CC BY
42
INNOVATIVE METHODS OF OZONE THERAPY FOR CORRECTING THE LEVEL OF FERTILITY AT WOMEN WITH RELATIVE INFERTILITY
YE.F. FILIPPOV Kuban State Medical University, Krasnodar
The article concerns the aspect of fertility of women with relative infertility, traditionally being one of the most covered parts of higher school obstetrics and gynecology training.
Key words: ozone therapy, restoration of fertility for women.
УДК 616.33-002.44:612.015.1:546.46
РОЛЬ МАГНИЯ И ЖЕЛАТИНАЗЫ В В ФОРМИРОВАНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЯЗВЫ ЖЕЛУДКА
Л.Н. РОГОВА, Н.В. ШЕСТЕРНИНА*
Иммуногистохимическим методом выявлено, что при сформированной ацетатной язве в тканях язвенного дефекта в апикальном отделе и клеточном компоненте стромы собственной пластинки слизистой увеличивается удельное число желатиназа В - позитивных клеток и интенсивность её экспрессии. Одновременно уменьшается концентрация магния в эритроцитарной массе, полученной из подключичной вены. При этом выявляется отрицательная корреляционная зависимость между уровнем магния и экспрессией желатиназы В. Ключевые слова: желатиназа В, ацетатная язва желудка, магний.
Роль Helicobacter pillory как этиологического фактора язвы желудка и двенадцатиперстной кишки не вызывает сомнения [1,3,9]. Однако частота и продолжительность обострений определяется, в первую очередь, механизмами резистентности слизистой, среди которых детально изучено формирование слизистого барьера, обладающего буферными свойствами. Не менее значима протективная роль высокой скорости пролиферации тканей желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Реализация ростового сигнала начинается с экспрессии рецепторов к ростовым факторам и формировании TRAMP 6 и 7 каналов, переносящих магний из внеклеточного во внутриклеточный сектор, где он выступает как активатор дыхательных ферментов, факторов энергообразования и энергопотребления, пластических процессов [5]. Известно, что при действии повреждающего фактора в тканях в зоне острофазного ответа происходит деструкция межклеточного матрикса матриксными металлопротеиназами: коллагеназами, желатиназа-ми, стромиелиназами, с последующим восстановлением разрушенных структур [8]. Турна А.А. (2010) показал, что в зоне воспаления активируется металлопротеиназа -3, -7, -9 разрушающие межклеточные структуры и опосредованно через цитокины, активирующие ростовые факторы, стимулирующие пролифератив-ные процессы [7]. Аналогичные изменения происходят, вероятно, и в изъязвленных тканях ЖКТ, представляющих зону хронического воспаления.
Цель исследования - изучение экспрессия желатиназы В в тканях язвенного дефекта и уровня магния в эритроцитарной массе и жидких средах организма у крыс с экспериментальной ацетатной язвой желудка.
Материалы и методы исследования. Эксперименты выполнены на белых крысах линии Вистар обоего пола массой от 250 до 310 г, находящихся на стандартной диете. У всех экспериментальных животных определяли содержание магния в крови и производили иммуногистохимическое исследование в зоне язвенного дефекта. Животные были разделены на три группы. Первую группу составили интактные животные. Крысам второй группы моделировали ацетатную язву в пилорическом отделе желудка по методу Окабэ С. (2005) под нембуталовым наркозом (30 мг/кг массы) [10]. В третью группу (контрольная серия или ложнооперированные животные) входили животные, которым выполняли те же манипуляции, что и во второй группе, но без нанесения повреждения стенки желудка.
Перед моделированием в исходном состоянии забирали кровь из подключичной вены. Животных выводили из эксперимента через 7 суток с момента моделирования и производили забор материала: кровь из подключичной и воротной вены, лим-
* Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, chemordakova.nat@mail.ru, Волгоград, 400131, пл. Павших Борцов, 1.
фу из общего кишечного лимфатического протока, ткани желудка для иммуногистохимического исследования - из пилорического отдела желудка.
Содержание магния в плазме и лимфе определяли набором фирмы «Лахема», содержание магния в эритроцитах - по реакции с титановьдм желтым [2].
Для идентификации желатиназы В (матричной металлопро-теиназы 9 - ММП-9) использовались моноклональные антитела к ММП-9 («Novocastra», Великобритания), предназначенные для работы с парафиновыми срезами.
Оценка реакции проводилась полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания и удельного числа антиген-позитивных клеток в слизистой оболочке и железах пи-лорического отдела желудка. Иммуногистохимическая реакция оценивалась как негативная - «0» (нет реакции), слабопозитивная -«1» (слабо окрашенные клетки), умереннопозитивная - «2» (клетки средней интенсивности окраски) и сильнопозитивная или сверхэкспрессия - «3» (клетки высокой интенсивности окраски).
Средние величины при нормальном распределении выражались как М±1 значимость различий оценивали по коэффициенту Стьюдента; при распределении отличном от нормального - как медиана (Me), 25 и 75 перцентиль, достоверность различий оценивали с применением критерия Уилкоксона при уровне значимости Q<0,05. Результаты исследований обработаны методом вариационной статистики с использованием стандартного пакета анализа с помощью электронных таблиц Excel.
Результаты и их обсуждение: Через 7 суток с момента моделирования формируется типичная язва, обычно кратерообразной формы с грануляционным валом, отечностью, гиперемией, а также геморрагиями в слизистой оболочке площадью 30,95±6,7 мм2.
Экспрессия ММП-9- позитивных клеток в тканях желудка, взятых от интактных животных, была слабо выражена как по интенсивности, так и по количеству антиген-позитивных клеток. В контрольной подгруппе отмечается недостоверная активация ММП-9 как в апикальном отделе собственной пластинки слизистой (СПС), так и в клеточном компоненте стромы СПС. При сформированной экспериментальной ацетатной язве желудка в апикальном отделе СПС желудка отмечается достоверное увеличение интенсивности экспрессии на фоне наметившейся тенденции к увеличению числа ММП-9-позитивных клеток. Наряду с этим отмечается увеличение числа ММП-9- позитивных клеток в клеточном компоненте стромы СПС (Q<0,05). Одновременно в клеточном компоненте стромы СПС выявлено более выраженное увеличение числа при максимально высокой интенсивности экспрессии ММП-9 позитивных клеток.
Таблица 1
Удельное число ММП-9-позитивных клеток (% и балл) при экспериментальной ацетатной язве желудка через 7 суток с момента моделирования [25 и 75 перцентили]
Показатели Исходное состояние Контроль Ацетатная язва
Апикальный отдел собственной пластинки слизистой желудка % 10[10;101 42,5[17,5;48,75] 52,5[50;62,5]
балл 1,5[1;2] 1,5[1;2] 3[3;3]*
Клеточный компонент стромы собственной пластинки слизистой оболочки % 15[2,5;201 32,5[12,5;48,75] 77,5[55;100]*
балл 1,5[0,25;2] 2[1,25;2] 3[3;3]*
Примечание: * - достоверность различий между показателями в контрольной группе и при экспериментальной ацетатной язве желудка, д<0,05
В группе животных с экспериментальной ацетатной язвой желудка на сроке 7 суток в эритроцитарной массе крови из подключичной вены концентрация магния по сравнению с контролем снижается в 1,36 раз (р<0,05). При этом отмечается умеренная отрицательная корреляционная связь между площадью язвенного дефекта и уровнем внутриэритроцитарного магния в крови из подключичной вены в исходном состоянии (г=-0,4) и сильная - при сформировавшейся экспериментальной язве желудка (г= -0,89). В то время как в крови из воротной вены его уровень практически оставался неизменным. При сформированной язве желудка концентрация магния в плазме крови из подключичной, воротной вены, лимфе по отношению к контролю значимо не изменялась (табл. 2).
Таблица 2
Содержание магния в эритроцитарной массе и плазме крови (ммоль/л) у крыс с ацетатной язвой до и после применения МСЛК (М±m)
Кровь Исходное состояние Контроль Ацетатная язва
подключичная вена (эритроцитарная масса) 1,52±0,089 1,8±0,105 ** 1,32±0,082 ** п
воротная вена (эритроцитарная масса) 1,48±0,13 1,65±0,11 1,69±0,105
подключичная вена (плазма) 0,981±0,015 0,917±0,011 * 0,914±0,026 **
воротная вена (плазма) 1,02±0,013 0,884±0,006 *** 0,923±0,02 ***
Лимфа 0,72±0,004 0,71±0,018 0,69±0,012
Примечание: по отношению к исходному состоянию: * - p<0,05; ** - p<0,01; *** - p<0,001; по отношению к контролю: п - p<0,05;
Анализ полученных результатов показывает, что в исходном состоянии максимальная активность ММП-9 выявляется в клеточном компоненте стромы СПС оболочки. В контрольной серии при весьма умеренном воздействии на серозную оболочку ЖКТ, увеличивается число клеток экспрессирующих ММП-9 в клеточном компоненте стромы СПС, но еще более - в апикальном отделе СПС, где, очевидно, возрастает скорость обновления слизистой. При сформировавшейся ацетатной язве возрастает число ММП-9-позитивных клеток, как в апикальном отделе СПС, так и клеточном компоненте стромы СПС. Высокая экспрессия и активность ММП-9 в различных отделах СПС отражает, очевидно, напряжение деструктивно-воспалительные, деструктивно-пролиферативные процессы, протекающие в этих тканях формировании язвы.
Установлено, что механизмы пролиферации энергозатрат-ны. В активации факторов энергообразования и потребления значимую роль играет внутриклеточный магний [4]. Его аккумуляция в клетке способствует формированию специальных магниевых TRAMP каналов [11]. Развивающееся на фоне язвы уменьшение содержания эритроцитарного магния является, видимо, результатом перераспределительных процессов в пользу поврежденных тканей. Доказательством чего служит снижение концентрации магния в лимфе, оттекающей от межклеточного экстрацеллюлярного пространства тканей ЖКТ.
В работах Громовой О.А. с соавторами (2008) делается предположение, что магниевый дефицит нарушает метаболизм соединительной ткани, путем активации таких ферментов как гиалуронидаза, трансглутаминаза, металлопротеиназы и т.д. [6]. Результаты наших исследований так же подтверждают, что между содержанием внутриклеточного магния и активностью ММП-9 существует отрицательная корреляционная связь.
Вывод: проведенное исследование позволяет сделать заключение, что в зоне экспериментального язвенного дефекта увеличивается число и интенсивность экспрессии желатиназа В-позитивных клеток на фоне изменения содержания магния в эритроцитарной массе.
Литература
1. Ивашкин, В.Т. Медицинский вестник / В.Т. Ивашкин.-2006.- № 19 (362).- С. 9-10.
2. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям лабораторной диагностике / D/C/ Камышников. - М.:МЕДпресс-информ, 2004.- С. 579-591.
3. Окороков, А.Н. Диагностика болезней внутренних органов: Т.1. Диагностика болезней органов пищеварения / А.Н. Окороков.- М.: Мед. лит., 2002. - 560с.
4. Поветкина, В.Н. Вестник новых медицинских технологий / В.Н. Поветкина, Л.Н. Рогова.- 2011. Т.ХУШ, №2.- С.83-86.
5. Старавойтов, В.А. Вестник Российского университета дружбы народов (серия медицина) / В.А. Старавойтов, Л.Н. Рогова, М.Е. Стаценко.- 2008.- № 7.- С. 532-535.
6. Трошин, И.Ю. Кардиология / И.Ю. Трошин, О.А. Громова. - 2008, №10.- С. 14—21.
7. Турна, А.А. Активность матриксных металлопротеиназ при различных патогенетических вариантов воспаления: автореф. дис. ... док. мед. наук. / А.А. Турнаю.- М., 2010.
8. Хасигов, П.З. Биохимия / Хасигов П.З., Подобед О.В. 2001.- том 66.- вып 2.- С.167-179.
9. Couturier M. R., Tasca E., Montecucco C., Stein M. // Infection and Immunity.- 2006.- Т. 74.- № 1.- С. 273-281.
10. Okabe S.//Biol.pharm.bull.- 2005.- Vol.28, №8.- P. 13211341.
11. Rubin H. //Magnesium research.- 2005.- Vol.18, 4.-P.268-74.
THE ROLE OF GELATINASE AND MAGNESIUM IN EXPERIMENTAL GASTRIC ULCER DEVELOPMENT
L.N. ROGOVA, N.V. SHESTERNINA
Volgograd State Medical University
By means of immune-histo-chemical method it has been revealed that at formed acetate ulcer in the fabrics of ulcerous defect in apical and cell component of mucous plate stroma the number of gelatinase B-positive cells number and its intensity increase. At the same time magnesium concentration in red blood cells, withdrawn from subclavian vein, decreases. Simultaneously negative correlation dependence between magnesium level and gelatinase B expression.
Key words: gelatinase B, acetic gastric ulcer, magnesium.
УДК 611.127
КРОВЯНАЯ КАРДИОПЛЕГИЯ ВО ВРЕМЯ ОПЕРАЦИЙ НА СЕРДЦЕ В УСЛОВИЯХ ИСКУССТВЕННОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ - ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
В.А. БУБНОВ, Б.Б. ЧЕРНЯК
Статья посвящена актуальной проблеме защиты миокарда при постоянно расширяющихся технических возможностях кардиохирургии в отношении коррекции сложных пороков и заболевания сердца. Неудовлетворительная защита миокарда является одним из ведущих ключевых факторов, обусловливающих летальность в раннем послеоперационном периоде, при адекватно выполненной хирургической коррекции.
Ключевые слова: кровяная кардиоплегия, сердце, миокард, искусственное кровообращение.
Актуальность проблеме защиты миокарда придает факт, что постоянно расширяются технические возможности кардиохирургии в отношении коррекции все более сложных пороков и заболеваний сердца, однако более травматичных и требующих большего периода прекращения коронарного кровотока. Возрастает число оперируемых больных с уже скомпрометированным и ишемизированным миокардом,где защита миокарда еще более важна. Неудовлетворительная защита миокарда является одним из ведущих ключевых факторов, обусловливающих летальность в раннем послеоперационном периоде, при адекватно выполненной хирургической коррекции.
Температурный режим во время аноксии миокарда. Сложным и нерешенным до настоящего времени вопросом является оптимальная для миокарда температура во время ишемии. Необходим компромисс между двумя противоположными стратегиями: уменьшением метаболических потребностей миокарда путем остановки сердца и снижением температуры миокарда и, в противоположность этому, повышение температуры миокарда в период ишемической остановки для увеличения возможностей немедленного восстановления функции сердца после снятия зажима с аорты [17].
Теоретическим обоснованием использования гипотермии в кардиохирургии явились экспериментальные работы Furman J.I. et al. (1950) о логарифмической зависимости между температурой и метаболизмом миокарда. Авторы наблюдали замедление обмена на 90% при снижении температуры с 36° до 10° С.Однако наряду с положительным эффектом снижения метаболических потребностей сердечной мышцы гипотермия сама по себе не безразлична для тканей. Сердце даже при глубоком охлаждении нуждается в энергии. Единственным ее источником является анаэробный гликолиз. Сохранение его имеет положительное значение, так как образующиеся при этом даже небольшое количество АТФ позволяет сохранить функциональную активность мембран и замедлить наступление ишемической контрактуры. При низких температурах необратимо угнетается ряд ферментных систем, прежде всего АТФаза, нарушается интегральность и функция липидных мембран. Нарушается иммунный статус [4].
