CC BY
26
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
и при стимуляции фитогемагглютинином (ФГА, Sigma) в конечной концентрации 20 мкг/мл. Подсчет количества CD25, CD38- и СD69-позитивных Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+CD4+) и цитотоксических Т-клеток (CD3+CD8+) проведен методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител (Beckman Coulter, USA). Для статистического анализа данных использовали непараметрический критерий Манна—Уитни.
Выявлено, что после инкубации без стимулятора количество CD69-позитивных Т-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток у детей с аутоиммунной патологией не отличалось от условно здоровых детей. При индукции ФГА доля клеток, экспрессировавших CD69, во всех субпопуляциях при всех заболеваниях была ниже, чем в контрольной группе (p < 0,05). Количество CD38-позитивных клеток среди CD3+, CD3+CD4+ и CD3+CD8+ у всех детей с ревматическими заболеваниями было снижено по сравнению с контролем, как в спонтанном варианте, так и при стимуляции митогеном (p < 0,05). Количество цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрес-сировавших CD25, в группах больных не отличалось от контрольного уровня при обоих вариантах инкубации. Спонтанное и стимулированное количество CD3+CD25+ и CD3+CD4+CD25+ у больных с ЮИА и ЮСД было значительно ниже, чем у условно здоровых детей (p < 0,05), у больных с СКВ различия наблюдались на уровне тенденции (p < 0,1).
Таким образом, количество CD3+CD4+CD25+ и CD3+CD8+CD25+ при воздействии мутагена изменялось несхожим образом. Следует отметить, что большинство CD25-позитивных Т-хелперов составляют популяцию регуляторных Т-клеток, обладающих су-прессорными свойствами (Sakaguchi S., 2011), тогда как CD3+CD8+CD25+ могут быть в большей степени представлены активированными эффекторами. Ранее нами было показано, что изменение количества регуляторных Т-клеток CD3+CD4+CD25+CD127low/neg и активированных Т-хелперов CD3+CD4+CD25+CD127+, в совокупности составляющих субпопуляцию CD25-позитивных Т-хелперов, подчиняется различным закономерностям (Пашнина И.А., 2014). Учитывая функциональную разнородность субпопуляции CD3+CD25+, представляется целесообразным оценивать экспрессию CD25 отдельно на Т-хелперах (с разделением на регуляторные Т-клетки и активированные Т-хелперы) и цитотоксических Т-клетках. При этом общие закономерности изменения экспрессии CD38 и CD69 на Т-хелперах и цитотоксиче-ских Т-клетках совпадали, что может указывать на возможность определения совокупной экспрессии этих маркеров на Т-лимфоцитах при стимуляции in vitro у детей с аутоиммунной патологией соединительной ткани. Однако для подтверждения этого заключения необходимо понимание функциональной роли CD38- и CD69-позитивных Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток, которая, несмотря на многочисленные публикации по этой теме, остается пока спорной.
Автор выражает искреннюю благодарность врачам Областной детской клинической больницы № 1 Козловой Е.С. и Скоробогатовой О.В. за подбор пациентов для исследования.
РОЛЬ МЕТАБОЛИЗМА ПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ В ПРОГНОЗЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ВЗК У ДЕТЕЙ
Петричук С.В.1, Мирошкина Л.В. 1, Курбатова О.В.2, Закиров Р.Ш.1, Радыгина Т.В.1, Самохина И.В.1, Цимбалова Е.Г.1
1ФГБНУ «Научный центр здоровья детей», Москва, Россия
2 ФГБНУ «Научный центр акушерства, гинекологии
и перинатологии» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
3 ФГБОУВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет» им. Н.Н. Пирогова, Москва, Россия
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) — хронические, рецидивирующие не инфекционные заболевания ЖКТ, приводящие к необратимому нарушению его структуры и функции. Развитие хронического воспаления при ВЗК происходит в результате срыва толерантности иммунной системы к микробиоте кишечника под действием триггерных факторов. Выявление высоких концентрации TNFa в биоптатах кишечника пациентов с ВЗК позволило разработать патогенетическую стратегию лечения — биологическую терапию (БТ), включающую применение моноклональных антител, блокирующих TNFa. Применение БТ при ВЗК позволило увеличить долю пациентов, достигающих стабильной ремиссии, однако, в виду потери ответа к препарату у трети пациентов не наблюдается стойкого эффекта от БТ. Показано, что эффективность БТ определяется исходным уровнем TNFa в плазме крови, а также содержанием ТЫ7-лимфоцитов (ТЫ7-лф), активированных Т-хелперов (act-Th) и регуляторных Т-клеток (Treg). Известно, что эффекторные функции лимфоцитов (пролиферация, дифференцировка) напрямую зависят от интенсивности их метаболизма.
Цель. Оценить диагностическую значимость показателей метаболической активности популяций лимфоцитов в прогнозе эффективности инфликсимаба.
Материалы и методы. Обследовано 136 детей в возрасте 10-18 лет с ВЗК (БК-87 пациентов, ЯК-49 пациентов). Пациенты наблюдались в динамике заболевания: до назначения БТ и через 1 год БТ. В зависимости от эффективности БТ пациенты были распределены на 2 группы: со стойким положительным эффектом (группа 1, n = 44) и с нестойким эффектом БТ (группа 2, n = 92). Интенсивность энергообмена популяций лф оценивали по активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) — фермента цикла Кребса и II этапа дыхательной цепи митохондрий. Определение активности СДГ в основных и малых популяциях лимфоцитов периферической крови проводили на проточном цитометре CYTOMICS FC500 иммуноцитохими-ческим методом. Статистическая обработка выполнена с помощью пакета Statistica 6.0, ROC-анализ выполнялся с использованием программы SPSS 16.0
Результаты. До назначения БТ активность СДГ в популяциях Т-лф, Т-хелперах, В-лф и Treg у пациентов в группе 1 была достоверно выше, чем в группе 2, причем наибольшие отличия наблюдались в популяции Treg (AUC = 0,820). Через год БТ у пациентов группы 1 высокая активность СДГ сохранялась только в популяциях Т-хелперов и в Treg. ROC-анализ данных выявил, что активность СДГ в популяциях Treg-лф, Т-хелперах и В1-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
лф, а также исходное содержания ThH-лф являются наиболее информативными показателями для прогнозирования эффекта БТ Численность !Ы7-лф превышающая 18,6% от CD3+CD4+ и снижение активности СДГ в популяции Treg ниже, чем на 15% относительно референсных значений позволяют прогнозировать нестойкий терапевтический ответ на БТ. Длительное течение заболевания (более 5 лет) до начала БТ сопровождается выраженным уменьшением активности СДГ в популяциях Т-хелперов, что снижает эффективность БТ.
Выводы. Иммуноцитохимическое исследование и им-мунофенотипирование лимфоцитов периферической крови у пациентов с ВЗК имеют прогностическую значимость и позволяют с высокой вероятностью прогнозировать эффект лечения блокаторами TNFa. Полученные результаты обосновывают раннее назначение БТ для получения стойкого терапевтического эффекта. Детям с ВЗК показано динамическое определение метаболической активности лимфоцитов и своевременная коррекция выявленных изменений, в том числе препаратами, улучшающими энергетический обмен клетки.
ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ НА СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ПРИ КОМОРБИДНОСТИ САХАРНОГО ДИАБЕТА ТИПА II (СД2) И ХОБЛ В ПЕРИОД ПЕРИМЕНОПАУЗЫ
Попкова А.С.
Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва, Россия
Введение. Основой прогрессирования СД2 при ко-морбидности с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) является хроническое воспаление — комплексный иммунопатологический процесс, включающий реакции врожденного и адаптивного иммунитета. Значимая роль в этих процессах принадлежит провоспалитель-ным цитокинам. Изменение их баланса приводит к нарушениям не только в зоне воспаления, но и на системном уровне. У этих больных наблюдается подавление фагоцитарной активности нейтрофилов, дисбаланс различных субпопуляций Т-лимфоцитов, снижение содержания В-лимфоцитов. В развитии коморбидности СД2 с ХОБЛ нельзя исключить также влияние половых гормонов, особенно в старшем возрасте. Изменения их физиологических концентраций вызывают раннюю инволюцию тимуса и селезенки и, как следствие, нарушения клеточного и гуморального иммунитета. Однако данные о состоянии гуморального звена врожденного и адаптивного иммунитета при коморбидности СД2 с ХОБЛ, протекающих на фоне гормональных расстройств в период перименопау-зы, практически отсутствуют.
Цель. Исследовать влияние гормонального дисбаланса у пациенток с СД2, протекающего на фоне ХОБЛ и климактерического синдрома, на содержание провос-палительных цитокинов и иммуноглобулинов в биологических жидкостях.
Материалы и методы. Было обследовано 100 женщин с СД2 на фоне стабильно протекающей ХОБЛ 2 степени тяжести по GOLD (2011) (среднетяжелой) и климактери-
ческого синдрома либо без такового (группа сравнения) в возрасте 43-55 лет. Содержание цитокинов проводили в бронхо-альвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) и сыворотке крови больных методом проточной цитоф-луорометрии (Beckman Coulter FC500, США) с использованием наборов реактивов для мультикомплексного определения цитокинов (BMS810FF) человека в соответствии с инструкциями производителя. Анализ полученных данных проводили лицензированной программой разработчика FlowCytomix Prover. 3.0. Содержание IgM, IgG, IgA определяли в сыворотке крови больных с помощью иммуноферментного анализа (R&D Systems, США). Статистическую обработку проводили с помощью критерия (t) Стьюдента.
Результаты. Сравнительный анализ содержания цитокинов в БАЛЖ и сыворотке крови больных СД2, отягощенного ХОБЛ и климактерическим синдромом, выявил достоверное увеличение концентраций IL-1ß, IL-6, IL-8, TNFa и IFNy, по сравнению с группой сравнения, что свидетельствует о наличии как местного, так и системного воспаления. Оценка содержания IgM, IgG и IgA в сыворотке крови этих больных показала, что их уровень достоверно ниже нормы практически здоровых женщин. Из полученных данных следует, что коморбидность СД2 с ХОБЛ, протекающих в период перименопаузы, приводит к истощению иммунной системы и развитию иммунодефицита B-клеточного звена иммунитета.
Заключение. Таким образом, установлено неблагоприятное влияние гормональных нарушений у женщин в период перименопаузы на течение СД2 при его коморбидности с ХОБЛ. Повышение концентрации провос-палительных цитокинов с одной стороны и снижение содержания иммуноглобулинов с другой стороны способствуют поддержанию местного и системного хронического воспалительного процесса.
РЕГУЛЯТОРНЫЕ Т-ЛИМФОЦИТЫ И СУБПОПУЛЯЦИИ Т-КЛЕТОК ПАМЯТИ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ
Семакова П.Н.1, Олейник Е.К.1, Жулай Г.А.1, Чуров А.В.1, Олейник В.М.1, Барышева О.Ю.2, Марусенко И.М.2
1ФГБУН «Институт биологии Карельского научного центра» РАН, Петрозаводск, Россия 2 ФГБОУВПО «Петрозаводский государственный университет», Петрозаводск, Россия
Введение. Регуляторные Т-клетки (Tregs) играют существенную роль в контроле иммунного ответа и представляют собой одну из важных мишеней в иммунотерапии аутоиммунитета. Ревматоидный артрит (РА) — это аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, связано с нарущением Т-клеточной толерантности в организме. Количественные и/или качественные изменения в Treg-клетках могут приводить к развитию РА. Вместе с тем остается открытым вопрос о том, как поддерживается численность и функциональная активность Tregs при РА. В литературе накапливаются данные о важной роли Т-клеток памяти с фенотипом CD4+CD45RO+ в развитии аутоиммунных заболеваний. Показано, что на стадии обострения у больных рассеянным склерозом количе-
