CC BY
16УДК 612.017.1:634.7
DOI 10.29141/2500-1922-2023-8-2-12
EDN VBLJLG
Роль микронутриентов в регуляции экспрессии генов провоспалительных цитокинов при ковидном и постковидном синдромах
М.Н. Школьникова1 Е.В. Аверьянова2, Е.Д. Рожнов2
1Уральский государственный экономический университет, г. Екатеринбург, Российская Федерация
2Бийский технологический институт (филиал) Алтайский государственный технический университет им. И.И. Ползунова, г. Бийск, Российская Федерация Н shkolnikova.m.n@mail.ru
Реферат
Ряд микронутриентов в пищевом рационе рассматриваются как вещества, способные ингибировать экспрессию генов циклооксигеназ ЦОГ-1 и ЦОГ-2 и индуцибельной NO-синтазы - маркеров воспалительного процесса при COVID-19. Цель исследования: разработка состава композиции микронутриентов - ингибитора гипервоспалительной реакции как эффективного компонента персонифицированного питания при ковидном и постковидном синдромах. Показан противовоспалительный потенциал некоторых микронутриентов; доказано воздействие флавоноидов, аскорбиновой кислоты, глицирризиновой кислоты и цинка на разные мишени, на основе чего разработаны двух-, трех- и четырехкомпонентные составы композиций перечисленных ми-кронутриентов в разных соотношениях, что обеспечит эффективность в отношении большего количества мишеней. Для доклинических исследований противовоспалительной активности с помощью регрессионного анализа отобраны шесть образцов композиции с максимальными значениями антиоксидантной активности. Биологическую активность образцов композиций определяли: in vitro - с использованием специфических ферментных биотест-систем на основе индуцибельной NO-синтазы и соответствующего программного обеспечения, in vivo - на модели острого асептического и хронического воспаления на 220 аутбредных крысах-самцах линии Вистар. В эксперименте in vitro установлено, что противовоспалительная активность экспериментальных образцов композиции микронутриентов уменьшается в ряду: III-2 > III-1 > VI-2 > VI-1 > I. При анализе плазмы крови крыс in vivo доказано, что при длительном курсовом применении образцы композиции микронутриентов III-1, III-2, VI-1 и VI-2 проявляют выраженный антиэкссудативный эффект и приводят к достоверному снижению ЦОГ-2. Установлено, что курсовое введение композиции микронутриентов в дозе 25 мг/кг приводит к достоверному снижению концентрации ЦОГ-2 во всех исследуемых группах животных. В большей степени подавление активности ЦОГ-2 наблюдалось в образце III-2. Трехкомпонентный состав данной композиции, включающий микронизированную очищенную флавоноидную фракцию облепихового шрота, глицирризиновую и аскорбиновую кислоты в соотношении 30:10:100, может быть рекомендован в качестве биологически активной добавки к пище в рационе персонифицированного питания при ковидном и постковидном синдромах.
Финансирование: Работа выполнена в рамках госзадания Минобрнауки РФ (мнемокод 0611-2020-013; номер темы FZMM-2020-0013, ГЗ № 075-00316-20-01).
Для цитирования: Школьникова М.Н., Аверьянова Е.В., Рожнов Е.Д. Роль микронутриентов в регуляции экспрессии генов провоспалительных цитокинов при ковидном и постковидном синдромах// Индустрия питания|Food Industry. 2023. Т. 8, № 2. С. 116-129. DOI: 10.29141/2500-1922-2023-8-2-12. EDN: VBLJLG.
Дата поступления статьи: 28 марта 2023 г.
Ключевые слова:
микронутриенты;
флавоноиды;
аскорбиновая кислота;
глицирризиновая кислота;
цинк;
экспрессия генов; воспалительная реакция;
противовоспалительный эффект; персонифицированное питание
Micronutrients Role in the Proinflammatory Cytokine Gene Expression Regulation in COVID-19 and Post-COVID-19 Syndromes
Marina N. Shkolnikova1 Elena V. Averyanova2, Evgeny D. Rozhnov2
1Ural State University of Economics, Ekaterinburg, Russian Federation
2Biysk Technological Institute (Branch) of the Altay State Technical University n.a. Ivan I. Polzunov, Biysk, Russian Federation
Abstract
A number of micronutrients in the diet are substances capable of inhibiting the genes expression of cyclooxygenases COX-1 and COX-2 and inducible NO synthase that are markers of the inflammatory process in COVID-19. The study aims at the development of the composition micronutrients - an inhibitor of hyperinflammatory reaction as an effective component of personalized nutrition in COVID and post-COVID syndromes. The thesis presents the anti-inflammatory potential of some micronutrients; proves the impact of flavo-noids, ascorbic acid, glycyrrhizic acid and zinc on different targets; describes developed two-, three- and four-component compositions of the listed micronutrients in different ratios, which will ensure effectiveness against a larger number of targets. For preclinical studies of anti-inflammatory activity, a man selected six composition samples with maximum values of antioxidant activity using regression analysis; determined the biological activity of the composition samples: in vitro - using specific enzyme biotest systems based on inducible NO synthase and appropriate software, in vivo - on a model of acute aseptic and chronic inflammation in 220 outbred male Wistar rats. In vitro experiment confirms that the anti-inflammatory activity of experimental samples of the micronutrients composition decreases in the following series: III-2 > III-1 > VI-2 > VI-1 > I. The blood plasma analysis of rats in vivo proves that with prolonged course use, micronutrients composition samples III-1, III-2, VI-1 and VI-2 exhibit a pronounced antiexudative effect and lead to a significant decrease in COX-2. The course micronutrients composition introduction at a dose of 25 mg/kg leads to a significant decrease in the COX-2 concentration in all the studied animal groups. There is the COX-2 activity suppression in sample III-2 to a greater extent. The authors recommend the three-component composition including a micronized purified flavonoid fraction of sea buckthorn meal, glycyrrhizic and ascorbic acids in a ratio of 30:10:100 as a biologically active food additive in the diet of personalized nutrition for COVID and post-COVID syndromes.
Funding: The work was carried out within the framework of the state task of the Ministry of Education and Science of the Russian Federation (mnemocode 0611-2020-013; topic number FZMM-2020-0013, SA No. 075-00316-20-01)
For citation: Marina N. Shkolnikova, Elena V. Averyanova, Evgeny D. Rozhnov. Micronutrients Role in the Proinflammatory Cytokine Gene Expression Regulation in COVID-19 and Post-COVID-19 Syndromes. Индустрия питания|Food Industry. 2023. Vol. 8, No. 2. Pp. 116-129. DOI: 10.29141/2500-1922-2023-8-2-12. EDN: VBLJLG.
Paper submitted: March 21, 2023
Введение
Развитие нутригеномики в новом тысячелетии привело к пониманию значения микрону-триентов для обеспечения нормальной жизнедеятельности человека: поддержания обмена веществ, работоспособности, снижения утомляемости, профилактики и комплексной терапии различных заболеваний, в том числе генетических. Потребность организма в определенных микронутриентах зависит не только от пола, возраста и физического состояния человека, но и от
E3 shkolnikova.m.n@mail.ru
Keywords:
micronutrients; flavonoids; ascorbic acid; glycyrrhizic acid; zinc;
gene expression; inflammatory response; anti-inflammatory effect;
personalized nutrition.
его генетических особенностей [1]. При этом имеются убедительные доказательства влияния микронутриентов на экспрессию генов различными способами: напрямую, через их метаболиты или посредством молекул, участвующих в передаче сигнала [2].
Некоторые БАВ в составе пищевых продуктов, в частности флавоноиды (генистеин и ресвера-трол), являются лигандами для факторов транскрипции и, таким образом, непосредственно
изменяют экспрессию генов. Дефицит ряда ми-кронутриентов, в том числе витамина С и цинка, может вызывать изменения в ДНК (разрыв и мутацию), аналогичные тем, которые наблюдаются после облучения. Молекула кверцетина способна ингибировать экспрессию генов ЦОГ-2 и iNOS, уменьшая перенос транскрипционного фактора каппа-би (NF-кB) из цитоплазмы в ядро. Пищевые вещества могут метаболизироваться различными путями, изменяя концентрацию субстратов или промежуточных продуктов, влияющих на экспрессию генов. И наоборот, субстраты или промежуточные соединения могут воздействовать на сигнальные пути клетки, участвующие в экспрессии генов, или изменять их. Более того, пищевые вещества могут напрямую изменять пути передачи сигналов, ответственных за изменение экспрессии генов. Основное внимание нутригеномных исследований сосредоточено на SNP-вариациях последовательности ДНК, на которые приходится 90 % всех генетических вариаций человека. Многие из них влияют на риск развития различных хронических заболеваний [3].
Учитывая биологическую активность минорных компонентов пищи и их терапевтический эффект, экспрессию генов необходимо рассматривать во взаимосвязи с микронутриентами специализированного персонифицированного питания, так как изменение рациона в конечном итоге оказывает влияние на большинство клеток в организме. Поэтому питание, будучи одним из факторов модификации молекулярной среды обитания клетки, в настоящее время рассматривается как средство регулирования экспрессии генов и является одной из областей современных научных исследований нутригеномики.
Следует отметить, что наиболее широко представлена научная информация, касающаяся ну-тригенономики неинфекционных алиментарно-зависимых заболеваний (диабет, ожирение, сердечно-сосудистые и др.) [4], тогда как в современных реалиях инфекционные, в том числе вирусные, заболевания становятся все более опасными.
Так, за 2020-2022 гг. распространение корона-вирусной инфекции COVID-19, вызванной вирусом SARS-CoV-2, крайне негативно повлияло на здоровье миллионов россиян, создав серьезный вызов системе здравоохранения и глобальной экономической стабильности. Особенностью SARS-CoV-2 является высокая скорость инфицирования в сочетании с повышенным риском тяжелого течения и летальности, главным образом из-за возникновения острого респираторного дистресс-синдрома и связанного с ним при превышении резервных возможностей организма стремительного развития вирус-индуцирован-
ного вторичного гемофагоцитарного синдрома (цитокинового шторма) на фоне значительной выработки иммунными клетками провоспали-тельных цитокинов, что приводит к госпитализации и смертности более чем в 40 % случаев [5; 6]. При этом для COVID-19 характерен цитокиновый шторм с лавинообразным повышением многочисленных маркеров воспаления (С-реактивный белок (СРБ), ^-6, ^-у и др.) на фоне усиленного апоптоза Т-лимфоцитов [7], поэтому тактически важным является максимально быстрое купирование этого процесса, что снижает риск летальных исходов [8].
Клиническими исследованиями доказано, что у пациентов с тяжелой формой COVID-19 цитокиновый шторм проявляется в неконтролируемой, часто фатальной активации иммунной системы и сопровождается высвобождением провоспа-лительных цитокинов, маркерами которых в сыворотке крови являются изоформы циклоокси-геназ ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в количестве, значительно превышающем норму. В связи с этим ингибиро-вание гипервоспалительной и регуляция иммунных реакций является важной стратегией ослабления цитокинового шторма [9].
Доказано, что снизить избыточный синтез провоспалительных цитокинов позволяет ряд микронутриентов, в числе которых фитопрепараты (флавоноиды, глицирризиновая кислота (ГК) и др.), минеральные вещества (цинк, магний и др.) и витамины (аскорбиновая кислота (АК), витамин D), а их адекватное потребление имеет большое значение для поддержания иммунитета в целом [10-12].
Предположительно аналогичный противовоспалительный эффект при цитокиновом шторме присущ и флавоноидому комплексу (в составе которого рутин, кверцетин, кемпферол и изо-рамнетин), выделенному из облепихового шрота. Так, имеются данные о высокой активности экстрактов облепихи против вирусов гриппа А в сравнении с противовирусными средствами [13]. Общеизвестен синергетический эффект флаво-ноидов и АК, который доказан на примере пары кверцетин - АК, проявляющей анти-SARS-CoV-2 и иммуномодулирующую активность [14; 15].
Вместе с тем на сегодняшний день не представлены исследования об эффективности их совместного действия и (или) реализации потенциальных механизмов подавления гипервоспалительной реакции при цитокиновом шторме. В то же время известно, что каждое из этих веществ оказывает доказанное воздействие на разные мишени, а их комбинация позволит составу проявлять эффективность в отношении большего количества мишеней. Поэтому требуются дополнительные исследования комби-
наций флавоноидов, АК, ГК и цинка с анализом реакционной способности составов и биохимических показателей, действие которых направлено в первую очередь на активные центры ферментов, в частности циклооксигеназу ЦОГ-2, так как ингибирование именно ЦОГ-2 обусловливает противовоспалительное действие.
Исследование составов для получения неогаленовых препаратов, регулирующих гипервоспалительную реакцию при цитокиновом шторме, является одной из актуальных задач эффективной терапии вируса SARS-CoV-2, требующей оперативного решения. Имеющиеся научные данные о противовоспалительной активности ряда флавоноидов, глицирризиновой, аскорбиновой кислот и ионов цинка в отношении вируса SARS-CoV-2 [16-18] и результаты собственных исследований, подтверждающие противовоспалительную активность флавоноидов облепихового шрота in vitro и in vivo [19; 20] позволили сформулировать цель настоящего исследования: разработка состава композиции микронутриен-тов - ингибитора гипервоспалительной реакции как эффективного компонента персонифицированного питания при ковидном и постковидном синдромах.
Объекты и методы исследования
Этапы исследования и последовательность их выполнения представлены на схеме рис. 1.
На этапе обоснования составов композиции использованы данные крупнейших мировых и российских баз (ISI Web of Knowledge, MEDLINE Science Direct и Google Scholar) и библиотек (cyberleninka.ru, elibrary.ru). Поиск литературы проводили по ключевым словам и названиям конкретных генов, цитокинов и мишеней. Анализ массива данных позволил систематизировать результаты поиска по подавлению гипервоспалительной реакции при цитокиновом шторме микронутриентами различной природы (табл. 1).
Течение вирусных инфекций усугубляют патологии, в генезе которых определяющим фактором является развитие окислительного стресса: диабет, ожирение и гипертония [3]. Снижение риска возникновения патологий может быть достигнуто либо путем введения антиоксидант-ных соединений, обладающих противоокисли-тельной и противовирусной активностью, либо путем комбинирования противовирусных препаратов с соединениями, способными усиливать антиоксидантную защиту организма [25; 26]. На основании этого были рассмотрены двух-, трех- и четырехкомпонентные композиции, составленные из микронутриентов разных групп (табл. 1) в различных соотношениях, и определена их ан-тиоксидантная активность (АОА) амперометри-ческим методом по ГОСТ Р 54037-2010. Регрессионный анализ полученных данных позволил получить уравнение зависимости АОА композиции микронутриентов от состава и соотношения компонентов:
АОА (мг/г) = 0,7252 - 0,0026*1 - 0,0206Х2 -- 0,0048Х3 + 0,0049Х4,
где Х1 - содержание МОФФ ОШ в композиции, мг; Х2 - содержание ГК в композиции, мг; Х3 -содержание цитрата цинка в композиции, мг; Х4 - содержание аскорбиновой кислоты в композиции, мг.
На этапе исследования противовоспалительной активности объектами являлись шесть образцов композиции микронутриентов, состав и значения АОА которых приведены в табл. 2.
Микронизированная очищенная флавоноид-ная фракция облепихового шрота (МОФФ ОШ) получена по оригинальной запатентованной технологии [27];глицирризиновая кислота выделена из корней и корневища солодки голой (Glycyrrhizza glabra L.) по [28]; аскорбиновая кислота (CAS: 50-81-7) и цитрат цинка (CAS: 546-46-3) -коммерческие образцы.
А. Анализ литературных источников
£ак ^►ДШ
ФФ ОШ
ГК
МОФФ
Б. Выбор компонентов композиции
in silico
В.
Получение вариантов композиции
Д-1. Исследования
in vitro
Д-2. Исследования
m vivo
Исследование АОА составов композиции
Доклинические исследования отобранных
составов композиции
Рис. 1. Общая схема экспериментальных исследований Fig. 1. General Scheme ofExperimental Studies
Таблица 1. Противовоспалительный потенциал микронутриентов разработанной композиции Table 1. Anti-Inflammatory Potential of Micronutrients of the Developed Composition
Вид микронутриента Мишени Доказательство фармакологической активности
Фитопрепараты
Флавонолы (кверцетин, кемпферол) У человека: ангиотензин-превращающий фермент 2 (АПФ 2), сериновая протеаза 2 (TMPRSS 2). У вируса: белок Мрг° (двойная активность) In silico [21]
Флаваноны (нарингенин, гесперетин) Провоспалительные цитокины (1ЫР и И-б); белок-медиатор цитокиновой реакции амфо-терин (HMGB 1) In vivo на модели индуцированных эндогенной интоксикацией бактериальным ли-пополисахаридом (LPS); in vitro на модели ишемического повреждения миокарда [12]
Сапонины (глицирризино-вая кислота) Проинфекционные медиаторы посредством контроля рецепторов протеинкиназ и, как следствие, снижения продуцирования воспалительных цитокинов In vitro, in vivo на модели вирусной пневмонии [22; 23]
Витамины
Аскорбиновая кислота Ускоряет деградацию гистамина, угнетает образование простагландинов и других медиаторов воспаления In vito, in vivo при терапии коронавируса [23; 24]
Минеральные вещества
Цинк Универсальный фактор транскрипции (NF-kB); провоспалительные цитокины (ФНО-а, IL-6 и IL-12B) In silico, in vitm [S]
Таблица 2. Состав образцов композиции микронутриентов, используемых на этапе доклинических исследований Table 2. Composition of Micronutrient Composition Samples Used at the Preclinical Research Stage
Вариант композиции Компоненты композиции Соотношение
МОФФ ОШ Глицирризиновая кислота Цитрат цинка Аскорбиновая кислота компонентов композиции АОА, мг/г
I 5,1422 G,S56S - - 3G:5:G:G G,61GG ± G,G4SS
II 1,5G4S G,522G 3,9132 - 3G:1G:75:G G,GS67 ± G,GG61
III-1 1,3332 G,222G - 4,4448 30:10:0:100 1,1742 ± G,GSS1
III-2* 1,3332 G,222G - 4,4448 30:10:0:100 1,1742 ± G,GSS1
VI-1 G,8376 G,2796 2,G92S 2,7912 30:10:75:100 G,61GG ± G,G5GS
VI-2* G,8376 G,2796 2,G92S 2,7912 30:10:75:100 G,61GG ± G,G5GS
Примечание. * Фракция флавоноидов облепихового шрота немикронизированная.
В процессе исследования были использованы методы выявления биологической активности композиции с применением специфических ферментных биотест-систем /п уИтго на основе индуцибельной NO-синтазы (iNOS) (входит в состав «Биологические коллекции специфических ферментных биотест-систем /п уИтго (БК-СФБТС)» ФГБНУ ВИЛАР, г. Москва). Активность ферментативной реакции в экспериментах оценивали по скорости реакции, катализируемой iNOS /п уИтго при температуре 37 °С. Скорость iNOS-реакции до (контроль) и после добавления тестируемого вещества (опыт) определяли по изменению поглощения НАДФН в процессе iNOS-реакции на
двулучевом спектрофотометре марки Shimadzu UV-1800 (Япония), используя программу «Кинетические исследования». Кинетическую скорость ферментативной реакции, катализируемой iNOS, рассчитывали до (контроль) и после (опыт) добавления в пробу исследуемых образцов композиции, используя молярный коэффициент экстинкции, равный 6,22 тМ-1 [29].
Для оценки противовоспалительной активности исследуемых составов in vivo определяли их влияние на разные стадии процесса воспаления -острого асептического и хронического, являющихся наиболее распространенными моделями экссудативной фазы воспаления. На данном
этапе исследования эксперименты проведены на 220 аутбредных крысах-самцах линии Вистар возрастом 4-5 мес. и массой от 250 до 350 г, в каждой опытной и контрольной группах по 10 животных. Животные были выращены в отделении генетики животных и человека ФИЦ «Институт цитологии и генетики» СО РАН (г. Новосибирск). Исследования на крысах проводили с соблюдением ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур» и правил, принятых Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (г. Страсбург, 1986). Эвтаназию животных осуществляли с соблюдением требований Хельсинкской декларации о гуманном отношении (г. Хельсинки, 2002) путем декапита-ции на гильотине лабораторной (после наркотизации диэтиловым эфиром) с одновременным забором биологического материала. Все процедуры с животными в исследовании проводили в соответствии с этическими нормами обращения с животными, принятыми Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях, принятой Европейским союзом в 1986 г.; Директивой Совета 86/609/ЕЕС, основанной на тексте соглашения Dr. Robert Hubrecht, Current EU Legislation Controlling Animal Experiments, и в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств, утвержденными решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. № 81. Служба контроля качества лаборатории осуществляла проверку плана, хода исследования и итогового протокола.
При моделировании острого асептического воспаления животным опытных групп (по 10 особей) ежедневно вводили 1 мл экстракта композиции, соответствующей номеру в табл. 2, в 1 % растворе крахмального клейстера в дозе 25 мг/кг в течение 10 сут; контрольная группа животных (10 особей) получала аналогичный раствор крахмального клейстера, но без внесения экстракта.
При моделировании хронического воспаления животным опытных и контрольной групп вводили растворы в соответствии с дизайном моделирования острого асептического воспаления, но продолжительностью 14 сут.
До начала применения экстрактов животных всех групп помещали в общие клетки. Затем животным опытных групп вводили варианты композиций в дозе 25 мг/кг в 1 мл 1 % раствора крахмального клейстера; в контрольных группах - 1 мл 1 % раствора крахмального клейсте-
ра. Данная схема применения препарата была выбрана исходя из рекомендаций «Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств» [30]. На протяжении всего эксперимента для кормления крыс использовался стандартный лабораторный рацион. По истечении исследований на модели хронического воспаления у крыс каждой группы проводили забор крови и подвергали их эвтаназии под наркозом.
Забор крови у экспериментальных животных, которые были предварительно наркотизированы эфирным наркозом, осуществляли после окончания эксперимента. Кровь для проведения диагностических манипуляций в объеме 5 мл забирали из печеночного синуса крыс в полистироловый градуированный шприц с широкой иглой согласно рекомендации Американского комитета стандартизации клинических лабораторий (NCCLS: National Committeefor Clinical Laboratory Standards, стандарт Н 21-А2 1991).
Для получения сыворотки крови использовали стерильные пробирки, вымытые в растворе мыла и промытые дистиллированной водой. Пробирки имели комнатную температуру, так как кровь плотно пристает к стенкам пробирок и наступает частичный гемолиз эритроцитов. Пробирки с кровью устанавливали в термостат при температуре 37 °С на 1 ч, затем переносили на холод. Через 4 ч сыворотка в виде прозрачной жидкости отделялась от кровяного сгустка. Для лучшего выделения сыворотки образовавшийся сгусток фибрина отделяли от стенок пробирок, обводя стеклянной палочкой. С целью быстрого получения сыворотки свернувшуюся кровь центрифугировали при 2000-2500 об/мин в течение 15-20 мин.
Содержание ферментов ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в сыворотке крови определяли методом иммунофер-ментного анализа (ИФА). Результаты ИФА определяли по интенсивности окраски на фотометре при длине волны 450 нм и пересчитывали на концентрацию фермента с использованием гра-дуировочного графика и программного обеспечения Curve Expert 1.4.
Обработку результатов экспериментальных исследований проводили с использованием пакета программ статистического анализа Statistica 13,0 (Stat Soft, США). Для оценки значимости отличий между выборками с распределением, приближающимся к нормальному, использовался t-критерий Стьюдента. Критический уровень значимости P при проверке статистических гипотез принимался на уровне 0,05. Рассчитывали медиану и интерквартильный размах (25 %; 75 %). Для выявления статистической значимости различий в связи с отсутствием нормально-
сти распределения использовали непараметрические критерии, а именно: для оценки различий зависимых выборок - критерий Вилкоксона, для оценки различий независимых выборок - критерий Манна - Уитни [30].
Результаты исследования и их обсуждение
Показано (табл. 1), что флавоноиды, АК, ГК и цинк оказывают доказанное воздействие на разные мишени, а их комбинация позволит составу проявлять эффективность в отношении большего количества мишеней.
Эффективность противовоспалительного действия экспериментальных образцов композиции оценивали по скорости ферментативной реакции, катализируемой индуцибельной NO-синта-зой (iNOS), являющейся маркером развития воспалительного процесса в организме. Результаты представлены в табл. 3.
Из результатов, представленных в табл. 3, следует, что образцы композиции III-1 и III-2 снижали скорость iNOS-реакции в два раза, что свидетельствует об их противовоспалительных свойствах. Образцы I, VI-1 и VI-2 также ингибировали скорость iNOS-реакции по сравнению с контролем на 13,0; 26,0 и 29,1 % соответственно, что свидетельствует о менее выраженных противовоспалительных свойствах по сравнению с образцами III-1 и III-2. Образец II достоверного влияния на активность iNOS не оказывал, что позволяет предположить, что iNOS не является для него основной мишенью.
Нарушение микроциркуляции и формирование отека относятся к основным «классическим» признакам воспаления. Известно, что процесс формирования каррагенинового отека в течение первого часа связан с дегрануляцией тучных клеток и высвобождением таких медиаторов воспа-
ления, как гистамин и серотонин. В последующие 60 мин флогогенный эффект поддерживается накапливающимся в очаге воспаления брадики-нином, а после этого - простагландинами типа Е [31]. Координацию иммунокомпетентных клеток в очаге воспаления и модуляцию процессов экссудации обеспечивают цитокины. Примерами провоспалительных цитокинов являются фактор некроза опухоли (TNF-a) и интерлейкин-6 (^-6), наиболее важный индуктор белков острой фазы.
Согласно исследованиям, проведенным ранее, присутствие в кольце В хромона флавонолов (рутина и кверцетина) 4'- и (или) 3',4'-гидрок-сильных групп определяет их ингибирующую активность в отношении гистамина, триптазы, интерлейкинов ^-6 и ^-8, высвобождаемых макрофагами и тучными клетками [32].
Исходя из вышеизложенного можно предположить, что определенный вклад в снижение секреции медиаторов воспаления и цитокинов, вероятно, вносят содержащиеся в МОФФ ОШ флавонолы, что подтверждается полученными экспериментальными данными (рис. 2 и 3).
Как видно из представленных данных, превентивное применение МОФФ ОШ совместно с ми-кронутриентами в разных соотношениях (образцы 1^1-2) в дозе 25 мг/кг существенно подавляло формирование воспалительного отека конечности крыс, индуцированного субплантарным введением каррагенина. Уже через час после применения препарат более чем на 30 % подавлял выраженность экссудативной реакции. Антиэкс-судативное действие образцов композиции (111-1-VI-2) сохранялось на высоком уровне в течение 2 ч эксперимента, а затем несколько ослабевало. Введение образцов композиции I и II приводило к потере антиэкссудативного эффекта к четвертому часу экспериментального наблюдения.
Таблица 3. Влияние БАВ экспериментальных экстрактов на скорость ферментативной реакции, катализируемой iNOS, в условиях опытов in vitro (М ± m) Table 3. Impact of Experimental Extracts BAS on the Rate of Enzymatic Reaction Catalyzed by iNOS under In Vitro Experiments (M ± m)
Вариант опытов Скорость ферментативной реакции, катализируемой iNOS in vitro, мкмоль НАДФН/мг белка в минуту Отношение опыт/контроль, %
Контроль (без препарата) 4,73 ± 0,26 100,00
Образец I 4,11 ± 0,13* 87,00
Образец II 5,02 ± 0,21 106,24
Образец III-1 2,44 ± 0,14* 51,50
Образец III-2 2,28 ± 0,18* 48,25
Образец VI-1 3,50 ± 0,22* 74,00
Образец VI-2 3,35 ± 0,19* 70,10
Примечание. * Статистическая значимость отличий от контроля при р < 0,05. 122
N1-1 IN-2 VI-1 VI-2
Через 1ч после инъекции каррагенина
Через 2 ч после инъекции каррагенина
Через 4 ч после инъекции каррагенина
Продолжительность образования отека, ч
Рис. 2. Прирост объема отека конечности опытных крыс на фоне длительного введения композиции микронутриентов Fig. 2. Limb Edema Volume Increase in Experimental Rats against the Background of Prolonged Micronutrients Composition Introduction
к 10 X л
5ss
s £
is Ь 5 S
О m m s
s
I-
o
Q.
80 70 60 50 40 30 20 10
il , Hl , У! ! И!
Через 1 ч после инъекции каррагенина
Через 2 ч после инъекции каррагенина
Через 4 ч после инъекции каррагенина
I
-1
II-2
VI-1
VI-2
Варианты опытов
Рис. 3. Противовоспалительная активность образцов композиции микронутриентов при каррагениновом отеке конечности крыс Fig. 3. Anti-Inflammatory Activity of Micronutrient Composition Samples in Carrageenan Rat Limb Edema
В некоторой степени описанный противовоспалительный эффект всех образцов композиции можно объяснить их АОА, так как известно, что существенный вклад в развитие экссудативной фазы воспаления вносят процессы свободнора-дикального окисления и нарушение трансмембранной проницаемости. В условиях повышенной функциональной активности при воспалении гранулоциты становятся источником не только первичных активных форм кислорода (АФК), но и вторичных кислород- и углерод-центрирован-ных радикальных интермедиатов. Гиперпродукция последних ассоциирована с избыточной выработкой и секрецией ряда провоспалительных цитокинов, медиаторов воспаления и активацией системы комплимента [33]. Можно предположить, что наличие в МОФФ ОШ флавоноидов (рутина, кверцетина, кемпферола и изорамне-тина) нейтрализует АФК и ингибирует развитие воспаления на начальных стадиях.
Однако антиэкссудативный эффект образцов композиции лишь в некоторой степени уклады-
вался в теорию антиоксидантной защиты клеток в очаге воспаления. В частности, показано, что противовоспалительный эффект развивался при использовании образцов композиции в дозе 25 мг/кг, что соответствует оксидантному действию препарата в условиях эксперимента. Это может означать, что приоритетными механизмами снижения экссудативной фазы воспаления образцами композиции являются не антиоксидантные свойства препарата, а иные системы. Учитывая эффективность образцов композиции в период энергичного нарастания отека, можно предположить его вмешательство в пусковые механизмы воспалительного процесса.
При изучении антипролиферативных свойств образцов композиции микронутриентов при курсовом применении во всех опытах выявлялась явная тенденция к ослаблению пролифератив-ного компонента воспалительной реакции, которая, впрочем, не достигала уровня достоверных различий у большинства образцов (табл. 4).
ISSN 2686-7982 (Online) ISSN 2500-1922 (Print)
Т. 8 № 2 2023
ИНДУСТРИЯ
ПИТАНИЯ INDUS
Таблица 4. Влияние длительного курсового применения композиции микронутриентов на развитие хронического пролиферативного воспаления Table 4. Impact of the Long-Term Micronutrients Composition Course Use on the Chronic Proliferative Inflammation Development
Группа животных Влажная масса, г Сухая масса, мг Масса грануляционно-фиброзной ткани, мг
Контрольная 0,18 (0,17; 0,21) 0,09 (0,08; 0,11) 0,09 (0,08; 0,10)
I 0,18 (0,16; 0,21) Рк = 0,257 0,08 (0,07; 0,10) Рк = 0,096 0,10 (0,08; 0,11) Рк = 0,678
II 0,17 (0,16; 0,18) Рк = 0,307 0,09 (0,08; 0,10) Рк = 0,385 0,08 (0,07; 0,10) Рк = 0,571
III-1 0,19 (0,17; 0,20) Рк = 1,000 0,09 (0,09; 0,10) Рк = 0,970 0,09 (0,09; 0,10) Рк = 0,970
III-2 0,18 (0,17; 0,20) Рк = 0,678 0,08 (0,06; 0,10) Рк = 0,199 0,10 (0,09; 0,11) Рк = 0,427
VI-1 0,17 (0,14; 0,23) Рк = 0,734 0,09 (0,06; 0,11) Рк = 0,521 0,09 (0,08; 0,11) Рк = 0,910
VI-2 0,18 (0,16; 0,20) Рк = 0,762 0,09 (0,05;0,11) Рк = 0,571 0,10 (0,08; 0,11) Рк = 0,678
Примечание. рк - показатель статистической значимости внутригрупповых различий по сравнению с контрольной группой.
Из табл. 4 видно, что масса сухой и влажной воспалительных гранулем, равно как и разность между ними, существенно не отличались от аналогичных показателей, зафиксированных в контрольной группе животных, не получавших композицию.
Принципиальное значение с точки зрения понимания патогенеза воспаления и механизма действия нестероидных противовоспалительных средств имеют данные об изоформах ци-клооксигеназы (ЦОГ), обозначаемых как ЦОГ-1 и ЦОГ-2 и играющих разную роль в метаболизме арахидоновой кислоты в физиологических и патологических условиях [33; 34].
ЦОГ-1 представляет собой конститутивный (постоянно синтезируемый под влиянием физиологических стимулов и присутствующий в клетках) фермент, участвующий в образовании про-стагландинов, простациклина и тромбоксанов, являющихся регуляторами микроциркуляции и других функций в различных тканях, в том числе в слизистой оболочке ЖКТ, почек, в образовании тромбоксанов из тромбоцитов, ряда функций эндотелия и т. п.
В отличие от ЦОГ-1, изоформа ЦОГ-2 в физиологических условиях присутствует в тканях в крайне низкой концентрации. Ее образование
стимулируется рядом активируемых в условиях воспаления факторов, таких как цитокины (ин-терлейкины ^-1, фактор некроза опухолей TNF-a и др.), свободные радикалы кислорода, липопо-лисахариды, митогенные факторы, активатор тканевого плазминогена и др. ЦОГ-2 синтезируется в воспаленных тканях так называемыми клетками воспаления - макрофагами, моноцитами, а также синовиоцитами и фибробластами. Именно этот фермент играет ключевую роль в образовании провоспалительных простаглан-динов, участвующих в развитии и поддержании воспалительного процесса [35].
В результате проведенных экспериментов установлено, что концентрация ЦОГ-1 в плазме крови животных контрольной группы равнялась 1,12 нг/мл. Достоверных различий влияния образцов композиции микронутриентов на активность ЦОГ-1 получено не было (табл. 5).
Концентрация ЦОГ-2 в плазме крови крыс контрольной группы составила 0,47 нг/мл. Согласно полученным данным курсовое введение образцов композиции микронутриентов в дозе 25 мг/кг приводило к достоверному снижению концентрации ЦОГ-2 во всех исследуемых группах. В большей степени подавление активности ЦОГ-2 наблюдалось в образце 111-2.
Таблица 5. Влияние длительного курсового применения образцов композиции микронутриентов на активность ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в крови крыс Table 5. Impact of the Long-Term Micronutrients Composition Samples Course Use on COX-1 and COX-2 Activity in Rat Blood
Группа Концентрация, нг/мл
животных ЦОГ-1 I ЦОГ-2
Контрольная 1,12 (0,98; 1,23) 0,47 (0,43; 0,62)
I 0,43 (0,81; 1,46) рк = 0,616 0,33 (0,28; 0,33) рк = 0,012
II 0,92 (0,68; 0,8S) рк = 0,83S 0,26 (0,2S; 0,28) рк = 0,012
III-1 2,S2 (1,01; 4,22) рк = 0,296 0,26 (0,2S; 0,31) рк = 0,012
III-2 1,S0 (1,06; 1,76) рк = 0,403 0,26 (0,24;0,27) рк = 0,012
VI-1 0,97 (0,83; 1,3S) рк = 0,676 0,33 (0,30; 0,37) рк = 0,037
VI-2 0,87 (0,78; 0,94) рк = 0,144 0,29 (0,28; 0,30) рк = 0,012
Примечание. рк - показатель статистической значимости внутригрупповых различий по сравнению с контрольной группой.
В настоящее время можно отметить наличие флавоноидов с ЦОГ-1/ЦОГ-2-ингибирующим действием при доминировании последнего. Именно данная группа смешанных ингибиторов циклооксигеназы флавоноидной природы более привлекательна в качестве новых противовоспалительных средств с позиции гастроин-тестинальной токсичности [36]. Проведенные
исследования доказали, что кверцетин проявляет подавляющую активность в отношении ЦОГ-2. Снижение активности ЦОГ флавоноида-ми осуществляется как на уровне транскрипции, так и на уровне аллостерической регуляции [37]. Данные выводы подтверждаются результатами молекулярного докинга исследования взаимосвязи «структура - эффективность ЦОГ-2-ингиби-торной активности» флавоноидов различных классов: флавононов, флавонов, флавонолов, изофлавонов [20].
Заключение
В результате проведенных скрининговых исследований в условиях опытов in vitro с применением специфической ферментной биотест-системы на основе iNOS установлено, что противовоспалительная активность экспериментальных образцов композиции микронутриентов уменьшается в ряду: III-2 > III-1 > VI-2 > VI-1 > I. Исследованиями плазмы крови крыс in vivo доказано, что при длительном курсовом применении образцы композиции микронутриентов III-1, III-2, VI-1 и VI-2 проявляют выраженный антиэкс-судативный эффект и приводят к достоверному снижению ЦОГ-2. Курсовое введение композиции микронутриентов в дозе 25 мг/кг приводило к достоверному снижению концентрации ЦОГ-2 во всех исследуемых группах животных, в большей степени подавление активности ЦОГ-2 наблюдалось в образце III-2. Существенного влияния на пролиферативный компонент воспаления не зарегистрировано, несмотря на тенденцию к ослаблению воспалительной реакции.
Таким образом, разработанная композиция 111-1, содержащая МОФФ ОШ, глицирризино-вую и аскорбиновую кислоты в соотношении 30:10:100, может быть рекомендована в качестве биологически активной добавки к пище и ключевого компонента рациона персонифицированного питания при ковидном и постковидном синдромах.
Библиографический список
1. Батурин А.К., Сорокина Е.Ю., Погожева А.В. и др. Генетические подходы к персонализации питания // Вопросы питани-я|РтЬ^ of Nutrition. 2012. Т. 81, № 6. С. 4-11. EDN: PUTCUD.
2. Shamim, N.; Gupta, A., Paul, V., et al. Nutritional Genomics: A Review. The Pharma Innovation. 2017. Vol. 6. Iss. 4. Pp. 17-20.
3. Мазилов С.И., Микеров А.Н., Комлева Н.Е. и др. Роль нутриге-нетики и нутригеномики в профилактике хронических неинфекционных заболеваний // Вопросы питания|Problems of Nutrition. 2022. Т. 91, № 1. С. 9-18. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-1-9-18. EDN: ULTEBI.
Bibliography
1. Baturin, A.K.; Sorokina, E.Yu.; Pogozheva, A.V. i dr. Geneticheskie Podhody k Personalizacii Pitaniya [Genetic Approaches to Nutrition Personalization]. Voprosy Pitaniya|Problems of Nutrition. 2012. Vol. 81. No. 6. Pp. 4-11. EDN: PUTCUD. (in Russ.)
2. Shamim, N.; Gupta, A., Paul, V., et al. Nutritional Genomics: A Review. The Pharma Innovation. 2017. Vol. 6. Iss. 4. Pp. 17-20.
3. Mazilov, S.I.; Mikerov, A.N.; Komleva, N.E. i dr. Rol' Nutrigenetiki
i Nutrigenomiki v Profilaktike Hronicheskih Neinfekcionnyh Za-bolevanij [Nutrigenetics and Nutrigenomics Role in the Chronic Non-Communicable Diseases Prevention]. Voprosy Pitaniya|Prob-
4. Лапик И.А., Гаппарова К.М., Чехонина Ю.Г. и др. Современные тенденции развития нутригеномики ожирения // Вопросы питания. 2016. Т. 85, № 6. С. 6-13. EDN: XGSFLV.
5. Mahmudpour, M.; Roozbeh, J.;Keshavarz, M., et al. COVID-19 Cytokine Storm: the Anger of Inflammation. Cytokine. 2020. Vol. 133. Article Number: 155151. DOI: https://doi.org/10.1016/j. cyto.2020.155151.
6. Tzotzos, S.J.; Fischer, B.; Fischer, H., et al. Incidence of ARDS and Outcomes in Hospitalized Patients with COVID-19: a Global Literature Survey. Critical Care. 2020. Vol. 24. Iss. 1. Pp. 1-4. DOI: https:// doi.org/10.1186/s13054-020-03240-7.
7. Fung, S.Y.; Yuen, K.S.; Ye, Z.W., et al. A Tug-of-War between Severe Acute Respiratory syndrome coronavirus 2 and Host Antiviral Defence: Lessons from Other Pathogenic Viruses. Emerging Microbes & Infections. 2020. Vol. 9. Iss. 1. Pp. 558-570. DOI: https://doi.org/10 .1080/22221751.2020.1736644.
8. Громова О.А., Торшин И.Ю. Важность цинка для поддержания активности белков врожденного противовирусного иммунитета: анализ публикаций, посвященных COVID-19 // Профилактическая медицина. 2020. Т. 23, № 3. С. 131-139. DOI: https://doi. org/10.17116/profmed202023031131. EDN: MBEJDO.
9. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X., et al. Clinical Features of Patients Infected with 2019 Novel Coronavirus in Wuhan, China. The Lancet. 2020. Vol. 395. Iss. 10223. Pp. 497-506. DOI: https://doi.org/10.1016/ S0140-6736(20)30183-5.
10. Sindel, A.; Taylor, T.; Chesney, A., et al. Hematopoietic Stem Cell Mobilization Following PD-1 Blockade: Cytokine Release Syndrome after Transplantation Managed with Ascorbic Acid. European Journal of Haematology. 2019. Vol. 103. Iss. 2. Pp. 134-136. DOI: https:// doi.org/10.1111/ejh.13248.
11. Бердиева З.М., Касимова Ш.А. Влияние глицирризиновой кислоты, глабридина и ресвератрола на репликацию SARS-ко-ронавируса // Universum: химия и биология. 2021. Т. 85, № 7-1. С. 52-54. EDN: WINSBC.
12. Alzaabi, M.M.;Hamdy, R.; Ashmawy, N.S., et al. Flavonoids Are Promising Safe Therapy against COVID-19. Phytochemistry Reviews. 2022. Vol. 21. Pp. 291-312. DOI: https://doi.org/10.1007/s11101-021-09759-z.
13. Enkhtaivan, G.; John, K.M.; Pandurangan, M., et al. Extreme Effects of Seabuckthorn Extracts on Influenza Viruses and Human Cancer Cells and Correlation between Flavonol Glycosides and Biological Activities of Extracts. Saudi Journal of Biological Sciences. 2017. Vol. 24. Iss. 7. Pp. 1646-1656. DOI: https://doi.org/10.1016/)'. sjbs.2016.01.004.
14. Colunga Biancatelli, R.M.L.; Berrill, M.; Catravas, J.D.; et al. Querce-tin and Vitamin C: an Experimental, Synergistic Therapy for the Prevention and Treatment of SARS-CoV-2 Related Disease (COVID-19). Frontiers in Immunology. 2020. Vol. 11. Article Number: 1451. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.01451.
15. Петрушкина Н.П., Симонова Н.А., Коломиец О.И. и др. COVID-19: подходы к патогенетическому обоснованию выбора средств профилактики, лечения и реабилитации // Научно-спортивный вестник Урала и Сибири. 2020. Т. 28, № 4. С. 26-35. EDN: BWQFGK.
16. Hosseinzade, A.; Sadeghi, O.; Naghdipour Biregani, A., et al. Immunomodulatory Effects of Flavonoids: Possible Induction of T CD4+ Regulatory Cells through Suppression of mTOR Pathway Signaling Activity. Frontiers in Immunology. 2019. Vol. 10. Article Number: 51. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.00051.
lems of Nutrition. 2022. Vol. 91. No. 1. Pp. 9-18. DOI: https://doi. org/10.33029/0042-8833-2022-91-1-9-18. EDN: ULTEBI. (in Russ.)
4. Lapik, I.A.; Gapparova, K.M.; Chekhonina, Yu.G. i dr. Sovremennye Tendencii Razvitiya Nutrigenomiki Ozhireniya [Modern Trends in the Obesity Nutrigenomics Development]. Voprosy Pitaniya. 2016. Vol. 85. No. 6. Pp. 6-13. EDN: XGSFLV. (in Russ.)
5. Mahmudpour, M.;Roozbeh, J.; Keshavarz, M., et al. COVID-19 Cytokine Storm: the Anger of Inflammation. Cytokine. 2020. Vol. 133. Article Number: 155151. DOI: https://doi.org/10.1016/)'. cyto.2020.155151.
6. Tzotzos, S.J.; Fischer, B.; Fischer, H., et al. Incidence of ARDS and Outcomes in Hospitalized Patients with COVID-19: a Global Literature Survey. Critical Care. 2020. Vol. 24. Iss. 1. Pp. 1-4. DOI: https:// doi.org/10.1186/s13054-020-03240-7.
7. Fung, S.Y.; Yuen, K.S.; Ye, Z.W., et al. A Tug-of-War between Severe Acute Respiratory syndrome coronavirus 2 and Host Antiviral Defence: Lessons from Other Pathogenic Viruses. Emerging Microbes & Infections. 2020. Vol. 9. Iss. 1. Pp. 558-570. DOI: https://doi.org/10 .1080/22221751.2020.1736644.
8. Gromova, O.A.; Torshin, I.Yu. Vazhnost' Cinka dlya Podderzhaniya Aktivnosti Belkov Vrozhdennogo Protivovirusnogo Immuniteta: Analiz Publikacij, Posvyashchennyh COVID-19 [Zinc Importance for Maintaining the Proteins Activity of Innate Antiviral Immunity: Publications Analysis on COVID-19]. Profilakticheskaya Medicina. 2020. Vol. 23. No. 3. Pp. 131-139. DOI: https://doi.org/10.17116/ profmed202023031131. EDN: MBEJDO. (in Russ.)
9. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X., et al. Clinical Features of Patients Infected with 2019 Novel Coronavirus in Wuhan, China. The Lancet. 2020. Vol. 395. Iss. 10223. Pp. 497-506. DOI: https://doi.org/10.1016/ S0140-6736(20)30183-5.
10. Sindel, A.; Taylor, T.; Chesney, A., et al. Hematopoietic Stem Cell Mobilization Following PD-1 Blockade: Cytokine Release Syndrome after Transplantation Managed with Ascorbic Acid. European Journal of Haematology. 2019. Vol. 103. Iss. 2. Pp. 134-136. DOI: https:// doi.org/10.1111/ejh.13248.
11. Berdieva, Z.M.; Kasimova, Sh.A. Vliyanie Glicirrizinovoj Kisloty, Gla-bridina i Resveratrola na Replikaciyu SARS-Koronavirusa [Lycyrrhi-zic Acid, Glabridine and Resveratrol Impact on the Atypical Pneumo-nia-Coronavirus Prevention]. Universum: Himiya i Biologiya. 2021. Vol. 85. No. 7-1. Pp. 52-54. EDN: WINSBC. (in Russ.)
12. Alzaabi, M.M.; Hamdy, R.; Ashmawy, N.S., et al. Flavonoids Are Promising Safe Therapy against COVID-19. Phytochemistry Reviews. 2022. Vol. 21. Pp. 291-312. DOI: https://doi.org/10.1007/s11101-021-09759-z.
13. Enkhtaivan, G.; John, K.M.; Pandurangan, M., et al. Extreme Effects of Seabuckthorn Extracts on Influenza Viruses and Human Cancer Cells and Correlation between Flavonol Glycosides and Biological Activities of Extracts. Saudi Journal of Biological Sciences. 2017. Vol. 24. Iss. 7. Pp. 1646-1656. DOI: https://doi.org/10.1016/). sjbs.2016.01.004.
14. Colunga Biancatelli, R.M.L.; Berrill, M.; Catravas, J.D.; et al. Querce-tin and Vitamin C: an Experimental, Synergistic Therapy for the Prevention and Treatment of SARS-CoV-2 Related Disease (COVID-19). Frontiers in Immunology. 2020. Vol. 11. Article Number: 1451. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.01451.
15. Petrushkina, N.P.; Simonova, N.A.; Kolomiec, O.I. i dr. COVID-19: Podhody k Patogeneticheskomu Obosnovaniyu Vybora Sredstv Profilaktiki, Lecheniya i Reabilitacii [COVID-19: Approaches to Pathogenetic Substantiation of the Prevention, Treatment and Rehabilitation Choice]. Nauchno-Sportivnyj Vestnik Urala i Sibiri. 2020. Vol. 28. No. 4. Pp. 26-35. EDN: BWQFGK. (in Russ.)
17. Jo, S., Kim, S., Shin, D.H., et al. Inhibition of SARS-CoV 3CL Protease by Flavonoids. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2020. Vol. 35, Iss. 1. Pp. 145-151. DOI: https://doi.org/10.1080/1 4756366.2019.1690480.
18. Liu, T., Luo, S., Libby, P., et al. Cathepsin L-Selective Inhibitors: a Potentially Promising Treatment for COVID-19 Patients. Pharmacology & Therapeutics. 2020. Vol. 213. Article Number: 107587. DOI: https://doi.org/10.1016/jj.pharmthera.2020.107587.
19. Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н., Рожнов Е.Д. и др. Исследование биологической активности флавоноидов облепихового шрота с применением специфических биотест-систем // Химия растительного сырья. 2020. № 4. С. 235-241. DOI: https://doi. org/10.14258/jcprm.2020048859. EDN: CHRRVD.
20. Школьникова М.Н., Аверьянова Е.В., Рожнов Е.Д. и др. Исследование антибактериальной активности флавоноидов облепихового шрота // Индустрия питания|Food Industry. 2020. Т. 5, № 3. С. 61-69. DOI: https://doi.org/10.29141/2500-1922-2020-5-3-7. EDN: AWZINX.
21. Hoffmann, M.; Kleine-Weber, H.; Schroeder, S., et al. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor. Cell. 2020. Vol. 181. Iss. 2. Pp. 271-280. DOI: https://doi.org/10.1016/jj.cell.2020.02.052.
22. Smirnov, V.S.; Garshinina, A.V.; Shtro, A.A., et al. Anti-Viral Activity of a Complex of the Glycyrrhizic Acid-Alpha-Glutamyltryptophan against the Experimental Lethal Influenza Infection in White Mice Caused by the Oseltamivir-Resistant Strain of the Virus. Voprosy vi-rusologii. 2014. Vol. 59. Iss. 5. Pp. 31-38.
23. Li, R.; Wu, K.; Li, Y., et al. Integrative Pharmacological Mechanism of Vitamin C Combined with Glycyrrhizic Acid against COVID-19: Findings of Bioinformatics Analyses. Briefings in Bioinformatics. 2021. Vol. 22. Iss. 2. Pp. 1161-1174. DOI: https://doi.org/10.1093/ bib/bbaa141.
24. Честнова Т.В., Подшибякина А.С. Препараты, применяемые при лечении COVID-19: механизм воздействия и эффективность (обзор литературы) // Вестник новых медицинских технологий. 2021. Т. 15, № 1. Публикация 3-4. DOI: https://doi. org/10.24412/2075-4094-2021-1-3-4.
25. Даренская М.А., Колесникова Л., Колесников С.И. COVID-19: окислительный стресс и актуальность антиоксидантной терапии // Вестник Российской академии медицинских наук | Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2020. Т. 75, № 4. С. 318-325. DOI: https://doi.org/10.15690/vramn1360. EDN: QLCOTC.
26. Sánchez-Rodríguez, R.; Munari, F.; Angioni, R., et al. Targeting Monoamine Oxidase to Dampen NLRP3 Inflammasome Activation in Inflammation. Cellular & Molecular Immunology. 2020. Vol. 18. Iss. 5. Pp. 1311-1313. DOI: https://doi.org/10.1038/s41423-020-0441-8.
27. Патент РФ 2711728 С1. МПК A61K 36/72. Способ получения комплекса биофлавоноидов из обезжиренного облепихового шрота / Е.В. Аверьянова, М.Н. Школьникова, А.В. Малахова, Е.Д. Рожнов; патентообладатель: федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Алтайский государственный технический университет им. И.И. Ползунова» (АлтГТУ). Отдел научно-исследовательской работы сотрудников и преподавателей (ОНИРСиП). Заявка № 2019126682; заявлено: 22.08.2019; опубликовано: 21.01.2020; бюл. № 3. EDN: EDCASQ.
28. Абжалелов Б.Б., Кужамбердиева С.Ж., Асемов А.Б. и др. Получение глицирризиновой кислоты из солодкового корня // Международный журнал экспериментального образования. 2016. № 5-1. С. 100-104. EDN: VTQVRZ.
16. Hosseinzade, A.; Sadeghi, O.; Naghdipour Biregani, A., et al. Immunomodulatory Effects of Flavonoids: Possible Induction of T CD4+ Regulatory Cells through Suppression of mTOR Pathway Signaling Activity. Frontiers in Immunology. 2019. Vol. 10. Article Number: 51. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.00051.
17. Jo, S., Kim, S., Shin, D.H., et al. Inhibition of SARS-CoV 3CL Protease by Flavonoids. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2020. Vol. 35, Iss. 1. Pp. 145-151. DOI: https://doi.org/10.1080/1 4756366.2019.1690480.
18. Liu, T., Luo, S., Libby, P., et al. Cathepsin L-Selective Inhibitors: a Potentially Promising Treatment for COVID-19 Patients. Pharmacology & Therapeutics. 2020. Vol. 213. Article Number: 107587. DOI: https://doi.org/10.1016/jj.pharmthera.2020.107587.
19. Averyanova, E.V.; Shkolnikova, M.N.;Rozhnov, E.D. i dr. Issledo-vanie Biologicheskoj Aktivnosti Flavonoidov Oblepihovogo Shrota s Primeneniem Specificheskih Biotest-Sistem [Biological Activity Research of Sea Buckthorn Meal Flavonoids Using Specific Biotest Systems]. Himiya Rastitel'nogo Syr'ya. 2020. No. 4. Pp. 235-241. DOI: https://doi.org/10.14258/jcprm.2020048859. EDN: CHRRVD. (in Russ.)
20. Shkolnikova, M.N.; Averyanova, E.V.; Rozhnov, E.D. i dr. Issledovanie Antibakterial'noj Aktivnosti Flavonoidov Oblepihovogo Shrota [Antibacterial Activity Research of Sea Buckthorn Meal Flavonoids]. Industriya Pitaniya|Food Industry. 2020. Vol. 5. No. 3. Pp. 61-69. DOI: https://doi.org/10.29141/2500-1922-2020-5-3-7. EDN: AWZINX. (in Russ.)
21. Hoffmann, M.; Kleine-Weber, H.; Schroeder, S., et al. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor. Cell. 2020. Vol. 181. Iss. 2. Pp. 271-280. DOI: https://doi.org/10.1016/jj.cell.2020.02.052.
22. Smirnov, V.S.; Garshinina, A.V.; Shtro, A.A., et al. Anti-Viral Activity of a Complex of the Glycyrrhizic Acid-Alpha-Glutamyltryptophan against the Experimental Lethal Influenza Infection in White Mice Caused by the Oseltamivir-Resistant Strain of the Virus. Voprosy vi-rusologii. 2014. Vol. 59. Iss. 5. Pp. 31-38.
23. Li, R.; Wu, K.; Li, Y., et al. Integrative Pharmacological Mechanism of Vitamin C Combined with Glycyrrhizic Acid against COVID-19: Findings of Bioinformatics Analyses. Briefings in Bioinformatics. 2021. Vol. 22. Iss. 2. Pp. 1161-1174. DOI: https://doi.org/10.1093/ bib/bbaa141.
24. Chestnova, T.V.; Podshibyakina, A.S. Preparaty, Primenyaemye pri Lechenii COVID-19: Mekhanizm Vozdejstviya i Effektivnost' (Ob-zor Literatury) [Drugs Used in the COVID-19 Treatment: Action and Effectiveness Mechanism (Literature Review)]. Vestnik Novyh Medicinskih Tekhnologij. 2021. Vol. 15. No. 1. Publikaciya 3-4. DOI: https://doi.org/10.24412/2075-4094-2021-1-3-4. (in Russ.)
25. Darenskaya, M.A.; Kolesnikova, L.; Kolesnikov, S.I. COVID-19: Okisli-tel'nyj Stress i Aktual'nost' Antioksidantnoj Terapii [COVID-19: Oxidative Stress and Relevance of Antioxidant Therapy]. Vestnik Rossi-jskoj Akademii Medicinskih Nauk | Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2020. Vol. 75. No. 4. Pp. 318-325. DOI: https:// doi.org/10.15690/vramn1360. EDN: QLCOTC. (in Russ.)
26. Sánchez-Rodríguez, R.; Munari, F.; Angioni, R., et al. Targeting Mon-oamine Oxidase to Dampen NLRP3 Inflammasome Activation in Inflammation. Cellular & Molecular Immunology. 2020. Vol. 18. Iss. 5. Pp. 1311-1313. DOI: https://doi.org/10.1038/s41423-020-0441-8.
27. Patent RF 2711728 S1. MPK A61K 36/72. Sposob Polucheniya Kom-pleksa Bioflavonoidov iz Obezzhirennogo Oblepihovogo Shrota [Production Method for Bioflavonoid Complex from Skimmed Sea Buckthorn Meal]. E.V. Averyanova, M.N. Shkol'nikova, A.V. Mala-
29. Стрелкова Л.Б., Кондакова Н.В., Дубинская В.А. и др. Индуци-бельная NO-синтаза как ферментная биотест-система для выявления веществ с противовоспалительными свойствами in vitro // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2013. № 11. С. 75-80. EDN: RPQAHJ.
30. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств: в 2 т. / Научный центр экспертизы средств медицинского применения Минздравсоцразвития России. М.: Гриф и К, 2012. Т. 1. 944 с. ISBN 978-5-8125-1466-3. EDN: SDEWMP.
31. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Кондратюк В.И. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М.: Минздрав СССР, 1983. 16 с.
32. Pelzer, L.E.; Guardia, T.; Juarez, A.O., et al. Acute and Chronican-ti-Inflammatory Effects of Plant Flavonoids. Il Farmaco. 1998. Vol. 53. Iss. 6. Pp. 421-424. DOI: https://doi.org/10.1016/S0014-827X(98)00046-9.
33. Теплов В.И. Функциональные продукты питания. М.: А-Приор, 2008. 240 с. ISBN 978-5-384-00155-3. EDN: RXAWQB.
34. Хафизьянова Р.Х., Бурыкин И.М., Алеева Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии. Казань: Медицина, 2006. 374 с. ISBN 5-7645-0312-4. EDN: OUVWTC.
35. Дыгай А.М., Жданов В.В. Теория регуляции кроветворения в норме и при патологии // Сибирский научный медицинский журнал. 2012. Т. 32, № 1. С. 21-30. EDN: OPUFHX.
36. Гладких Ф.В. Превентивно-лечебные стратегии фармакокор-рекции гастропатии, индуцированной нестероидными противовоспалительными препаратами // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2017. Т. 15, № 4. С. 14-23. DOI: https://doi.org/10.17816/RCF15414-23. EDN: YLLSXK.
37. Шварц Г.Я., Сюбаев Р.Д. Методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2000. С. 234-241.
hova, E.D. Rozhnov; Patentoobladatel': Federal'noe Gosudarstven-noe Byudzhetnoe Obrazovatel'noe Uchrezhdenie Vysshego Obra-zovaniya «Altajskij Gosudarstvennyj Tekhnicheskij Universitet Im. I.I. Polzunova» (AltGTU). Otdel Nauchno-Issledovatel'skoj Raboty Sotrudnikov i Prepodavatelej (ONIRSiP). Zayavka No. 2019126682. Zayavleno: 22.08.2019. Opublikovano: 21.01.2020. Byul. No. 3. EDN: EDCASQ. (in Russ.)
28. Abzhalelov, B.B.; Kuzhamberdieva, S.Zh.; Asemov, A.B. i dr. Poluch-enie Glicirrizinovoj Kisloty iz Solodkovogo Kornya [Production of Glycyrrhizic Acid from Licorice Root]. Mezhdunarodnyj ZHurnal Ek-sperimental'nogo Obrazovaniya. 2016. No. 5-1. Pp. 100-104. EDN: VTQVRZ. (in Russ.)
29. Strelkova, L.B.;Kondakova, N.V.;Dubinskaya, V.A. i dr. Induci-bel'naya NO-Sintaza kak Fermentnaya Biotest-Sistema dlya Vy-yavleniya Veshchestv s Protivovospalitel'nymi Svojstvami In Vitro [Inducible NO-Synthase as an Enzyme Biotest System for Detecting Substances with Anti-Inflammatory Properties In Vitro]. Voprosy biologicheskoj, medicinskoj i farmacevticheskoj himii. 2013. No. 11. Pp. 75-80. EDN: RPQAHJ. (in Russ.)
30. Rukovodstvo po Provedeniyu Doklinicheskih Issledovanij Lekarst-vennyh Sredstv [Guidelines for Conducting Preclinical Medicine Studies]: v 2 T. Nauchnyj Centr Ekspertizy Sredstv Medicinskogo Primeneniya Minzdravsocrazvitiya Rossii. M.: Grif i K. 2012. Vol. 1. 944 p. ISBN 978-5-8125-1466-3. EDN: SDEWMP. (in Russ.)
31. Trinus, F.P.;Klebanov, B.M.; Kondratyuk, V.I. Metodicheskie Re-komendacii po Eksperimental'nomu (Doklinicheskomu) Izucheniyu Nesteroidnyh Protivovospalitel'nyh Farmakologicheskih Vesh-chestv [Methodological Recommendations for the Experimental (Preclinical) Study of Nonsteroidal Anti-Inflammatory Pharmacological Substances]. M.: Minzdrav SSSR. 1983. 16 p. (in Russ.)
32. Pelzer, L.E.; Guardia, T.; Juarez, A.O., et al. Acute and Chronican-ti-Inflammatory Effects of Plant Flavonoids. Il Farmaco. 1998. Vol. 53. Iss. 6. Pp. 421-424. DOI: https://doi.org/10.1016/S0014-827X(98)00046-9.
33. Teplov, V.I. Funkcional'nye Produkty Pitaniya [Functional Food Products]. M.: A-Prior. 2008. 240 p. ISBN 978-5-384-00155-3. EDN: RXAWQB. (in Russ.)
34. Hafizyanova, R.H.; Burykin, I.M.; Aleeva, G.N. Matematicheskaya Statistika v Eksperimental'noj i Klinicheskoj Farmakologii [Mathematical Statistics in Experimental and Clinical Pharmacology]. Kazan': Medicina. 2006. 374 p. ISBN 5-7645-0312-4. EDN: OUVWTC. (in Russ.)
35. Dygaj, A.M.;Zhdanov, V.V. Teoriya Regulyacii Krovetvoreniya v Norme i pri Patologii [Theory of Hematopoiesis Regulation in Norm and Pathology]. Sibirskij Nauchnyj Medicinskij Zhurnal. 2012. Vol. 32. No. 1. Pp. 21-30. EDN: OPUFHX. (in Russ.)
36. Gladkih, F.V. Preventivno-Lechebnye Strategii Farmakokorrekcii Gastropatii, Inducirovannoj Nesteroidnymi Protivovospalitel'nymi Preparatami [Preventive and Therapeutic Strategies for Pharma-cocorrection of Gastropathy Induced by Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs]. Obzory po Klinicheskoj Farmakologii i Lekarst-vennoj Terapii. 2017. Vol. 15. No. 4. Pp. 14-23. DOI: https://doi. org/10.17816/RCF15414-23. EDN: YLLSXK. (in Russ.)
37. Schwartz, G.Ya.; Syubaev, R.D. Metodicheskie Ukazaniya po Izucheniyu Novyh Nesteroidnyh Protivovospalitel'nyh Preparatov [Methodological Guidelines for the New Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs Study]. Rukovodstvo po Eksperimental'nomu (Doklinicheskomu) Izucheniyu Novyh Farmakologicheskih Veshchestv. M.: Medicina. 2000. Pp. 234-241. (in Russ.)
Информация об авторах / Information about Authors
Доктор технических наук, доцент, профессор кафедры технологии питания Уральский государственный экономический университет
620144, Российская Федерация, г. Екатеринбург, ул. 8 Марта/Народной Воли, 62/45
Doctor of Technical Sciences, Associate Professor, Professor of the Nutrition Technology Department
Ural State University of Economics
620144, Russian Federation, Ekaterinburg, 8 Marta St. / Narodnoy Voli St., 62/45 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9146-6951
Кандидат химических наук, доцент, доцент кафедры биотехнологии Бийский технологический институт (филиал) Алтайского государственного технического университета им. И.И. Ползунова
659305, Российская Федерация, г. Бийск, улица имени Героя Советского Союза Трофимова, 27
Candidate of Chemical Sciences, Associate Professor, Associate Professor of the Biotechnology Department
Biysk Technological Institute (Branch) of the Altay State Technical University n.a. Ivan I. Polzunov
659305, Russian Federation, Biysk, Geroya Sovetskogo Soyuza Trofimova St., 27 ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2144-1238
Доктор технических наук, профессор кафедры биотехнологии
Бийский технологический институт (филиал) Алтайского государственного
технического университета им. И.И. Ползунова
659305, Российская Федерация, г. Бийск, ул. им. Героя Советского Союза Трофимова, 27
Doctor of Technical Sciences, Professor of the Biotechnology Department Biysk Technological Institute (Branch) of the Altay State Technical University n.a. Ivan I. Polzunov
659305, Russian Federation, Biysk, Geroya Sovetskogo Soyuza Trofimova St., 27 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3982-9700
Вклад авторов:
Школьникова М.Н. - научное руководство, разработка концепции исследования, проведение критического анализа материалов;
Аверьянова Е.В. - проведение экспериментов, развитие методологии исследования и формирование выводов; Рожнов Е.Д. - подготовка начального варианта текста, обработка результатов эксперимента и перевод элементов статьи на английский язык.
Contribution of the Authors:
Shkolnikova, Marina N. - scientific guidance, developing research concept, conducting a critical analysis of materials; Averyanova, Elena V. - conducting experiments, expounding methodology for the research development, drawing conclusions; Rozhnov, Evgeny D. - preparing the initial version of the text, processing the experiment results, translating the article elements into English.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. The authors declare no conflicts of interests.
Школьникова Марина Николаевна
Shkolnikova, Marina Nikolaevna
Тел./Phone: +7 (343) 283-12-72 E-mail: shkolnikova.m.n@mail.ru
Аверьянова Елена Витальевна
Averyanova, Elena Vitalievna
Тел./Phone: +7 (3854) 43-53-05 E-mail: averianova.ev@bti.secna.ru
Рожнов
Евгений Дмитриевич
Rozhnov,
Evgeny Dmitrievich
Тел./Phone: +7 (3854) 43-53-05 e-mail: red@bti.secna.ru
