CC BY
42
О СИДОРЕНКО М.Л., БУЗОЛЕВА Л.С., 2015 УДК 614.77:579.6(210.5)
СидоренкоМ.Л.12,3, БузолеваЛ.С.2,3
САНИТАРНОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПОЧВ МОРСКОГО ПОБЕРЕЖЬЯ
'ФГБУН Биолого-почвенный институт ДВО РАН, 690022, Владивосток; 2ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.П. Сомова СО РАМН, 690031, Владивосток; Дальневосточный федеральный университет, 690950, Владивосток.
Исследована динамика роста бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia pseudotuberculosis в почвах морского побережья (маршевые и маритимные почвы). Показано, что эти бактерии хорошо размножаются во всех исследуемых почвах, предпочитая все же маритимные почвы. Определено, что содержание гумуса является одним из лимитирующих факторов, ограничивающих размножение патогенных бактерий в исследуемых почвах. Установлено, что абиотические характеристики почв морского побережья оказывают прямое положительное влияние на сохранение и размножение в них патогенной микрофлоры. Этому способствует степень насыщенности основаниями, обменная емкость катионов, количество гумуса. В формировании экологической политики следует принимать во внимание и ограничить антропогенную нагрузку на почву.
Ключевые слова: почвы морского побережья; Listeria monocytogenes; Yersinia pseudotuberculosis; гумус. Для цитирования: Гигиена и санитария. 2015; 94(5): 20-23.
Sidorenko M. L.123, Buzoleva L. S.23 SANITARY SIGNIFICANCE OF SOIL SEA COASTS
institute of Biology and Soil Science, Vladivostok, Russian Federation, 690022; 2Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after G. P. Somov, Vladivostok, Russian Federation, 690031; 3Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russian Federation, 690950
There was investigated the dynamics of growth of Listeria monocytogenes and Yersinia pseudotuberculosis in soils of sea coast (mid-flight and maritime soils). These bacteria were shown to reproduced well in all researched soils, preferring nevertheless maritime soils. The content of the humus was determined to be the one of the limiting factors restricting the multiplication of pathogenic bacteria in studied soils. Abiotic characteristic of soils of sea coast were established to render the direct positive influence on the preservation and reproduction of pathogenic microflora in them. This is promoted by a degree of a saturation by the bases, cation-exchange capacity, quantity of humus. In the formation of environmental policy it should be taken into account and the human-induced load on the soil should be limited.
Key words: soils of sea coast; Listeria monocytogenes; Yersinia pseudotuberculosis; humus. Received 14.02.14
Citation: Gigiena i Sanitariya. 2015; 94(5): 20-23. (In Russ.)
Экономическая и экологическая ценность морских побережий широко признана. Первая связана с относительно большой плотностью населения в приморских районах, вызванной оптимальными возможностями для жизни. Следует отметить, что в прибрежной полосе мирового океана шириной 50 км сконцентрировано около 1/3 населения Земли. Биоценозы морских побережий испытывают высокую антропогенную нагрузку. Среди различных экосистем побережная и морская наиболее подвержены действию разрушающих факторов среды, в число которых входят туристические посещения, мелиорация и освоение сельскохозяйственных угодий, загрязнение пестицидами [1—4].
Анализ данных литературы показывает [5-18], что исследователи, как правило, рассматривали существование патогенных микроорганизмов в почве без учета ее химических, физико-химических характеристик. Почва - многокомпонентная система, которая характеризуется различной температурой, кислотностью, влажностью, гумусовым составом, разнообразным микробоценозом. Поэтому микроорганизмы, обитающие в почве, испытывают сильное воздействие со стороны всех перечисленных факторов (температура, рН, влажность, гумусовый состав, микробоценоз и т.д.). Следовательно, важно учитывать их влияние на рост и размножение патогенной микрофлоры. Если в настоящее время существуют данные, указывающие на возможность существования ли-
Для корреспонденции: Сидоренко Марина Леонидовна, sidorenko@biosoil.ru
For correspondence: YSidorenko Marina, e-mail: sidorenko@ biosoil.ru.
стерий в пахотных почвах (но и эти работы единичны) [19, 20], то об индикации листерий из почв морского побережья на сегодняшний день ничего не известно.
В связи с этим возникла необходимость в изучении абиотических и биотических факторов почв морского побережья оказывающих влияние на рост и размножение в них листерий и иерсиний. Это позволит выявить закономерности распространения L. monocytogenes и Y. pseudotuberculosis в почвах различного генезиса и экологических условий формирования и спрогнозировать рост и размножение возбудителей сапрозоонозных инфекций. Исследования подобной направленности позволяют также установить факторы, влияющие на формирование экологической политики, направленной на использование прибрежных территорий.
Материалы и методы
При проведении исследований использовались образцы маршевой и маритимной луговой почв (Приморский край, побережье залива Петра Великого), отобранные из верхнего (0-10 см) горизонта. А также референтные штаммы L. monocytogenes («П», «А», «К», «10CN», «4В», «1/2А») и Y. pseudotuberculosis («Н-557», «282», «512», «907», «Н-2781», «Н-3515»). Штаммы листерий получены из Всероссийского государственного контрольного института ветпрепаратов (Москва). Штаммы иерсиний получены из музея Всероссийского центра по иерсинио-зам и псевдотуберкулезу (НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, Владивосток).
В почвенных образцах определялись: гумус по Тюрину, актуальная кислотность, состав почвенного погло-
щающего комплекса, обменная кислотность, гидролитическая кислотность, обменные основания (Са2+ и Mg2+), емкость катионного обмена, степень насыщенности основаниями [21, 22]. Препараты гуминовых кислот были получены из маршевой и маритимной луговой почв [23] по общепринятой методике [21].
Для изучения кинетики роста листериозного и псевдотуберкулезного микробов при температурах 20-22°С и 4-6°С в различных средах (исследуемые образцы почв, гуминовые препараты, вытяжки гумусовых кислот) использовали трижды отмытую в физиологическом растворе культуру бактерий, которую вносили в испытуемые среды дозированно из расчета 100 клеток в 0,1 мл среды. Количество бактериальных клеток в 1 мл суспензии определяли по оптическому стандарту мутности. Исследования проводили при периодическом культивировании бактерий. Для построения кривой роста определяли динамику численности бактерий путем периодических высевов по 0,1 мл инокулята (делая необходимые серийные разведения) на дифференциально-диагностические среды (дрожжевой агар для листерий и среда Серова для иерсиний). Стадии кривой роста и наибольшее содержание бактерий определяли по числу колоний, выросших на чашках Петри с дифференциально-диагностическими агаризированными средами (ко-лониеобразующие единицы, КОЕ).
Для определения численности жизнеспособных клеток L. monocytogenes и Y. pseudotuberculosis в почвах готовили суспензию, содержащую 1 г почвы в 100 мл физиологического раствора. Использование нативной почвы не представлялось возможным из-за высокой сорбции почвенными частицами клеток бактерий [24]. Подготовленные суспензии стерилизовали дробно, 3 раза по 20 минут с интервалом 24 часа при температуре 100 °С текучим паром, затем их инокулировали суточными культурами листерий и иерсиний в количестве 103 КОЕ / мл (по стандарту мутности). Исходная заражающая доза при контрольном высеве из почвенной суспензии составила 1000 КОЕ / мл. Всего было исследовано пять вариантов опытов при 20-22 °С и пять - при 4-6 °С. Повторность трехкратная.
Размножение исследуемых бактерий на гумино-вых препаратах почв изучали следующим образом. Предварительно готовили специальные среды, состоящие из дистиллированной воды и гуминового препарата (0,02%), которые стерилизовали дробно, 3 раза по 20 мин с интервалом 24 ч при температуре 100 °С текучим паром. Стерильные среды в пробирках ино-кулировали суточными культурами L. monocytogenes и Y. pseudotuberculosis в количестве 103 КОЕ/ 0,1 мл. Инкубировали при температурах 4-6°С и 20-22°С. Высев производили на плотные питательные среды в течение 15 суток с периодичностью в одни сутки. Всего было исследовано 120 вариантов опытов (по-вторность трехкратная).
Длительность экспериментов зависела от изменения кривой роста исследуемых бактерий и составляла в среднем 30 сут, поскольку необходимо было установить факт размножения листериозного и псевдотуберкулезного микробов, то достаточно было получить три фазы кривой роста (исходная стационарная фаза, фаза задержки размножения, фаза логарифмическая).
Для культивирования микробов листериоза и псевдотуберкулеза использовали следующие среды: питательный агар (панкреатический гидролизат кильки - 17,9 г, агар сухой - 11,2 г, натрия хлорид - 7,7 г, вода дистил-
о ^
8
05
m
6
<в
X ^
В
ч 1-
з-
2-
Заражающая 1 доза
Сутки
>5 5 X О
ч о
Заражающая 1 доза
Сутки
Рис. 1. Кривые роста L. monocytogenes штамм 10CN (А) и Y. pseudotuberculosis штамм 907 (Б), в почвах морского побережья. -о- мари-тимная почва, -х- маршевая почва.
лированная - до 1 л, рН = 7,3±0,2), дрожжевой агар с глюкозой (натрия хлорид - 5,5г, гидролизат кормовых дрожжей - 12 г, агар сухой - 12,5 г, вода дистиллированная - до 1 л, глюкоза - 2 г, рН = 7,2-7,4), среда Серова (питательный агар - 3,2 мл, глюкоза 0,5 г, мочевина - 0,1 г, аммоний молибденовокислый - 0,1 г, сода (Na2CO3) -0,08 г, 30 % раствор желчи - 2 мл, 1% раствор кристаллического фиолетового - 0,1 мл, 1,6% раствор Конго-рот -0,9 мл, вода дистиллированная - 100 мл).
Результаты и обсуждение
В ходе наших экспериментов было установлено, что все исследуемые штаммы бактерий лучше всего размножались в маритимной почве, где их концентрация увеличивалась на 3,2 Lg. В маршевой почве наблюдалось менее интенсивное размножение бактерий, увеличение численности которых не превышало 1,6 Lg. При этом иерсинии в обоих типах почв размножались лучше, чем листерии. Кроме того, размножение листе-рий и иерсиний в почвах морского побережья зависело от индивидуальных особенностей штамма. Так, штамм «К» L. monocytogenes одинаково хорошо размножался как в маршевой, так и в маритимной почве. Штамм 2781 Y. pseudotuberculosis интенсивно размножался в маршевой почве, при этом в маритимной почве численность микроорганизмов резко снижалась, и на восьмые сутки высевались единичные колонии (рис. 1).
Помимо индивидуальных особенностей штаммов бактерий на размножение листерий и иерсиний в почвах морского побережья оказывает влияние характеристика самих почв. По величине рН водной вытяжки видно, что маршевая почва является слабокислой (рН = 6,1), а маритимная - нейтральной (рН = 6,76) (табл. 1). Слабокислая и нейтральная среды исследуемых почв благоприятны для размножения L. monocytogenes и
Таблица 1
Состав почвенного поглощающего комплекса
Название почвы рН Обменная кислотность по Дайкухара, мг-экв/ 100г почвы Гидролитическая кислотность, мг-экв/ 100г почвы Обменные основания, мг-экв/ 100г почвы Емкость катионного обмена, мг-экв/100г почвы Степень насыщенности основаниями, %
Н2О KCl Са2+ Mg2+
Маршевая 6,01 5,20 0,10 0,95 3,74 2,09 6,78 85,99
Маритимная 6,76 6,08 0,16 5,83 31,2 9,05 46,08 87,35
Y. pseudotuberculosis. Так, по данным В. И. Гершу-на (1981) [25] оптимальные пределы кислотности для L. monocytogenes лежат в интервале рН 7,6 - 7,8, а по данным Г. П. Сомова (1988) [5] для Y. pseudotuberculosis -рН 6,0-6,8. Именно поэтому маритимные почвы являются наиболее благоприятными для роста листерий и иерсиний.
Более активное размножение листерий и иерсиний в маритимной почве объясняется тем, что маритимная почва имеет более высокие показатели степени насыщенности основаниями (87,35%), емкости катионного обмена (46,08%), чем маршевая почва (85,99 и 6,78% соответственно) (см. табл. 1). Это указывает на то, что в маритимной почве более высокие концентрации ионов кальция и магния, которые являются необходимыми для нормального роста и размножения патогенных бактерий [26]. Как видно из табл. 1, по содержанию обменных оснований маритимная почва превосходит маршевую: Са2+ - 20 мг экв/100г почвы, Mg2+- 5,2 мг экв/100г почвы; Са2+ - 21,9 мг экв/100г почвы, Mg2+- 8,7 мг экв/100г почвы соответственно.
Кроме того, содержание гумуса является одним из лимитирующих факторов при размножении патогенных бактерий в исследуемых почвах. Так, содержание гумуса маршевой почвы - 2,06 %, маритимной - 5,43% (табл. 2). Поэтому, нами также было исследовано влияние гумуса на размножение патогенных бактерий. Для чего были получены чистые препараты гуминовых кислот в виде гуматов аммония. Результаты опыта показали, что L. monocytogenes и Y. pseudotuberculosis достаточно хорошо размножались как на гуматах маритимной луговой почвы (достигая размножения бактерий до 6 Lg L. monocytogenes шт. 10CN и 6,4 Lg - Y. pseudotuberculosis шт. 512), так и на гуматах маршевой почвы (до 5 Lg L. monocytogenes шт. 10CN - и 5,9 Lg - Y. pseudotuberculosis шт. 512), отдавая все же некоторое предпочтение гуматам, вы-
Таблица 2
Агрохимические показатели почв
Маршевая почва Маритимная почва
Естественная влажность, % объема 69,8 63,2
Степень водонасыщенности, % 92,6 85,5
Полная влагоемкость, % 137,1 144,9
Порозность аэрации, % 6,3 31,6
Общая порозность, % 76,1 44,5
Сумма частиц > 0,01мм, % 96,1 55,5
Сумма частиц < 0,01 мм, % 3,9 49,5
Запасы легкорастворимых солей 1,87 4,33
в слое 20 см, кг/м2
Содержание гумуса, % 2,06 5,43
деленным из маритимной луговой почвы (разница в 1 Lg у L. monocytogenes и 0,5 Lg у Y. pseudotuberculosis незначительна) (рис. 2).
Маршевая и маритимная почвы также различаются по количеству запасов легкорастворимых солей в слое 20 см - 1,87 кг/м2 и 4,33 кг/м2 соответственно. Общая порозность маршевой почвы - 76,1 %, маритимной -44,5%. Естественная влажность - 69,8% объема для маршевой почвы и 63,2 % объема для маритимной почвы. Степень водонасыщенности - 92,6 и 85,5% соответственно. По содержанию физического песка и физической глины маршевые почвы оцениваются как связанно песчаные (сумма частиц >0,01 мм (фракция физической глины) 96,1%), а маритимные - легкоглинистые (55,5%) (см. табл. 2).
Таким образом, установлено, что абиотические характеристики почв морского побережья оказывают непосредственное положительное влияние на сохранение и размножение в них патогенной микрофлоры. Этому способствует степень насыщенности основаниями, емкости катионного обмена, степень гумуссированности этих почв, а также штаммовые свойства самих бактерий. Поэтому при формировании экологической политики следует учитывать и ограничивать антропогенную нагрузку на почвы.
Î 7-
I6
S 5
га m 1-
о аз т s t; о
4 3 2 1
э о
Заражающая доза
2 3 5 7 9 12 15 Сутки
s s
X
о ц
о
76 5
ш 4
§ 3
I 2
о
* 1 □>
-1 0 Заражающая 1 доза
5
Сутки
12 15
Рис. 2. Кривые роста условно-патогенной микрофлоры на гумино-вых препаратах почв морского побережья: L. monocytogenes шт. 10CN (А); Y. pseudotuberculosis шт. 512. (Б). -о- гуматы NH3 маритимной луговой почвы; -х- гуматы NH3 маршевой почвы.
Литература (п.п. 3-4, 11-18 см. References)
1. Алькамо Д., Эш Н., Батлер К.Д., Калликотт Д.Б., Капистрано Д., Карпентер С.Р. и др. Оценка экосистем на пороге тысячелетия. Экосистемы и благосостояние людей: рамки оценки. Вашингтон: Island Press; 2005.
2. Спиридонов В.А., Гаврило М.В., Краснова Е.Д., Николаева Н.Г., ред. Атлас биологического разнообразия морей и побережий российской Арктики. М.: WWF России; 2011.
5. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий: экологические аспекты. Новосибирск: Наука, Сибирское отделениеие; 1988.
6. Кузнецов В.Г., Тимченко Н.Ф., Образцов Ю.Г., Андрюков Б.Г. Вспышка псевдотуберкулеза в Южном Приморье. Бактериологическая диагностика и характеристика возбудителя. Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2001; 3: 50-3.
7. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю. Сапронозы: от природных до техногенных очагов. Национальные приоритеты России. 2011; 2: 53-4.
8. Литвин В.Ю., Сомов Г.П., Пушкарева В.И. Сапронозы как природно-очаговые болезни. Эпидемиология и вакцинопро-филактика. 2010; 1: 10-6.
9. Сомов Г.П., Покровский В.И., Беседнова Н.Н. Псевдотуберкулез. М.: Медицина; 1990.
10. Сомов Г.П., Бузолева Л.С. Адаптация патогенных бактерий к абиотическим факторам окружающей среды. Владивосток: Примполиграфкобинат; 2004.
19. Сидоренко М.Л., Бузолева Л.С., Костенков Н.М. Влияние свойств почв на сохранение и размножение листерий и иер-синий. Почвоведение. 2006; 2: 237-43.
20. Сидоренко М.Л., Бузолева Л.С. Размножение патогенной микрофлоры под влиянием микробного сообщества почвенной экосистемы. Вестник Красноярского государственного аграрного университета. 2012; 3: 43-8.
21. Орлов Д.С., Гришина Л.А. Практикум по химии гумуса. М.: Издательство МГУ; 1981.
22. Кауричев И.С., ред. Практикум по почвоведению. М.: Колос; 1980.
23. Шляхов С.А. Классификация почв морских побережий. Владивосток: Дальнаука; 1996.
24. Сбойчаков В.Б., ред. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований : учебник для средних медицинских учебных заведений. 2-е изд. СПб.: СпецЛит; 2011.
25. Гершун В.И. Распространение и жизнеспособность листерий в объектах внешней среды и влияние температурного фактора на их морфологические свойства. Вопросы природной очаговости болезней. 1981; 12: 78-89.
26. Вернадский В.И. Избранные сочинения. М.: Издательство АН; 2001.
References
1. Al'kamo D., Esh N., Batler K.D., Kallikott D.B., Kapistrano D., Karpenter S.R. et al. Evaluation of the Millennium. Ecosystems and Human Well-being: A Framework for Evaluation [Otsenka ekosistem na poroge tysyacheletiya. Ekosistemy i blagosostoyanie lyudey: ramki otsenki]. Vashington: Island Press; 2005. (in Russian)
2. Spiridonov V.A., Gavrilo M.V., Krasnova E.D., Nikolaeva N.G., eds. Atlas of Biodiversity of the Seas and Coasts of the Russian Arctic [Atlas biologicheskogo raznoobraziya morey i poberezhiy rossiyskoy Arktiki]. Moscow: WWF Rossii; 2011. (in Russian)
3. Remoundou K., Koundouri P., Kontogianni A., Nunes P.A.L.D., Skourtos M. Valuation of Natural Marine Ecosystems: an Economic Prospective. Environ. Sci. Policy. 2009; 12(7): 1040-51.
4. Braat L.C., De Groot R. The Ecosystems Services Agenda: Bridging the Worlds of Natural Science and Economics, Conservation and Development, and Public and Private Policy. Ecosystem Services. 2012; 1 (1): 4-15.
5. Somov G.P., Litvin V.Yu. Saprofitizm and Parasitism of Patho-
genic Bacteria: Ecological Aspects [Saprofitizm i parazitizm patogennykh bakteriy: ekologicheskie aspekty]. Novosibirsk: Nauka, Sibirskoe otdelenieie; 1988. (in Russian)
6. Kuznetsov V.G., Timchenko N.F., Obraztsov Yu.G., Andryu-kov B.G. Pseudotuberculosis outbreak in Southern Primorye. Bacteriological diagnosis and characterization of the causative agent. Zdorov'e. Meditsinskaya ekologiya. Nauka. 2001; 3: 50-3. (in Russian)
7. Pushkareva V.I., Litvin V.Yu. Sapronoses: from natural to man-made fires. Natsional'nye prioritety Rossii. 2011; 2: 53-4. (in Russian)
8. Litvin V.Yu., Somov G.P., Pushkareva V.I. Sapronoses as natural focal disease. Epidemiologiya i vaktsinoprofilaktika. 2010; 1: 10-6. (in Russian)
9. Somov G.P., Pokrovskiy V.I., Besednova N.N. Pseudotuberculosis [Psevdotuberkulez]. Moscow: Meditsina; 1990. (in Russian)
10. Somov G.P., Buzoleva L.S. Adaptation of Pathogenic Bacteria to the Abiotic Environment [Adaptatsiya patogennykh bakteriy k abioticheskim faktoram okruzhayushchey sredy]. Vladivostok: Primpoligrafkobinat; 2004. (in Russian)
11. Baumgardner D.J. Soil-Related Bacterial and Fungal Infections. J. Am. BoardFam. Med. 2012; 25 (5): 734-44.
12. Maier R.M., Pepper I.L., Gerba C.P., eds. Environmental Microbiology. 2nd ed. Amsterdam: Elsevier; 2009.
13. Reddy P., Bleck T.P. Clostridium botulinum (botulism). In: Man-dell G.L., Bennett J.E., Dolin R., eds. Mandell, Douglas, and Bennett's principles and practice of infectious diseases. 7th ed. Philadelphia: Churchill Livingstone; 2010: 3097-102.
14. Hugh-Jones M., Blackburn J. The ecology of Bacillus anthracis. Mol. Aspects Med. 2009; 30: 356-67.
15. Freitag N.E., Port G.C., Miner M.D. Listeria monocytogenes-from saprophyte to intracellular pathogen. Nat. Rev. Microbiol. 2009; 7: 623-8.
16. Casati S., Gioria-Martinoni A., Gaia V. Commercial potting soils as an alternative infection source of Legionella pneumophila and other Legionella species in Switzerland. Clin. Microbiol. Infect. 2009; 15: 571-5.
17. Forsberg K.J., Reyes A., Wang B., Selleck E.M., Selleck E.M., Sommer M.O., Dantas G. The shared antibiotic resistome of soil bacteria and human pathogens. Science. 2012; 337: 1107-11.
18. Silby M.W., Winstanley C., Godfrey S.A., Levy S.B., Jackson R.W. Pseudomonas genomes: diverse and adaptable. FEMS Microbiol. Rev. 2011; 35(4): 652-80.
19. Sidorenko M.L., Buzoleva L.S., Kostenkov N.M. The effect of soil properties on the preservation and reproduction of listeria and yersinia. Pochvovedenie. 2006; 2: 237-43. (in Russian)
20. Sidorenko M.L., Buzoleva L.S. Reproduction of pathogenic microflora influenced the soil microbial community ecosystem. Vestnik Krasnoyarskogo gosudarstvennogo agrarnogo univer-siteta. 2012; 3: 43-8. (in Russian)
21. Orlov D.S., Grishina L.A. Workshop on Humus Chemistry [Praktikum po khimii gumusa]. Moscow: Izdatel'stvo MGU; 1981. (in Russian)
22. Kaurichev I.S., ed. Workshop on Soil [Praktikum po pochvove-deniyu]. Moscow: Kolos; 1980. (in Russian)
23. Shlyakhov S.A. Soil Classification of Sea Coasts [Klassifikatsiya pochv morskikh poberezhiy]. Vladivostok: Dal'nauka; 1996. (in Russian)
24. Sboychakov V.B., ed. Microbiology of the Basics of Epidemiology and Microbiology Research Methods: a Textbook for Secondary Medical Schools [Mikrobiologiya s osnovami epidemi-ologii i metodami mikrobiologicheskikh issledovaniy : uchebnik dlya srednikh meditsinskikh uchebnykh zavedeniy]. 2nd ed. St. Petersburg: SpetsLit; 2011. (in Russian)
25. Gershun V.I. Distribution and viability of Listeria in environmental objects and the influence of temperature on their morphological properties. Voprosy prirodnoy ochagovosti bolezney. 1981; 12: 78-89. (in Russian)
26. Vernadskiy V.I. Selected Writings [Izbrannye sochineniya]. Moscow: Izdatel'stvo AN; 2001. (in Russian)
Поступила 14.02.14
