CC BY
28
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ВРОЖДЁННЫЙ ИММУНИТЕТ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018
УДК 616.71-018.46-002.2-092:612.014.467
Гординская Н.А., Лебедев М.Ю., АлейникД.Я., Рубцова Ю.П., Митрофанов В.Н., Живцов О.П.
роль toll-подобных рецепторов в патогенезе хронического остеомиелита
ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, 603155, г Нижний Новгород, Россия
В работе проанализирована экспрессия и функциональная активность TLR2 и TLR4 на CD^+^летках периферической крови пациентов с хроническим остеомиелитом длинных трубчатых костей. Экспрессия TLR4 у всех пациентов была высокой и составляла 98,8%. По уровню экспрессии TLR2 выделены две группы пациентов с различным течением заболевания. В первой группе уровень экспрессии TLR2 при обострении процесса был достоверно ниже, чем во второй группе больных, в процессе лечения повышался с 31,7±17,4 до 80,3±2,3%, при этом их функциональная активность (продукция ФНО-а спонтанная и стимулированная) снижалась. Во второй группе пациентов при обострении остеомиелита экспрессия TLR2 на моноцитах составила 70,7±8,05%, после лечения снижалась до 51,2±l8,9%, а их функциональная активность повышалась. На фоне однотипного лечения всех пациентов спонтанная выработка ФНО-а мононуклеарными клетками у больных второй группе снижалась, а стимулированная - повышалась. При стимуляции мононуклеарных клеток пептидогликаном выработка ФНО-а была достоверно выше (р<0,05) в первой группе. Эти изменения коррелировали с достоверно большим содержанием HLA-DR+, CD19+, CD3+DR+-клеток и клинически стойкой ремиссией после лечения в первой группе больных. После лечения у больных первой группы обострение хронического процесса не наблюдалось в период всего исследования. Максимальное время наблюдения составило полтора года (17±2 мес). В противоположность этому у пациентов второй группы период до рецидива был значительно короче и составлял в среднем три с половиной месяца (3±0,5 мес).
Выявлена связь между экспрессией и функциональной активностью TLR2 на CD14+-клетках периферической крови пациентов с хроническим остеомиелитом длинных трубчатых костей.
Ключевые слова: врожденный иммунитет; TLR; CD-рецепторы; интерлейкины; хронический остеомиелит.
Для цитирования: Гординская Н.А., Лебедев М.Ю., Алейник Д.Я., Рубцова Ю.П., Митрофанов В.Н., Живцов О.П. Роль TOLL-подобных рецепторов в патогенезе хронического остеомиелита. Иммунология. 2018; 39(1): 12-15. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-12-15
Gordinskaya N.A., LebedevM.Y., AleynikD.Y., Rubtsova Y.P., Mitrofanov V.N., Zhivtsov O.P.
ROLE OF TOLL-LIKE RECEPTORS IN THE PATHOGENESIS OF CHRONIC OSTEOMYELITIS
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education «Privolzhsky Research Medical University», 603155,
Nizhny Novgorod, Russia
The aim of this study was to analyze expression and functional activity of TLR2 and TLR4 on CD14+ peripheral blood се!^ in patients with chronic osteomyelitis of long bones. TLR4 expression in all patients was high and equaled to 98.8%. Depending on TLR2 expression level, patients were divided into two groups with different disease courses. The first group showed a significantly lower TLR2 expression level as compared to the second group of patients, and in the course of treatment it increased from 31.7±17.4% to 80.3±2.3% with a functional activity reduction (spontaneous and stimulated TNF-alpha production). The second group of patients developed TLR2 expression on monocytes equal to 70.7±8.05% at osteomyelitis aggravation; after treatment it reduced to 51.2±18.9%, and their functional activity increased. With similar treatment for all patients, spontaneous TNF-alpha production by mononuclear cells in the second group of patients reduced, while stimulated production increased. With stimulation of mononuclear cells by peptidoglycane, TNF-alpha production was significantly higher (р<0,05) in the first patient group. These changes correlated with a significantly higher content of HLA-DR+, CD19+, CD3+ Dr+ cells and clinically stable remission after treatment in the first patient group. After provided treatment patients of the first group showed no aggravation of the chronic process throughout the research period. Maximum monitoring time was a year and a half (17±2 months). By contrast to this, the time to relapse in patients of the second group was much shorter and was equal to three and a half months on the average (3±0.5 months).
The interrelation between the expression and functional activity of TLR2 on CD14+ peripheral blood cells of patients with chronic osteomyelitis of long tubular bones with a duration of remission of the disease.
Keywords: Innate immunity; TLRs; CD-receptors; interleukins; chronic osteomyelitis.
For citation. Gordinskaya N.A., Lebedev M.Y., Aleynik D.Y., Rubtsovа Y.P., Mitrofanov V.N., Zhivtsov O.P. Role of toll-like receptors in the pathogenesis of chronic osteomyelitis. Immunologiya. 2018; 39(1): 12-15. DOI: http://dx.doi. org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-12-15.
Для корреспонденции: Гординская Наталья Александровна, д-р мед. наук, руководитель лабораторного сектора ФГБУ «ПФМИЦ» Минздрава России, 603155, r. Нижний Новгород, Россия, E-mail: info@nniito.ru
ORIGINAL ARTICLE
For correspondence: Gordinskaya N.A., Dr. Sci. Med., Head of Laboratory Department Federal State Budgetary Institution
«Privolzhsky Federal Research Medical Centre» of the Ministry of Health of the Russian Federation, E-mail: info@nniito.ru
Gordinskaya N.A. http://orcid.org/0000-0002-4146-0332
Lebedev M.Y. http://orcid.org/0000-0001-5596-2619
Aleynik D.Y. http://orcid.org/0000-0003-1482-4281
Rubtsova Y.P. http://orcid.org/0000-0002-2781-6419
Mitrofanov V.N. http://orcid.org/0000-0003-2046-3865
Zhivtsov O.P. http://orcid.org/0000-0002-2809-1683
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received 12.09.17 Accepted 16.12.17
Актуальность. Хронический остеомиелит как любое хроническое заболевание приводит к многочисленным изменениям в иммунной системе. Многолетними исследованиями доказано снижение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов у пациентов с остеомиелитом, уменьшение числа NK-клеток и CD4+- лимфоцитов, повышение CD8+-клеток и содержания про- и одновременно противовоспалительных цитокинов в периферической крови [1]. Однако выявленные иммунологические сдвиги не привели к объяснению причин хронического течения заболевания и очередных рецидивов процесса после ремиссии [2, 3].
Последнее десятилетие характеризуется активным изучением состояния врождённого иммунитета при различных инфекционных заболеваниях. Врождённый иммунитет рассматривают как наследственно закреплённую систему защиты многоклеточных организмов от любых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также эндогенных продуктов тканевой деструкции [4-7]. При этом врождённая иммунная система обеспечивает распознавание и элиминацию патогенов в первые часы после вторжения антигена, когда механизмы адаптивного иммунитета ещё не функционируют [8]. Являясь первой линией защиты от микробов, попадающих в организм человека, врождённая иммунная система распознает чужеродные молекулярные структуры (па-тоген-ассоциированные молекулярные паттерны - ПАМП) с помощью многочисленных структур - паттернраспозна-ющих рецепторов - ПРР, к которым относятся сигнальные Toll-подобные (Toll-like receptors - TLRs), NOD-подобные и RIG-подобные рецепторы. TLRs - это семейство трансмембранных гликопротеинов, третичная структура которых определяет специфичность связывания с определёнными ПАМП. Каждый из TLRs распознает определённый набор микробных продуктов, что позволяет организму обнаружить большую часть патогенов, которыми он может быть инфицирован. После взаимодействия клеток врождённого иммунитета, несущих TLRs с патогеном, происходит передача сигнала внутрь клетки и последовательная активация адапторных белков, протеинкиназ и транскрипционных факторов, что приводит к изменению экспрессии различных генов, в частности провоспалительных цитокинов [9-13]. Уровень экспрессии толл-рецепторов и их функциональная активность определяют выраженность воспалительной реакции.
В настоящей работе проанализирован уровень экспрессии молекул TLR2 и TLR4 на моноцитах периферической крови пациентов с обострением хронического остеомиелита до и после лечения и уровня спонтанной и индуцированной выработки этими клетками фактора некроза опухоли-а (ФНО-а), а также количества CD3+, CD4+, CD8+,CD19+, CD^+56+и HLA-DR+-лимфоцитов в периферической крови. Прослежена зависимость количества TLR2+ и TLR4+-клеток с клиническими особенностями течения хронического остеомиелитического процесса.
Материал и методы
Исследовали образцы крови от 49 больных (9 женщин и 40 мужчин 17-67 лет), находившихся на хирургическом
лечении в отделении гнойной хирургии ФГБУ «ПФМИЦ» Минздрава России в период с 2014 по 2016 г по поводу обострения хронического остеомиелита. У всех пациентов был моноочаг, локализовавшийся в длинной трубчатой кости с наличием одного или множественных костных секвестров. Длительность остеомиелитического процесса к моменту госпитализации составила от 3 мес до 12 лет. Каждый больной предварительно перенёс от 2 до 7 оперативных вмешательств из-за обострений хронического остеомиелита. По поводу гематогенного остеомиелита лечение получали 7 больных. Остальные имели в анамнезе закрытые или открытые переломы. Хирургическое лечение проводилось всем больным. Оперативное вмешательство заключалось в остеонекрсек-вестрэтомии, санации раны при помощи ультразвукового кавитатора в антибактериальном растворе. Костный дефект заполняли препаратом на основе коллагена.
Сроки ремиссии оценивали, исходя из времени повторного обращения по поводу обострения у пациентов в отделении гнойной хирургии центра.
В группу сравнения вошли 23 условно здоровых добровольца, сопоставимых по возрасту и полу.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из гепарини-зированной крови (25 ЕД на 1 мл) с помощью градиентного центрифугирования при 1500 об/мин (фиколл-урографин р=1,077 г/см3) 40 мин и дважды отмывали средой RPMI 1640 при 1500 об/мин в течение 10 мин. После чего культивировали МНК в полной ростовой среде RPMI 1640, содержащей 10% телячьей эмбриональной сыворотки (ООО «ПанЭко»), 2% Мм глутамина и антибиотики (пенициллин 100 ЕД/мл и стрептомицин 50 мг/мл, ООО «ПанЭко»). Исходная концентрация МНК составляла Г106 клеток/мл.
В качестве лигандов TLR использовали стимуляторы ЛПС (E.coli O127: B8; Sigma) в дозе 0,1 мкг/мл и пеп-тидогликан (Staphylococcus aureus; Sigma) в дозе 5 мкг/мл. Оптимальные дозы выбраны на основании методических рекомендаций фирм-производителей используемых лиган-дов и литературных данных. Клетки инкубировали в СО2 инкубаторе фирмы Sanyo (Япония) при 5% СО2, 37 оС и абсолютной влажности. Спонтанную выработку ФНО-а определяли, культивируя МНК в полной ростовой среде без стимуляторов. По окончании культивирования клетки осаждали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 15 мин. Отбирали супернатанты и хранили их в течение 1-2 мес при -80 оС. Рассчитывали индекс стимуляции как отношение количества ФНО-а при использовании соответствующего лиганда к спонтанной выработке цитокина клетками.
Продукцию ФНО-а определяли в супернатантах культур методом ИФА с помощью тест-систем фирмы Bioscience (США) на анализаторе Sunrise Tecan (Австрия), оснащённом системой Magellan, позволяющей в автоматическом режиме производить подсчёт оптической плотности.
Для определения экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах МНК периферической крови сразу после их выделения инкубировали с FITC-меченными антителами к CD14 (Beck^an Coulter, США), PE-меченными антителами к TLR2 (CD14+CD282+)
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Таблица 1
Количество и функциональная активность TLR2 и TLR4 по уровню продукции ФНО-а у пациентов с обострением хронического остеомиелита (M±m)
Группа
Показатель 1-я («=15) 2-я (n=34) Доноры, n=23
до лечения после лечения до лечения после лечения
TLR2, % 31,7±17,4
TLR4,% 99,3±0,4
Продукция ФНО-а спонтанная, пг/мл 71,2±48,9
Продукция ФНО-а стимулированная ПГ, пг/мл 877,5±163,8 Продукция ФНО-а стимулированная ЛПС, пг/мл 740,7±234,5
80,3±2,3** 100,0±0,4 53,65±24,1** 310,2±36,7 578,2±146,2
70,7±8,05* 97,0±2,6 24,9±7,4 668,02±97,7 479,05±62,5
51,2±18,9 99,0±0 16,3±5,7 1222,0±140,04*, ** 1128,2±270,08*, **
55,6±3,1 42,9±4,6 25,4±6,8 359,7±23,2 687±18,8
Примечание. групп.
-/><0,05 при сравнении показателей первой и второй групп; ** р<0,05 при сравнении данных до и после лечения внутри
и APC-меченными антителами к TLR4 (CD14+CD284+) (Bioscience) с соответствующими изотипическими контролями (Вескмап Coulter) в течение 30 мин при 4оС. Анализ экспрессии CD14, TLR2 и TLR4 проводили на проточном цитофлюориме-тре Navios (Вескмап Coulter). Оценивали процент моноцитов, несущих на своей поверхности TLR2 и TLR4, и среднюю интенсивность флюоресценции (RMFI), величину которой выражали в условных единицах (усл. ед.) флюоресценции.
Определение иммунофенотипа клеток проводили на проточном цитофлюориметре Navios (Beckman Coulter) методом многоцветного анализа. В качестве реагентов использовали пятицветную панель моноклональных антител против CD45 (меченных FITC), CD4 (меченных РЕ), CD8 (меченных ECD), CD3 (меченных РС5) и CD19 (меченых РС7), а также четырёхцветную панель моноклональных антител против CD45 (меченных РС5), CD3 (меченных FITC), CD16+56 (меченных РЕ) и HLA-DR (меченных РС7) производства Beckman Coulter. Полученные результаты оценивали как статистически значимые при значениях p<0,05. Все данные выражались в виде средних величин ± стандартная ошибка среднего (M±m).
Статистическую обработку проводили с использованием программы Statistica 6.1.
Результаты и обсуждение
Результаты исследования количества TLR2 и TLR4-положительных моноцитов в крови доноров показали, что их число было относительно стабильным показателем и составило в среднем 55,6± 3,1 и 42,9± 4,6% соответственно (табл. 1).
При обострении хронического остеомиелита оказалось, что по экспрессии TLR2 на моноцитах среди обследованных пациентов можно выделить две группы. В первую группу («=15) вошли больные, у которых экспрессия исследуемого рецептора выше, чем у доноров и составила в среднем 70,7±8,05%. Соответственно во вторую группу («=34) вошли больные, у которых количество TLR2+-моноцитов ниже, чем у доноров и составилj в среднем 31,7±17,16%.
Экспрессия TLR4 была высокой (98,7±1,1%) практически у всех пациентов. Средняя интенсивность флюоресценции при этом в обеих группах сравнима для TLR2 и TLR4 и составила 37 усл. ед.
Следует отметить, что у большинства (94,3%) пациентов из остеомиелитического очага выделялся Staphylococcus aureus.
В стадии обострения хронического остеомиелита спонтанная продукция ФНО-а мононуклеарами в первой группе больных была выше, чем во второй, однако достоверности различий не выявлено. При использовании пептидогликана и липополисахарида для стимуляции МНК продукция ФНО-а у пациентов первой и второй групп достоверных различий не имела. Стимулирующее влияние различных лигандов на продукцию ФНО-а рассчитывали, используя условный коэффициент стимуляции (КС): отношение концентрации ФНО-а
в супернатантах МНК, стимулированных лигандами, к концентрации ФНО-а в супернатантах не стимулированных мононуклеаров. В первой группе пациентов при стимуляции МНК пептидогликаном КС был равен 12,3, во второй - 27,8. При стимуляции мононуклеарных клеток липополисахари-дом в группах сравнения достоверных отличий не выявлено, КС в первой группе больных равен 10,4, во второй - 19,9.
Результаты исследований, проведенных после лечения, также показали значимую разницу показателей в выделенных группах. В первой группе уровень экспрессии TLR2-рецептора в процессе лечения повысился с 31,7±17,4 до 80,3±2,3%, при этом функциональная активность - продукция ФНО-а как спонтанная, так и стимулированная - снижалась. Во второй группе при обострении остеомиелита экспрессия TLR2-рецептора на моноцитах составила 70,7±8,05%, после курса лечения снизилась до 51,2±18,9%. Изменения функциональной активности TLR-рецепторов у пациентов второй группы были неоднозначными: спонтанная выработка ФНО-а МНК периферической крови во второй группе больных снизилась (24,9±7,4 vs. 16,3±5,7 пг/мл), а стимулированная продукция ФНО-а повысилась (668,02±97,7 vs. 1222,0±140,04 пг/мл и 479,05±62,5 vs. 1128,2±270,08 пг/мл, для ПГ и ЛПС соответственно).
Функциональная активность TLR после лечения у пациентов первой группы достоверно снизилась. Коэффициент стимуляции при использовании пептидогликана в первой группе составил 5,8, во второй - 76,3, при использовании ли-
Таблица 2
Иммунофенотип лимфоцитов периферической крови у пациентов с остеомиелитом в период обострения (%)
Группа 1, n=15 Группа 2, n =34
Показатель до лечения после лечения до лечения после лечения
CD 3+ 75,2±0,7 74,8±1,2 77,4±0,8 77,5±2,0
CD 4+ 50,25±3,4 48,7±7,5 50,1±6,7 47,4±2,9
CD 8+ 22,9±3,6 23,2±3,2 32,5±2,4 26,3±3,7
HLA-DR+ 21,5±2,1* 23,3±1,8* 13,6±2,8* 13,2±2,7*
CD19+ 12,4±4,3 13,1±2,2* 10,0±2,9 6,7±2,7*
CD3-16/56+ 10,2±0,8 13,3±2,3 5,8±0,9 8,1±1,5
CD3+HLA-DR+ 7,8±0,9* 8,8±1,3 4,5±0,7 6,7±1,6
CD3-HLA-DR+ 10,9±1,8 10,7±0,8* 7,6±1,9 4,5±0,9*
CD3-8+ 4,6±0,3 5,0±1,0 2,8±0,2 3,5±0,9
Примечание.* второй групп. - /><0,05 при сравнении показателей первой
пополисахарида - 10,9 и 70,5 соответственно.
Анализ иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови в группах сравнения пациентов с хроническим остеомиелитом показал, что общее число Т-лимфоцитов и основных субпопуляций не имели значимых отличий при сравнении как между группами, так и в процессе лечения (табл. 2).
Количество натуральных киллеров (CD3-16+-клеток) имело тенденцию к увеличению в первой группе пациентов с повышенным содержанием TLR2+-моноцитов в стадии обострения болезни и было максимальным к моменту выписки больных из стационара. Подобная картина прослеживалась в популяции активированных NK-клеток (CD3-CD8+-лимфоциты). Зарегистрированы достоверные отличия в содержании HLA-DR+-лимфоцитов у пациентов обеих групп. В первой группе больных количество HLA-DR+-клеток было выше, чем во второй как до лечения, так и после его завершения. После лечения в первой группе больных численность популяции CD19+-лимфоцитов достоверно выше по сравнению с показателем во второй группе.
Анализ клинического течения остеомиелитического процесса показал, что в первой и второй группах пациентов имелись различия в длительности безрецидивного периода. После лечения у больных первой группы обострение хронического процесса не наблюдалось в период всего исследования. Максимальное время наблюдения составило полтора года (17±2 мес). В противоположность этому, у пациентов второй группы период до рецидива был значительно короче и составлял в среднем 3,5 (3±0,5) мес.
У пациентов первой группы при поступлении в стационар вывялено достоверное снижение количества TLR2+-моноцитов по сравнению с больными второй группы. Обнаружено, что в этой группе спонтанная и индуцированная пептидгликаном продукция ФНО-а имела отчётливую тенденцию к повышению по сравнению с группой больных с коротким безрецидивным периодом. Количество TLR4+-моноцитов в обеих группах практически не отличалось, но продукция ФНО-а, индуцированная липополисахаридом, была выше в первой группе. Можно предположить, что у данной группы больных снижение количества клеток-продуцентов сопровождается сохранением или даже повышением их функциональной активности. Вероятно, именно сохранение функционального потенциала Toll-подобных рецепторов является одним из факторов, способствующих увеличению временного промежутка до очередного обострения хронического остеомиелитического процесса.
Дальнейшее изучение рецепторов врождённого иммунитета при хроническом остеомиелите, в частности, детекция полиморфизмов TLRs, по-видимому, могут прояснить патогенетические процессы течения заболевания и позволят внести коррективы в схемы медикаментозного лечения хронического остеомиелита.
Выводы
1. Обострение хронического остеомиелита стафилококковой этиологии характеризуется высокой экспрессией TLR4 CD14+-клетками периферической крови по сравнению со здоровыми лицами.
2. В стадии обострения хронического остеомиелита у одних пациентов наблюдается высокая экспрессия TLR2 на моноцитах периферической крови (70,7±8,05%), у других -низкая (31,7±17,4%).
3. В группе больных с высокой экспрессией TLR2 на моноцитах периферической крови число HLA-DR+ и CD19+-лимфоцитов достоверно выше по сравнению с больными с низкой экспрессией TLR2.
4. Выявлена связь экспрессии и активности TLR2 в период обострения болезни и длительности ремиссии у пациентов с хроническим остеомиелитом.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
ORIGINAL ARTICLE
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии
конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 11-13 см. REFERENCES)
1. Абатуров А.Е. Молекулярные механизмы неспецифической защиты респираторного тракта: распознавание патоген-ассоциирован-ных молекулярных структур. Здоровье ребенка. 2006; (2): 87-92.
2. Лебедев М.Ю., Шолкина М.Н., Живцов О.П. Содержание дубль-позитивных СЭ4+С08+лимфоцитов в периферической крови тя-желообожженных и больных с остеомиелитом. Фундаментальные исследования. 2013; (12): 45-8.
3. Тевс Д.С., Калуцкий П.В., Лазаренко В.А. Нарушение иммунного и цитокинового статуса у больных хроническим остеомиелитом костей стопы. Казанский медицинский журнал. 2003; (4): 460-3.
4. Глинцбург А.Л., Лиходед В.Г., Бондаренко В.М. Экзогенные и эндогенные факторы в патогенезе атеросклероза. Рецепторная теория атеросклероза. Российский кардиологический журнал. 2010; (2): 92-6.
5. Ковальчук Л.В., Хореева М.В., Варивода А.С., Кондратенко И.В. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке TOLL-подобных рецепторов человека. Иммунология. 2008; 29(4): 223-7.
6. Хаитов Р.М., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Роль паттернраспоз-нающих рецепторов во врожденном и адаптивном иммунитете. Иммунология. 2009; 30(1): 66-76.
8. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Никонова А.С., Греченко В.В., Агапов М.А., Индраков В.А. и др. Корригирующее действие ингибитора циклооксигеназы на функциональное состояние моно-нуклеарных клеток, экспрессирующих TLR. Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2010; (1): 45-50.
10. Самарканова Д.М., Кожанова С.В., Шортанбаев А.А. Толл-подобные рецепторы, их экспрессия и связь с заболеваниями человека. Вестник Национальной академии наук Республики Казахстан. 2012; (1): 20-6.
REFERENCES
1. Abaturov A.E. Molecular mechanisms of nonspecific respiratory tract protection: recognition of pathogen-associated molecular structures. Zdorov'e rebenka. 2006; (2): 87-92. (in Russian)
2. Lebedev M.Yu., Sholkina M.N., Zhivtsov O.P. Content of CD4+CD8+ double positive lymphocytes in peripheral blood of patients with severe burns and patients with osteomyelitis. Fundamental'nye issledovaniya. 2013; (12): 45-8. (in Russian) (in Russian)
3. Tevs D.S., Kalutskiy P.V., Lazarenko V.A Disorders of immune and cytokine status in patients with chronic osteomyelitis of foot bones. Kazanskiy meditsinskiy zhurnal. 2003; (4): 460-3. (in Russian)
4. Glintsburg A.L., Likhoded V.G., Bondarenko V.M. Exogenous and endogenous factors in atherosclerosis pathogenesis. Receptor theory of the atherosclerosis. Rossiyskiy kardiologicheskiy zhurnal. 2010; (2): 92-6. (in Russian)
5. Koval'chuk L.V., Khoreeva M.V., Varivoda A.S., Kondratenko I.V. Innate immunity receptors: approaches to quantitative and functional evaluation of TOLL-like human receptors. Immunologiya. 2008; 29(4): 223-7. (in Russian)
6. Khaitov R.M., Pashchenkov M.V., Pinegin B.V. Role of pattern recognizing receptors in innate and adaptive immunity. Immunologiya. 2009; 30(1): 66-76. (in Russian)
7. Erridge C. Endogenous ligands of TLR2 and TLR4: agonists or assistants? J. Leukoc. Biol. 2010; 87(6): 989-99.
8. Koval'chuk L.V., Khoreva M.V., Nikonova A.S., Grechenko V.V., Agapov M.A., Indrakov V.A. Corrective effect of cyclooxygenase inhibitor on functional status of mononuclear cells expressing Toll-like receptors. Mikrobiologiya, epidemiologiya i immunobiologiya. 2010; (1): 45-50. (in Russian)
9. Montes A.H., Asensi V., Alvares V., Vall E., Ocana M.g., Meana A. et al. The (tlr4 Asp 299Gly) polymorphism is a risk factor for gramnegative and haemathogenous osteomyelitis. J. Clin. Exp. Immunol. 2006; 143(3): 404-13.
10. Samarkanova D.M., Kozhanova S.V., Shortanbaev A.A. Toll-like receptors, their expression and connection with human diseases. Vestnik Natsional'noy akademii naukRespubliki Kazakhstan. 2012; (1): 20-6.
11. Kaisho T., Akira S. Toll-like receptor Function and signaling. J. Allergy. Clin. Immunol. 2006; 117(5): 979-87.
12. Lorenz E., Mira J.P., Frees K.L., Schwartz D.A. Relevance of mutations in the TLR4 receptor in patients with gramnegative septic shock. Arch. Intern. Med. 2002; 162(9): 1028-32.
13. Takeda K., Kaisho T., Akira S. Toll-like receptors. Annu. Rev. Immunol. 2003; 21: 335-76.
Поступила 12.09.17 Принята в печать 16.12.17
