CC BY
62
УДК 618.11+618.14]-006.6-033.2:577.21
Yu. G. Payanidi, V. Yu. Selchuk, A. Yu. Asanov, K. I. Gordania, T. I. Zakharova
THE ROLE OF GENETIC MARKERS IN DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF ENDOMETRIOID OVARIAN CANCER AND
CORPUS UTERUS CANCER
N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
The multiple primary malignancies are not yet studied well enough at present. The female genital polyneoplasia is, probably, the most urgent problem in clinical oncology. The differential diagnosis of multiple primary malignancies is the most important question to solve. Sometimes, it is very difficult to differentiate metastasis from multiple primary malignancies. The complex diagnosis methods including clinical laboratory instrumental and genetic will account for final diagnosis of this type of cancer.
Key words: endometrioid adenocarcinoma, ovarian, corpus uterus, metastasis.
-Q-
Ю. Г. Паяниди, В. Ю. Селъчук, А. Ю. Асанов, К. И. Жорданиа, Т. И. Захарова
РОЛЬ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ СИНХРОННОГО ЭНДОМЕТРИОИДНОГО РАКА ЯИЧНИКОВ И ТЕЛА МАТКИ
ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
-о-
РЕЗЮМЕ
Первично-множественные опухоли относятся к одной из наименее изученных проблем в современной онкологии. Существенное место в их структуре занимают полинеоплазии органов женского генитального тракта. Особенно актуальна дифференциальная диагностика первично-множественных и метастатических опухолей. Сказать, в каких случаях имеется первичная множественность, а в каких — метастазы, порой бывает очень сложно. Окончательно диагноз может быть установлен только путем комплексного обследования больного с использованием различных диагностических методик: клинических, лабораторных, инструментальных, а в последние годы и молекулярно-генетических методов исследования.
Ключевые слова: эндометриоидная аденокарцинома, яичники, тело матки, метастаз.
ВВЕДЕНИЕ
За последнее десятилетие в онкологии возрос интерес к изучению проблем, связанных с феноменом первичной множественности опухолей. Это обусловлено, в первую очередь, повсеместным увеличением количества больных данным видом онкологической патологии. Не последнее место в проблематике занимает возможность постановки и решения академических проблем канцерогенеза с использованием моделей первично-множественных и метастатических злокачественных новообразований. Предметом оживленных обсуждений и дискуссий является вопрос о дифференциальной диагностике синхронных злокачественных опухолей тела матки и яичников. Вместе с тем по ре-
зультатам немногочисленных публикаций, в которых, как правило, приведены единичные клинические наблюдения, не представляется возможным сделать вывод, в каких случаях процесс следует трактовать как первично-множественный, а в каких — как метастатический. Не будет преувеличением сказать, что этот вопрос встает особенно остро при выборе соответствующей тактики лечения таких больных. Зачастую на практике большинство клиницистов склонны рассматривать синхронные злокачественные новообразования тела матки и яичников как метастатические, представляющие собой единый распространенный опухолевый процесс [1]. Между тем это не всегда бывает оправдано. Для выяснения некоторых аспектов проблемы нами было проведено комплексное исследование синхрон-
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
-е-
-о-
ных первично-множественных и метастатических злокачественных новообразований яичников и тела матки.
Цель исследования — оценка эффективности использования молекулярно-генетических технологий для анализа клонального происхождения множественных опухолей репродуктивной системы женского организма. Теоретическая основа работы — фундаментальное представление о моноклональной природе опухолей.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для изучения гистотипа и клинических особенностей синхронных опухолей были использованы данные 79 случаев, наблюдавшихся в клинике с 1990 по 2004 г. Показано, что большинство синхронных опухолей тела матки и яичников имеет строение эндоме-триоидной аденокарциномы. У 41 (52 %) больной морфологически был подтвержден диагноз рака тела матки с метастазами в яичниках, а в 38 (48 %) случаях после планового гистологического исследования был поставлен диагноз первично-множественного синхронного рака яичников и рака тела матки. Для проведения молекулярно-генетических исследований был получен материал от 8 женщин, у которых диагностирован синхронный эндометриоидный рак яичников и матки (эндометрия). На основании результатов клинико-патологического и гистологического исследований каждый случай был оценен либо как случай первичной опухоли с метастазированием, либо как синхронный первично-множественный рак. Образцы тканей были подвергнуты препаративной микродиссекции с выделением пораженной и интакт-ной областей, из которых в последующем были выделены уникальные образцы ДНК.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как показали наши исследования, клиническое течение заболеваний в 2 группах больных (раком тела с метастазами в яичниках и синхронным первично-множественным раком тела матки и раком яичников) имеет ряд существенных статистически достоверных отличий. Метастазы в яичниках при раке тела матки чаще всего выявляются у более пожилых женщин в менопаузе. В большинстве случаев у них наблюдается местно-распространенный опухолевый процесс, при котором опухоль эндометрия, представленная аденокарциномой с плоскоклеточной метаплазией (36,5 %), имеет смешанную форму роста (51,2 %), занимает всю полость матки и переходит на цервикальный канал (53,7 %), ее размеры превышают 5 см (48,8 %), а глубина инвазии в миометрий составляет более 1 см (56,1 %).
У больных первично-множественным синхронным раком тела матки и раком яичников заболевания выявляются чаще в молодом возрасте при сохраненной менструальной функции (57,9 %). В этих случаях чаще всего наблюдается высокодифференцированная аденокарцинома тела матки (52,6 %) с экзофитной формой роста (71,1 %), ее размер редко достигает 5 см (10,5 %), глубина инвазии миометрия не превышает
0,5 см (78,95 %). Опухоль эндометрия в редких наблюдениях (10,5 %) переходила на цервикальный канал, причем при глубине инвазии не более 1 см.
Сравнительное сопоставление выживаемости при синхронном первично-множественном раке яичников и раке эндометрия и выживаемости больных раком тела матки с метастазами в яичниках показывает, что для 1-й группы больных характерно более благоприятное течение заболевания. У них реже развиваются рецидивы — в 12 (31,6 %) наблюдениях, а 5-летняя выживаемость достигает 66,2 % (рис. 1).
0 1 2 3 4 >5
Время наблюдения, годы
—♦— рак тела матки с метастазами в яичниках —■— первично-множественный рак
Рис. 1. Выживаемость 2 групп больных (первично-множественным синхронным раком яичников и раком эндометрия и раком тела матки с метастазами в яичниках)
Уровень общей 5-летней выживаемости больных раком тела матки с метастазами в яичниках составил 32,2 %. Срок, к которому погибло 50 % больных, — 39,3±3,2 мес. Различия в группах сравнения статистически достоверны (р<0,05).
На 2-м этапе работы были предприняты молеку-лярно-генетические подходы к дифференциальной диагностике синхронных полинеоплазий яичников и тела матки. Для этого были проведены исследования молекулярно-генетического разнообразия в опухолевых и нормальных тканях изучаемых органов путем анализа мутаций гена К-гаБ и феномена потери гетеро-зиготности (ЬОИ-анализ).
Анализ мутаций гена К-гая. Одним из наиболее изученных онкогенов, активация которого часто обнаруживается при раке яичников, является ген К-гаБ. Продукт гена К-гаБ относится к классу в-белков и участвует в самых разнообразных аспектах регуляции клеточных процессов. Ранее было показано, что характер мутаций в гене К-гаБ зависит от гистологического типа и локализации опухоли. Так, мутации К-гаБ значительно чаще регистрируются при муцинозных по сравнению с немуцинозным раком яичников, что позволяет обсуждать перспективность исследований мутаций гена К-гаБ для дифференциальной диагностики.
При рестрикции ПЦР продукта (157 п. н.) в случае отсутствия мутации имеется 2 сайта для эндонуклеа-зы, что приводит к образованию 3 фрагментов (114, 29 и 14 п. н.). При наличии мутации вследствие исчезновения одного из сайтов рестрикции образуются фраг-
-о-
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
72
-е-
менты 143 и 14 п. н. Схемы-интерпретации результатов анализа изменчивости гена К-гаБ представлены на рис. 2.
Рис. 2. Изменчивость гена K-ras:
Мут — мутация; Плм — полиморфизм
Анализ потери гетерозиготности (LOH-анализ) был выполнен с использованием полиморфных микро-сателлитных маркеров для аллелей D3S4614 (3p21.31), D3S4604 (3р21.31—p21.2) гена RASSF1A и аллелей D17S578 (17p13) и D17S1353 (17p13) гена р53. Для LOH-анализа сравнивали интенсивность аллелей высокой (H-аллели) и низкой (L-аллели) молекулярной массы в соответствующих парах опухоль—норма. Случаи с уменьшением интенсивности одного из аллелей на 50 % и более рассматривали как LOH.
На следующем этапе работы была предпринята попытка выяснения, являются ли случаи множественных опухолей полинеоплазиями или же имеют метастатическое происхождение. Хорошо доказан факт, что каждая ткань характеризуется своим, как правило уникальным, набором микросателлитных локусов разной длины. Этот феномен был использован в настоящей работе для анализа происхождения опухолей. Если опухоли возникли независимо друг от друга, то картина расположения микросателлитных полос у них не будет соответствовать друг другу, если же 2-я опухоль — метастаз, то будет наблюдаться соответствие микросаттелитов. В результате сопоставительного анализа аллельного дисбаланса в опухолевых и нормальных тканях исследованных органов было сделано заключение о природе множественности поражения в каждом из 7 случаев. Логику заключения демонстрирует следующий пример (рис. 3).
Примером иллюстрации трактовки происхождения первично-множественности являются образцы опухолей яичника и эндометрия больной № 4748. Из рис. 3 ясно, что характеристики опухоли яичника и нормальной ткани яичника совпадают как по локусу
Рис. 3. Картина электрофоретического разделения продуктов ПЦР образцов тканей яичника и эндометрия больных № 11961 и № 4748 по локусу 01781353
01781353, так и по набору («лестнице») неспецифических фрагментов. Вместе с тем особенности неспецифических фрагментов опухоли эндометрия и нормальной ткани эндометрия полностью совпадают, а «лестницы» опухоли эндометрия и яичника существенно различаются. Таким образом, опухоли яичника и эндометрия не совпадают по набору неспецифических фрагментов ДНК, но идентичны соответствующим норма, т. е. тканям, из которых они сформировались (табл. 1).
Таблица 1.
Результаты сопоставительного сравнения аллель-ного дисбаланса в опухолевых и нормальных тканях исследованных органов и результаты гистологического исследования
Маркер 5406 8356 5641 11961 4748 5342 7253
< D3S4614 Мет Мет Мет Мет ПМО ПМО Мет
1Л а ее D3S4604 Мет ПМО Мет ПМО ПМО ПМО Мет
m 1Л D17S578 Мет Мет Мет Мет ПМО ПМО ПМО
D17S1353 Мет Мет Мет Мет ПМО ПМО Мет
Обобщенный результат Мет Мет Мет Мет ПМО ПМО Мет
Примечание: Мет — метастаз; ПМО — первично-множественные опухоли.
В целом сравнение полученных результатов с результатами гистологических исследований показало, что в 3 случаях отмечается полное или почти полное совпадение результатов молекулярно-генетического анализа 6 полиморфных локусов и заключения гистологов. В других 3 случаях выводы молекулярных и гистологических исследований не совпадали (см. табл. 1).
Для уточнения результатов молекулярно-генетиче-ского исследования несовпадающих случаев были предприняты дополнительные исследования 6 других полиморфных локусов гена ЯЛВВП (0382405, 0382409, 0383047, 0382454, 0382456 и 0381766). Кроме того, в качестве контроля дополнительно иссле-
-о-
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
-е-
довано 2 случая с полным соответствием ранее полученных результатов (№ 4748 и 5342). Результаты дополнительных исследований приведены в табл. 2 и 3.
Таблица 2.
Результаты дополнительного исследования моле-кулярно-генетического разнообразия в опухолевых и нормальных тканях исследованных органов
Маркер Локализация 5406 5641 11961 4748 5342
Яич Энд Яич Энд Яич Энд Яич Энд Яич Энд
D3S2405 3р25.3 ni ni Да ni ni ni Д ni ni ni
D353047 3р22.3 ni ni ni О Д ni ni ni О О
D3S2409 3р21.31 О ni О ni Д Да Mi Ml О О
D3S2456 Зр21.31 д Ml Д ni ni Д ni Д о о
D3S1766 Зр21.1 Ml ni О О Д Д Да Д О О
D3S2454 Зр14.1 о 0 О О О О О О ni О
Примечание: Яич — яичник; Энд — эндометрий; О — сохранение гетрозиготности; Д — делеция; Д,а — делеция с амплификацией второго аллеля; М1 — нестабильность микросателлитов как изменение длин маркера; ш — не информативный случай.
Таблица 3.
Результаты сопоставительного сравнения аллель-ного дисбаланса в опухолевых и нормальных тканях исследованных органов по дополнительным полиморфным локусам гена ИЛ88Р1
Маркер Локализация 5406 5641 11961 4748 5342
D3S2405 3р25.3 Мег Мег Мег ПМО ПМО
D3S3047 3р22.3 Мет ПМО ПМО ПМО ПМО
D3S2409 3р21.31 Мет ПМО ПМО ПМО ПМО
D3S2456 3р21.31 Мег ПМО Мег ПМО ПМО
D3S1766 Зр21.1 Мег ПМО Мег ПМО ПМО
D3S2454 Зр14.1 Мег ПМО ПМО ПМО ПМО
Примечание: Мет — метастаз; ПМО — первично-множественные опухоли.
В целом результаты проведенного исследования позволяют заключить, что природа возникновения опухолей, оцененная по результатам проведенных исследований, подтверждена в 3 случаях, но оставалась неопределенной для случая № 5641 (5Мет:5ПМО) и № 11961 (6Мет: 4ПМО).
Для большей определенности было проведено сопоставление результатов молекулярно-генетических исследований с клинико-морфологическими находками этих двух случаев.
Обе женщины обратились в РОНЦ с далеко зашедшим распространенным онкологическим процессом. Поскольку известно, что в поздних стадиях развития злокачественных опухолей могут обнаруживаться разнообразные и неспецифические мутационные изменения, использование молекулярных технологий для дифференциальной диагностики может быть ограничено при распространенности опухолевого процесса [2-5].
ВЫВОДЫ
Таким образом, результаты проведенного пилотного исследования позволяют говорить о том, что молеку-лярно-генетические подходы могут иметь большое значение в дифференциации первично-множественных опухолей и первичной опухоли с метастазированием.
ЛИТЕРАТУРА
1. Попова Т. Н., Сельчук В. Ю., Баталина Л. Д. Диагностика первично-множественных синхронных злокачественных новообразований женских половых органов // Акуш. гинекол. — 2001. — № 4. — С. 45-46.
2. Brieger J., Jacob R., Riazimand H. S. et al. Chromosomal aberrations in premalignant and malignant squamous epithelium // Cancer Genet. Cytogenet. — 2003. — Vol. 144(2). — P. 148-155.
3. Castro I. M., Connell P. P., Waggoner S. et al. Synchronous ovarian and endometrial malignancies // Am. J. Clin. Oncol. — 2000. — Vol. 23(5). — P. 521-525.
4. Fujii H., Matsumoto T., Yoshida M. et al. Genetics of synchronous uterine and ovarian endometrioid carcinoma: combined analyses of loss of heterozygosity, PTEN mutation, and microsatellite instability // Hum. Pathol. — 2002. — Vol. 33(4). — P. 421-428.
5. Herrinton L. J., Voigt L. F., Weiss N. S. et al. Risk factors for synchronous primary endometrial and ovarian cancers // Ann. Epidemiol. — 2001. — Vol. 11(8). — P. 529-533.
Поступила 08.02.06
■ ■
74
-Q-
№1/том 5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
-е-
