CC BY
35УДК 577.21
РОЛЬ СИНЕРГИЧЕСКОЙ СВЯЗИ ACE I/D И ACE2 G8790A ПОЛИМОРФИЗМОВ В
ЭТИОЛОГИИ COVID-19
АЛИБЕКОВА ГЮЛЬМИРА РИЗВАН КЫЗЫ
Докторант Института Молекулярной Биологии и Биотехнологий НАН Азербайджана, Баку,
Азербайджан
*МУСТАФАЕВ НУРМАММАД ШАМИЛ ОГЛУ
Доцент, заведующий лабораторией Популяционной геномики Института Молекулярной Биологии и Биотехнологий НАН Азербайджана, Баку, Азербайджан
ГУСЕЙНОВА ИРАДА МАМЕД КЫЗЫ
Академик, генеральный директор Института Молекулярной Биологии и Биотехнологий НАН
Азербайджана, Баку, Азербайджан
Аннотация. Настоящая работа посвящена изучению полиморфизмов генов АСЕ I/D и АСЕ2 G/A. Кроме того, сделана попытка выявить роли синергической связи ACE I/D и ACE2 G/A полиморфизмов в этиологии СоVID-19, а также найти возможную корреляционную связь между тяжестью течения болезни/восприимчивостью к заболеванию и мутантными аллельными вариантами/генотипами этих генов. Выявлено, что среди заболевших лиц носители гомозиготных генотипов DD и AA соответственно в 1,44 и 3,2 раза больше, чем среди условно здоровых лиц. Большинство больных с крайне тяжелым и тяжелым течением были носителями гомозиготных генотипов мутантных аллелей либо одного гена, либо обоих генов (DD+GG, II+AA, ID+AA, DD+AA). Статистические параметры показывают, что значения отношение шансов (OR) и относительного риска (RR) больше единицы как для аллели D, так и для аллели A, но достоверная корреляция наблюдается только для аллели D (Р=0.0480). Хотя для мутантных гомозиготных генотипов DD и AA значения OR и RR тоже достаточно высоки, достоверная корреляция обнаружено только для генотипа АА (Р=0.0052). При оценки ассоциаций между восприимчивости/заболеваемости коронавирусной инфекции и генетических моделей не выявлено ярко выраженной и достоверной связи.
Ключевые слова: СоVID-19, ангиотензин превращающий энзим (АСЕ), мутация, полиморфизм, генотип, генетическая модель.
ВВЕДЕНИЕ
По данным ВОЗ, около 20% населения земного шара в настоящее время страдает рядом аутоиммунных и хронических заболеваний, и самые высокие показатели смертности от таких заболеваний приходятся именно на эти заболевания. К таким заболеваниям относятся бронхиальная астма и хронические (обструктивные) заболевания легких, сахарный диабет II типа (СД), артериальная гипертензия и сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) широкого спектра, аутоиммунные заболевания (СД I типа, ревматоидный артрит, рассеянный склероз и др.), все виды онкологических заболеваний, аллергии и др., которые имеют высокий летальный исход в условиях последней коронавирусной пандемии [5, 10, 14, 19]. Коронавирусная пандемия ^VID-^ еще раз доказало, что официальная наука и медицина, в особенности фармакология пока еще не готова к внезапным вспышкам таких быстро распространяемых инфекций. Хотя экспрессные средства тестирования разрабатывались в довольно короткие сроки, но чрезвычайно тяжелая ситуация наблюдалось при медикаментозном лечении самой инфекции и разработках эффективных вакцин [1].
Возбудителем современной коронавирусной инфекции является вирус из группы ß-коронавируов - SARS (Severe Acute Respiratory Syndrome) CoV-2. Этот вирус имеет высокое
ОФ "Международный научно-исследовательский центр "Endless Light in Science"
генетическое сходство с вирусом SARS-CoV, который в 2002-2003 гг. вызвал вспышку тяжелого острого респираторного синдрома, но является более вирулентным чем свои предшественники SARS-CoV и MERS-CoV (Middle East Respiratory Syndrome). Исследованиями установлено, что эндоцитоз вируса в клетку хозяина осуществляется следующим образом: попавший в межклеточное пространство вирус связывается с растворимыми фуринами, затем связываясь фуриноподобными претеазами, например, трансмембранной сериновой протеазой 2 (transmembrane serine protease 2, TMPRSS2), вирус активируется [2, 12]. Далее, активированный вирус связывается с растворимой формой ангиотензинпревращающего фермента 2 (рАСЕ2) - главным агентом инвазии вируса и через его рецептор проникает во внутрь клетки. Так как рецептор АСЕ2 не является тканеспецифичным и широко распространен в клетках различных тканей (напр. сердца, легких, почек, тонкой кишки, щитовидной железы, лимф, мозга, яичек (клетки Сертоли) и т.д.), это создает еще более благоприятное условия для инфицирования различных частей организма человека данным опасным патогеном [13].
Ферменты АСЕ и АСЕ2 являются основными компонентами ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (RAAS), участвующей в регуляции кровяного давления. Основной функцией растворимого экзопептидазного фермента ACE является катализ расщепления декапептида ангиотензина I до октапептида ангиотензина II, в результате чего повышается артериальное давление. Тем временем мембранная экзопептидаза ACE2 (мАСЕ2) действуя противоположно АСЕ, расщепляет ангиотензина II до ангиотензина (1-7) и тем самым снижает кровяное давление.
Оба фермента играют весьма важную роль в организме человека. Уровни экспрессии/биосинтеза АСЕ и АСЕ2 корегулируется в зависимости от их участия в определенном процессе. Установлено, что у больных CoVID-19 уровень экспрессии и биосинтеза соответствующих генов и белков, особенно АСЕ2 заметно повышены. Кроме того, мАСЕ2 является основной точкой проникновения некоторых штаммов коронавирусной инфекции, в частности HCoV-NL63, SARS-CoV и SARS-CoV-2 во внутрь клетки и последующей транслокации их в клеточные эндосомы,
Изучение полиморфизмов генов АСЕ и АСЕ2 имеет весьма важное значение как с точки зрения понимания механизмов влияния вируса на общее состояние инфицированных людей, а также восприимчивость к коронавирусной инфекции и на тяжесть течения заболевания [4, 8, 15, 16, 17, 18]. В некоторых литературных источниках указываются на тесную связь между смертностью от кронавирусной инфекции и полиморфизмов этих генов [6, 7, 9]. Ранее уже была изучена роль инсерционно/делеционного (I/D) полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ) в Азербайджанской популяции и выявлена положительная корреляция (Р<0,01) между присутствием в генотипе аллели D и наличия патологий, в частности сахарного диабета 1 и 2 типа [3].
Цел настоящего исследования является: изучение I/D и G/A полиморфизмов генов АСЕ и АСЕ2 соответственно, выявления роли синергической связи ACE I/D и ACE2 G/A полиморфизмов в этиологии ^VID-^, а также установления корреляционной связи между тяжестью течения болезни / восприимчивостью к заболеванию и мутантными аллельными вариантами/генотипами этих генов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Образцы крови: Сбор образцов крови осуществлялся по решению комиссии по биоэтике на добровольной основе в соответствии с международными нормами. В исследовании приняли участие неродственные лица, заболевшие коронавирусом (I группа, 82 человека, 39 мужчин и 43 женщин) и условно здоровые (не заболевшие коронавирусом) люди (II группа, контроль, 90 человек, 43 мужчин и 47 женщин) разных возрастных групп, работающих в разных сферах деятельности. Образцы крови брали после выздоровления больных, т.е. среди
ОФ "Международный научно-исследовательский центр "Endless Light in Science"
исследованных лиц летальных исходов не было.
Выделение ДНК: Выделение ДНК из образцов крови проводили согласно инструкции производителя с использованием набора реагентов «Diatom™DNA Prep 200» («Изоген», РФ). Концентрацию и чистоту выделенных образцов ДНК определяли спектрофотометрически с использованием прибора NanoDrop 2000.
ПЦР и электрофорез: Для выявления I/D полиморфизма гена АСЕ и SNP типа G8790A (rs2285666) полиморфизма гена АСЕ2 были использованы следующие праймеры (Eurofin Genomics) (таблица 1) [11].
Таблица 1. Некоторые характеристики праймеров
Праймер Последовательность Длина синтезируемых фрагментов
Ген АСЕ (I/D полиморфизм)
ACE-F ACE-R 5'-CTGGAGACCACrcCCATCCTTTCT-3' 5' -GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3' 490 п.н. для Ins аллели 190 п.н. для Del аллели
ACE-5a ACE-5c 5'-TGGGACCACAGCGCCCGCCACTAC-3' 5'TCGCCAGCCCTCCCATGCCCATAA-3' 335 п.н. только для Ins аллели
Ген АСЕ 2 (G/A полиморфизм)
Forward Reverse 5' -CATGTGGTCAAAAGGATATCT-3' 5' -AAAGTAAGGTTGGCAGACAT-3' 466 п.н. для генотипа GG 466, 281 и 185 п.п. для генотипа GA 281 и 185 п.н. для генотипа AA
Оптимальная температура отжига для праймеров определены градиентным ПЦР в интервале температуры 59-73°С.
Условия ПЦР для пар праймеров ACE-F и ACE-R: 94°С денатурация 5 мин; 94°С - 1 мин, 60°С - 1 мин и 72°С - 2 мин (30 циклов); 72°С - 5 мин (конечная элонгация).
Праймеры АСЕ-5а и АСЕ-5с были использованы для уточнения нет ли потери I аллели во всех выявленных DD генотипах. Условия ПЦР для пар праймеров АСЕ-5а и АСЕ-5с: 94°С денатурация 4 мин; 94°С - 40 сек, 65°С - 1 мин и 72°С - 1 мин (30 циклов); 72°С - 10 мин (конечная элонгация).
Условия ПЦР для праймеров при выявлении G/A полиморфизма гена АСЕ2: 94°С денатурация 3 мин; 10 циклов - 94°С 1 мин, 65°С 1 мин и 72°С 1 мин; 15 циклов - 94°С 1 мин, 60°С 1 мин и 72°С 1 мин; 20 циклов - 94°С 1 мин, 58°С 1 мин и 72°С 1 мин; 72°С 8 мин (конечная элонгация). После ПЦР к реакционной смеси было добавлено 0,5 pl рестриктаза Alu (New England Biolabs) и смесь оставлена для инкубации на ночь.
Электрофорез продуктов ПЦР проводили в 1,5% агарозном геле, окрашенном этидий-бромидом. Фрагменты визуализированы с помощью «Gel Documentation System» («UVITEO» СК).
Статистические анализы: Статистические параметры (частоты аллелей, генотипов, соотношение шансов (odds ratios, OR) и относительный риск (relative risk, RR) при 95% доверительном интервале (95% confidence intervals, CI), значение Р (Pearson value of the Chi-square test)) вычислены с помощью программы Microsoft Excel и онлайн калькулятора [20].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
Примеры выявленных генотипов по обоим полиморфизмам приведены на Рис. 1 и Рис. 2. Частоты выявленных аллелей и генотипов в отдельных группах приведены в таблице 2.
Для выявления возможной связи между различными видами полиморфизмов были рассчитаны количество всевозможных комбинаций I/D и G/A генотипов как среди заболевших, так и среди не заболевших лиц (таблица 3). Заболевшие лица разделены на 4 группы по тяжести течения болезни: крайне тяжелое (при лечении использовалось аппарат
искусственной вентиляции легких), тяжелое, среднее, и легкое течение.
М 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Рис. 1. Генетические профили некоторых лиц, выявленные праймерами ACE-F и ACE-R: М - 100 п.н. ладдер, 6, 13 - генотипы II; 1, 2, 3, 4, 7, 9, 11 - генотипы ГО; 5, 12 - генотипы DD.
М123456789 10 11 12
Рис. 2. Генетические профили некоторых лиц, выявленные рестрикцией фермента Alu: М - 100 п.н. ладдер, 3, 4, 7, 10 - генотипы GG; 1, 2, 5, 8, 9, 11 - генотипы GA; 6, 12 - генотипы AA.
Таблица 2. Частоты аллелей и генотипов генов АСЕ и АСЕ2 (% (абсолютное число))
Группы Инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена ACE
Аллели Генотипы
I D II ID DD
Заболевшие с О^Ю-19, п=82 39,0 61,0 6,1 (5) 65,9 (54) 28,0 (23)
Не заболевшие с CoVID-19, п=90 46,7 53,3 15,6 (14) 66,6 (60) 17,8 (16)
По исследованной популяции, п=172 44,2 55,8 11,0 (19) 66,3 (114) 22,7 (39)
SNP типа G8790A (rs2285666) полиморфизм гена АСЕ2
G A GG GA AA
Заболевшие с О^Ю-19, п=82 55,5 44,5 30,5 (25) 50,0 (41) 19,5 (16)
Не заболевшие с CoVID-19, п=90 68,9 31,1 43,3 (39) 51,1 (46) 5,6 (5)
По исследованной популяции, п=172 62,5 37,5 37,2 (64) 50,6 (87) 12,2 (21)
Как видно из таблицы 2, если считать I аллели гена АСЕ и G аллели гена АСЕ2 нормальными (или дикими), тогда частота мутантного аллели как D гена АСЕ, так и А гена АСЕ2 среди восприимчивых к коронавирусу людей немного выше относительно группе не заболевших лиц (1,14 и 1,43 раза, соответственно). Такая же, но более яркая картина наблюдается относительно лиц гомозиготов по этим аллелям (генотипы DD и AA). Частоты этих генотипов среди заболевших лиц были 1.44 и 3.2 раза больше относительно условно здоровых лиц, соответственно. Надо отметить, что большинство больных с крайне тяжелым и тяжелым течением были носителями гомозиготных мутантных аллелей либо одного гена, либо обоих генов одновременно (DD+GG, II+AA, ID+AA, DD+AA) (таблица 4). Для больных с тяжелым течением генотипы ID+GG (12 больных только с тяжелым течением) и ID+GA (1 пациент с крайне тяжелым и 5 больных с тяжелым течением) составляли исключение. Это может быть связанно с тем что в этих случаях для тяжелого течения болезни достаточно было присутствие одного из мутантных аллелей.
Заметим еще интересный факт, что как среди заболевших, так и среди не заболевших лиц
по гену АСЕ преобладает мутантный аллель D, а по гену АСЕ2 мутантный аллель G. Кроме того самым распространенным генотипом был ID+GA (у 35 больных). Кроме вышеуказанного, 19 больных со средне тяжелым и 10 больных с легким течением обладали этой комбинацией генотипов.
Таблица 3. Распределение различных комбинаций I/D и G/A генотипов среди заболевших коронавирусом и условно здоровых лиц_
Комбинация аллелей
Группы II+GG ID+GG DD+GG II+GA ID+GA DD+GA II+AA ID+AA DD+AA
Заболевшие c CoVID-19, n=82 3 12 10 1 35 5 1 7 8
Не заболевшие с CoVID-19, n=90 6 29 4 6 30 10 2 1 2
По исследованной популяции, n=172 9 41 14 7 65 15 3 8 10
Таблица 4. Распределение различных комбинаций генотипов I/D и G/A среди заболевших коронавирусом в зависимости от тяжести течения заболевания
Комбинация аллелей
Течение болезни II+GG ID+GG DD+GG II+GA ID+GA DD+GA II+AA ID+AA DD+AA
Крайне тяжелое, п=12 - - 2 - 1 2 1 3 3
Тяжелое, п=31 - 12 4 - 5 3 - 3 4
Средне тяжелое, п=25 - - 4 1 19 - - - 1
Легкое, п=14 3 - - - 10 - - 1 -
В таблице 5 приведены некоторые статистические характеристики (соотношение шансов (odds ratios, OR) и относительный риск (relative risk, RR) при 95% доверительном интервале (95% confidence intervals, CI), значение Р (Pearson value of the Chi-square test)) для мутантных аллелей (D и A) и генотипов с их участием (ID, DD, GA и AA), а также для генетических моделей (доминантный, рецессивный и сверх доминантный). Расчеты проведены относительно контрольной группы (группа лиц, не заболевшими коронавирусом).
Таблица 5. Некоторые статистические характеристики мутантных аллелей, генотипов с их _участием и генетических моделей__
Аллели,генотипы, генетические модели OR (CI=95%) P-value RR (CI=95%)
Аллели
D 2.8368 (0.9739-8.2637) 0.0480 1.1120 (1.0017-1.2344)
A 1.7435 (0.9301-3.2684) 0.1082 1.2267 (0.9740-1.5449)
Генотипы
ID 0.9643 (0.5121-1.8156) 0.9203 0.9878 (0.7978-1.2231)
DD 1.8030 (0.8741-3.7189) 0.1082 1.5777 (0.8980-2.7719)
GA 0.9565 (0.5257-1.7403) 0.8875 0.9783 (0.7275-1.3154)
AA 4.1212 (1.4358-11.8293) 0.0052 3.5122 (1.3467-9.1598)
Генетические модели
Доминантный, (И+Ю) уб ЭЭ 0.5546 (0.2689-1.1440) 0.1082 0.8751 (0.7414-1.0329)
Рецессивный, II уб (ЭЭ+Ю) 0.3525 (0.1210-1.0268) 0.0480 0.3920 (0.1477-1.0406)
Сверх доминантный (И+ЭЭ) уб 1Э 1.0370 (0.5508-1.9526) 0.9203 1.0244 (0.6736-1.5578)
Доминантный, (GG+GA) уб АА 0.2426 (0.0845-0.6965) 0.0052 0.8522 (0.7575-0.9587)
Рецессивный, GG уб (AA+GA) 0.5735 (0.3060-1.0752) 0.0817 0.7036 (0.4701-1.053)
Сверх доминантный (GG+AA) уб GA 0.9565 (0.5257-1.7403) 0.8875 0.9783 (0.7275-1.3154)
Как видно из таблицы 5, несмотря на то, что значения OR и RR больше единицы как для аллели D, так и A, но достоверная корреляция наблюдается только для аллели D (Р=0.0480). В случае генотипов наблюдается обратная ситуация. Хотя для мутантных гомозиготных генотипов DD и AA значения OR и RR также достаточно больше единицы, достоверная корреляция обнаружено только для генотипа АА (Р=0.0052). Статистические расчеты генетических моделей для оценки ассоциаций восприимчивости/заболеваемости коронавирусной инфекции не выявили ярко выраженной и достоверной связи.
В заключении можно сказать, что обе мутантные аллели (D и А) как в отдельности, так и вместе, а также генотипы с их участием в определенной степени играют положительную роль в восприимчивости к коронавирусной инфекции. Это особенно ярко выражается среди гомозиготных носителей этих аллелей (таблица 4 и 5). Так, большинство больных с крайне тяжелым и тяжелым течением являются носителями именно гомозиготных генотипов и их сочетаний, а больные с среднетяжелым и легким течением были носителями гетерозиготных генотипов и их сочетаний.
БЛАГОДАРНОСТИ
Работа выполнена при финансовой поддержки гранта Фонда развития науки при Президенте Азербайджанской Республики (EIF-GAT-5-2020-3(37)-12/09/3-M-09).
ЛИТЕРАТУРА
1. Шатунова П. О., Быков А. С., Свитич О. А., Зверев В. В. Ангиотензинпревращающий фермент 2. Подходы к патогенетической терапии COVID-19 // Журнал Микробиологии, Эпидемиологии и Иммунобиологии. - 2020. - том 97, № 4. - С. 339-345; doi: 10.36233/0372-9311-2020-97-4-6.
2. Abbasi Z., Assady S., Khoury E.E., Heyman S. N. Letter to the editor: Angiotensin-converting enzyme 2: an ally or a Trojan horse? Implications to SARS-CoV-2-related cardio-vascular complications // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2020. - V. 318, No 5. - P. H1080-H1083; doi: 10.1152/ajpheart.00215.2020.
3. Alibayova G. R., Rustamova S. M., Akhundova L. A., Mustafayev N. Sh., Huseynova I. M. Angiotensin-converting enzyme gene insertion/deletion (I/D) polymorphism in Azerbaijan population // Journal of Life Sciences and Biomedicine. - 2020. - V. 2 (75), No 2. - P. 7-16; doi: doi.org/10.29228/jlsb.56
4. Alimoradi N., Sharqi M., Firouzabadi D. et al. SNPs of ACE1 (rs4343) and ACE2 (rs2285666) genes are linked to SARS-CoV-2 infection but not with the severity of disease // Virol. J. - 2022. -V. 19. - Article No 48; doi: 10.1186/s12985-022-01782-6.
5. Autoimmune Diseases - Modern Diseases // Proc. of Workshop. European Parliament Report. -2017. - 36 P.
6. Bellone M., Calvisi S. L. ACE polymorphisms and COVID-19-related mortality in Europe // J. Mol. Med. (Berl.). - 2020. - V. 98, No 11. - P. 1505-1509; doi: 10.1007/s00109-020-01981-0.
7. Chaudhary M. COVID-19 susceptibility: potential of ACE2 polymorphisms // Egypt. J. Med. Hum. Genet. -2020, - V. 21. Article No 54; doi: 10.1186/s43042-020-00099-9.
8. Chen F., Zhang Y., Li X., Li W., Liu X., Xue X. The impact of ACE2 polymorphisms on COVID-19 disease: Susceptibility, severity, and therapy // Front. Cell Infect. Microbiol. - 2021. - V. 11. - Article No 753721; doi: 10.3389/fcimb.2021.753721.
9. Delanghe J. R., Speeckaert M. M., De Buyzere M. L. ACE polymorphism is a determinant for COVID-19 mortality in the post-vaccination era // Clin. Chem. Lab. Med. - 2021. - V. 60, No 2. - P. e32-e33; doi: 10.1515/cclm-2021-1001.
10. GBD 2015 Risk Factors Collaborators. Global, regional, and national comparative risk
assessment of 79 behavioural, environmental and occupational, and metabolic risks or clusters of risks, 1990-2015: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2015 // Lancet, - 2016. - V. 388, No 10053. - P. 1659-1724.
11. Houssen M., Al-Harass M., Shahin D., Etreby S.E., Farag K., Ebrahim M., Shaheen D. A., Hashem E. A. Association of ACE and ACE 2 genes polymorphisms with susceptibility to hepatocellular carcinoma in Egyptian HCV patients // Journal of Global Biosciences. - 2015. -V. 4, No 5. - P. 2393-2403.
12. Jackson C. B., Farzan M., Chen B. et al. Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2022. - V. 23. - P. 3-20; doi: 10.1038/s41580-021-00418-x.
13. Knyazev E., Nersisyan S., Tonevitsky A. Endocytosis and transcytosis of SARS-CoV-2 across the intestinal epithelium and other tissue barriers // Front. Immunol. - 2021. - V. 12. - Article No 636966; doi: 10.3389/fimmu.2021.636966.
14. Lerner A., Jeremias P., Matthias T. The World Incidence and Prevalence of Autoimmune Diseases is Increasing // International Journal of Celiac Disease. - 2015. - V. 3, No 4. - P. 151155; doi:10.12691/ijcd-3-4-8.
15. Möhlendick B., Schönfelder K., Breuckmann K., Elsner C., Babel N., Balfanz P., Dahl E., Dreher M., Fistera D., Herbstreit F., Hölzer B., Koch M., Kohnle M., Marx N., Risse J., Schmidt K., Skrzypczyk S., Sutharsan S., Taube C., Westhoff T. H., Jöckel K. H., Dittmer U., Siffert W., Kribben A. ACE2 polymorphism and susceptibility for SARS-CoV-2 infection and severity of COVID-19 // Pharmacogenet. Genomics. - 2021. - V. 31, No 8. - P. 165-171; doi: 10.1097/FPC.0000000000000436.
16. Oscanoa T. J., Vidal X., Coto E., Romero-Ortuno R. ACE gene I/D polymorphism and severity of SARS-CoV-2 infection in hospitalized patients: a meta-analysis // Arterial Hypertension. -2021. - V. 25, No 3. - P. 112-118; doi: 10.5603/AH.a2021.0018.
17. Sabater Molina M., Nicolás Rocamora E., Bendicho A. I., Vázquez E. G., Zorio E., Rodriguez F. D., Gil Ortuño C., Rodríguez A. I., Sánchez-López A. J., Jara Rubio R., Moreno-Docón A., Marcos P. J., García Pavía P., Villa R. B., Gimeno Blanes J. R. Polymorphisms in ACE, ACE2, AGTR1 genes and severity of COVID-19 disease // PLoS One. - 2022. - V. 17, No 2. - Article ID e0263140; doi: 10.1371/journal.pone.0263140.
18. Suryamohan K., Diwanji D., Stawiski E. W. et al. Human ACE2 receptor polymorphisms and altered susceptibility to SARS-CoV-2 // Commun Biol. - 2021. - V. 4. - Article No 475; doi: 10.1038/s42003 -021 -02030-3.
19. World Health Statistics 2022. - WHO: 2022. - 131 P.
20. URL: http://vassarstats.net/odds2x2.html.
