фармакология алкалоидов Anabasis aphylla L. и клиническое применение анабазина гидрохлорида. Ташкент, 1982. 160 с.
5. Садыков А.С. Химия алкалоидов Anabasis aphylla. Ташкент, 1956. С. 153-156.
6. Гефтер Е.Л. Улучшенные методы синтеза фенилдихлорфосфина и дихлорангидрида фенилфосфиновой кислоты // Журнал общей химии. 1958. Т. 28. Вып. 5. С. 1338-1340.
7. Смирнов Е.А., Зиновьев Ю.М., Петрунин В.А. Синтез алкил- и арилдихлорфосфинов из углеводородов и пятихлористого фосфора // Журн. общ. химии. 1968. Т. 38. Вып. 7. С. 1551-1552.
8. Бабаев Б.Н. Методы синтеза хлорангидридов кислот фосфора // Вестник ГулГУ. 2006. №3-4. С. 9-13.
9. Кабачник М.И., Медведь Т.Я., Поликарпов Ю.М., Юдина К.С. Реакции окиси винилдифенилфосфина // Изв. АН СССР. ОХН. 1962. №9. С. 1584-1589.
10. Saunders B.C., Worthy T.S. Esters Containing Phosphorus. Part XI. Ethylphosphonic Dichloride Containing 32P // J. Chem. Soc. 1953. N7. Pp. 2115-2117.
11. Абдувахабов A.A., Садыков A.A., Далимов Д.Н., Асланов Х.А. Алкалоиды и их производные как инструмент для изучения холинергической системы. Ташкент, 1984. 288 с.
12. Ellman G.L., Countrey R.D., Anders V., Feather K.M A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity // Biochem. Pharm. 1961. V. 7. P. 88-95.
13. Бресткин А.П., Виняр Т.Н., Розенгарт Е.В. Взаимодействие холинэстеразы мозга лягушки с некоторыми обратимыми ингибиторами // Биохимия. 1981. Т. 46. Вып. 6. С. 1042-1048.
14. Далимов Д.Н., Моралев С.Н., Бабаев Б.Н., Кормилицын Б.Н., Прохоренко Н.К., Розенгарт В.И., Абдувахабов А.А. Синтез и биологическая активность производных кислот фосфора, содержащих циклические амины // Узбкский химический журнал. 1992. №1. С. 32-38.
15. Omura T., Sato R. The carbon monoxide-binding pigment of liver microsomes. I. Evidence for its homoprotein nature // J. Biol. Chem. 1964. V. 239. N7. P. 2370-2378.
16. Леонтьев В.Б., Мухамедханова С.И., Абдурахманов Ш.Д., Левкович М.Г. Конформационные состояния и реакционная способность азотсодержащих алициклических ^единений // Проблемы и перспективы развития химии природных и физиологически активных веществ. Ташкент, 1988. С. 25-77.
17. Тимбеков Э.Х., Эшбаев Ф.Ш., Асланов Х.А. и др. Масс-спектрометрическое изучение производных группы хинолизидина // Химия природных соединений. 1972. №2. С. 194-199.
18. Будзикевич Г.К., Джерасси К., Уильямс Д. Интерпретация масс-спектров органических соединений. М., 1966. 131 c.
19. Терентьев В.Б., Станкявичюс А.П. Масс-спектрометрический анализ биологически активных азотистых оснований. Вильнюс, 1987. С. 235-328.
20. Далимов Д.Н., Моралев С.Н., Бабаев Б.Н., Кормилицын Б.Н. и др. Синтез и биологическая активность производных кислот фосфора, содержащих циклические амины // Узб. хим. журн. 1992. №1. С. 32-38.
Поступило в редакцию 19 августа 2009 г.
После переработки 18 декабря 2009 г.
