CC BY
18
материалы.
клинико-патогенетического варианта крапивницы, общим диагностическим критерием со стороны кожи является воспаление, сопровождающееся выбросом большого количества биологически активных веществ (БАВ). Такими БАВ являются катехоламины (КА) и серотони-на (С), оказывающие противоположные эффекты на функциональную активность клеток иммунной системы. Реализация воздействия БАВ осуществляется в том числе и через метаболическую систему лимфоцитов, регулирующих функциональную активность лимфоцитов.
Цель исследования: выявить особенности активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ, содержания катехоламинов (КА) и серотони-на (С) в лимфоцитах крови лиц в зависимости от патогенетической формы крапивницы.
Материал и методы. Обследовано 167 человек в возрасте от 18 до 50 лет: 30 больных истинной аллергической крапивницей (ИАК), 41 - псевдоаллергической крапивницей (ПАК) и 96 практически здоровых лиц в качестве контроля, сопоставимых по полу и возрасту. исследование активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови проведено с помощью биолюминесцентных методов (Савченко А.А., 1991; Савченко А.А., Сунцова Л.Н., 1989). Концентрация КА и С в лимфоцитах определена люминесцентногистохимиче-ским методом (Yokoo Н., 1982).
Достоверность различий полученных показателей контрольной группы и больных хронической рецидивирующей крапивницы оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0.
Результаты. В лимфоцитах крови больных различными патогенетическими формами крапивницы обнаружены как общие однонаправленные изменения активности отдельных ферментов, так и особенности, характерные для каждой группы обследованных. В частности как у больных иАК, так и ПАК выявлено снижение уровней активности малатдегидрогеназы, НАДФ-зависимой изоци-тратдегидрогеназы, НАДН- и НАДФ-зависимых глутатдегидрогеназ и глутатионредуктазы при общем повышении активности глицерол-3-фосфатдегидрогеназы. Кроме того, при ИАК обнаружены характерные особенности метаболизма лимфоцитов, определяемые снижением активности НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназ, а также повышением уровня анаэробной реакции лактатдегидрогеназы.
Установлено, что содержание серотонина и катехоламинов в лимфоцитах крови больных крапивницей, независимо от патогенетической формы, снижено, относительно контроля.
Заключение. У больных крапивницей, независимо от ее патогенетической формы, выявленные нарушения гуморальной регуляции лимфоцитов, по-видимому, связаны с изменениями их метаболизма. Для лимфоцитов больных ИАК характерна стимуляция реакций гликолиза за счет поступления продуктов липидного катаболизма. Однако для терминальной реакции гликолиза характерно повышенное образование лактата из пирувата, что ведет к снижению поступления пирувата в дальнейшие реакции окисления. Вследствие этого, по-видимому, ниже уровни активности оксидоредуктаз цикла Кребса, что отражает снижение уровня аэробных окислительных процессов клетки. К тому же при ИАК в лимфоцитах снижена связь между аминокислотным обменом и циклом Кребса за счет глутаматдегидрогеназных реакций и подавлена антиоксидантная способность лимфоцитов. Следовательно, снижен уровень аэробной энергетики клетки при снижении ее антиоксидантной способности. При ПАК в лимфоцитах выявлены тенденции, аналогичные группе больных ИАК, в изменении аэробных энергетических процессов, антиоксидантной способности, однако не изменена интенсивность превращения пирувата и снижен отток субстратов в реакциях цикла Кребса на аминокислотный обмен.
М.Г. Данилец, Ю.П. Бельский, Е.Г. Учасова, Н.В. Бельская, А.А. Лигачева, Е.С. Трофимова, А.М. Гурьев*, М.В. Белоусов*, Р.Р. Ахмеджанов*, М.С. Юсубов*, В.И. Агафонов Роль Р38 И Pi3K В АКТИВАЦИИ МАКРоФАГоВ
водорастворимыми полисахаридами календулы и клевера
Гу нии фармакологии Томского научного центра сО рАМн; * ГОу ВпО сибирский государственный медицинский университет росздрава, г Томск
Под влиянием экзо- и эндогенных стимулов макрофаги (Мф) активируются по двум принципиально разным направлениям, приобретая про- или противовоспалительные свойства. Воспалительные Мф вырабатывают NO, TNF-a, IL-12, способствуют Th1 иммунному ответу [Goerdt S., 1999; Mantovani A., 2006], в то время как противовоспалительные поддерживают Th2 тип ответа (продуцируют IL-1ra, IL-10, TGF-jS), привлекают к месту воспаления T регуляторные
(Tr) клетки и создают условия для развития толерантности [Gordon S., 2003; Mantovani A., 2004; Kreider T., 2007]. Маркерной чертой противовоспалительных Мф является экспрессия аргиназы (Arg), преобразовывающая аргинин в полиамины и мочевину, а воспалительных -ÍNOS с высокой продукцией NO [Munder M., 1998; Kreider T., 2007]. Известно, что активация Мф через одни и те же паттерн-распозна-ющие структуры может приводить к появлению как про- и противовоспалительных свойств, что показано, например, для растительных полисахаридов (ПС) [Schepetkin I.A., 2006]. Одними из важнейших участников внутриклеточного сигналинга Мф являются фосфо-инозитол-3-киназа (PI3K) и MAP киназа р38, которые участвуют в передаче как про-, так и противовоспалительных сигналов [Fukao Т., 2002; Fukao Т., 2003; Kim L., 2005; Zhao Q., 2005].
Цель исследования: изучить участие сигнальных молекул р38 и PI3K в механизме действия ПС, выделенных из календулы и клевера, на способность Мф продуцировать NO и экспрессировать аргиназу.
Материал и методы. Водорастворимые полисахариды получены из фармакопейного сырья на каф. химии СибГМУ по стандартной методике. В экспериментах использованы мыши линии BAlb/ cY. Мф выделяли из суспензии перитонеальных клеток методом прилипания к пластику. Мф культивировали в стандартных условиях, в надосадке определяли концентрацию нитритов при помощи реактива Грейса, а в клетках оценивали активность Arg по способности клеточного гомогената образовывать мочевину. Иммунный ответ Th2 типа индуцировали овальбумином (OVA) [Laitinen Т, 2004], содержание IgG1 и IgE в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем. Th1 иммунный ответ вызывали парентеральным введением эритроцитов барана [Yokozeki Н., 2000], в селезенках определяли число антителообразующих клеток (АО К), а величину реакции ГЗТ оценивали через 24 ч после инъекции в подушечку лап эритроцитов барана [Хаитов Р.М., 1999].
Результаты. При курсовом введении ПС календулы и клевера увеличивали Th1 иммунный ответ (оба ПС стимулировали образование АОК, ПС клевера усиливали реакцию ГЗТ). На фоне Th2 иммунного ответа ПС снижали летальность в результате анафилактического шока и значительно ингибировали продукцию IgE и IgG1. Сравнение влияния ПС и ЛПС на NO-продуцирующую активность Мф и экспрессию ими аргиназы показало, что оба ПС стимулировали продукцию NO, но несколько слабее, чем ЛПС. Полимиксин В (ингибитор липополисахаридов) не отменял этого эффекта. При этом ПС календулы и клевера также стимулировали экспрессию макрофагами Arg. При добавлении в культуру Мф ингибитора р38 (SB203580) стимуляция продукции NO полностью отменялась: без ингибитора концентрация нитритов под действием ПС повышалась с 3,0±0,2 мкМ до 4,4±0,4 мкМ (ПС календулы) и 6,3±0,3 мкМ (ПС клевера), при добавлении ингибитора концентрация нитритов в культуре без ПС составила 2,1±0,3, а в присутствии ПС - 2,8±0,3 мкМ (ПС календулы) и 2,7±0,3 мкМ (ПС клевера). Напротив, стимуляция экспрессии аргиназы происходила без вовлечения р38. Стимулирующее воздействие ПС клевера и календулы на продукцию NO в присутствии ингибитора PI3K (LY294002) также полностью отменялось: без ингибитора концентрация нитритов возрастала с 6,4±0,2 мкМ до 9,5±0,2 (ПС календулы) и 11,9±0,4 мкМ (ПС клевера), а в присутствии ингибитора не менялась (в контроле 2,9±0,2 мкМ, с ПС календулы 2,8±0,5 мкМ, с ПС клевера 3,1 ±0,3 мкМ). Стимулирующее воздействие ПС календулы и девясила в отношении экспрессии аргиназы резко снижалось при блокировании активности PI3K: без ингибитора экспрессия аргиназы под действием ПС повышалась с 1,93±0,07 мМ мочевины до 2,37±0,15 мМ (ПС календулы) и 2,97±0,11 мМ (ПС клевера), при добавлении ингибитора показатель опускался значительно ниже контрольных значений (до 0,42±0,05 мМ для ПС календулы и до 0,27±0,05 мМ для ПС клевера). Однако стимулирующее действие ПС (как клевера, так и календулы) сохранялось и в присутствии ингибитора PI3K (с 0,13±0,02 мМ до 0,42±0,05 мМ для ПС календулы и до 0,27±0,05 мМ для ПС клевера).
Заключение. ПС календулы и клевера обладают NO-стиму-лирующей активностью, которая полностью зависит от р38 и PI3K, а также увеличивают экспрессию макрофагами аргиназы, что не требует вовлечения р38, но частично зависит от PI3K пути.
Т.И. Долгих, Н.С. Запарий
определение иммуноглобулина А ПРИ токсоплазменной инвазии в омской области
Омская государственная медицинская академия
Токсоплазмоз является одной из важных проблем в структуре инфекционной заболеваемости. Актуальность проблемы токсоплаз-
