CC BY
20
К^ДПребёнка
КлУчна пед1атр1я / Clinical Pediatrics
УДК 616.33-008.3.-002:616.98:578/579:612.017-053.2 АБАТУРОВ O.e., ГЕРАСИМЕНКО О.М. Державний заклад «Днпропетровська медична академя Мнстерства охорони здоров'я Укра!ни»
РОЛЬ TLR4, NLRC1/NOD1 ТА NF-kB У РОЗВИТКУ ЗАПАЛЕННЯ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ШЛУНКА
■ ■ W ■ ■ ■■ ■ W
ПРИ ХЕЛ1КОБАКТЕРН1И 1НФЕКЦ11 У Д1ТЕИ
Резюме. Метою до^дження було вивчення ролi TLR4, NLRC1/NOD1 та NF-kB у розвитку запалення слизовог оболонки шлунка (СОШ) у dimeü, хворих на хрошчш запальш H.pylori-асоцШоват захворювання гастродуоденального вiддiлу травного тракту.
Методи. nid спостереженням перебувало 128 дтей ie хротчними гастродуоденальними захворювання-ми в стадП загострення: 70 (54,7 %) дтей (середнШ вж 14,04 ± 0,34року), як шфжоваш H.pylori, та 58 (45,3 %) nацieнmiв, у яких H.pylori був вidсуmнiм (середнШ вк 14,12 ± 0,43року). Використовувались молекулярно-генетичт методи для визначення рiвня експресП TLR4, NLRC1/NOD1 у бiопmаmi СОШ та NF-kB у лiмфоциmах периферичног кровi.
Результати. Доведено, що у пацieнmiв, шфкованих H.pylori, вiдзначаemься тдвищення рiвня експресП як гена TLR4, так i гена NLRC1/NOD1 в бiопmаmi СОШ при зниженш акmивносmi експресП фактора транскрипцП NF-kB у лiмфоциmах на вiдмiну вiд дтей, захворювання яких не було пов'язане з шфкуванням H.pylori. Показано, що у дтей, шфкованих Са§А(+)-штамами H.pylori, рееструвалась вiрогiдно бльш низька активнсть експресП тльки фактора транскрипцП NF-kB у лiмфоциmах периферичног кровi. Запропоновано модель учасmi неспецифiчних механiзмiв уродженого iмунimеmу у розвитку хрошчного запального процесу слизовог оболонки гастродуоденального вiддiлу травного тракту у дтей при шфкуванш CagA(+)- i Са§А(—)-штамами H.pylori.
Ключовi слова: Helicobacter pylori, вроджений iмунimеm, TLR4, NLRC1/NOD1, NF-kB, дти.
Вступ
1мунна система реалiзуe реакщю макрооргашз-му на впровадження шфекцшних агенпв, викорис-товуючи вроджеш й адаптивш мехашзми захисту. Еволюцшно бгльш давш вроджеш мехашзми захисту макрооргашзму вiдрiзняються швидкою, але неспецифiчною вщповщдю на даю патогешв. Адаптивш мехашзми захисту розшзнають специфiчнi антигени патогену i характеризуются наявшстю гмунолопчно! пам'ять
При шф^ванш Helicobacter pylori (H.pylori) ре-акцiя вроджено! та адаптивно! гмунно! систем при-зводить до розвитку процесу запалення СОШ i ерадикацп збудника [6]. Неспецифiчнi мехашзми вроджено! гмунно! системи е визначальною ланкою захисту макрооргашзму вщ H.pylori [2, 5]. 1н-дуковаш H.pylori-шфекщею модуляцп експресГ! гешв пов'язанi з активащею образ-розпiзнавальних рецепторiв (pattern-recognition receptors, PRR), на-самперед то11-подг6них (Toll-like-receptor, TLR) i NOD-подiбних (NOD-like-receptor, NLR, NLR/
NOD) рецепторiв, а також сигнальних шляхiв, що призводять до активаци факторiв транскрипцп (у тому чи^ ядерного фактора транскрипцп кВ (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells, NF-кВ) [14].
Саме адекватна дiя PRR обумовлюе ефектив-ну ерадикацiю H.pylori, репарацiю пошкоджених тканин, одужання пацiента, тодi як дефщитне збу-дження PRR може зумовити розвиток хрошзацп запалення, а надмiрне — виникнення автоiмунно-го процесу [1]. Одними з основних складових уро-джено! iмунноi вщповщ на iнфекцiю H.pylori, що лежать у молекулярнш основi запалення й морфо-логiчних змiн епiтелiоцитiв слизово! оболонки, е TLR4, NOD-подiбний проте!н субсiмейства CARD NLRC1/NOD1, ядерний фактор транскрипцп NF-кВ.
© Абатуров О.6., Герасименко О.М., 2014 © «Здоров'я дитини», 2014 © Заславський О.Ю., 2014
У зв'язку з цим розумiння молекулярних меха-Hi3MiB захисту неспецифiчного вродженого iMyHi-тету, зокрема, ролi TLR4, NLRC1/NOD1, фактора транскрипцп NF-kB — найважливша умова для подальшого удосконалення методiв лiкyвання та профшактики хрошчних хелiкобактер-асощйова-них захворювань гастродуоденально! зони травного тракту у дггей.
Метою досЛдження було вивчення ролi TLR4, NLRC1/NOD1 та NF-kB у розвитку запалення СОШ у дiтей, хворих на хрошчш запальнi H.pylori-асоцшоваш захворювання гастродуоденального вщщлу травного тракту.
Матер1али та методи досл1дження
Пщ спостереженням перебували 128 дiтей вь ком вщ 7 до 17 роив iз хронiчними захворювання-ми гастродуоденального вщщлу травного тракту в стадп загострення, якi знаходилися на обстеженш й лiкyваннi в спещ^зованому дитячому гастро-ентерологiчномy вiддiленнi Комунального закладу «Дншропетровська дитяча мiська клтчна лжар-ня № 1» Дншропетровсько! обласно! ради». Пащ-енти залежно вiд наявностi H.pylori були роздшеш на двi групи. До першо! (основно!) групи yвiйшли 70 (54,7 %) пащенпв, iнфiкованих H.pylori, до дру-го! (порiвняння) — дати, у яких H.pylori був вщсут-нiм, — 58 (45,3 %). Середнш вiк дiтей у першш грyпi був 14,04 ± 0,34 року, у другш грyпi — 14,12 ± 0,43 року. Хлопчики в груш дггей, iнфiкованих H.pylori, становили 67,1 % (47 дггей), у другш груш — 70,7 % (41); дiвчатка — вщповщно 32,9 % (23) i 29,3 % (17). Тривалють захворювання (мю.) у групах була вщповщно 29,22 ± 3,72 та 25,30 ± 3,25.
За нозологiчною формою захворювання розпо-дiл дiтей у групах був таким (табл. 1).
Уам дням проведено фiзикальне та загально-клiнiчне лабораторне обстеження, ендоскотчне дослiдження стравоходу, шлунка i дванадцятипало! кишки (ФЕГДС, Pentax FG-15W (Япон1я)), визна-чення кислото- та секретоутворюючо! функцп, УЗД органiв черевно! порожнини. Для iдентифiкацГi H.pylori використовували: швидкий уреазний тест Хелпiл-тест (ТОВ «АМА», Рос1я, Санкт-Петербург); дихальний Хелiк-тест з використанням шдикатор-них трубок (ТОВ «АМА», РосГя, Санкт-Петербург); визначення в сироватщ венозно! кровГ сумарних
ÎMyHorao6^imB (IgM, IgA, IgG) до Ag CagA бш-ка H.pylori методом 1ФА («ХелжоБест-антитша», «Вектор-Бест», Рос1я).
Визначення р1вня експресИ гена NLRC1/NOD1 проводили методом полiмеpaзноï лaнцюговоï реак-цИ (ПЛР) у реальному чaсi. Загальну РНК видшяли з бiоптaтiв шлунка за допомогою комплекту pеaгентiв «РИБО-золь-В» (AmpliSens, Росiя). Для отримання кДНК у реакцИ обеpненоï транскрипцИ використовували праймер ол!го(дТ)18 та обернену транскрип-тазу M-MuLV (SibEnzyme, Рос1я). Aнaлiзyвaли екс-пресш гена NLRC1/NOD1 методом полiмеpaзноï лaнцюговоï реакцИ у реальному 4aci з використанням детектувального ампл!ф!катора ДТ-322 («ДНК-Технология», Рос1я) при зaбapвленнi SYBR Green I шляхом вщносного aнaлiзy. Реакщю aмплiфiкaцlï проводили з1 специфiчними олпонуклеотидними праймерами до кДНК NLRC1/NOD1 людини — NLRC1/NOD1-forw: CTT CTG GTC ACT CAC ATC CGC A, NLRC1/NOD1-rev: TGG GCA TAG CAC AGC ACG AAC. Температура вщпалу праймер!в 62 °C. Як референтний використовували ген GAPDH. Для анал!зу даних застосовували пороговий Ct-метод з розрахунком за формулою: 2-ACt (або гео-метричний Cp-метод з розрахунком за формулою: ACp = Cp (NLRC1/NOD1) — Cp (GAPDH)).
Р!вень експресИ гена TLR4 визначався методом полiмеpaзноï лaнцюговоï pеaкцïï (PCR) у режи-м1 реального часу (Real-time). Видшення загаль-roï РНК з клггин СОШ проводили за допомогою комплекту реагенпв «РИБО-золь-В» (AmpliSens, Рос1я). Для отримання кДНК у реакцИ обеpненоï тpaнскpипцïï використовували праймер олко^^^. Aнaлiзyвaли експресго гена Toll-подiбного рецептора TLR4-методом ПЛР у реальному час при за-барвленш SYBR Green I, шляхом вщносного юль-к1сного aнaлiзy. Як референтний використовували ген b-актину. Для анал!зу даних застосовували вщ-носний Cp-метод 1з розрахунком за формулою: ACp = Cp (TLR4) - Cp (b-актину).
Для визначення експресИ NF-kB CD40+-клггинами сyспензiю мононyклеapiв пеpифеpичноï кров1 iнкyбyвaли з моноклональними антитшами (мкАТ ) до поверхневих антигешв CD40. До 50 мкл суспензИ (105 кл1тин) додавали 5 мкл мкАТ, м!че-них FITC, проти CD40 (Caltag, CШA) й шкубува-ли 20 хв при 4 °C. Пот1м кл1тини вiдмивaли шляхом
Таблиця 1. Структура за нозолопчною формою хрон1чноУ гастродуоденально)' патологи залежно
вд наявност H.pylori у пац1ент1в, n (%)
H.pylori(+), n = 70 H.pylori(-), n = 58
Хрошчний гастрит 28 (40) 23 (39,7)
Хрошчний гастродуодешт 16 (22,9) 18 (31)
Виразкова хвороба дванадцятипало'| кишки 20 (28,6) 14 (24,1)
Виразкова хвороба шлунка 2 (2,8) 2 (3,5)
Функцюнальна диспепая 4 (5,7) 1 (1,7)
Всього 70 (100) 58 (100)
Всього по групах 70 (54,7) 58 (45,3)
Примтки: H.pylori(+) — пац1енти, ¡нф1кован1 H.pylori; H.pylori(-) — пац1енти, у яких H.pylori вщсутшй.
центрифугування з 1 мл фосфатно-сольового буфера (ФСБ) при 1500 об/хв протягом 5 хв. Ресус-пендоваш клггани фiксували розчином (Caltag, США) 20 хв при 4 °С. Пермеабшзащю проводили при мкАТ проти субодинищ р65 молекули NF-kB (BD Biosciences Pharmingen, США) протягом 40 хв при 4 °С. Ысля одноразового вiдмивання до ресус-пендованих клггин додавали iншi мкАТ, мiченi РЕ (Caltag, США). Пiсля 20-хвилинно! шкубацп кль тини вiдмивали, додавали 0,5 мл ФСБ та аналiзу-вали проби на проточному цитофлуориметрi EPIX LX-MCL (Beckman Coulter, США), використову-ючи програму System IITM Software. Для збудження флуоресценцп використовували аргоновий лазер i3 хвилею завдовжки 488 нм. Додатково до флуорес-центних параметрiв проводили реeстрацiю прямого та бокового свггорозсшвання клггин, що дозволяло виключати з анал!зу конгломерати кл1тин, !х уламки.
Визначення експресп NF-kB у лiмфоцитах та експресп генiв TLR4 i NLRC1/NOD1 у бюпта-т1 СОШ проводилося в НД1 генетичних та !мун-них основ розвитку патолог!! та фармакогенетики ВДНЗУ «Украхнська медична стоматолопчна акаде-м1я», м. Полтава.
Дослщження було проведено в1дпов1дно до етичних принцитв GCP («Якiсна клiнiчна практика») щодо медичного дослiдження. На участь у науковому дослщженш, що проводили з дозволу локально! комюп з бюетики ДЗ «ДМА МОЗ Укра!-ни», було отримано шформовану згоду батькiв па-щенпв.
Статистичну обробку отриманих результатiв проведено за допомогою пакетiв комп'ютерних ста-тистичних програм Statgraf, Matstat, Statistica 10,0. При вивченш значущостi вiдмiнностей статистич-них ви61рок використовувались пара- i непараме-тричн1 критерп. В1рог1дн1сть розходжень при роз-под1л1, в1дм1нному в1д нормального, оцiнювалася за допомогою U-критерго Манна — Уйта, для даних 1з нормальним розпод1лом — t-критерго Стьюдента. Статистично значущими вважали вщмшносп при р < 0,05.
Результата досл1дження та IX обговорення
Нами проаналiзовано осо6ливост1 експресп TLR4, NLRC1/NOD1 у бiоптатi СОШ i ядерного фактора kB (NF-kB) у лГмфоциих периферично! кров1 пацieнтiв залежно вщ iнфiкування H.pylori (рис. 1).
Проведенi нами молекулярно-генетичш досль дження показали, що у дггей, iнфiкованих H.pylori, вiдзначаeться тдвищення р1вня експресп як гена TLR4, так i гена NLRC1/NOD1 (Р = 0,01) у бюптап СОШ при зниженш активностi експресп ядерного фактора NF-kB у лiмфоцитах на вщмшу в1д пащ-енпв, захворювання яких не було пов'язане з шфь куванням H.pylori (Р = 0,01). За допомогою коре-ляцшного аналiзу виявлено прямий взаемозв'язок
мiж експресieю reHiB NLRC1/NOD1 i TLR4 у бю-nTaTi СОШ пащенпв i3 хeлiкобактeрною шфек-цieю (r = 0,36), у пащенпв i3 H.pylori-негативним статусом такий взаемозв'язок практично вщсутнш (r = 0,14). Hpylori-шдуковане пщвищення експресИ reHiB TLR4, NLRC1/NOD1 у СОШ хворих на хротч-Hi гастрити було продемонстровано й шшими авторами [7, 10, 11, 12] Проте у дггей дослщжено змiни експресИ тшьки TLR. Так, Hugo Lagunes-Servin i ствавт. [8] показали, що у дггей, iнфiкованих H.pylori, спостeрiгаеться посилення експресН TLR eпiтeлiоцитiв СОШ, яке супроводжуеться продук-цiею прозапальних цитоюшв IL-8, IL-10 i TNF-a. Однак малоймовiрно, що така виражена прозапаль-на вщповщь eпiтeлiоцитiв СОШ може бути обумов-лена виключно шдукщею TLR лiгандами H.pylori, оскшьки мжрооргашзми H.pylori виявляють здат-нють шпбувати наявнiсть TLR на цитоплазматич-нш мeмбранi eпiтeлiоцитiв [4].
Виявлене нами пщвищення активностi експре-eiï гена NLRC1/NOD1 у СОШ дггей, шфжованих H.pylori, свщчить про те, що H.pylori викликае реак-щю нeспeцифiчних мeханiзмiв захисту СОШ, вико-ристовуючи внутршньоклггант цитоплазматичнi рецептори прозапальних сигнальних шляхГв ештель оцитш. Можливють проникнення пeптидоглiканiв (PGN) у цитоплазму ештелюципв СОШ обумов-лена наявнiстю в H.pylori системи секрецИ IV типу (T4SS) [9]. Взаемодiя PGN is NLRC1/NOD1 iндукуе продукщю дeфeнзинiв i IFN I типу, що зумовлюе розвиток захисно! Т^-асощйовано! вщповщ [13]. Одночасне тдвищення активносп експресп! мемб-ранних TLR4, що беруть участь у розшзнаванш LPS, i цитоплазматичних NLRC1/NOD1, що взаемодь ють ¡з PGN збудника, яю проникли в цитоплазму ештелюципв, передбачае нeобхiднiсть синерпч-ного впливу на прозапальш внутрГшньоклГтиннГ
TLR4
NOD1
NF-kB
□ H.pylori(+) ■ H.pylori(-)
Рисунок 1. Р1вень експресп TLR4, NLRC1/NOD1 у бюптат СОШ, Nf-kB ул'мфюцитах периферичноï кров! пац1ент1в, ¡нф1кованих i не нфкованих H.pylori
КлШчна пед1атр1я / Clinical Pediatrics
сигнальш шляхи i, можливо, наявнiсть додаткових альтернативних шляхТв для кожного типу образ-розпiзнавальних рецепторiв.
Нами встановлено, що у дией високий рiвень експресП як гена TLR4 ^вень активностi 1,9—2,8),
так i гена NLRC1/NOD1 (рiвень активностi > 4,2) у бющ^й СОШ асоцiйований з ризиком розвитку ускладненого переб^ хрошчно! гастродуо-денально! патологи (ВР = 2,6; ДК = 4,2 i ВР = 3,8; ДК = 5,8 вщповщно). Враховуючи той факт, що
Рисунок 2. Модель участ неспециф1чних механ1зм1в уродженого '¡мунтету у розвитку хрошчного запального процесу слизово' оболонки гастродуоденального вщдшу травного тракту у дтей при
iнфiкуваннi CagA(+)- i СадА(-)-штамами H.pylori Примтки: незалежно в'щ наявност фактора патогенност CagA вщбуваеться активаця фактор'в транскрипцП' NF-kB i IRF7 (interferon regulatory factor 7), як iндукують продукцю прозапальних цитокiнiв та IFN I типу в'щпов'щно. Лпополсахариди H.pylori, збуджуючи TLR4, приводять до активаци адаптерноi молекули MyD88, яка через TAK1 (TGF-beta activated kinase 1) сприяе ¡ндукцп фактора транскрипцП NF-kB. Проте'нглкани H.pylori, проникаючи в цитоплазму ептелюцита за допомогою T4SS CagA(+)-штамв або через транспорт везикул зовншньоi мембрани збудника CagA(-)-штамiв, взаемодють з цитоплазматичним рецептором NLRC1/NOD1, який через каскад RICK (receptor-interacting serine-threonine kinase) ^ TBK1 (TANK-binding kinase 1) призводить до активацП фактора транскрипцП IRF7. Адаптерна молекула RICK також призводить до збудження TAK1, яка обумовлюе активацю NF-kB. Про-те'н CagA CagA(+)-штамiв H.pylori 'шпбуе активнсть фактора транскрипцП NF-kB, пригнiчуючи надлиш-кове запалення, що сприяе персистенцп мiкроорганiзмiв H.pylori. Жирними стрлками вказан збудлив1 сигнали, пунктирною стрлкою — ¡нп6уючий сигнал.
Таблиця 2. Р1вень експресп TLR4, NLRC1/NOD1 у бюптат СОШ, NF-кВ у л1мфоцитах периферичноï кров! пац1ент1в, нфкованих цитотоксичними CagА(+)-штамами H.pylori та нецитотоксичними
CagА(-)-штамами H.pylori
Показник H.pylori(+), n = 70; M ± S Вiрогiднiсть, P
CagA(+), SS oci6 CagA(-), 32 особи
TLR4 1,34 t G,18 1,13 t G,16 > G,G5
NLRC1/NOD1 1,9G t G,39 1,99 t G,52 > G,G5
NF-кВ (%) 46,8G t 4,12 48,58 t 4,27 G,G5
NF-кВ G,7G6 t G,G5G 1,G1 t G,29 G,G5
Примтки: TLR4 — експрес1я TLR4 (од.) у б'юптат СОШ; NLRC1/NOD1 — експрес1я NLRC1/NOD1 (од.) у боптат СОШ; NF-кВ (%) — р1вень експресп NF-кВ+ у л'мфоцитах (%); NF-кВ — максимальний р1вень експресп NF-кВ+ ул'мфоцитах (од.); CagA(+) — пац1енти, ¡нф1кован1 цитотоксичними CagA-позитивними штамами H.pylori; CagA(-) — пац1енти, ¡нф1кован1 нецитотоксичними CagA-негативними штамами H.pylori; Р — р1вень в1рогщност1, отриманий за допомогою и-критер1ю Манна — У/'тш.
TLR4 i NLRC1/NOD1 пов'язаш з прозапальними внутршньоклггинними сигнальними каскадами, пщвищення активност !х експресп можна вважати предиктором ураження СОШ i ранньою прогнос-тичною ознакою несприятливого перебпу Н.ру1оп-асоцiйованого запалення гастродуоденального вщ-дiлу травного тракту.
Особливий патогенетичний штерес становить зафжсований нами вiрогщно нижчий рiвень експресп фактора транскрипцп NF-кB у лiмфоцитах периферично! кровi пацieнтiв, шфжованих Н.ру1оп, н1ж у дiтей, не шфжованих Н.ру1оп, при, згiдно з да-ними ендоскопiчного дослщження, вiзуально порiв-нянному ступенi запального ураження СОШ. Щл-ком iмовiрно, що активнiсть фактора транскрипц!! NF-кB шпбуеться деякими продуктами Н.ру1оп для створення умов персистенцп збудника.
Так само нами проведено дослщження експрес!! компонента неспецифiчних механiзмiв захисту за-лежно вщ наявностi фактора цитотоксичностi CagA у причинно-значущих штамiв Н.ру1оп. Характеристика експресп TLR4, NLRC1/NOD1 у бюптап СОШ i NF-кB у лiмфоцитах периферично! кровi пацieнтiв, шфжованих цитотоксичними CagА-позитивними штамами Н.ру1оп, наведена в табл. 2.
Таким чином, враховуючи особливост розвитку запального процесу слизово! оболонки при шфжу-ваннi CagA(+)-штамами Н.ру1оп, ми вважаемо, що проведення ерадикацшно! терап!! необхвдно поед-нувати з призначенням препарапв, якi пригнiчують активнiсть молекулярних компоненпв неспецифiч-них механiзмiв захисту i мають прозапальну актив-нiсть.
Висновки
1. У пацiентiв, iнфiкованих Н.ру1оп, вщзнача-еться пщвищення рiвня експресп як гена так i гена NLRC1/NOD1 у бюптап СОШ при зниженш активностi експресп ядерного фактора NF-кB у лiм-фоцитах на вщмшу вщ дiтей, захворювання яких не було пов'язане з шф^ванням Н.ру1оп.
2. Змiни активност компонентiв неспецифiчно-го захисту, таких як експреся TLR4, NLRC1/NOD1
i NF-кВ, y дггей i3 xpонiчною пaтологieю гастроду-оденaльного вщдшу тpaвного тpaктy при шфжу-вaннi цитотоксичними CagA(+)-штaмaми H.pylori вiдpiзнялися вiд кньо'! pеaкцiï при iнфiкyвaннi нецитотоксичними CagA(—)-штaмaми H.pylori тiльки вipогiдно бшьш низькою aктивнiстю фaктоpa тpaнс-крипщ! NF-кВ y лiмфоцитax периферично! кровь
3. Зaпpопоновaно модель yчaстi неспецифiчниx меxaнiзмiв ypодженого iмyнiтетy в розвитку xpонiч-ного зaпaльного процесу слизовоï оболонки гастро-дyоденaльного вщдшу тpaвного тpaктy y дiтей при iнфiкyвaннi CagA(+)- i CagA(—)-штaмaми H.pylori.
Список лiтepaтypи
1. Абатуров А.Е., Bолоcовец А.П., Юлыш Е.И. Инuцuацuя воcnалumельного процека пры вырутых u бакmерыальных за-болеваныях, возможноcmы u пертектывы медыкаменmозного управленыя. — Харьков: Новое ыово, 20ll. — 344 c.
2. Every A.L. Key host-pathogen interactions for designing novel interventions against Helicobacter pylori // Trends Microbiol. — 20l3. — 2l(5). — 253-9. doi:l0.l0l6/j.tim.20l3.02.007.
3. Ferrand J., Ferrero R.L. Recognition of Extracellular Bacteria by NLRs and Its Role in the Development ofAdaptive Immunity //Front Immunol. — 20l3. — 4. — 344. doi:l0.33S9/fmmu.20l3.00344.
4. Ferrero R.L. Innate immune recognition of the extracellular mucosal pathogen, Helicobacter pylori // Mol. Immunol. — 2005. — 42(S). — S79-S5. doi.org/l0.l0l6/j.molimm.2004.l2.00l.
5. He C. Helicobacter pylori-related host gene polymorphisms associated with susceptibility of gastric carcinogenesis: a two-stage case-control study in Chinese / C. He, H. Tu, L. Sun, Q. Xu, P. Li, Y. Gong, N. Dong, Y. Yuan // Carcinogenesis. — 20l3. — 34(7). — l450-7. doi:l0.l093/carcin/bgt079.
6. Ihan A, Pinchuk I.V., Beswick E.J. Inflammation, immunity, and vaccines for Helicobacter pylori infection //Helicobacter. — 20l2. — l7 Suppl. l. — l6-2l. doi: l0.llll/j.l523-537S.20l2.00977.x.
7. Kim E.J. Association between genetic polymorphisms of NOD l and Helicobacter pylori-induced gastric mucosal inflammation in healthy Korean population / E.J. Kim, J.R. Lee, W. C. Chung, S.H. Jung, H.J. Sung, Y.W. Lee, Y.S. Oh, S.B. Kim, C.N. Paik, K.M. Lee, S.J. Noh // Helicobacter. — 20l3. — lS(2). — l43-50. doi: l0.llll/hel.l2020.
S. Lagunes-Servin H. Toll-like receptors and cytokines are up-regulated during Helicobacter pylori infection in children / H. La-gunes-Servin, J. Torres, C. Maldonado-Bernal, M. Pérez-Rodríguez, S. Huerta-Yépez, A. Madrazo de la Garza, L. Muñoz-Pérez,, L. Flores-Luna, G. Ramón-García, M. Camorlinga-Ponce //Helicobacter. — 20l3. — lS(6). — 423-32. doi: l0.llll/hel.l2067.
9. Posselt G., Backert S., Wessler S. The functional interplay of Helicobacter pylori factors with gastric epithelial cells induces a multi-
step process in pathogenesis // Cell Commun Signal. — 2013. — 11. — 77. doi: 10.1186/1478-811X-11-77.
10. Sánchez-Zauco N.A., Giono-Cerezo S, Maldonado-Ber-nal C. Receptores tipo Toll, patogénesis y respuesta inmune a Helicobacter pylori//Salud. Publica Mex. — 2010. — 52(5). — 447-54. doi. org/10.1590/S0036-36342010000500012.
11. Schmausser B. Expression and subcellular distribution of tolllike receptors TLR4, TLR5 and TLR9 on the gastric epithelium in Helicobacter pylori infection/ B. Schmausser, M. Andrulis, S. Endrich, S.K. Lee, C. Josenhans, H.K. Müller-Hermelink, M. Eck // Clin. Exp. Immunol. — 2004. — 136(3). — 521-6. doi:10.1111/j.1365-2249.2004.02464.x.
12. Smith M.F. Toll-like receptor (TLR) 2 and TLR5, but not TLR4, are required for Helicobacter pylori-induced NF-kappa B ac-
tivation and chemokine expression by epithelial cells/M.F. Smith Jr, A. Mitchell, G. Li, S. Ding, A.M. Fitzmaurice, K. Ryan, S. Crowe, J.B. Goldberg // J. Biol. Chem. - 2003 Aug 29. - 278(35). -32552-60.
13. Watanabe T. Activation oftype IIFNsignaling by NLRC1/NOD1 mediates mucosal host defense against Helicobacter pylori infection / T. Watanabe, N. Asano, A. Kitani, I.J. Fuss, T. Chiba, W. Strober // Gut Microbes. - 2011. - 2(1). - 61-5. doi:10.4161/gmic.2.1.15162.
14. Yang Z.M., Chen W.W., Wang Y.F. Gene expression profiling in gastric mucosa from Helicobacter pylori-infected and uninfected patients undergoing chronic superficial gastritis // PLoS One. - 2012. -7(3). - e33030. doi:10.1371/journal.pone.0033030.
OTpuMaHO 02.04.14 ■
Абатуров A.E., Герасименко O.H. Государственное учреждение «Днепропетровская медицинская академия Министерства здравоохранения Украины»
РОЛЬ TLR4, NLRC1/NOD1 И NF-kB В РАЗВИТИИ ВОСПАЛЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ
Резюме. Целью исследования было изучение роли TLR4, NLRC1/NOD1 и NF-kB в развитии воспаления слизистой оболочки желудка (СОЖ) у детей с хроническими воспалительными Н.ру1оп'-ассоциированными заболеваниями гастродуоденального отдела пищеварительного тракта.
Методы. Под наблюдением находилось 128 детей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями в стадии обострения: 70 (54,7 %) детей (средний возраст 14,04 ± 0,34 года), инфицированных H.pylori, и 58 (45,3 %) пациентов, у которых H.pylori не определялся (средний возраст 14,12 ± 0,43 года). Использовались молекулярно-генети-ческие методы для определения уровня экспрессии TLR4, NLRC1/NOD1 в биоптате СОЖ и NF-kB в лимфоцитах периферической крови.
Результаты. Показано, что у пациентов, инфицированных H.pylori, отмечается повышение уровня экспрессии как гена TLR4, так и гена NLRC1/NOD1 в биоптате СОЖ при снижении активности экспрессии фактора транскрипции NF-kB в лимфоцитах в отличие от детей, заболевание которых не было связано с инфицированием H.pylori. У детей, инфицированных CаgA(+)-штаммами H.pylori, регистрировалась достоверно более низкая активность экспрессии только фактора транскрипции NF-kB в лимфоцитах периферической крови. Предложена модель участия неспецифических механизмов врожденного иммунитета в развитии хронического воспалительного процесса слизистой оболочки гастродуоденального отдела пищеварительного тракта у детей при инфицировании CagA(+)- и CagA(—)-штаммами H.pylori.
Ключевые слова: Helicobacter pylori, врожденный иммунитет, TLR4, NLRC1/NOD1, NF-kB, дети.
AbaturovO.Ye., Gerasymenko O.M.
State Institution «Dnipropetrovsk Medical Academy of Ministry of Healthcare of Ukraine», Dnipropetrovsk, Ukraine
ROLE OF TLR4, NLRC1/NOD1 AND NF-kB IN INFLAMMATION OF GASTRIC MUCOSA IN HELICOBACTER PYLORI INFECTION IN CHILDREN
Summary. The aim of the work was to study the role of TLR4, NLRC1/NOD1 and NF-kB in inflammation of gastric mucosa (GM) in children with chronic inflammatory H.pylori-associat-ed gastroduodenal diseases of the intestinal tract.
Methods. We observed 128 children with chronic gastroduodenal diseases in the acute stage: 70 (54.7 %) children (mean age 14.04 ± 0.34 years) infected with H.pylori, and 58 (45.3 %) — in which H.pylori was not detected (mean age 14.12 ± 0.43 years). We used molecular genetic methods to determine the level of TLR4, NLRC1/NOD1 expression if biopsy material of GM and NF-kB in peripheral blood lymphocytes.
Results. It is shown that patients infected with H.pylori show increased level of both TLR4 gene and NLRC1/NOD1 expression in biopsy material of GM at reducing activity of transcription factor NF-kB expression in lymphocytes, unlike children, whose disease was not associated with H.pylori infection. In children infected with CagA(+)-strains of H.pylori we detected significantly lower activity of expression only of the transcription NF-kB in peripheral blood lymphocytes. We propose a model of participation of non-specific mechanisms of innate immunity in the development of chronic inflammation of the gastric mucosa of gasrtoduodenal part of the intestinal tract in children infected with CagA(+)- and CagA(—)-strains of H.pylori.
Key words: Helicobacter pylori, innate immunity, TLR4, NLRC1/NOD1, NF-kB, children.
