CC BY
4© Коллектив авторов, 2014
Роль эозинофильных гранулоцитов в возникновении рестеноза у пациентов после коронарного стентирования с помощью стентов, покрытых лекарственным веществом
З.А. ГАББАСОВ, С.Г. КОЗЛОВ, А.Э. ИМАЕВА, О.С. САБУРОВА, В.П. МАСЕНКО
ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава России
Role of eosinophil granulocytes in the occurrence of restenosis in patients after coronary stenting with drug-eluting stents
Z.A. GABBASOV, S.G. KOZLOV, A.E. IMAEVA, O.S. SABUROVA, V.P. MASENKO Russian Cardiology Research-and-Production Complex, Russian Ministry of Health, Moscow
Резюме
Цель исследования. Изучение роли эозинофильных гранулоцитов в развитии рестеноза после имплантации стентов, покрытых лекарственным веществом (СЛП).
Материалы и методы. Проведено сопоставление уровня эозинофилов, катионного белка эозинофилов (КБЭ), иммуноглобулина Е (IgE) и С-реактивного белка (СРБ) в крови 170 больных ишемической болезнью сердца (ИБС) со стабильной стенокардией, которым в течение первого года после эндоваскулярной реваскуляризации миокарда с помощью СЛП проведена повторная коронарография. Количество эозинофилов в крови определяли по результатам, полученным на проточном цитофлуориметре FACS Calibur («Becton Dickinson», США). Уровень КБЭ, IgE и СРБ в крови определяли иммуноферментным методом на анализаторе Immulite-1000 («Siemens», Германия). Данные представлены в виде медианы (25-й процентиль; 75-й процентиль).
Результаты. Уровень эозинофилов в крови пациентов с рестенозом составил 272 (234; 292) клетки в 1 мкл, в то время как в крови больных без рестеноза — 134 (85; 156) клетки в 1 мкл (p=0,002). Уровень КБЭ в плазме крови пациентов, у которых возник рестеноз после имплантации СЛП, оказался выше (p=0,017), чем у больных, у которых рестеноз не обнаружен, — 17,7 (11,2; 24) и 9 (6,4; 12,9) нг/мл соответственно. Уровень КБЭ через 6 мес после имплантации СЛП статистически значимо выше (р=0,04) исходного — 8,6 (7,3; 9,7) нг/мл. В последующем отмечено еще большее увеличение уровня КБЭ. Статистически значимой динамики уровня КБЭ в крови после имплантации стентов без покрытия лекарственным веществом не обнаружено.
Заключение. Полученные данные позволяют предположить связь между возникновением рестеноза и повышенной активностью эозинофильных гранулоцитов у пациентов с ИБС после имплантации СЛП.
Ключевые слова: коронарное стентирование, рестеноз, эозинофильные гранулоциты.
Aim. To study the role of eosinophil granulocytes in the development of restenosis after drug-eluting stent (DES) implantation. Materials and methods. The blood levels of eosinophils, eosinophil cationic protein (ECP), immunoglobulin E (IgE), and C-reactive protein (CRP) were compared in 170 patients with coronary heart disease (CHD) and stable angina who had undergone recoronarography within the first year after endovascular myocardial revascularization using DES. The blood level of eosinophils was determined by the results obtained employing the FACS Calibur flow cytofluorometer (Becton Dickinson, USA). That of ECP, IgE, and CRP was estimated by enzyme immunoassay by means of an Immulite-100 analyzer (Siemens, Germany). The data were presented as median (25th percentile and 75th percentile).
Results. The blood eosinophil level was 272 (234; 292) cells/^l in patients with restenosis while that was 134 (85; 156) cells/^l in those without restenosis (p=0.002). The plasma ECP level proved to be greater in the patients who had developed restenosis after DES implantation than in those who had not [17.7 (11.2; 24) and 9 (6.4; 12.9) ng/ml, respectively (p=0.017). At 6 months after DES implantation, the level of ECP was significantly higher (8.6 (7.3; 9.7) ng/ml) than the baseline level (p=0.04). Later on, there was an even greater increase in ECP levels. No significant changes were noted in blood ECP levels after bare stent implantation. Conclusion. The findings suggest that there is a relationship between the occurrence of restenosis and the enhanced activity of eosinophil granulocytes in CHD patents after DES implantation.
Key words: coronary stenting, restenosis, eosinophil granulocytes.
АГ — артериальная гипертония
вч-СРБ — высокочувствительный С-реактивный белок
ГЛП — гиперлипидемия
ИБС — ишемическая болезнь сердца
КБЭ — катионный белок эозинофилов
КГ — коронарография
КС — коронарное стентирование
ОА — огибающая артерия
ПКА — правая коронарная артерия
ПНА — передняя нисходящая артерия
СбЛП — стент без покрытия лекарственным веществом
СД — сахарный диабет
СЛП — стент, покрытый лекарственным веществом ФК — функциональный класс
ЭВРМ — эндоваскулярная реваскуляризация миокарда IgE — иммуноглобулин E
Несмотря на большое число исследований, посвя- конца неясны. Повреждение сосудистой стенки, проис-щенных проблеме рестеноза, механизмы его развития до ходящее во время коронарного стентирования (КС), ини-
циирует каскад последовательных процессов, включающих острый воспалительный ответ, миграцию и последующую пролиферацию синтезирующих экстрацеллюляр-ный матрикс гладких мышечных клеток [1, 2]. Избыточный пролиферативный ответ и формирование клетками избыточного количества внеклеточного матрикса приводит к гиперплазии неоинтимы — основной причине возникновения рестеноза после имплантации стентов [3—5]. Восстановление сосудистой стенки сопровождается не только активацией стромальных клеток, но и вовлечением в процессы пролиферации ряда других клеточных популяций, в том числе клеток крови. В последние годы высказано предположение о том, что одной из возможных причин возникновения рестеноза после имплантации стентов, покрытых лекарственным веществом (СЛП), может быть реакция локальной гиперчувствительности на полимерное покрытие стентов — процесс, в котором эо-зинофилы играют важную роль [6, 7]. Массивная инфильтрация клетками воспаления, в том числе эозинофилами, стенки коронарной артерии в месте развития рестеноза после имплантации стента, покрытого сиролимусом, продемонстрирована H. Hao и соавт. [8]. Показана связь между количеством эозинофилов в крови и риском смерти у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС), подвергшихся коронарной ангиопластике [9]. В то же время исследования, посвященные данной проблеме, немногочисленны. Целью настоящего исследования явилось изучение роли эозинофильных гранулоцитов в развитии ре-стеноза после имплантации СЛП.
Материалы и методы
Под наблюдением находились 170 больных с хроническими формами ИБС, мужчины и женщины, в возрасте от 35 до 75 лет, в том числе 80 пациентов, которым в течение первого года после имплантации СЛП проведена коронарография (КГ); 75 больных, впервые подвергшихся КС, а также 15 пациентов с ИБС, подтвержденной при КГ.
В исследование не включали пациентов с нестабильной стенокардией, в первые 2 мес после перенесенного инфаркта миокарда, с острым нарушением мозгового кровообращения, операцией коронарного шунтирования в анамнезе, ангиопластикой по поводу рестеноза в анамнезе, снижением фракции выброса левого желудочка менее 40%, застойной сердечной недостаточностью, повышением уровня креатинина в крови более 150 мкмоль/л, диффузными заболеваниями соединительной ткани (ревматизм, ревматоидный артрит и др.), клиническими и лабораторными признаками острого инфекционного заболевания, тяжелыми хроническими заболеваниями (онкологические, гематологические и др.) и увеличением количества эозинофилов в крови более 700 клеток в 1 мкл (для исключения гиперэозинофи-лии, вызванной лекарственной аллергией, аллергической сенсибилизацией организма и др.).
Исследование состояло из 3 последовательно выполненных этапов, результаты каждого из них служили предпосылкой для проведения следующего этапа. На первом этапе изучена связь
Сведения об авторах:
Козлов Сергей Геннадиевич — д.м.н., с.н.с. отд. атеросклероза ИКК им. А.Л. Мясникова РКНПК
Имаева Асия Эмверовна — к.м.н., м.н.с. научно-диспансерного отд. Сабурова Ольга Стояновна — к.б.н., с.н.с. лаб. стволовых клеток человека ИЭК
Масенко Валерий Павлович — д.м.н., рук. отд. нейрогуморальных и иммунологических исследований
между уровнем циркулирующих положительных по остеонекти-ну клеток крови и полиморфно-ядерных лейкоцитов с развитием рестеноза после имплантации СЛП. В исследование включили 48 мужчин и женщин с ИБС, которым в течение первого года после эндоваскулярной реваскуляризации миокарда (ЭВРМ) с помощью стентов, покрытых сиролимусом (Sypher, «Cordis», США), в плановом порядке выполнена КГ. При проведении анализа клеток крови методом проточной цитофлуориметрии выявлены клетки, обладающие интенсивной автофлюоресценцией по каналу FL-1 (рис. 1). При этом в крови пациентов с рестенозом количество подобных клеток было больше, чем у пациентов без рестеноза. Оказалось, что такая интенсивная автофлюоресценция характерна для эозинофильных гранулоцитов и связана с интенсивным свечением их специфических цитоплазматических гранул [10, 11]. Совместно со специалистами ФГБУ «Гематологический научный центр» МЗ РФ проведены дополнительные исследования и дано заключение о том, что изучаемая популяция клеток представляет собой именно эозинофильные гранулоциты. Данное наблюдение послужило поводом для более детального анализа лейкоцитарной формулы в обследуемых группах пациентов. Уровень лейкоцитов проанализирован с помощью гематологического анализатора Cell-DYN 3500 и проведено сопоставление уровня полиморфно-ядерных лейкоцитов среди пациентов с рестенозом и без рестеноза. Обнаруженное с помощью гематологического анализатора различие в уровне эозинофилов в крови больных обеих групп побудило провести более детальный анализ состава различных субпопуляций ядросодержащих клеток крови методом проточной цитофлуориметрии. Количество эозинофи-лов в крови определяли по результатам, полученным на проточном цитофлуориметре FACS Calibur («Becton Dickinson», США). Для этого в пробе крови по параметрам светорассеяния клеток определяли процентное содержание положительных по CD45 гранулоцитов с высоким уровнем автофлюоресценции (автоф-люоресценция+/CD45+). По данным измерений вычисляли концентрацию эозинофильных гранулоцитов в 1 мкл крови.
На втором этапе изучен уровень катионного белка эозинофилов (КБЭ), а также эозинофильного нейротоксина у больных с рестенозом после имплантации стентов, покрытых сиролимусом (Sypher, «Cordis», США). В исследование включили 32 пациентов (мужчин и женщин) с ИБС, которым в течение первого года после ЭВРМ с помощью СЛП в плановом порядке проведена КГ. Контрольную группу составили 15 больных с верифицированным посредством КГ диагнозом ИБС, но не подвергавшихся ранее ЭВРМ. По результатам КГ пациентов распределили на 2 группы. В 1-ю группу вошли 13 больных, у которых отмечено возникновение рестеноза, во 2-ю группу — 19 пациентов без рестеноза. У пациентов обеих групп проведено сравнение клинической и ангиографической характеристик (количество пораженных магистральных артерий, окклюзий, бифуркационных стенозов, протяженных стенозов, артерий малого диаметра). Всем пациентам проведено измерение уровня КБЭ, эозинофильного нейротоксина, высокочувствительного С-реактивного белка (вч-СРБ), иммуноглобулина E (IgE) в сыворотке крови, а также сопоставление уровня этих показателей среди пациентов с ресте-нозом, без рестеноза и контрольной группы.
Заключительным этапом исследования стала оценка динамики уровня КБЭ в течение года после КС. Под наблюдением находились 75 больных ИБС — мужчин и женщины, подвергшихся в плановом порядке КС. Всех пациентов разделили на 2 группы. В 1-ю группу вошли 60 больных, которым были имплантированы стенты, покрытые сиролимусом (Sypher, «Cordis», США) и эверолимусом (Promus, «Boston Scientific», США), во 2-ю группу —15 пациентов после ЭВРМ с помощью стентов без покрытия лекарственным веществом (СбЛП). У пациентов обеих групп проведено сравнение клинической и ангиографической характеристик (количество пораженных магистральных артерий,
Контактная информация:
Габбасов Зуфар Ахнафович — д.б.н., в.н.с. лаборатории стволовых клеток человека ИЭК РКНПК; тел.: +7(495)414-6279; e-mail: zufargabbasov@yandex.ru
Рис. 1. Гистограммы зависимости интенсивности флюоресценции лейкоцитов, меченных антителами к CD45, по каналу FL-3 (СD45-PC5) от интенсивности автофлуоресценции лейкоцитов по каналу FL-1.
а — лейкоциты, полученные из крови пациентов, у которых развился рестеноз; б — лейкоциты, полученные из крови пациентов без рестеноза. Гейт R1 (указан стрелкой) содержат положительные по CD45 клетки с интенсивной автофлюоресценцией.
окклюзий, бифуркационных стенозов, протяженных стенозов, артерий малого диаметра). У всех больных перед агентированием, на 1, 5 и 7-й дни, а также через 2, 6 и 12 мес после ЭВРМ в крови определены уровни КБЭ, IgE и вч-СРБ. Выполнено сопоставление уровня этих показателей в динамике у пациентов, которым имплантированы СЛП, и у больных, которым имплантированы СбЛП.
При определении уровня КБЭ кровь для исследования брали из локтевой вены утром натощак после двенадцатичасового голодания в 2 пробирки (S-Monovette, SARSTEDT): с активатором свертывания для получения сыворотки и с ЭДТА для получения плазмы. Образец крови в пробирке, предназначенный для получения сыворотки, после полуторачасовой инкубации при температуре 19 °С центрифугировали в течение 15 мин при температуре 19 °С при 1500 g. Супернатант отбирали в отдельные пробирки и хранили при температуре —70 °С. После размораживания уровень КБЭ определяли иммуноферментным методом в соответствии с рекомендациями к набору Immulite-1000 ECP («Siemens Healthcare», Великобритания) на автоматическом хе-милюминесцентном анализаторе Immulite-1000 («DPC-Siemens», США). Образец крови, стабилизированный ЭДТА, центрифугировали в течение 15 мин при температуре 4 °C при 1500 g. Плазму отбирали в отдельные пробирки и хранили при температуре —70 °С. После размораживания готовили образцы для измерения коэффициента поглощения на медицинском анализаторе Униплан («ПИКОН», Россия) в соответствии с рекомендациями к набору ECP ELISA Kit («MBS», США), после чего проводили подсчет уровня КБЭ. Для КБЭ диапазон регистрируемых значений составлял 0,5—200 нг/мл с коэффициентом вариации не более 4%.
При определении уровня эозинофильного нейротоксина кровь для исследования брали из локтевой вены пациентов утром натощак после двенадцатичасового голодания в пробирки с ЭД-ТА (S-Monovette, SARSTEDT). После десятиминутной инкубации при температуре 19 °С центрифугировали в течение 10 мин при 1500 g при температуре 4 °С, плазму отбирали в отдельные пробирки и хранили при температуре —70 °С. После размораживания 50 мкл плазмы добавляли к 200 мкл раствора-разбавителя. Затем, следуя рекомендациям к набору EDN ELISA Kit («MBL»,
Япония), готовили образцы для измерения коэффициента поглощения на медицинском анализаторе Униплан («ПИКОН», Россия), после чего проводили подсчет уровня эозинофильного ней-ротоксина. Диапазон значений эозинофильного нейротоксина в плазме крови здоровых добровольцев согласно рекомендациям к набору EDN ELISA Kit («MBL», Япония) составлял 18,1 (6,2— 49,8) нг/мл.
Уровень С-реактивного белка определяли высокочувствительным нефелометрическим методом на автоматическом лазерном нефелометре BN-proSpec («Dade-Behring», Германия). Уровень IgE в плазме крови определяли иммуноферментным методом на автоматическом хемилюминесцентном анализаторе Immulite-1000 («DPC-Siemens», США).
Статистический анализ данных проведен с помощью программного пакета Statistica 6. Все собранные в ходе исследования данные представлены в виде медианы, 25-го и 75-го проценти-лей. Для проверки статистических гипотез о виде распределения использовали критерий W Шапиро—Уилка. Для сравнительного анализа данных, полученных в двух группах, использовали точный критерий Фишера и критерий U Манна—Уитни, в нескольких группах — критерий х2 и критерий ANOVA по Краскелу— Уоллису. Для анализа множества повторных измерений в одной и той же группе применяли критерий Фридмана, для парного сравнения повторных измерений — критерий Вилкоксона. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты
Пациенты с рестенозом (n=20) и больные без рестеноза (n=28), у которых проведен анализ состава различных субпопуляций ядросодержащих клеток крови (первый этап), не различались по возрасту, соотношению мужчин и женщин, курящих и некурящих, а также наличию гиперлипидемии (ГЛП) и сахарного диабета (СД). Число больных со стенокардией II—IV функционального класса (ФК) было сопоставимым в обеих группах. У
Рис. 2. Уровень эозинофильных гранулоцитов в крови у больных после имплантации СЛП.
1 — без рестеноза (n=28); 2 — с рестенозом (n=20).р<0,001 (критерий U Манна—Уитни).
одинакового числа пациентов имелись постинфарктный кардиосклероз и артериальная гипертония (АГ). У больных обеих групп одинаково часто осуществлялось стен-тирование передней нисходящей (ПНА), огибающей (ОА) и правой коронарной артерии (ПКА). Одинаково часто осуществлялось стентирование бифуркационных стенозов, окклюзий, протяженных стенозов, артерий малого диаметра.
Количество эозинофильных гранулоцитов с высоким уровнем автофлюоресценции в крови пациентов, у которых развился рестеноз после имплантации СПЛ, оказалось значительно выше, чем в крови пациентов без рестеноза (рис. 2). Уровень эозинофилов в крови у пациентов с рестенозом составил 272 (234; 292) клетки в 1 мкл, в то время как в крови у больных без рестеноза — 134 (85; 156) клетки в 1 мкл (p=0,002). По уровню эозинофилов в периферической крови пациенты, подвергшиеся КС с помощью СЛП, разделены на 2 группы. В 1-ю группу вошли 24 пациента с уровнем эозинофилов в крови ниже (<170 в 1 мкл) медианы распределения, во 2-ю группу — 24 пациента с уровнем эозинофилов в крови выше (>170 в 1 мкл) медианы распределения. Среди больных с уровнем эози-нофилов крови ниже медианы распределения рестеноз возник у 1 (5%), что статистически значимо меньше (p<0,001), чем во 2-й группе, где рестеноз выявлен у 19 (79%) пациентов. Различий по уровням положительных по остеонектину клеток в этих группах пациентов не обнаружено.
Пациенты с рестенозом (n=13), без рестеноза (n=19), а также лица, вошедшие в контрольную группу (n=15), у которых изучалась динамика уровня КБЭ и эозинофиль-ного нейротоксина (второй этап), не различались между собой по возрасту, соотношению мужчин и женщин, курящих и некурящих. Число больных со стенокардией II— IV ФК оказалось сопоставимым во всех группах. У одинакового числа пациентов имелись безболевая ишемия мио-
Рис. 3. Уровень КБЭ в крови у пациентов с ИБС, которым стентирование не проводилось (1; n=15), больных без рестеноза (2; n=19) и пациентов с ИБС, у которых выявлен рестеноз после имплантации СЛП (3; n=13). p<0,05 (критерий ANOVA по Краскелу—Уоллису).
карда, постинфарктный кардиосклероз, АГ, ГЛП и СД. Больным первых 2 групп одинаково часто проводили стентирование ПНА, ОА и ПКА, протяженных (>20 мм) стенозов, артерий малого (<2,75 мм) диаметра, окклюзий, а также бифуркационных стенозов.
Уровень КБЭ в плазме крови пациентов, у которых возник рестеноз после имплантации СЛП, статистически значимо выше (р=0,017), чем у больных без рестеноза, и составил 17,7 (11,2; 24) и 9 (6,4; 12,9) нг/мл соответственно (рис. 3). Уровень КБЭ у пациентов контрольной группы составил 8,5 (6,6; 10,9) нг/мл, что статистически значимо не отличалось (р=0,336) от аналогичного показателя у пациентов без рестеноза. Статистически значимых различий по уровню эозинофильного нейротоксина, вч-СРБ и ^Е в крови пациентов всех 3 групп не обнаружено. По уровню КБЭ в плазме крови пациенты, подвергшиеся КС, разделены на 2 группы. В 1-ю группу вошли 16 больных с уровнем КБЭ ниже медианы распределения (<11,4 нг/ мл), во 2-ю группу — 16 пациентов с уровнем КБЭ выше медианы распределения (>11,4 нг/мл). Среди больных с уровнем КБЭ в крови ниже медианы распределения ре-стеноз обнаружен у 3 (19%), что статистически значимо меньше, чем у больных с уровнем КБЭ выше медианы распределения, среди которых рестеноз выявлен у 10 (62%) (рис. 4).
Пациенты, которым имплантированы СЛП («=60), и больные после ЭВРМ с помощью СбЛП («=15), у которых оценена динамика уровня КБЭ в течение года после КС (третий этап), не различались по возрасту, соотношению мужчин и женщин, курящих и некурящих. Число больных со стенокардией II—IV ФК оказалось сопоставимым в обеих группах. У одинакового числа больных имелись постинфарктный кардиосклероз, безболевая ишемия миокарда, АГ, ГЛП и СД. У больных обеих групп одинаково часто встречалось поражение 1, 2 и 3 магистральных коронарных артерий. У больных обеих групп одинаково часто
Рис. 4. Возникновение рестеноза у пациентов с ИБС в зависимости от уровня КБЭ в плазме крови.
1 — КБЭ <11 нг/мл; 2 — КБЭ >11 нг/мл. р=0,019 (критерий и Манна—Уитни).
осуществлялось стентирование ПНА, ОА и ПКА. Одинаково часто осуществлялось стентирование окклюзий и артерий малого диаметра. У больных, которым имплантированы СЛП, чаще проводили стентирование протяженных и бифуркационных стенозов.
Уровень КБЭ перед имплантацией СЛП составил 7,8 (6,4; 8,7) нг/мл (рис. 5), при этом в 1, 3 и 7-й дни, а также через 2 мес после стентирования статистически значимо не отличался от исходного и равнялся 7,9 (6,2; 8,9), 7,6 (5,6; 8,4), 7,5 (5,6; 8,3) и 7,3 (6,55; 8,6) нг/мл соответственно. Таким образом, статистически значимой динамики уровня КБЭ в эти сроки не выявлено (р=0,12). Уровень КБЭ через 6 мес после имплантации СЛП был статистически значимо выше (р=0,04) исходного — 8,6 (7,3; 9,7) нг/мл. В последующем отмечено еще большее увеличение уровня КБЭ через 12 мес после КС — 12,5 (10,1; 14,6) нг/мл, что статистически значимо выше, чем через 6 мес после ЭВРМ (р=0,001). Уровень КБЭ перед имплантацией СбЛП составил 7,2 (6,5; 9,5) нг/мл и статистически значимо не отличался от исходного уровня КБЭ пациентов, которым имплантированы СЛП. Уровень КБЭ на 1, 3 и 7-й дни, а также через 2, 6 и 12 мес после имплантации СбЛП составил соответственно 7,5 (6,2; 9,2), 7,1 (6,5; 8,7), 6,9 (5,7; 8,4), 7,3 (5,1; 9,2), 7,0 (5,2; 8,6) и 7,4 (5,7; 8,3) нг/мл. Статистически значимой динамики этого показателя после имплантации СбЛП не обнаружено в течение всего периода наблюдения (р=0,61). У больных после ЭВРМ с помощью СЛП в отличие от пациентов, которым имплантированы СбЛП, выявлен более высокий уровень КБЭ через 6 (р=0,01) и 12 (р=0,001) мес наблюдения.
В 1-й день после имплантации СЛП отмечено повышение уровня вч-СРБ. На 3-й день данный показатель вернулся к исходному значению. В последующем статистически значимая динамика уровня СРБ не выявлялась. На 1-й день после имплантации СбЛП уровень вч-СРБ также был статистически значимо выше исходного. На 3-й и 7-й дни после стентирования отмечено прогрессив-
ное снижение данного показателя. В последующем уровень вч-СРБ вернулся к исходному и его статистически значимая динамика не выявлялась. Статистически значимой динамики уровня IgE в сыворотке крови у больных в течение всего периода наблюдения не было (p=0,78).
Обсуждение
При анализе различных популяций лейкоцитов после имплантации СЛП в крови пациентов с рестенозом по сравнению с пациентами без рестеноза обнаружено большее количество эозинофильных гранулоцитов. Кроме того, выявлено, что частота возникновения рестеноза у больных с количеством эозинофилов больше медианы распределения статистически значимо выше, чем у пациентов с количеством эозинофилов менее медианы распределения. Полученные данные могут свидетельствовать об участии эозинофильных гранулоцитов в формировании рестеноза. Возможность участия эозино-филов в возникновении рестеноза подтверждается результатами исследований других авторов. Так, в исследовании I. Toor и соавт. [9] показано, что уровень эозинофилов в крови перед чрескожным коронарным вмешательством выше медианы распределения связан с повышенным риском смерти через 6 мес после эндоваскуляр-ного вмешательства. В исследовании R. Virmani и соавт. [12] обнаружена инфильтрация эозинофилами стенки коронарной артерии в месте имплантации стентов, покрытых сиролимусом. A. Finn и соавт. [13] провели сравнение характера клеточной инфильтрации в местах имплантации СбЛП и СЛП в артериях свиней. По данным гистологического исследования, через 6 мес после имплантации стентов, покрытых сиролимусом или пакли-такселем, в месте вмешательства обнаруживалась выраженная эозинофильная и грануломатозная инфильтрация. В то же время после реваскуляризации миокарда с помощью СбЛП подобной клеточной инфильтрации не выявлено. Возможным объяснением полученных результатов, по мнению авторов, может быть возникновение локальной реакции гиперчувствительности к нерастворимому полимеру в стентах обоих типов либо к лекарственному препарату, выделяемому из стента в просвет сосуда [13]. Инфильтрация стенки коронарной артерии эозинофилами в месте развития рестеноза после имплантации СЛП продемонстрирована рядом других исследователей [8, 14, 15].
Гранулы эозинофилов содержат уникальные основные белки, в том числе большой основной белок, КБЭ, эозинофильную пероксидазу, эозинофильный нейроток-син, а также в-глюкуронидазу. Эти белки высвобождаются при активации эозинофилов и играют важную роль в эффекторной функции эозинофилов [16]. Из основных белков КБЭ является одним из наиболее широко используемых клинических маркеров активации эозинофилов. Полученное нами различие по уровню эозинофилов в группах пациентов с рестенозом и без такового позволило выдвинуть предположение о том, что развитие гиперплазии неоинтимы после имплантации СЛП может сопровождаться активацией и дегрануляцией эозинофилов с выделением КБЭ в системный кровоток. Согласно результатам настоящего исследования более высокий уровень КБЭ в плазме крови после имплантации СЛП сопрово-
13 12 11 1Ü
3" а
fp=bJHI
1 / /
1
/
y / I P-4,01
■ ■ ■ 2
Je 1-Йд^Ц SJiflete. ¡'-й-деш. а мес Fuffi: 12 мес ОТЁНТЛ-ГГТ711НГ
Рис. 5. Динамика уровня КБЭ в крови у больных в течение первого года после стентирования.
1 — после имплантации СЛП; 2 — после имплантации СбЛП.р<0,001 (критерий Фридмана). Значенияр (критерий UМанна—Уитни) для различий по уровню КБЭ между покрытыми и непокрытыми стентами приведены на рисунке.
ждается более частым развитием рестеноза. Подъем уровня КБЭ не связан ни с интенсивностью воспалительных процессов, которые оценивали по уровню вч-СРБ, ни с развитием зависимых от аллергических реакций. Анализ динамики уровня КБЭ после имплантации СЛП показал, что он повышается со 2-го месяца после ЭВРМ и достигает максимального значения через 12 мес после вмешательства. В то же время после имплантации СбЛП уровень КБЭ не отличается от исходного.
Связь уровня КБЭ в крови с развитием выраженных кардиальных осложнений (повторная реваскуляризация миокарда, инфаркт миокарда или смерть от ИБС) в течение первого года после ЭВРМ с помощью стентов, покрытых сиролимусом или паклитакселем, показана итальянскими исследователями [17]. Выдвинуто предположение о том, что вероятным фактором активации эозинофилов является гиперчувствительность к полимеру [9, 18]. Это косвенно подтверждается результатами экспериментальных исследований. Так, выявлены воспалительная реакция и утолщение интимы в стентированном сегменте по-
сле имплантации стентов, покрытых различными биополимерами [19].
Заключение
Количество эозинофильных гранулоцитов в крови пациентов, у которых отмечено возникновение рестеноза после имплантации СЛП, статистически значимо выше, чем у больных без рестеноза, что свидетельствует об участии этой популяции клеток в его возникновении.
У пациентов, подвергшихся КС с помощью СЛП и имеющих более высокий (выше медианы распределения) уровень КБЭ в крови, частота возникновения рестеноза выше, чем у пациентов с более низким (ниже медианы распределения) уровнем этого белка. Подобный факт позволяет предположить наличие воспалительной реакции с вовлечением эозинофилов в месте возникновения рестеноза.
ЭВРМ с помощью СЛП в отличие от имплантации СбЛП вызывает повышение уровня КБЭ, которое обнаруживают через 6—12 мес после коронарной ангиопластики.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ferrante G., Niccoli G., Biasucci L.M. et al. Association between C-reactive protein and angiographic restenosis after bare metal stents: an updated and comprehensive meta-analysis of 2747 patients. Cardiovasc Revasc Med 2008; 9 (3): 156—165.
2. Inoue T., Croce K., Morooka T. et al. Vascular inflammation and repair: implications for re-endothelialization, restenosis, and stent thrombosis. JACC Cardiovasc Interv 2011; 4 (10): 1057—1066.
3. Costa M.A., Simon D.I. Molecular basis of restenosis and drug-eluting stents. Circulation 2005; 111 (17): 2257—2273.
4. Curcio A., Torella D., Indolfi C. Mechanisms of smooth muscle cell proliferation and endothelial regeneration after vascular injury and stenting: approach to therapy. Circ J. 2011; 75 (6): 1287—1296.
5. Shoji M, Koba S., Kobayashi Y. Roles of Bone-Marrow-Derived Cells and Inflammatory Cytokines in Neointimal Hyperplasia after Vascular Injury. Biomed Res Int 2014; 2014: 945127.
6. Finn A. V., Kolodgie F.D., Harnek J. et al. Differential response of delayed healing and persistent inflammation at sites of overlapping sirolimus- or paclitaxel-eluting stents. Circulation 2005; 112 (2): 270—278.
7. Niccoli G., Montone R.A., Ferrante G., Crea F. The evolving role of inflammatory biomarkers in risk assessment after stent implantation. J Am Coll Cardiol 2010; 56 (22): 1783—1793.
8. Hao H, Ishibashi-Ueda H, Tsujimoto M. et al. Drug-eluting stent: importance of clinico-pathological correlations. Circ J 2011; 75 (7): 1548—1558.
9. ToorI.S., Jaumdally R., Lip G.Y. et al. Eosinophil count predicts mortality following percutaneous coronary intervention. Thromb Res 2012; 130 (4): 607—611.
10. Weil G.J., Chused T.M. Eosinophil autofluorescence and its use in isolation and analysis of human eosinophils using flow microfluo-rometry. Blood 1981; 57 (6): 1099—1104.
11. Thurau A.M., Schylz U., Wolf V. et al. Identification of eosinophils by flow cytometry. Cytometry 1996; 23 (2): 150—158.
12. Virmani R, Guagliumi G., Farb A. et al. Localized hypersensitivity and late coronary thrombosis secondary to a sirolimus-eluting stent: should we be cautious? Circulation 2004; 109 (6): 701—705.
13. Finn A. V., Nakazawa G., Joner M. et al. Vascular responses to drug eluting stents: importance of delayed healing. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2007; 27 (7): 1500—1510.
14. Kawano H., Koide Y, Baba T. et al. Granulation tissue with eo-sinophil infiltration in the restenotic lesion after coronary stent implantation. Circ J 2004; 68 (7): 722—723.
17. Kornowski R., HongM.K., Tio F.O. et al. In-stent restenosis: contributions of inflammatory responses and arterial injury to neointimal hyperplasia. J Am Coll Cardiol 1998; 31 (1): 224—230.
18. Muniz V.S., Weller P.F., Neves J.S. Eosinophil crystalloid granules: structure, function, and beyond. J Leukoc Biol 2012; 92 (2): 281—288.
19. Niccoli G., Schiavino D, Belloni F. et al. Pre-intervention eosinophil cationic protein serum levels predict clinical outcomes following implantation of drug-eluting stents. Eur Heart J 2009; 30 (11): 1340—1347.
Поступила 20.03.2014
