CC BY
14
УДК 619: 612. 98; 578. 835. 2
Левкчвськнй Д.М. - к.вет.н., доцент, © Маслянко Р.П. - д.бюл.н., професор. Лье1еський нацюнальний утеерситет еетеринарног медицины та бютехнологт
¡мет С.З. Гжицького
РОЛЬ 1МУННИХ МЕХАН1ЗМ1В У РОЗВИТКУ Д1АРЕ1 У ЯГНЯТ
При клмчному обстеженш в оцшщ iмунного статусу ягнят з ознаками дiареl було встановлено, що запальний i деструктивний процес у тонкому кишечнику асоцшеться з високим рiвнем антитiл до представниюв мiкрофлори, включаючи лактобактери, перевищуючи норму рiвня природних антитiл у кровi ягнят рiзного вiку. Поряд з цим у хворих тварин виявлено змши в концентраци iмуноглобулiнiв i кiлькостi iмунокомпетентних клiтин. Результати свщчать, що ключову роль в розвитку дiареl у ягнят ввдграють порушення процесу iмунорегуляцil, в тому числ^ аутоiмунного характеру.
Ключовi слова: дiарея, ягнята, антитiла, iмунокомпетентнi кл^ини.
При дiагностичному обстеженнi ягнят з дiарейним синдромом вiдмiчають розвиток хрошчного запалення тонкого вiддiлу кишечнику, особливо дванадцятипало! кишки з ознаками деструктивного процесу. В 9095% випадюв розвитку дiареl асоцiйовано з переб^ом iнфекцiйного процесу в слизових оболонках шлунково-кишкового тракту, зумовлених бактерiальними та вiрусними агентами [1, 5, 9, 19, 12].
Вщомо, що в патогенез захворювань залучаються фактори природного та адаптивного iмунiтету. Iнфекцiя, викликана патогенними збудниками, iнiцiюe активацiю фагоцитозу [3, 21, 26], посилення хемотаксису кл^ин до вогнища ураження та продукци вiльних радикалiв [17, 20, 23].
В цш роботi ми виходили iз концепци, що ключову роль у розвитку дiареl у ягнят вдаграють порушення процесу iмунорегуляцil, за участю гуморальних i кл^инних механiзмiв захисту.
Мета дослiджень полягала у вивченнi ролi окремих факторiв природного та адаптивного iмунiтету в розвитку дiареl у ягнят на основi визначення рiвня iмуноглобулiнiв та антитш, а також регуляторних Т- i В-лiмфоцитiв у 1х кров1
У вiтчизнянiй лiтературi вiдсутнi дослщження, присвяченi вивченню iмунного статусу ягнят при дiареях рiзного походження, не враховуючи окремих дослiджень у ягнят раннього вжу рiзних порiд, народжених в рiзнi пори року [1].
Матерiал i методи дослщжень. Пiд нашим спостереженням знаходилося 17 ягнят з ознаками дiареl вжом 7-30 днiв.
Дiагноз дiарея (гастроентерит) було встановлено на пiдставi клшжо-лабораторних критерив з використанням загальноприйнято! класифжаци активностi дiарейного процесу.
© Левшвський Д.М., Маслянко Р.П., 2009
161
В контрольну групу були включеш 8 клмчно здорових ягнят-аналопв, яю знаходились в однакових умовах годiвлi та утримання. Стан iмунноl системи ощнювали за рiвнем гуморальних i клiтинних факторiв природного та адаптивного iмунiтету згiдно з методиками, описаними Р.П. Маслянком i ствавторами [2].
Оцiнку гуморального iмунiтету проводили за кiлькiстю В-лiмфоцитiв i концентрацieю iмуноглобулiнiв рiзних класiв i зв'язаних з ними захисних антитш. Клiтинну ланку природного й адаптивного iмунiтету оцiнювали за кiлькiстю лейкоциив, лiмфоцитiв рiзних субпопуляцiй, зокрема, СД4+ Т-гелпери та СД8+ Т-супресори-кшери, iмунорегулюючий iндекс (1Р1) -СД4+/СД8+ клiтин - за спiввiдношенням iмунокомпетентних Т-лiмфоцитiв. Фагоцитарну активнiсть лейкоцитiв визначали з використанням шактивовано! культури золотистого стафшококу, при цьому враховували основш параметри фагоцитарного процесу.
Результати дослiджень показали, що у ягнят 3-денного вiку гострий переб^ дiареl супроводжуеться достовiрним зниженням вщносно! кiлькостi лiмфоцитiв переважно за рахунок зменшення числа СД4+ Т-гелперних кл^ин (табл. 1).
Таблиця 1
Показники адаптивного iмунiтету ягнят в динамЩ __розвитку д1аре'1, М±т_
Показники Здо ров1 Хвор1
3 дш 14 дшв 3 дш 14 дшв
Лейкоцити, % 7,6±0,2 6,4±0,2 6,2±0,2* 6,5±0,3
Л1мфоцити, % 36,2±0,9 38,6±0,9 31,4±0,8* 32,2±1,1*
СД4+, % 41,4±1,2 42,7±1,2 29,7±0,8** 36,8±1,2*
СД8+, % 21,3±0,8 34,4±0,9* 19,5±0,7 27,7±0,9*
СД4+/СД8+ 1,94 1,24 1,53* 1,33
ДО, г/л 8,6±0,2 5,8±0,1 5,4±0,1** 4,1±0,1**
IgМ, г/л 0,8±0,01 1,4±0,03 0,7±0,01 1,1±0,03
¡ЯА, г/л 0,6±0,01 0,9±0,02 0,5±0,01 0,8±0,02
В-клггини, % 12,4±0,4 16,7±0,7 10,2±0,3* 12,3±0,4*
Аналiз таблицi 1 показуе, що в кровi новонароджених ягнят (3-денного вжу), хворих дiареею, знижуеться вiдносна кiлькiсть лейкоцитiв на 18% (Р<0,05), в тому чи^ лiмфоцитiв на 14% (Р<0,05), Т-гелперних клггин - на 28% (Р<0,01) та iмунорегуляторний iндекс - на 28% (Р<0,05). Одночасно у ягнят дослщно! групи, порiвняно з контрольною, достовiрно знижувався вмiст iмуноглобулiнiв головного класу - IgG на 37% (Р<0,01). Iншi фактори адаптивного iмунiтету в кровi новонароджених ягнят дослщно! групи достовiрних змiн не зазнавали.
При дослiдженнi цих же параметрiв iмунiтету у 14-денних ягнят (таблиця 1) можна побачити, що у дослщнш грут загальне число лейкоциив суттево не змiнилося, а вмкт IgG достовiрно знизився (Р<0,01). Вщносна
162
кшьккть лiмфоцитiв у кровi здорових ягнят на другому тижш життя достовiрно збшьшилася, що могло бути наслщком iнтенсивного засвоення !х з материнського молозива. Привертае увагу те, що число кл^ин, здатних утворювати розетки з гетерогенними еритроцитами в кровi 3-денних ягнят, особливо дослщно! групи, менше, шж 14-денних.
При дослiдженнi природних факторiв iмунiтету, зокрема фагоцитарно! системи, з'ясували вияснили, що хворi гострим гастроентеритом ягнята суттево не вiдрiзнялися вщ клiнiчно здорових аналогiв за основними параметрами фагоцитозу (табл. 2).
Таблиця 2
Фагоцитарна актнвшсть лейкоцнт1в ягнят при д1аре'1, М±т
Показники Здоров1 Хвор1
3 дш 14 дшв 3 дш 14 дшв
Фагоцитарна актившсть, % 31,6±0,9 45,8±2,7** 27,9±1,8 38,6±2,4**
Фагоцитарне число, % 41,2±2,3 51,6±2,8* 34,5±1,9 45,7±2,6*
Фагоцитарний 1ндекс, од. 4,7±0,1 5,9±0,2* 3,9±0,3 5,2±0,3*
1з даних таблицi 2 видно, що хоча ягнята дослщно! групи впродовж всього перюду спостережень i характеризувалися пщвищеними показниками фагоцитарно! реакцi!, але рiзниця була статистично недостовiрною. Натомiсть з вжом цi показники неспецифiчно! резистентност у ягнят обох груп достовiрно зростають (Р<0,01).
Таким чином, на пiдставi проведених дослiджень можна зробити таю висновки. Незважаючи на подiбнiсть змiн, аналiзуючи показники у рiзнi вiковi перiоди, для ягнят 3-денного вiку з гострим перебiгом дiаре! характерна недостатнiсть гуморально! та кл^инно! ланок iмунно! системи, що супроводжувалась зниженням числа Т-лiмфоцитiв, головним чином за рахунок зменшення кiлькостi Т-гелперних кл^ин i в меншiй мiрi - Т-супресорiв-кiлерiв, а також значним дефщитом В-лiмфоцитiв. Серед iмуноглобулiнiв окремих клаЫв вiдмiчали зниження рiвня IgG у сироватцi кровi при порiвняльнiй стабiльностi IgМ i IgА. Причому, вщхилення iмунного статусу в обстежених ягнят дослщно! групи складали 40-50% вщ рiвня показникiв тварин контрольно! групи, що може вважатися недостатшстю iмунiтету. Такi вiдхилення iмунного захисту в органiзмi ягнят, хворих дiареею, вимагають проведення вiдповiдно! iмунокорегуючо! терапи. Незважаючи на збiльшення у кровi ягнят контрольно! групи В-лiмфоцитiв порiвняно з тваринами дослiдно! групи, у них виявляеться дисбаланс кл^инно! ланки iмунiтету. Зокрема спiввiдношення iмунорегуляторного шдексу переважае в сторону Т-супресорно! ланки захисту. Тому для посилення iмунного захисту в органiзмi хворих ягнят по^бно застосовувати модулятори, здатнi пщвищити функцiональну активнiсть Т-гелперних кл^ин, якi спроможнi забезпечити високий рiвень адаптивного iмунiтету.
163
Л1тература
1. Левювський Д.М., Маслянко Р.П. 1мунний статус ягнят у критичш перюди постнатального розвитку // Науковий вкник ЛНУВМ та БТ iM. С.З. Гжицького. - 2004. - Т.6 (1), С. 202-208.
2. Маслянко Р.П. i ствавтори. Методичш рекомендаци по ощнщ та контролю iмунного статусу тварин / Львiв. - 2001. - 72 с.
3. Федоров Ю.Н. Иммуноглобулины овец в онтогенезе и значение их количественных исследований // Труды ВНЭВ. - 1985. - Т.63. - С. 69-75.
4. Adkins B., Leclerc C. Neonatal adaptive immunity comes of age // Nat. Rev. Immunol., - 2004. - V. 172. - P/ 1018-1027.
5. Akira S., Uematsu S. Pathogen recognition and innate immunity // Cell. - 2006.
- V. 124. - P. 783-801.
6. Berins C.L. Events at the host - microbial interface of the gastroenteral tract // Am. g. Physiol. - 2005. - V. 289. - P.G 173-G176.
7. Clark B. A review of viral and bacterial gastroenteritis // Curr. Opin. Inf. Dis. -2004. V. 17. - P. 461-469.
8. Crocker P.L. Singles of innate immunity in calves and lambs // Curr. Opin. Pharmacol. - 2005. V. 7. - P. 431-437.
9. Harris W.L., Spoerri J. Mechanisms of neonatal mucosal antibody production // J. Exp. Med. - 2002. - V. 195. - P. F19-F23.
10. Hugues S., Scholer A. Dynamic imaging of chemokine - dependent CD4+ T cells help for CD8+ T cell responses // Nat. Immunol. - 2007. - V. 8. - P. 921931.
11. Eckmann L. Innate immunity and mucosal intestine // Curr. Opin. Gastroenterol. - 2004. - V. 20 - P. 82-88.
12. Kapes D. Regulation of B- and T-lymphoid cell development // Curr. Opin. Immunol. - 2007. - V. 19. - P. 113-116.
13. Kravtsiv Y., Maslianko R. Passive immunity against rotavirus in infants // Науковий вкник ЛНУВМ та БТ iM. С.З. Гжицького. 2008. - Т.10. - С. 142149.
14. Luhn K., Simmons C.S. Moran E. et al. Increased frequencies of CD4+ CD25+ high regulatory T cell // J. Exp. Med. - 2007. - V. 204. - P. 979-987.
15. Moenning V., Honne H. BVD central in Europe current status and perspectives // Animal Health Res. Rev. - 2005. - V. 6. - P. 63-74.
16. Moredi L. Innate cellular immune response in newborn // Clin. Immunol. -2006. - V. 118. - P. 137-145.
17. Napolitano F., Marino V. Influence of artificial rearing on behavioral and immune response of lambs // App. Anim. Behav. Sci. - 1995. - V. 45. - P. 245253.
18. Niers L. Mutational support for the infants immune system // Nutr. Rev. - 2007.
- V. 65. - P. 347-361.
19. Ohgi S., Gima H., Akiyma T. Neonatal behavioral profile and crying in premature infants and term age // Acta Pediatr. - 2006. - V. 95. - P. 1461-1467.
164
20. Radek K., Gallo R.L. Antibacterial peptides natural effectors of the innate immune system // Semin. Immunopafhol. - 2007. - V. 29. - P. 27-45.
21. Ravetch J., Aderem A. Phagocytes cells // Immunol. Res. - 2007. - V. 220. - P. 5-8.
22. Reynond C.A. Somatic generation of diversity in a mammalian primary lymphoid organ: the sheep illal Peyer's patches // Cell. - 1991. - V. 64. - P. 995-1007.
23. Sanderson Y.R., Walker W.A. The role of TLR-s nods in intestinal development and homeostasis // Am. J. Gastroenterol. Physiol. - 2007. - V. 291. - P. 42-49.
24. Segal J., Melamed D. Role of receptor revision in forming a B cell repertoire // Clin. Immunol. - 2002. - V. 105. - P. 1-8.
25. Takeuchi O., Akira S. Recognition of viruses by innate immunity // Immunol. Res. - 2007. - V. 220. - P. 169-183.
26. Underhill D.M., Ozinsky A. Phagocytosis of microbes: complexity in action // Annu. Rev. Immunit. - 2002. - V. 20. - P. 825-852.
Summary D.M. Levkivsky, R.P. Maslianko. MECHANISMS OF IMMUNE RESPONSE IN NEONATAL LAMBS WITH DIARRHEA.
Clinical examination of 25 lambs with diarrhea and estimation of their immune state showed that inflammation and destructive process were associated with high level of immunoglobulins and antibodies to normal microflora, including Lactobacteria, and also with increased normal antibodies in the blood. Along with these changes animal had changes in level of immunoregulatory T cells. Results of study suppose that disorders of immune regulation, including autoimmune reactions, plays the main role in development of diarrhea in lambs.
Cmammx nadiumna do peda^ii 31.03.2009
165
