CC BY
20
Семейный дефект аполипопротеина В-100: молекулярная основа заболевания и клинико-биохимические особенности пациентов
П.П. Малышев, А.Н. Мешков, Л.А. Котова, В.В. Кухарчук
Институт клинической кардиологии им. А.Л.Мясникова РКНПК Росздрава. Москва, Россия
Familial defect of apolipoprotein В-100: molecular disease basis and clinico-biochemical characteristics of the patients
P.P. Malyshev, A.N. Meshkov, L.A. Kotova, V.V. Kukharchuk
A.L. Myasnikov Research Institute of Clinical Cardiology, Russian Cardiology Scientific and Clinical Complex, Russian Federal Agency for Health and Social Development. Moscow, Russia
Цель. Определить характер и частоту мутаций гена аполипопротеина (апо) В-100 у пациентов с клиническим диагнозом гетерозиготной семейной гиперхолестеринемии (СГ) и охарактеризовать фенотипические проявления у носителей мутации.
Материал и методы. Скрининг на мутации в 26-м экзоне гена апо В-100 был проведен среди 111 пациентов с клиническим диагнозом гетерозиготной СГ. При анализе дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) использовали аллельспецифическую полимеразную цепную реакцию, рестрикционный анализ, анализ полиморфизма конформации одноцепочечного фрагмента ДНК (SSCP) и секвенирование участков ДНК с аномальной электрофоретической подвижностью.
Результаты. Среди больных с клиническими проявлениями гетерозиготной СГ у 4,5% была обнаружена мутация гена апо В-100. Мутация R3500Q была единственным видом нарушения в структуре гена апо В-100 у обследованных пациентов. Больные с дефектом апо В-100 по сравнению с носителями мутации рецептора липопротеина низкой плотности (ЛНП-рецептора) характеризовались менее выраженной ГХС. Заключение. Мутация R3500Q гена апо В-100 наряду с мутациями ЛНП-рецептора является одной из причин высокого уровня ХС у российских пациентов, в то время как другие мутации 26-го экзона гена этого белка, по-видимому, очень редки.
Ключевые слова: семейный дефект апо В-100, гиперхолестеринемия, ксантомы.
Aim. To identify character and prevalence of apolipoprotein (apo) B-100 gene mutation in patients with clinical diagnosis of heterozygote familial hypercholesterolemia (FH); to describe its phenotypical features in mutation carriers.
Material and methods. In 111 patients with clinical diagnosis of heterozygote FH, screening for exon 26 apo B-100 gene mutations was performed. For DNA analysis, allele-specific PCR, restriction analysis, analysis of DNA single-strand conformation polymorphism (SSCP), and sequestering of DNA fragments with anomaly electrophoretic activity were used.
Results. In patients with clinics of heterozygote FH, 4,5% had apo B-100 gene mutation. R3500Q mutation was the only apo B-100 gene structure anomaly observed in these individuals. Compared to patients with low-density lipoprotein (LDL) receptor mutation, subjects with apo B-100 defect had less manifested HCH.
Conclusion. R3500Q mutation of apo B-100 gene, together with LDL receptor mutations, partially explain high CH levels in Russian patients. Other mutations of this protein’s exon 26 could be very rare.
Key words: Familial apo B-100 defect, hypercholesterolemia, xanthomas.
©Коллектив авторов, 2007
Тел.: (495) 414-65-49, факс: (495) 414-67-97
E-mail: ppmal@rambler.ru
Введение
Когда в середине 7Q^ годов прошлого века стало известно, что повышенная концентрация липопротеинов низкой плотности (ЛИП) плазмы при семейной гиперхолестеринемии (СТ) вызывается наследственным дефектом рецептора ЛЯП (ЛЫП-P), появилась гипотеза, что причиной гиперхолестеринемии (rXC) может быть и зеркально противоположная ситуация — генетический дефект лиганда при нормальном рецепторе. B І986г появилось сообщение о группе пациентов, у которых был нарушен катаболизм собственных ЛЫП, тогда как катаболизм ЛЫП от здоровых доноров не был изменен [І]. Затем было показано, что ЛЫП этих пациентов связывались с ЛКП-P in vitro только на 3Q%, а у некоторых родственников І степени родства диагностировали rXC вследствие дефектных ЛКП, что соответствовало доминантной мутации, предположительно в гене аполипопротеина (апо) B-iQQ. Это нарушение предложили назвать “familial defective apolipoprotein B-iQQ” [2]. Поиск причинной мутации в гене апо B в области, кодирующей рецептор-связывающий домен белка, выявил однонуклеотидную замену в кодоне 35QQ, в результате чего одна аминокислота (аргинин) замещалась на другую (глутамин) [3].
Принято считать, что распространенность семейного дефекта (ОД) апо B в популяции составляет приблизительно І на 5QQ-7QQ человек [4,5]. Pезультаты популяционных исследований, а также данные изучения групп высокого риска в Европе показали значительную вариабельность распространенности этого CД в разных популяциях — от І:7І [6] до i:i25Q [7]. К настоящему времени идентифицировано несколько мутаций в гене апо B-iQQ, которые ведут к укорочению белка или аминокислотным заменам в составе белка, что приводит к развитию rXC: R348QW, R35QQQ, R35QQW и R353iC [3,8-iQ]. Мутация R35QQQ является наиболее частым CД и изучена лучше прочих [6].
B І998г был опубликован первый случай выявления CД апо B в Pоссии [ІІ]. Исключая данные авторов, с тех пор не сообщалось о других пациентах с этим заболеванием. Таким образом, CД апо B является по существу не изученной в Pоссии патологией. Ке известны ни распространенность этого нарушения, ни характер и частота возможных мутаций, лежащих в основе его возникновения, ни особенности течения заболевания у российских пациентов.
Материал и методы
Пациенты. Скрининг на СД апо В был проведен среди группы пациентов с клиническими признаками гетерозиготной формы СГ (критерии MED-PED — Make Early Diagnosis to Prevent Early Deaths) [12], наблюдающихся в Институте клинической кардиологии им. А.Л.Мяснико-ва, у кого были доступны образцы крови для анализа ДНК. В исследование включали пробандов, не связанных между собой родством; при выявлении мутации апо В-100 обследовали всех доступных родственников пациентов.
Определение липидного профиля (ЛП). Уровни общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ) и ХС ли-попротеинов высокой плотности (ЛВП) определяли стандартными ферментативными методами. Содержание ХС ЛНП рассчитывали по формуле Friedewald W 1972.
Анализ дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). При анализе 26-го экзона гена апо В-100 методика выделения ДНК, условия проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием соответствующих праймеров и анализа полиморфизма подвижности конформаций одноцепочечной ДНК (SSCP), а также секве-нирования аномальных фрагментов ДНК были теми же самыми, как описано ранее [13]. Детекцию мутации апо В3500 осуществляли методом аллельспецифической ПЦР. Метод основан на создании в ходе ПЦР дополнительного фрагмента длиной 144 пар нуклеотидов (п.н.) с помощью дополнительного праймера, комплементарного мутантному аллелю. В норме амплифицируется лишь один фрагмент длиной 320 п.н., который служит внутренним контролем эффективности ПЦР. Мутацию апо В3531 определяли методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов. Метод основан на создании в ходе ПЦР естественного сайта рестрикции Mph1103I в мутантном, но не в нормальном аллеле. Последующая обработка рестриктазой ПЦР-продукта длиной 320 п.н. в случае данной мутации приводит к образованию двух фрагментов длиной 102 и 218 п.н. В отличие от мутантного аллеля нормальный не чувствителен к рестриктазе. Продукты рестрикции анализировали электрофорезом в 3%-ном агарозном геле, содержащем 1 мкг/мл бромистого этидия. Размер фрагментов определяли с помощью стандартов 50 bp-Ladder (“Life Technologies”, Великобритания).
Результаты
Характеристика обследованной группы пациентов представлена в таблице 1.
Генетическое тестирование
Поскольку все известные мутации, вызывающие СД апо В, затрагивают рецептор-свя-зывающий домен апо В-100, для выявления возможных мутаций исследовали 26-й экзон этого гена. Такой подход заключался в следующем: при использовании одного и того же набора праймеров мутацию R3500Q исключали методом аллельспецифической ПЦР, мутацию R353^ — методом рестрикционного анализа; ДНК всех обследуемых пациентов подвергали SSCP с последующим секвенированием аномальных образцов.
Таблица 1
Клинико-биохимические характеристики пробандов (п=111) с клиническим диагнозом СГ, тестированных на мутации апо В
Клинически «несомненный»/«вероятный» диагноз СГ согласно критериям МЕО-РЕО
103/8
Пол (м/ж) 44/67
Возраст, годы 44 (диапазон 5—73)
Ксантомы сухожилий, % 86
Ксантелазмы, % 35
Дуга роговицы, % 42
ИБС, % 68
ОХС, ммоль/л 11,5 (2,5) (диапазон 7,1-20,7)
ТГ, ммоль/л 1,8 (0,8) (диапазон 0,3-4,5)
Примечание: данные ЛП представлены как средние и (стандартное отклонение).
Аллельспецифическая ПЦР для детекции мутации Я3500Р. При электрофорезе продуктов аллельспецифической ПЦР у 5 больных была обнаружена аномальная миграция ДНК.
Рестрикционный анализ. Этим методом с использованием рестриктазы МрЫ1031 не было выявлено ни одного носителя мутации Я3531С.
88СР-анализ. Смещение полос при электрофорезе ПЦР-продукта 26-го экзона гена апо В-100 в полиакриламидном геле наблюдалось у всех 5 пациентов, которые уже были идентифицированы методом аллельспецифической ПЦР. В то же время другие аномальные образцы в исследуемой коллекции при 88СР отсутствовали.
Секвенирование аномальных фрагментов ДНК. Для уточнения природы генного дефекта, точнее, подтверждения мутации Я3500О, нуклеотидную последовательность продуктов ПЦР-образцов, показавших аномальную миграцию при 88СР, секвенировали. В норме в положении 10708 гена апо В имеется только нуклеотид G, тогда как все 5 пациентов оказались гетерозиготными по указанному положению, где одновременно присутствовали нуклеотиды G и А.
Клинико-лабораторные характеристики
Фенотипическая характеристика пациентов с гетерозиготной формой СД апо В
Первоначально при генетическом скрининге были идентифицированы 5 пациентов (все женского пола) с СД апо В, в последующем при анализе ДНК родственников этих больных выявлено еще 3 носителя мутации. В целом, в двух семьях идентифицировано 3 и 2 носителя, в остальных — по одному. 7 пациентов из 4 семей были русской национальности, в одном случае национальность пробанда не выяснена. Установлено, что в 3 семьях больные родители были родом из Центральной России, в одной семье мать пробанда, предположительно носитель мутации, была по национальности литовкой. Еще в одной семье данные о происхождении родителей отсутствовали. 6 из 8 пациентов в разное время были госпитализированы в клинику.
В таблице 2 отражены клиническая характеристика и ЛП этих пациентов. Ишемическая болезнь сердца (ИБС) при первом обращении в клинику была выявлена у 4 больных (все женщины); у 2 из них в возрасте 46 и 48 лет была выполнена коронароангиография, на которой в обоих случаях было обнаружено гемодинамически значимое поражение (стенозы >75% по
Таблица 2
гетерозиготных пациентов с СД апо В
№ семьи Степень родства Возраст/ с пробандом пол ИМТ (кг/м2) ОХС ТГ П С ВП ХЛ Начало ИБС, Ксантомы Ксантелазмы годы сухожилий
1 пробанд 21/ж - 8,31 1,07 1,6 - - -
отец 41/м 27,4 8,05 0,76 1,19 - - -
бабушка 75/ж 25,6 7,7 2,07 - 59 -
2 пробанд 46/ж 22,6 9,49 0,99 - 29 + -
дочь 37/ж 23,4 8 - - - -
3 пробанд 50/ж 27,9 8,84 1,52 - - + -
4 пробанд 48/ж 19,2 7,1 1,28 0,98 48 + -
5 пробанд 65/ж 22,2 10,4 - - 65 + -
Примечание: представленные данные получены при первоначальном обследовании пациентов в клинике; ИМТ — индекс массы тела; липиды даны в ммоль/л.
диаметру сосуда) коронарного русла. У одной из этих пациенток отмечали раннее появление стенокардии напряжения (в возрасте 29 лет), у другой коронарный атеросклероз сочетался с гемодинамически значимым атеросклеротическим поражением сонных артерий (стенозы о >70% по диаметру сосуда). Известно, что 2 третья пациентка, страдавшая ИБС, впоследствии умерла в возрасте 78 лет от острого инфаркта миокарда (ИМ). Ксантомы сухожилий, преимущественно ахилловых, были обнаружены у 4 из 5 больных, в т.ч. у 3 — ИБС; ксантелазм не было ни у кого.
Обсуждение
СД апо В — генетическое заболевание, которое в большинстве случаев связано с заменой аргинина глутамином в кодоне 3500 (Я35000) [3,14]. Другие миссенс-мутации, вызывающие это заболевание, такие как Я3480М, R3500W и Я3531С, встречаются значительно реже. Мутация Я35000 идентифицирована во многих популяциях по всему миру [15]. Полученные в последние годы данные указывают на распространение мутации Я35000 также и в популяциях стран Восточной Европы, в т.ч. у лиц славянского происхождения [16].
Первый случай мутации Я35000 в России был описан в 1998г [11]. В этой работе мутация апо В была обнаружена при анализе 27 образцов ДНК пациентов с ИБС и ГХС. У носителя мутации, мужчины 42 лет, наблюдались повышенный уровень ХС сыворотки (9,6 ммоль/л) и документированная ИБС. Усилия других отечественных исследователей в этом отношении не увенчались успехом: никаких мутаций в гене апо В-100 не было обнаружено в других работах [17-19], несмотря на то, что эти исследования проводились в разных группах больных, как с ИБС, так и с клиническим фенотипом СГХС. Таким образом, к настоящему времени мутация Я35000 в России обнаружена в 6 семьях, включая данные авторов от 5 семей.
Клинически разграничить СГ от СД апо В невозможно, поскольку оба заболевания имеют большое сходство. В большинстве липидных клиник 2-5% пациентов с клиническим диагнозом СГ на самом деле имеют СД апо В [4]; например, в Нидерландах СД апо В был выявлен у 1,85% из 970 пациентов с клиническим диагнозом СГ [20], в Великобритании — у 3% в группе из 562 больных с СГ [21]. В настоящей работе у
I Пациенты с мутацией апо В □ Пациенты с мутацией ЛНП - рецептора
Рис. 1 Уровень ОХС сыворотки у гетерозигот с мутацией апо В-100 (Я3500р) и мутациями ЛНП-Р, выявленными в исследовании.
93% из 111 обследованных пробандов диагноз гетерозиготной СГ соответствовал «несомненному» согласно критериям МЕБ-РЕБ, и в этой группе было выявлено 5 случаев СД апо В. Среди последних «вероятный» диагноз заболевания отмечен только у 1 из 5 больных, причем это была самая молодая пациентка данной группы и без ксантом сухожилий. Во всех случаях причиной заболевания была мутация Я35000. Таким образом, в популяции больных с клиническим диагнозом СГ мутация Я35000 объясняла 4,5% случаев заболевания, что, в общем, согласуется с зарубежными оценками.
Низкий процент выявления СД апо В среди пациентов с клиническими признаками СГ при приблизительно одинаковой распространенности обоих заболеваний в общей популяции объясняется определенными фенотипическими различиями, которые были обнаружены при анализе данных большего числа пациентов. В ряде зарубежных исследований были продемонстрированы некоторые количественные фенотипические отличия этих заболеваний, касающиеся, прежде всего, липидных показателей. В частности, было показано, что у гетерозигот с СД апо В средний уровень ХС ЛНП существенно ниже, чем у гетерозигот с СГ [22]. ГХС умеренной степени и даже нормальный уровень ХС плазмы у больных с СД апо В зафиксированы несколькими авторами [22]. В настоящей работе у больных с СД апо В средний уровень ОХС также был достоверно ниже по сравнению с пациентами с ДНК-вери-фицированным диагнозом СГ (рисунок 1). При даже небольшом числе наблюдений (п=8), по-
лученные данные указывают на то, что ГХС более выражена при дефекте рецептора, чем при дефекте лиганда.
Распространенность СД апо В сильно зависит от обследуемого контингента пациентов. Помимо ГХС, другой категорией повышенного риска является популяция больных ИБС. Показано, что частота СД апо В у больных, перенесших ИМ, вдвое выше, чем у лиц без этого заболевания [23]. ИБС при СД апо В наблюдается у 40% пациентов мужского и у 20% женского пола в возрасте < 50 лет. Хотя эта ситуация похожа на ту, которая наблюдается при СГ, однако имеются некоторые различия. У пациентов мужского пола > 40 лет ИБС развивается чаще при СГ, чем при СД апо В. Обратная ситуация наблюдается у больных женщин: в возрасте > 50 лет ИБС чаще возникает при мутации апо В, чем при мутации ЛНП-Р [24]. В настоящей работе у всех 4 больных ИБС также отмечалось раннее развитие заболевания (в возрасте 29-65 лет). В одном случае коронарный атеросклероз сочетался со значимым каротидным атеросклерозом. Вследствие малого числа наблюдений нельзя провести прямое сравнение частоты развития ИБС между СД апо В и СГ
Большинство пациентов с СД апо В в исследовании были русской национальности. Недостаточное количество случаев этого заболевания не позволяет сделать выводы о географическом распределении мутации Я3500Р, однако известно, что большая часть пациентов была родом из Центральной России.
По данным 88СР-анализа возможно исключить мутацию R3500W гена апо В-100 как одну из причин ГХС у пациентов. В исследованиях, проведенных за рубежом, эту мутацию находили как в азиатских, так и в европейских популяциях. По-видимому, мутация R3500W является редкой в западных популяциях; так, в исследовании [25] она была идентифицирована лишь у 2 из 907 пациентов с гиперлипидемией.
В ряде работ мутация Я3531С ассоциировалась с развитием ГХС, но менее выражен-
ной, чем при мутации Я3500р. Частота этого дефекта в избирательных популяциях пациентов, обследованных при липидных клиниках, составляет 1:206-987 [26]. В этом исследовании методами рестрикционного анализа и 88СР не было выявлено ни одного пациента с мутацией Я3531С. Этот результат не явился неожиданным, поскольку исследуемая группа пациентов соответствовала самым строгим критериям клинического диагноза СГ, т.е. состояла из больных с выраженным, а не с умеренным повышением ХС.
Таким образом, в настоящем исследовании мутации Я3531С и R3500W не являлись причиной ГХС ни у одного из 111 пробандов со средним уровнем ОХС 11,5 ммоль/л — 95% доверительный интервал: 11,05-12,0.
Следует отметить, что в работе была амп-лифицирована и подвергнута скринингу на возможные мутации область гена апо В-100 длиной 320 п.н. Этот фрагмент покрывает и предполагаемое местоположение мутации H3543Y, которая, как показали исследования последних лет в Германии, может быть наиболее частой мутацией апо В. Ее частота в популяции оценивается гораздо выше, чем мутации Я3500Р (0,47% 0,12% соответственно)
[27]. Однако для выяснения физиологической и функциональной роли мутации H3543Y необходимы дальнейшие исследования. В работе по данным 88СР не было выявлено ни одного случая этой мутации.
В заключение, по данным выполненного исследования у 4,5% больных с клинической картиной гетерозиготной СГХС была обнаружена мутация Я3500Р гена апо В-100. Носители этого дефекта характеризовались менее выраженной ГХС по сравнению с носителями мутации ЛНП-Р. Таким образом, мутация Я3500Р в гене апо В-100, наряду с мутациями гена ЛНП-Р, является одной из причин высокой ГХС у российских пациентов, в то время как другие мутации 26-го экзона гена этого белка, по-видимому, очень редки.
Литература
1. Vega GL, Grundy SM. In vivo evidence for reduction binding of low density lipoprotein to receptors as a cause of primary moderate hypercholesterolemia. J Clin Invest 1986; 78: 1410-8.
2. Innerarity TL, Weisgraber KH, Arnold KS, et al. Familial defective apolipoprotein B-100: low density lipoproteins with abnormal receptor binding. Proc Natl Acad Sci USA 1987; 84: 6919-
23.
3. Soria LF, Ludwig EH, Clarke HRG, et al. Association between a specific apolipoprotein B mutation and familial defective apolipoprotein B-100. Proc Natl Acad Sci USA 1989; 86: 587-91.
4. Myant NB. Familial defective apolipoprotein B-100: a review, including some comparisons with familial hypercholestero-laemia. Atherosclerosis 1993; 104: 1-18.
5. Rauh G, Keller C, Schuster H, et al. Familial defective apolipoprotein B-100: a common cause of primary hypercholesterolemia. J Clin Invest 1992; 70: 77-84.
6. Fisher E, Scharnagl H, Hoffmann MM, et al. Mutations in the apolipoprotein (apo) B-100 receptor binding region: detection of apo B-100 (Arg35006Trp) associated with two new haplotypes and evidence that apo B-100 (Glu34056Gln) diminishes receptor-mediated uptake of LDL. Clin Chem 1999; 45: 1026-38.
7. Hansen PS. Familial defective apolipoprotein B-100. Dan Med Bull 1998; 45: 370-82.
8. Gaffney D, Reid JM, Cameron IM, et al. Independent mutations at codon 3500 of the apolipoprotein B gene are associated with hyperlipidaemia. Arterioscler Thromb Vasc Biol 1995; 15: 1025-9.
9. Pullinger CR, Hennessy LK, Chatterton JE, et al. Familial ligand-defective apolipoprotein B: identification of a new mutation that decreases LDL receptor binding affinity. J Clin Invest 1995; 95: 1225-34.
10. Boren J, Ekstrom U, Agren B, et al. The molecular mechanism for the genetic disorder familial defective apolipoprotein B100. J Biol Chem 2001; 276: 9214-8.
11. Pogoda T, Metelskaya V, Perova N, et al. Detection of apoB-3500 mutation in a Russian family with coronary heart disease. Hum Hered 1998; 48: 291-2.
12. WHO-Human Genetics, DoNDP, Familial
Hypercholesterolaemia — Report of a second WHO Consultation, ed. WHO. 1999, Geneva
13. Мешков А.Н., Стамбольский Д.В., Крапивнер C.P. и др. Мутации гена рецептора липопротеинов низкой плотности у пациентов с клиническим диагнозом семейной гиперхо-лестеринемии. Кардиология 2004; 9: 58-61.
14. Boren J, Lee I, Zhu W, et al. Identification of the low-density lipoprotein receptor-binding site in apolipoprotein B100 and modulation of its binding activity by the carboxyl terminus in familial defective apo B-100. J Clin Invest 1998; 101: 1084-93.
15. Miserez AR, Muller PY. Familial defective apolipoprotein B-100: a mutation emerged in the Mesolithic ancestors of Celtic peoples? Atherosclerosis 2000; 148: 433-6.
16. Kalina A, Csaszar A, Czeizel A, et al. Frequency of the R3500Q mutation of the apolipoprotein B-100 gene in a sample screened clinically for familial hypercholesterolemia in Hungary. Atherosclerosis 2001; 154: 247-51.
17. Schwartz EI, Shevtsov SP, Kuchinski AP, et al. Approach to identification of point mutation in apolipoprotein B-100 gene by means of PCR-mediated site-directed mutagenesis. Nucleic Acids Res 1991; 19: 3752.
18. Шевцов С.П. Отсутствие ДНК-полиморфизмов на участке гена APOB, кодирующем предполагаемый домен связывания белка ApoB-100 с рецептором липопротеидов низкой плотности. Генетика 1996; 2: 295-7.
19. Zakharova FM, Damgaard D, Mandelshtam MY, et al. Familial hypercholesterolemia in St.-Petersburg: the known and novel mutations found in the low density lipoprotein receptor gene in Russia. BMC Med Genet 2005; 6: 6.
20. Defesche JC, Pricker LK, Hayden RM, et al. Familial defective apolipoprotein B-100 is clinically indistinguishable from familial hypercholesterolemia. Arch Intern Med 1993; 153: 2349-56.
21. Talmud P, Tamplin JO, Heath K, et al. Rapid testing for three mutations causing familial defective apolipoprotein B100 in 562 patients with familial hypercholesterolaemia. Atherosclerosis 1996; 125:135-7.
22. Miserez AR, Keller N. Differences in the phenotypic characteristics of subjects with familial defective apolipoprotein B-100 and familial hypercholesterolemia. Arterioscler Thromb Vasc Biol 1995; 15: 1719-29.
23. Brousseau T, Arveiler D, Cambou JP, et al. Familial defective apolipoprotein B-100 and myocardial infarction. The ECTIM study. Atherosclerosis 1995; 116: 267-71.
24. Tybjaerg-Hansen A, Humphries SE. Familial defective apolipoprotein B-100: a single mutation that causes hypercholesterolemia and premature coronary artery disease. Atherosclerosis 1992; 96:91-107.
25. Tybjaerg-Hansen A, Steffensen R, Meinertz H, et al. Association of mutations in the apolipoprotein B gene with hypercholesterolemia and the risk of ischemic heart disease. N Engl J Med 1998; 338:1548-77.
26. Vrablik M, Ceska R, Horinek A. Major apolipoprotein B-100 mutations in lipoprotein metabolism and atherosclerosis. Physiol Res 2001; 50: 337-43.
27. Soufi M, Sattler AM, Maerz W, et al. A new but frequent mutation of apoB-100 - apoB His3543Tyr. Atherosclerosis 2004; 174: 11-6.
Поступила 24/04-2007
