CC BY
22https://dOi.Org/10.26442/20751753.2020.9.200324
оригинальная статья
Роль молекулярно-генетических факторов в развитии первого и повторного ишемического инсульта некардиоэмболического генеза
В.Н. Шишкова^1,2, Т.В. Адашева2, Л.В. Стаховская3, А.Ю. Ременник1, В.В. Валяева1 1ГБУЗ «Центр патологии речи и нейрореабилитации» Департамента здравоохранения г. Москвы, Москва, Россия;
2ФГБОУ ВО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Минздрава России, Москва, Россия; 3ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия everonika-1306@mail.ru
Аннотация
Цель. Провести оценку распределения полиморфных аллелей генов APO A5 (rs34282181), APO A5 (rs619054), APO E (rs5174), APO C4 (rs1132899), АРО Н (rs4581), LPL (rs199675233), LP(a) (rs41267817), APO B (rs1042031), АРО В (rs676210), АРО D (rs7659), ANGPT4 (rs1044250), TNFа (rs1800620), VEGFA (rs62401172), IL8 (rs1803205), IL6 (rs56383910), MTHFR (rs1801131), MTHFR (rs1801133), ADIPOQ-AS1 (rs17366743), ADIPOQ-AS1 (rs185847354), ADIPOR2 (rs12342), GRM 1 (rs1047005), GRM3 (rs2228595), BDNF (rs6265) для выявления ассоциации в развитии первого и повторных ишемических инсультов (ИИ) некардиоэмболического генеза.
Материалы и методы. В рамках исследования, проводимого в два этапа, где первый этап представлен исследованием с дизайном «случай-контроль», а второй - когортным наблюдательным исследованием, провели определение 23 вариантов однонуклеотидных полиморфизмов генов у 206 пациентов, перенесших первый ИИ некардиоэмболического генеза, и 206 здоровых добровольцев, соответствующих по полу, возрасту и месту проживания группе пациентов. Генотипирование полиморфизмов проводили с использованием готовых зондов TaqMan.
Результаты. Для однонуклеотидных полиморфных вариантов генов ADIPOQ-AS1 (rs17366743), АРО В (rs676210), APOA5 (rs619054), АРО D (rs7659) и IL8 (rs1803205) установлена ассоциация с развитием первого ИИ некардиоэмболического генеза. Для однонуклеотидного полиморфного варианта гена ADIPOR2 (rs12342) установлена ассоциация с защитой от развития повторного ИИ некардиоэмболического генеза.
Заключение. Установили значимые ассоциации для однонуклеотидных полиморфных вариантов генов с развитием первого и повторного ИИ некардиоэмболического генеза.
Ключевые слова: ишемический инсульт некардиоэмболического генеза, однонуклеотидные полиморфные варианты генов.
Для цитирования: Шишкова В.Н., Адашева Т.В., Стаховская Л.В. и др. Роль молекулярно-генетических факторов в развитии первого и повторного
ишемического инсульта некардиоэмболического генеза. Consilium Medicum. 2020; 22 (9): 14-22. DOI: 10.26442/20751753.2020.9.200324
original Article
The role of molecular genetic factors in the development of the first episode and recurrent noncardioembolic ischemic stroke
Veronika N. Shishkova^12, Tatiana V. Adasheva2, Liudmila V. Stakhovskaia3, Alla lu. Remennik1, Vera V. Valiaeva1
1Center for Speech Pathology and Neurorehabilitation, Moscow, Russia; 2Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry, Moscow, Russia; 3Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russia everonika-1306@mail.ru
Annotation
Aim. To assess the polymorphic allele distribution of the APO A5 (rs34282181), APO A5 (rs619054), APO E (rs5174), APO C4 (rs1132899), APO H (rs4581), LPL (rs 199675233), LP (a) (rs41267) genes B (rs1042031), APO B (rs676210), APO D (rs7659), ANGPT4 (rs1044250), TNF-а (rs1800620), VEGFA (rs62401172), IL8 (rs1803205), IL6 (rs56383910), MTH1801131), ADIPOQ-AS1 (rs17366743), ADIPOQ-AS1 (rs185847354), ADIPOR2 (rs12342), GRM 1 (rs1047005), GRM 3 (rs2228595), BDNF (rs6265) genes to reveal the association with the development of the first episode and recurrent noncardioembolic ischemic stroke (IS).
Materials and methods. As part of the study, conducted in two stages, where the first stage is a case-control study and the second is an observational cohort study, we identified 23 variants of single-nucleotide polymorphisms in 206 patients who had the first episode of noncardioembolic IS and in 206 sex-, age- and residence-matched healthy volunteer. Polymorphisms genotyping was performed with ready-to-use TaqMan probes.
Results. For single-nucleotide polymorphic variants of the ADIPOQ-AS1 (rs17366743), APO B (rs676210), APO A5 (rs619054), APO D (rs7659) and IL8 (rs1803205) genes, an association with the development of first episode of noncardioembolic IS was established. For the single-nucleotide polymorphic variant of the ADIPOR2 (rs12342) gene, an association with the protection against the development of recurrent noncardioembolic ischemic stroke was established. Conclusion. Significant associations for single-nucleotide polymorphic variants of genes with the development of first episode and recurrent noncardioembolic IS were found.
Key words: noncardioembolic ischemic stroke, single-nucleotide polymorphic variants of genes.
For citation: Shishkova V.N., Adasheva T.V., Stakhovskaia L.V. et al. The role of molecular genetic factors in the development of the first episode and recurrent noncardioembolic ischemic stroke. Consilium Medicum. 2020; 22 (9): 14-22. DOI: 10.26442/20751753.2020.9.200324
Ишемический инсульт (ИИ) остается чрезвычайно актуальной проблемой современной медицинской науки, учитывая постоянно растущую заболеваемость, тесно связанную с высокими показателями смертности и инвалидизации во всем мире [1].
Принимая во внимание многофакторность природы ИИ, отраженную в его многочисленных классификациях, в том числе в наиболее часто применяемой классификации патогенетических подтипов TOAST, приходится признать наличие объективных сложностей в разработке универсальных и одновременно эффективных подходов к профилактике
всех описанных патогенетических вариантов [2]. Немалую роль в трудностях создания единой профилактической стратегии современные исследователи причин развития ИИ отводят наследственному фактору [3].
Несмотря на значительное количество проведенных генетических исследований как в нашей стране, так и за рубежом, в данном направлении остается достаточно белых пятен, возможно, являющихся существенным звеном в решении данной проблемы. Опубликованные в настоящее время исследования затрагивают либо одиночные разрозненные полиморфные варианты генов из разных групп фак-
торов риска, либо масштабные изучения 1-2 генов методом секвенирования, но с определением всех возможных мутаций [4, 5]. Оба подхода, вероятно, не обладают всем потенциалом для точного определения искомой проблемы, на что косвенно указывают и полученные результаты [6]. Согласно современным представлениям об этиопатогенезе ИИ, перспективным направлением могут считаться комплексные молекулярно-генетические исследования, максимально приближенные по своему наполнению к реальной клинической картине конкретного подтипа ИИ, с воспроизведением основных патологических путей развития заболевания [7, 8].
Таким образом, цель настоящего исследования - изучить взаимосвязь между 23 однонуклеотидными полиморфизмами (ОНП) следующих генов: АРО А5 (^34282181), АРО А5 (п619054), APO E (п5174), APO C4 (пП32899), АРО Н (п4581), LPL (п199675233), LP(a) (^41267817), APO Б (п1042031), АРО В (п676210), АРО D (п7659), ANGPT4 (п1044250), ТШа (п1800620), VEGFA (п62401172), К8 (п1803205), К6 (п56383910), MTHFR (пШНШ), MTHFR (п1801133), ADIPOQ-AS1 (Ы7366743), ADIPOQ-AS1 (Ы85847354), ADIPOR2 (п12342), GRM1 (п1047005), GRM 3 (п2228595), БDNF (п6265), - отвечающих за развитие нарушений в различных обменных процессах (фолатный, углеводный, липидный), реакциях воспаления и эндотелиальной дисфункции, а также контролирующих нейротрофическую функцию и ангиогенез в центральной нервной системе, для выявления ассоциаций в развитием первого и повторных ИИ некардиоэмболического генеза.
Материалы и методы
В исследование, проводимое в два этапа, где первый этап представлен исследованием с дизайном «случай-контроль», а второй - когортным наблюдательным исследованием, включены 206 пациентов из неврологических отделений ГБУЗ «Центр патологии речи и нейрореабилитации» (Москва), перенесших первый ИИ некардиоэмболического генеза, и 206 здоровых добровольцев, соответствующих по полу, возрасту и месту проживания группе пациентов. Всего в исследование «случай-контроль» отобраны 412 участников, соответствующие критериям включения. Критерии для группы «пациенты»: подписанное информированное согласие на участие в исследовании; мужчины и женщины в возрасте 45-80 лет, перенесшие первый ИИ в течение последних 6 мес; время постоянного проживания в Москве - более 20 лет до момента включения в исследование. Для группы «контроль»: подписанное информированное согласие на участие в исследовании; мужчины и женщины в возрасте 45-80 лет, не переносившие ранее ИИ; время постоянного проживания в Москве - более 20 лет до момента включения в исследование. Критерии исключения из исследования для обеих групп: наличие подтвержденных семейных моногенных форм заболеваний, предрасполагающих к развитию ИИ (болезнь Фабри; синдром Марфана; синдром Элерса-Данлоса, тип 4; CADASIL; наследственные тромбо-филии и т.д.); указаний в анамнезе на заболевания с высоким риском развития кардиоэмболических осложнений (фибрилляция предсердий, ревматические пороки сердца, протезированные клапаны сердца, тромб в левом желудочке, дилатационная кардиомиопатия, миксома предсердия, инфекционный эндокардит, синдром слабости синусового узла, острая и хроническая сердечная недостаточность); предустановленный диагноз ишемиче-ской болезни сердца; беременность; подтвержденные состояния алкоголизма и наркомании; острые или хронические психиатрические заболевания; терминальные состояния; участие пациента в любом другом исследовании в течение последних 30 дней перед отбором в данное исследование.
Верификация ИИ в группе пациентов осуществлялась с помощью магнитно-резонансной томографии. Исходно
всем участникам исследования проводили клиническое обследование: анализ жалоб и анамнеза, в том числе семейного, оценку общего состояния и наличия вредных привычек, изучались вопросы питания, отношения к алкоголю, уровень ежедневной активности, измерение артериального давления, анализ антропометрических параметров, выявление традиционных факторов риска развития ИИ. На каждого включенного в исследование заведена карта участника, в которую заносилась вся информация. Все участники исследования подписывали форму информированного согласия. Во второй этап включены 206 пациентов, перенесших первый ИИ и обследованных согласно дизайну в первой части исследования. Второй этап представлял собой ко-гортное исследование, в котором оценивали количество повторных случаев ИИ (фатальных и нефатальных), среднее время наблюдения составило 36 мес.
Всем участникам исследования проводили забор крови для генотипирования по методу J. Hixson и D. Vernier [9]. Изучались ОНП следующих генов: аполипопротеинов А5, В, Е, С4, Н, D - APO A5 (rs34282181), APO A5 (rs619054), APO B (rs1042031), АРО В (rs676210), APO E (rs5174), APO C4 (rs1132899), АРО Н (rs4581), АРО D (rs7659); липопротеин-липазы - LPL (rs199675233); липопротеина а - LP(a) (rs41267817); ангиопоэтинподобного белка 4 -ANGPT4 (rs1044250); фактора некроза опухолей a - TNFa (rs1800620); сосудисто-эндотелиального фактора А - VEGFA (rs62401172); интерлейкина-6 и 8 - IL6 (rs56383910) и IL8 (rs1803205); метилентетрагидрофолатредуктазы - MTHFR (rs1801131) и MTHFR (rs1801133); адипонектина - ADIPOQ-AS1 (rs17366743); ADIPOQ-AS1 (rs185847354); рецептора адипонектина 2 - ADIPOR2 (rs12342); рецептора глутамата 1 -GRM 1 (rs1047005); рецептора глутамата 3 - GRM 3 (rs2228595); мозгового нейротрофического фактора - BDNF (rs6265). Анализ ОНП производили методом полимеразной цепной реакции с использованием готовых зондов TaqMan, имеющих идентификационный номер Assey ID (Applied Biosystems, США). Амплификацию ОНП исследуемых генов проводили на амплификаторе 7500 Real-Time PCR System (Applied Biosystems, США). Условия амплификации были стандартные и соответствовали таковым, указанным поставщиком реагентов для каждого Assey ID. Обозначения генотипов даны в соответствии с международной базой данных db SNP (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/).
Для статистической обработки результатов применяли программу SPSS Version 20. Распределение аллелей и генотипов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнберга. Сравнение групп с помощью критерия х2 с поправкой Йетса, расширения Фримена-Холтона для точного критерия Фишера (двухстороннего), критерия х2 для произвольных таблиц сопряженности, точного критерия Фишера (двухстороннего), а также рассчитывали отношение шансов и 95% доверительный интервал (ДИ). Критическое значение уровня значимости принималось равным 5%.
Результаты и обсуждение
Все участники исследования соответствовали критериям отбора и были сопоставимы по полу, возрасту и территории постоянного проживания. Основные клинико-антропомет-рические данные участников исследования представлены в табл. 1.
Результат анализа аллельного распределения исследованных 23 ОНП генов показан в табл. 2. Из представленных данных видно, что для ОНП: APO A5 (rs34282181), APO E (rs5174), APO C4 (rs1132899), АРО Н (rs4581), LPL (rs199675233), LP(a) (rs41267817), APO B (rs1042031), ANGPT4 (rs1044250), TNFa (rs1800620), VEGFA (rs62401172), IL6 (rs56383910), ADIPOQ-AS1 (rs185847354), ADIPOR2 (rs12342), GRM 1 (rs1047005), GRM 3 (rs2228595), MTHFR (rs1801131), MTHFR (rs1801133) и BDNF (rs6265) - не отмечено связи с развитием первого ИИ. Однако следует обратить внимание на то, что часть из пере-
Таблица 1. Клинико-антропометрические параметры участников исследования (I этап)
Параметры Первый ИИ (n=206) Контроль (n=206) Уровень значимости, p
Возраст, лет 56 (10) 54 (11) 0,161
Мужчины/женщины 117 (56,8%)/89 (43,2%) 116 (56,3%)/90 (43,6%) >0,052
Рост, см 168 (9) 167 (9) 0,1041
Масса тела, кг 86 (15) 80 (16) 0,0021
Индекс массы тела 30 (5) 29 (6) 0,0261
Окружность талии, см 101 (12) 93 (16) <0,0011
Наследственность по ИИ, п (%) 161 (78%) 125 (61%) 0,0472
Сахарный диабет (есть/нет) 143 (69%)/63 (31%) 22 (11 %)/184 (89%) <0,0012
Курение, п (%) 126 (61%) 135 (65%) >0,052
Артериальная гипертензия, п(%) 134 (65%) 125 (61%) >0,052
Фибрилляция предсердий, п 0 0
Ишемическая болезнь сердца 0 0
Антигипертензивные 65 61 >0,7492
Сахаросн ижающие 69 11 <0,0012
Статины 95 18 <0,0012
Ингибиторы протонной помпы 34 7 <0,0012
Ноотропы 43 0
Антидепрессанты 27 0
Примечание. Данные представлены в виде М (SD), где М - среднее значение, SD - стандартное отклонение. Здесь и далее в табл. 3: 'критерий Стьюдента ^-критерий); 2критерий х2 с поправкой Йетса.
численных ОНП, а именно: АРОА5 (п3428218), LPL Г199675233), ТШа (Ы800620), VEGFA (п6240П72), К6 (п56383910), GRM1 (Ы047005), Ща) (Ы1267817) и ADIPOQ-AS1 (rs185847354), показали редкую частоту встречаемости полиморфных аллелей. Таким образом, вполне вероятно, что подобная распространенность данных ОНП может являться особенностью для исследуемой популяции, что представляется интересным результатом. Следует отметить, что похожие варианты аллельного распределения для изученных нами ОНП продемонстрированы в исследованиях других авторов [10, 11].
Из представленных данных также видно, что для ОНП генов АРО В (п676210), APO A5 (п619054), АРО D (п7659), К8 (Ы803205) и ADIPOQ-AS1 (п17366743) выявлена значимая ассоциация с развитием первого ИИ. Полученные результаты могут свидетельствовать о вкладе нарушений углеводного и липидного обмена, а также связанных с ними воспалительных процессов в патогенезе ИИ, что также находит подтверждение в литературе [11-13]. Принимая во внимание возрастающий интерес к патофизиологическим эффектам аполипопротеинов, интерлейкинов и адипонек-тина в развитии и прогрессировании ИИ, в настоящее время предпринимаются шаги по разрабатыванию новых подходов к его профилактике с учетом появления новых данных [ 14].
Во вторую часть исследования включены 206 пациентов, перенесшие первый ИИ и обследованные в первой части исследования согласно дизайну. За период проспективного наблюдения - 36 мес - повторный ИИ развился у 58 пациентов, при этом фатальных ИИ достоверно не отмечено, но из исследования выбыли 7 пациентов по причине потерянной связи. Основные клинические характеристики участников исследования, перенесших один или несколько ИИ, представлены в табл. 3.
Обращает на себя внимание тот факт, что группа, сформированная из пациентов, перенесших повторный ИИ, отличалась от группы с единственным ИИ значительно большей долей мужчин, количеством случаев сахарного диабета 2-го типа и отягощенной наследственностью по развитию ИИ среди родственников первой линии родства. Принимая во внимание важность наследуемых компонентов риска ИИ, предприняли анализ распределения полиморфных ал-
лелей с целью выявления ассоциации данных ОНП с развитием повторного ИИ (табл. 4). Из данного анализа исключены ОНП, показавшие отсутствие минорных аллелей в группе пациентов, а именно: APOA5 (rs3428218), LPL (rs199675233), ГШа (rs1800620), VEGFA (rs62401172), IL6 (rs56383910), GRM1 (rs1047005), LP(а) (rs41267817) и ADI-POQ-AS1 (rs185847354).
В результате последовательно выполненного анализа частот встречаемости и распределения ОНП, отвечающих за развитие метаболических нарушений (фолатный, углеводный и липидный обмен), системного и локального воспаления, дисфункции эндотелия, ангиогенеза и нейропластич-ности установили сопоставимое частотное распределение с другими европейскими популяциями для ОНП: ADIPOQ-AS1 (rs17366743), MTHFR (rs1801131), MTHFR (rs1801133), BDNF (rs6265), APOA5 (rs619054), APOB (rs676210), APOB (rs1042031), APOC4 (rs1132899), АРОD (rs7659), APOH (rs4581), ANGPT4 (rs1044250) и GRM 3 (rs2228595) [10, 11]. В то же время не получили значимой связи между данными ОНП и риском развития повторного ИИ, что также нашло подтверждение в работах других исследователей [5-7, 11].
Однако для ОНП гена APOE (rs5174) отношение рисков составило 1,600 (95% ДИ 1,041-2,459) для генотипа СС, что дает возможность предположить различия во влиянии на риск развития повторного ИИ между генотипами данного ОПН. Для ОНП гена ADIPOR2 (rs12342) получили значимое различие в распределении полиморфных аллелей и достоверную связь с защитой от рецидива ИИ. Подобную связь недавно обнаружили R. Zhu и соавт., показав, что ОНП ADI-POR2 (rs12342) значительно снижает риск рецидива ИИ не-кардиоэмболического генеза [15]. Полученные результаты могут свидетельствовать о возможном влиянии изменений во взаимодействии адипонектина с его рецептором, что может быть также сопряжено с развитием углеводных нарушений, эндотелиальной дисфункции и состояния инсули-норезистентности, участвующих в развитии ИИ [8].
заключение
Таким образом, в результате проведенного исследования нами впервые определена низкая частота встречаемости следующих полиморфных вариантов генов: APOA5 (rs3428218),
Таблица 2. Частота аллелей и генотипов 17 ОНП генов
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, p Отношение шансов
инсульт контроль значение 95% ДИ
APOB RS676210
Аллель G 294/0,714 326/0,791 6,261 0,0131 0,657 0,478-0,905
Аллель A 118/0,286 86/0,208 1,521 1,105-2,094
Генотип G/G 107/0,519 124/0,602 - 0,0032 0,715 0,484-1,056
Генотип G/A 80/0,388 78/0,379 1,042 0,700-1,550
Генотип A/A 19/0,093 4/0,019 5,131 1,714-15,359
APOB Rs1042031
Аллель G 355/0,862 347/0,842 0,471 0,4931 1,167 0,794-1,715
Аллель A 57/0,138 65/0,158 0,857 0,583-1,260
Генотип G/G 158/0,767 147/0,714 - 0,2212 1,321 0,849-2,056
Генотип G/A 39/0,189 53/0,257 0,674 0,422-1,077
Генотип A/A 9/0,044 6/0,029 1,523 0,532-4,359
АРОА5 RS619054
Аллель G 275/0,667 313/0,760 8,129 0,0051 0,635 0,469-0,861
Аллель A 137/0,333 99/0,240 1,575 1,161-2,137
Генотип G/G 84/0,408 120/0,583 12,918 0,0023 2,043 1,381-3,024
Генотип A/G 107/0,519 73/0,345 0,508 0,342-0,754
Генотип A/A 15/0,073 13/0,063 0,858 0,397-1,851
APOA5 RS34282181
Аллель G 412/1,000 412/0,000 - 1,00 - -
Аллель T 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип G/G 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип G/^ 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип T/T 0/0,000 0/0,000 - -
APOC4 Rs1132899
Аллель T 192/0,466 187/0,454 0,078 0,7801 1,050 0,798-1,381
Аллель C 220/0,534 225/0,546 0,952 0,724-1,253
Генотип T/T 50/0,243 45/0,218 0,395 0,8213 1,147 0,725-1,815
Генотип T/C 92/0,446 97/0,471 0,907 0,615-1,336
Генотип C/C 64/0,311 64/0,311 1,000 0,659-1,518
LPL Rs 199675233
Аллель G 412/1,000 412/1,000 - 1,00 - -
Аллель A 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип G/G 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип G/A 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип A/A 0/0,000 0/0,000 - -
LPA Rs41267817
Аллель T 412/1,000 411/0,998 - 0,4994 - -
Аллель C 0/0,000 1/0,002 - -
Генотип T/T 206/1,000 205/0,995 - 0,9992 - -
Генотип T/C 0/0,000 1/0,005 - -
Генотип C/C 0/0,000 0/0,000 - -
АРО H Rs4581
Аллель C 291/0,706 303/0,735 0,730 0,3931 0,865 0,638-1,173
Аллель A 121/0,294 109/0,265 1,156 0,852-1,568
Генотип C/C 104/0,505 119/0,578 3,418 0,1823 0,745 0,505-1,099
Генотип A/C 83/0,403 65/0,316 1,464 0,977-2,194
Генотип A/A 19/0,092 22/0,106 0,850 0,445-1,622
Таблица 2. Частота аллелей и генотипов 17 ОНП генов (продолжение)
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, p Отношение шансов
инсульт контроль значение 95% ДИ
АРО D Rs7659
Аллель C 105/0,255 162/0,392 17,375 <0,0011 0,528 0,392-0,710
Аллель T 307/0,745 250/0,608 1,895 1,408-2,550
Генотип C/C 18/0,087 40/0,194 15,499 <0,0013 0,397 0,219-0,720
Генотип C/T 69/0,335 82/0,398 0,762 0,510-1,138
Генотип T/T 119/0,578 84/0,408 1,987 1,342-2,940
APO E Rs5174
Аллель C 215/0,522 198/0,481 1,243 0,2651 1,180 0,897-1,550
Аллель T 197/0,478 214/0,519 0,848 0,645-1,114
Генотип C/C 60/0,292 49/0,238 1,572 0,4563 1,317 0,848-2,044
Генотип C/T 95/0,462 100/0,485 0,907 0,616-1,336
Генотип T/T 51/0,246 57/0,277 0,860 0,554-1,335
ANGPT4 Rs1044250
Аллель C 283/0,687 298/0,723 1,144 0,2851 0,839 0,622-1,133
Аллель T 129/0,313 114/0,277 1,192 0,883-1,608
Генотип C/C 95/0,461 105/0,510 1,445 0,4863 0,816 0,544-1,201
Генотип C/T 93/0,451 88/0,427 1,104 0,748-1,629
Генотип T/T 18/0,088 13/0,063 1,421 0,677-2,983
ADIPOQ-AS1 Rs17366743
Аллель T 402/0,976 410/0,995 - 0,0164 0,196 0,043-0,901
Аллель C 10/0,024 2/0,005 5,100 1,110-23,420
Генотип T/T 196/0,951 204/0,990 - 0,0152 0,781 0,042-0,888
Генотип T/C 10/0,049 2/0,010 5,204 1,126-24,053
Генотип C/C 0/0,000 0/0,000 - -
ADIPOQ-AS1 Rs185847354
Аллель T 412/1,000 411/0,998 - 0,4994 - -
Аллель C 0/0,000 1/0,002 - -
Генотип T/T 206/1,000 205/0,995 - 0,5002 - -
Генотип T/C 0/0,000 1/0,005 - -
Генотип C/C 0/0,000 0/0,000 - -
ADIPOR Rs12342
Аллель C 290/0,704 292/0,709 0,006 0,9401 0,977 0,724-1,318
Аллель T 122/0,296 120/0,291 1,024 0,758-1,382
Генотип C/C 102/0,495 111/0,539 3,161 0,2063 0,839 0,570-1,236
Генотип C/T 86/0,411 70/0,339 1,382 0,926-2,062
Генотип T/T 18/0,087 25/0,121 0,693 0,366-1,314
TNFa Rs 1800620
Аллель G 412/1,000 412/1,000 - 1,00 - -
Аллель A 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип G/G 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип G/A 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип A/A 0/0,000 0/0,000 - -
VEGF A Rs 62401172
Аллель G 412/1,000 412/1,000 - 1,00 - -
Аллель T 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип G/G 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип G/T 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип T/T 0/0,000 0/0,000 - -
Таблица 2. Частота аллелей и генотипов 17 ОНП генов (окончание)
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, p Отношение шансов
инсульт контроль значение 95% ДИ
IL6 Rs56383910
Аллель A 412/1,000 412/1,000 - 1,00 - -
Аллель G 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип A/A 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип A/G 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип G/G 0/0,000 0/0,000 - -
IL 8 Rs 1803205
Аллель C 373/0,905 408/0,990 - <0,0014 0,094 0,033-0,265
Аллель T 39/0,095 4/0,010 10,665 3,775-30,130
Генотип C/C 167/0,811 202/0,981 - <0,0012 0,085 0,030-0,242
Генотип СЯ 39/0,189 4/0,019 11,793 4,120-33,676
Генотип T/T 0/0,000 0/0,000 - -
MTHFR Rs1801131
Аллель T 277/0,672 283/0,687 0,139 0,7091 0,935 0,698-1,253
Аллель G 135/0,328 129/0,313 1,069 0,798-1,433
Генотип T/T 93/0,451 92/0,446 1,667 0,4353 1,020 0,692-1,504
Генотип T/G 91/0,442 99/0,481 0,855 0,580-1,260
Генотип G/G 22/0,107 15/0,073 1,522 0,766-3,026
MTHFR Rs1801133
Аллель G 283/0,687 281/0,682 0,006 0,9411 1,023 0,762-1,372
Аллель A 129/0,313 131/0,318 0,978 0,729-1,312
Генотип G/G 103/0,500 95/0,461 2,273 0,3223 1,168 0,794-1,720
Генотип G/A 77/0,374 91/0,441 0,754 0,509-1,119
Генотип A/A 26/0,126 20/0,097 1,343 0,724-2,492
GRM 1 Rs1047005
Аллель T 412/1,000 412/1,000 - 1,00 - -
Аллель C 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип T/T 206/1,000 206/1,000 - 1,00 - -
Генотип T/C 0/0,000 0/0,000 - -
Генотип C/C 0/0,000 0/0,000 - -
GRM 3 Rs2228595
Аллель C 388/0,942 381/0,925 0,701 0,4031 1,315 0,758-2,283
Аллель T 31/0,075 24/0,058 0,760 0,438-1,319
Генотип C/C 175/0,850 184/0,893 - 0,0852 1,482 0,826-2,657
Генотип C/T 31/0,150 20/0,097 0,607 0,334-1,105
Генотип T/T 0/0,000 2/0,010 - -
BDNF Rs6265
Аллель C 367/0,891 348/0,845 3,426 0,0651 1,500 0,997-2,257
Аллель T 45/0,109 64/0,155 0,667 0,443-1,003
Генотип C/C 162/0,786 145/0,704 - 0,1222 1,549 0,990-2,424
Генотип C/T 43/0,208 58/0,282 0,673 0,428-1,059
Генотип T/T 1/0,006 3/0,014 0,330 0,034-3,200
Здесь и далее в табл. 4: 'критерий х2 с поправкой Йетса; 2расширение Фримена-Холтона для точного критерия Фишера (двухсторонний); критерий х2 для произвольных таблиц сопряженности; 4точный критерий Фишера (двухсторонний).
LPL (Ы99675233), TNFа (Ы800620), VEGFA (п62401172), К6 (п56383910), GRM1 (Ы047005), ШР(а) (Ы1267817) и ADI-POQ-AS1 (п185847354), что может стать основой для планирования и проведения будущих генетических исследований в Российской Федерации. Также для однонуклеотидных полиморфных вариантов генов ADIPOQ-AS1 (п17366743), АРО В (п676210), АРО А5 (п619054), АРО D (п7659) и Ш
(п1803205) установлена достоверная ассоциация с развитием первого ИИ некардиоэмболического генеза. Для одно-нуклеотидного полиморфного варианта гена ADIPOR2 (п12342) установлена ассоциация с протективным эффектом в отношении развития повторного ИИ некардиоэмбо-лического генеза. Учитывая многофакторный патогенез развития ИИ, можно предположить, что накопление
Таблица 3. Основные демографические и клинико-антропометрические параметры групп пациентов (II этап)
Параметры Повторный ИИ (n=58) Первый ИИ (n=141) Уровень значимости, p
Возраст, годы 60 (9) 60 (10) 0,9591
Рост, см 172 (8) 167 (10) <0,00011
Масса тела, кг 90 (15) 85 (16) 0,0311
Индекс массы тела 30 (5) 30 (5) 0,8731
Окружность талии, см 103 (11) 100 (13) 0,0811
Пол, n (%):
Мужчины 49 (84,4) 63 (44,7) <0,0012
Женщины 9 (15,6) 78 (55,3)
Сахарный диабет, n (%):
есть 47 (81,0) 88 (62,4) 0,0172
нет 11(19,0) 53 (37,6)
Курение, n (%) 54 (93,1) 124 (87,9) 0,4112
Артериальная гипертензия, n(%) 39 (67,2) 90 (63,8) 0,7692
Наследственность по ИИ, n (%) 56 (96,5) 99 (70,2) <0,0012
Примечание. Данные представлены в виде М (SD) для количественных данных, где М - среднее значение, SD - стандартное отклонение, и в виде частот для номинальных данных.
Таблица 4. Частота аллелей и генотипов 15 ОНП генов
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, Р Отношение риска
повторный инсульт (n=58) первый инсульт (n=141) значение ДИ 95%
APO B RS676210
Аллель G 89/0,767 222/0,787 0,093 0,7611 0,992 0,644-1,320
Аллель A 27/0,233 60/0,213 1,084 0,757-1,553
Генотип G/G 33/0,569 86/0,610 - 0,8782 0,887 0,574-1,372
Генотип G/A 23/0,397 50/0,355 1,134 0,730-1,761
Генотип A/A 2/0,034 5/0,035 0,980 0,297-3,226
APOB RS1042031
Аллель С 102/0,879 244/0,865 0,046 0,8311 1,095 0,680-1,763
Аллель Т 14/0,121 38/0,135 0,913 0,567-1,471
Генотип С/С 45/0,776 110/0,780 - 0,5943 0,983 0,585-1,650
Генотип СЯ 12/0,207 24/0,170 1,181 0,700-1,992
Генотип Т/Т 1/0,017 7/0,050 0,419 0,066-2,654
APOA5 Rs619054
Аллель G 92/0,793 211/0,748 0,681 0,4101 1,202 0,817-1,767
Аллель A 24/0,207 71/0,252 0,832 0,566-1,223
Генотип G/G 36/0,621 80/0,567 - 0,6462 1,171 0,747-1,835
Генотип A/G 20/0,345 51/0,362 0,949 0,601-1,499
Генотип A/A 2/0,034 10/0,071 0,557 0,154-2,010
APOC4 Rs1132899
Аллель T 68/0,586 157/0,557 0,183 0,6691 1,089 0,797-1,488
Аллель C 48/0,414 125/0,443 0,918 0,672-1,254
Генотип T/T 22/0,379 42/0,298 1,867 0,3943 1,289 0,831-1,999
Генотип T/C 24/0,414 73/0,518 0,742 0,477-1,155
Генотип C/C 12/0,207 26/0,184 1,105 0,652-1,874
APO H Rs4581
Аллель C 82/0,707 205/0,727 0,080 0,7781 0,933 0,668-1,303
Аллель A 34/0,293 77/0,273 1,072 0,767-1,498
Генотип C/C 31/0,534 70/0,496 - 0,0732 1,114 0,721-1,721
Генотип A/C 20/0,345 65/0,461 0,706 0,444-1,121
Генотип A/A 7/0,121 6/0,043 1,964 1,127-3,420
Таблица 4. Частота аллелей и генотипов 15 ОНП генов (продолжение)
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, p Отношение риска
повторный инсульт (n=58) первый инсульт (n=141) значение ДИ 95%
АРО D Rs7659
Аллель C 86/0,742 218/0,773 0,298 0,5851 0,886 0,628-1,252
Аллель T 30/0,259 64/0,227 1,128 0,799-1,593
Генотип C/C 31/0,534 88/0,624 - 0,2792 0,772 0,502-1,188
Генотип C/T 24/0,414 42/0,298 1,442 0,924-2,189
Генотип T/T 3/0,052 11/0,078 0,721 0,258-2,013
APO E Rs5174
Аллель C 68/0,586 139/0,493 2,505 0,1141 1,307 0,956-1,787
Аллель T 48/0,414 143/0,507 0,765 0,560-1,046
Генотип C/C 22/0,379 33/0,234 4,346 0,1143 1,600 1,041-2,459
Генотип C/T 24/0,414 73/0,518 0,742 0,477-1,155
Генотип T/T 12/0,207 35/0,248 0,844 0,489-1,454
ANGPT4 Rs1044250
Аллель C 78/0,672 200/0,709 0,368 0,5541 0,886 0,641-1,224
Аллель T 38/0,328 82/0,291 1,289 0,817-1,559
Генотип C/C 27/0,466 66/0,468 - 0,2042 0,993 0,634-1,533
Генотип C/T 24/0,414 68/0,482 0,821 0,528-1,277
Генотип T/T 7/0,120 7/0,050 1,814 1,022-3,219
ADIPOQ-AS1 Rs17366743
Аллель T 114/0,983 277/0,982 - 0,3214 1,020 0,313-3,326
Аллель C 2/0,017 5/0,018 0,980 0,301-3,194
Генотип T/T 56/0,966 136/0,965 - 0,9992 1,021 0,310-3,362
Генотип T/C 2/0,034 5/0,035 0,980 0,297-3,226
Генотип C/C 0/0,000 0/0,000 - -
ADIPOR Rs 12342
Аллель C 90/0,776 189/0,670 3,887 0,0491 1,476 1,009-2,159
Аллель T 26/0,224 93/0,330 0,677 0,463-0,990
Генотип C/C 36/0,621 62/0,440 5,387 0,0683 1,687 1,073-2,645
Генотип C/T 18/0,310 65/0,461 0,629 0,389-1,016
Генотип T/T 4/0,069 14/0,099 0,745 0,305-1,819
IL8 Rs 1803205
Аллель C 114/0,983 281/0,996 - 0,2054 0,433 0,192-0,978
Аллель T 2/0,017 1/0,004 2,310 1,022-5,219
Генотип C/C 56/0,966 140/0,993 - 0,2042 0,429 0,187-0,983
Генотип C/T 2/0,034 1/0,007 2,333 1,017-5,352
Генотип T/T 0/0,000 0/0,000 - -
MTHFR Rs1801131
Аллель T 86/0,741 196/0,695 0,645 0,4221 1,179 0,827-1,682
Аллель G 30/0,259 86/0,305 0,848 0,594-1,209
Генотип T/T 32/0,552 67/0,475 - 0,6282 1,243 0,830-1,923
Генотип T/G 22/0,379 62/0,440 0,837 0,534-1,312
Генотип G/G 4/0,069 12/0,085 0,847 0,352-2,038
MTHFR Rs1801133
Аллель G 81/0,698 194/0,688 0,007 0,9341 1,035 0,741-1,477
Аллель A 35/0,302 88/0,312 0,966 0,691-1,350
Генотип G/G 27/0,465 68/0,483 - 0,6552 0,953 0,617-1,472
Генотип G/A 27/0465 58/0,411 1,168 0,758-1,801
Генотип A/A 4/0,070 15/0,106 0,702 0,286-1,724
Таблица 4. Частота аллелей и генотипов 15 ОНП генов (окончание)
Аллели и генотипы N/частота аллелей и генотипов Значение х2 Уровень значимости, p Отношение риска
повторный инсульт, n=58 первый инсульт, n=141 значение ДИ 95%
GRM 3 RS2228595
Аллель C 112/0,966 265/0,940 - 0,4594 1,5600 0,637-3,818
Аллель T 4/0,034 17/0,060 0,641 0,262-1,570
Генотип C/C 54/0,931 125/0,887 - 0,7142 1,508 0,611-3,726
Генотип C/T 4/0,069 15/0,106 0,701 0,286-1,724
Генотип T/T 0/0,000 1/0,007 - -
BDNF Rs6265
Аллель C 104/0,897 245/0,869 0,001 0,9761 1,217 0,725-2,041
Аллель T 12/0,103 37/0,131 0,822 0,490-1,379
Генотип C/C 47/0,810 105/0,745 - 0,3262 1,321 0,748-2,334
Генотип C/T 10/0,172 35/0,248 0,713 0,393-1,292
Генотип T/T 1/0,018 1/0,007 1,728 0,425-7,029
молекулярно-генетических изменений, контролирующих различные патофизиологические механизмы развития ИИ, в сочетании с другими факторами риска может усиливать свое влияние на риск возникновения ИИ.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interest.
Литература/References
1. Стаховская Л.В., Котов С.В., Исакова Е.В. Инсульт: руководство для врачей. М.: Медицинское информационное агентство, 2013.
[Stakhovskaya L.V., Kotov S.V., Isakova E.V. Stroke: A Guide for Physicians. Moscow: Medical Information Agency, 2013 (in Russian).]
2. Adams HP, Bendixen BH, Kappelle J et al. Classification of subtype of acute ischemic stroke. Stroke 1993: 24 (1); 35-41.
3. Скворцова В.И., Шетова И.М., Шамалов Н.А. и др. Анализ ассоциации ДНК-маркеров с риском развития церебрального инсульта у лиц из славянской популяции. Вестник Российского государственного медицинского университета. 2011; 6: 62-6.
[Skvortsova V.I., Shetova I.M., Shamalov N.A. et al. Analiz assotsiatsii DNK-markerov s riskom raz-vitiia tserebral'nogo insul'ta u lits iz slavianskoi populiatsii. Vestnik Rossiiskogo gosudarstvennogo meditsinskogo universiteta. 2011; 6: 62-6 (in Russian).]
4. Торшин И.Ю., Громова О.А., Никонов А.А. Гены и цереброваскулярная патология, гены и нуклеотидные полиморфизмы при отдельных видах физиологических сдвигов и патологических процессов. Журн. неврологии и психиатрии (Прил. «Инсульт»). 2009; 5: 77-83.
[Torshin I.Iu., Gromova O.A., Nikonov A.A. Geny i tserebrovaskuliarnaia patologiia, geny i nukleo-tidnye polimorfizmy pri otdel'nykh vidakh fiziologicheskikh sdvigov i patologicheskikh protsessov. Zhurn. nevrologii i psikhiatrii (Pril. ""Insult"). 2009; 5: 77-83 (in Russian).]
5. Fornage M. Genetics of stroke. Curr Atheroscler Rep 2009; 11: 167-74.
6. Ikram MA, Seshadri S, Bis JC et al. Genome wide association studies of stroke. N Eng J Med 2009; 360 (17): 1718-28.
7. Malik R, Traylor M, Pulit SL. Low-frequency and common genetic variation in ischemic stroke: the METASTROKE collaboration. Nature 2016; 86 (13): 1217-26.
8. Шишкова В.Н., Адашева Т.В., Ременник А.Ю. и др. Изучение ассоциаций полиморфных вариантов генов липидного и углеводного обменов, сосудистого воспаления и нейротрансмит-терных систем с развитием первого ишемического инсульта. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2017; 16 (5): 27-31.
[Shishkova V.N., Adasheva T.V., Remennik A.Iu. et al. Izuchenie assotsiatsii polimorfnykh variantov genov lipidnogo i uglevodnogo obmenov, sosudistogo vospaleniia i neirotransmitternykh sistem s razvitiem pervogo ishemicheskogo insul'ta. Kardiovaskuliarnaia terapiia i profilaktika. 2017; 16 (5): 27-31 (in Russian).]
9. Hixson JE, Vernier DT. Restriction isotyping of human apolipoprotein E by gene amplification and cleavage with Hhal. J Lipid Res 1990; 31 (3): 545-8.
10. Ньюссбаум Р.Л., Мак-Иннес Р.Р., Виллард Х.Ф. Медицинская генетика: учеб. пособие. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.
[Newssbaum R.L., Mclnnes R.R., Willard H.F. Medical genetics: textbook. Moscow: GEOTAR-Media, 2010 (in Russian).]
11. Кошечкин В.А., Рожкова Т.А., Малышев П.П. Практическая липидология с методами медицинской генетики. Руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2019.
[Koshechkin V.A., Rozhkova T.A., Malyshev P.P. Practical lipidology with methods of medical genetics. Guide. Moscow: GEOTAR-Media, 2019 (in Russian).]
12. Wang Y, Liu F, Li L et al. The association between apolipoprotein A1-C3-A5 gene cluster promoter polymorphisms and risk of ischemic stroke in the northern Chinese Han population. J Int Med Res 2017; 45 (6): 2042-52.
13. Kucherenko AM, Shulzhenko DV, Kuznetsova SM et al. Association of IL8 and IL10 gene allelic variants with ischemic stroke risk and prognosis. Biopolym Cell 2014; 30 (3): 234-8.
14. Шишкова В.Н., Адашева Т.В., Ременник А.Ю. Прогностическая значимость клинико-антро-пометрических, биохимических, метаболических, сосудисто-воспалительных и молеку-лярно-генетических маркеров в развитии первого ишемического инсульта. Журн. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2018; 118 (2): 4-11.
[Shishkova V.N., Adasheva T.V., Remennik A.Iu. Prognosticheskaia znachimost' kliniko-antropomet-richeskikh, biokhimicheskikh, metabolicheskikh, sosudisto-vospalitel'nykh i molekuliarno-genetic-heskikh markerov v razvitii pervogo ishemicheskogo insul'ta. Zhurn. nevrologii i psikhiatrii im. S.S. Korsakova. 2018; 118 (2): 4-11 (in Russian).]
15. Zhu R, Zhao Y, Xiao T et al. Association between microRNA binding site polymorphisms in im-munoinflammatory genes and recurrence risk of ischemic stroke. Genomics 2020; 112 (3): 2241-6.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ / INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Шишкова Вероника Николаевна - канд. мед. наук, ст. науч. сотр., врач-эндокринолог ГБУЗ ЦПРиН, ФГБОУ ВО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова». E-mail: veronika-1306@mail.ru; ORCID: 0000-0002-1042-4275
Адашева Татьяна Владимировна - д-р мед. наук, проф. каф. поликлинической терапии ФГБОУ ВО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова». ORCID: 0000-0002-3763-8894
Стаховская Людмила Витальевна - д-р мед. наук, проф. каф. неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики ФГБОУ ВО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова»
Ременник Алла Юрьевна - канд. мед. наук, зав. клинико-биохимической лаб. ГБУЗ ЦПРиН Валяева Вера Владиленовна - врач-лаборант клинико-биохимической лаб. ГБУЗ ЦПРиН
Veronika N. Shishkova - Cand. Sci. (Med.), Center for Speech Pathology and Neurorehabilitation, Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry. E-mail: veronika-1306@mail.ru; ORCID: 0000-0002-1042-4275
Tatiana V. Adasheva - D. Sci. (Med.), Prof., Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry. ORCID: 0000-0002-3763-8894
Liudmila V. Stakhovskaia - D. Sci. (Med.), Prof., Pirogov Russian National Research Medical University
Alla lu. Remennik - Cand. Sci. (Med.), Center for Speech Pathology and Neurorehabilitation Vera V. Valiaeva - doctor-laboratory assistant, Center for Speech Pathology and Neurorehabilitation
Статья поступила в редакцию / The article received: 19.08.2020 Статья принята к печати / The article approved for publication: 20.11.2020
