CC BY
92
ISSN 2313-7347
© Коллектив авторов, 2016
DOI: 10.17749/2313-7347.2016.10.4.039-048
РОЛЬ АРОМАТАЗЫ В РАЗВИТИИ ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА
Адамян Л.В., Сонова ММ, Логинова ОН, Арсланян К.Н.
ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России
X
го
X
0
го m го
с
01
о QÛ
О
Резюме
Цель работы - повышение эффективности лечения генитального эндометриоза путем уточнения некоторых аспектов патогенеза эндометриоза. Задачи исследования - определение экспрессии ароматазы в эутопическом и эктопическом эндометрии, выявление взаимосвязи полиморфизмов гена ароматазы и генов дотоксикации с целью оптимизации лечения больных гениальным эндометриозом. Материалы и методы. Определение полиморфных вариантов гена CYP19 проводили методом ПЦР со специфическими олигопраймерами с последующим рестрикционным анализом. Результаты. Экспрессия ароматазы при изученных формах эндометриоза положительно коррелирует со стадией заболевания. «Нулевой» вариант гена GSTM ассоциировался с тазовыми болями различной интенсивности, а также рецидивирующими формами заболевания (х2=8,78, p<0,05), что имеет важное значение в прогнозе клинического течения заболевания. По гену GSTT1 каких-либо различий в группах, а также связи с клиническими проявлениями эндометриоза получено не было. Заключение. Обнаружение положительной экспрессии ароматазы в эктопических очагах, а также в эутопическом эндометрии при аденомиозе (58%) и наружном эндометриозе (80%), ее связи со стадией распространения заболевания и выраженностью болевого синдрома позволяет рассматривать данный фермент как перспективный для диагностики и разработки новых подходов к терапии эндометриоза с применением ингибиторов ароматазы. Исследование сочетанного полиморфизма генов ароматазы CYP19 и детоксикации GSTM можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития и прогноза клинического течения эндометриоза.
Ключевые слова
Ароматаза, эндометриоз, ген GSTM1, ген GSTT1, эктопический эндометрий, аденомиоз. Статья поступила: 14.09.2016 г.; в доработанном виде: 25.10.2016 г.; принята к печати: 12.12.2016 г. Конфликт интересов
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских ученых - кандидатов наук МК 6335.2015.7. Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Для цитирования
Адамян Л.В., Сонова М.М., Логинова О.Н., Арсланян К.Н. Роль ароматазы в развитии генитального эндометриоза. Акушерство, гинекология и репродукция. 2016; 4: 39-48.
THE ROLE OF AROMATASE IN THE DEVELOPMENT OF ENDOMETRIOSIS
Adamyan L.V., Sonova M.M., Loginova O.N., Arslanyan K.N. FSBEI HE A.I. Yevdokimov MSMSU MOH Russia Summary
The purpose of work - improving the efficiency of treating endometriosis by clarifying some aspects of the pathogenesis of endometriosis. Objectives of the study - determining the expression of aromatase in atopicescom and ectopic endometrium, to identify the relationship of polymorphisms in the aromatase gene and gems of detoksikatsii to optimize the ingenious treatment of patients with endometriosis. Materials and methods. Definition of polymorphic gene variants of CYP19 was assessed by PCR with specific oligoprimers with subsequent restriction analysis. Results: the Expression
of aromatase in the studied forms of endometriosis is positively correlated with the stage of disease. The "zero" variant of the gene GSTM associated with pelvic pain of varying intensity, as well as recurrent forms of the disease (x2=of 8.78; p<0.05), which is important in the prediction of the clinical course of the disease. By gene GSTT1 any difference in the groups, as well as links with clinical manifestations of endometriosis was obtained. Conclusion. Detection of positive expression of aromatase in the ectopic foci, and also in the endometrium atopicescom when adenomiose (58%) and external endometriosis (80%), its relationship with stage distribution of the disease and the severity of pain allows us to consider this enzyme as a promising for the diagnosis and development of new approaches to the treatment of endometriosis with aromatase inhibitors. The study of associated gene polymorphisms of the aromatase CYP19 and detoxification GSTM can be recommended as a prognostic test for assessing the risk of development and prognosis the clinical course of endometriosis.
Key words
Aromatase, endometriosis, gene GSTM1, gene GSTT1, ectopic endometrium, adenomyosis. Received: 14.09.2016; in the revised form: 25.10.2016; accepted: 12.12.2016. Conflict of interests
The work was supported by the Russian President's grant for state support of young Russian scientists - PhD MK 6335.2015.7. All authors contributed equally to this article. For citation
Adamyan L.V., Sonova M.M., Loginova O.N., Arslanyan K.N. The role of aromatase in the development of endometriosis. Akusherstvo, ginekologiya i reproduktsiya / Obstetrics, gynecology and reproduction. 2016; 4: 39-48 (in Russian).
Corresponding author
Address: ul. Delegatskaya, 20-1, Moscow, Russia, 127473. E-mail: poddubnay@yandex.ru (Loginova O.N.).
к о н Q
■
x
со a X
0
со m со a с
01 о 00
о s
LO CL
o m
x Й
К -О ^ Ц
CD CD ^ ICO
CO
X
О s ® CD
a.;;
CD
CN
К ^
s a X о
S О
° d m d
-O
О СП
5 ё
к V»
¡и
о _
р
СО о X П.
со
2 5
Введение
Согласно общепризнанному определению, эндоме-триоз - это гормонозависимое, генетически детерминированное заболевание, развивающееся на фоне нарушения иммунного гомеостаза, сущность которого проявляется разрастанием ткани, находящейся за пределами границ нормальной локализации слизистой оболочки тела матки, но идентичной по структуре и функции с эндометрием [1,2,6,7].
С момента установления факта, что менструальный рефлюкс является практически универсальным феноменом [2,19,21], остается неясным вопрос: почему эктопический эндометрий не во всех случаях проявляет способность к адгезии, инвазии и пролиферации. Рядом ученых [8] установлены факты изменения некоторых из этих процессов как в очагах эктопии, так и в эндометрии. Можно предположить, что это связано с качественными особенностями эндометрия, забрасываемого в брюшную полость. В связи с этим изучение молекулярно-биологическиих особенностей эуто-пического и этопического эндометрия является приоритетным. При этом важнейшее место занимает изучение процессов, обеспечивающих выживание эктопических клеток эндометрия. Результаты ряда исследований показали, что очаги эндометриоза
имеют автономный рост и обладают повышенной пролиферативной активностью со сниженным индексом апоптоза, усиленным ангиогенезом [6,7]. О важной роли локальной гипергормонемии для формирования такой «автономности» в репродуктивных органах сообщают и другие исследователи [5,15]. Как предполагается, местная гиперэстрогения может быть связана с ферментом ароматазой цитохрома Р450 [15]. Известно, что под действием фермента арома-тазы андрогены превращаются в эстрогены. Выявлено, что присутствие ароматазы способствует локальной продукции эстрогенов и приобретению свойств автономности [13]. Обнаружение экспрессии ароматазы в нехарактерном для нее эутопическом эндометрии (скорее всего, по причине генетических нарушений), сопряженной с экспрессией рецепторов эстрогенов, может дополнительно объяснить установленное ранее исследователями состояние локальной гипергормонемии [5] при эндометриозе, когда эктопическая ткань создает «выгодные» условия для собственных трофических потребностей. За счет гипер-эстрогении на тканевом уровне такой важный физиологический процесс, как циклический ангиогенез, может стать патологическим. Результаты усиления ангиогенеза подтверждаются наличием гипертрофии
£ ю О. СП
С I
® Я х d, = S
to
с ю ^ а>
I?
Q. CD
ее
О ™ О Щ
со
X
со т со
ы
о
со
-О
ю
т ^
о
О X
СР и
I- а
£ о
О. О
£ о.
£ я
со х CIS
и гиперплазии миометрия при аденомиозе, обусловленных высокой экспрессией ангиогенных факторов роста. Адамян Л.В. и др. [2], изучая свойства и состояние перитонеальной жидкости при ретроцервикаль-ном эндометриозе, установили, что уровень содержания сосудистого эндотелиального фактора роста А (СЭФР-А), сосудистого эндотелиального фактора роста Р-1 (рСЭФР Р-1), рецептора сосудистого эндоте-лиального фактора роста Р-2 (рСФЭРр-2) в перитоне-альной жидкости достоверно выше, чем у пациенток без эндометриоза. Следовательно, изучение состояния факторов роста и оценка их роли в развитии эндометриоза являются актуальными.
Фермент ароматаза катализирует конверсию андро-стендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол. Как было указано выше, ген, который кодирует этот фермент, экспрессируется у человека различными типами тканей и клеток, таких как гранулезные клетки яичников, плацентарный синцитиотрофобласт, клетки жировой ткани и фибробласты кожи, а также мозга. У женщин репродуктивного возраста яичники являются наиболее важным местом биосинтеза эстрогенов, который осуществляется циклически.
Известно, что клетки эндометрия и миометрия содержат самое высокое количество эстрогеновых рецепторов, являясь таким образом главной мишенью для эстрогенов. До недавних пор действие эстрогенов классически рассматривалось только через эндокринные механизмы: другими словами, за счет циркуляции эстрадиола, который секретируется яичниками или образуется из жировой ткани, обеспечивая эстроген-ный эффект после доставки к тканям-мишеням с током крови. Среди эстроген-зависимых заболеваний экспрессия ароматазы при эндометриозе имеет большое значение, доказанное многими авторами [9,11,18]. Во-первых, исключительно высокий уровень ароматазы м-РНК был найден на имплантах внеяичникового эндометриоза. Во вторых, стромальные клетки эндо-метриоидного происхождения в культуре, инкубированные с ц-АМФ аналогично показали высокий уровень активности ароматазы по сравнению с клетками синцитиотрофобласта [18,20,24]. Эти интересные факты привели к исследованию факторов роста, цито-кинов и других субстанций, которые могут индуцировать активность ароматазы через ц-АМФ-зависимые пути патофизиологии эндометриоза. Было выявлено, что простогландин Е2 (PG E2) является наиболее потенциальным индуктором активности ароматазы в стро-мальных эндометриоидных клетках. Эстрогены повышают образование PGE2 путем стимуляции фермента циклооксигеназы-2 (COX) в стромальных клетках в культуре [24,26]. Таким образом, положительная обратная связь на непрерывную локальную продукцию эстрогена и синтез простагландинов способствует развитию пролиферативных и воспалительных проявлений эндометриоза. Ароматаза была выделена в образцах эутопического эндометрия у больных тяжелыми формами эндометриоза при отсутствии ее в
контроле, хотя в намного меньших количествах, чем в имплантах эндометриоза [26,32]. Это предполагает наличие генетического дефекта у женщин с эндоме-триозом на основании его выявления в эутопическом эндометрии. Можно полагать, что когда дефективные клетки эндометрия с низким уровнем патологической экспрессии ароматазы достигают тазовой брюшины путем ретроградной менструации, возникает местная воспалительная реакция, которая стимулирует локальную ароматазную активность, то есть образование эстрогенов, индуцированных впрямую и не впрямую с помощью простагландинов и цитокинов [26].
Не следует полагать, что нарушенная экспрессия ароматазы является самым важным молекулярным механизмом в развитии и росте эндометриоза, поскольку существует много других молекулярных механизмов, которые способствуют его развитию - нарушенная экспрессия энзимов-протеиназ, которые ремодели-руют ткани или их ингибиторы (матриксные металло-протеиназы (MMP), их ингибиторы), важные цитокины (IL-6, RANTES - регулирующий активацию, экспрессию и секрецию Т-клеток) и факторы роста (эндотелиаль-ный фактор роста (EGF)) - являются одними из них [13,16]. К тому же, дефективная иммунная система, которая не справляется с очищением перитонеума после ретроградной менструации, как предполагается, участвует в развитии эндометриоза [24].
Доказательством важности ароматазной активности в патофизиологии эндометриоза является успешное подавление уровня эстрадиола с аналогами гона-дотропин рилизинг гормонов (ГтРГ) или индуцированной хирургической менопаузой. Купирование тазовой боли агонистами ГтРГ обычно успешно в процессе или сразу после лечения, в то же время болевой синдром рецидивирует более, чем в 75% случаев [31]. Одним из причин возобновления болей является присутствие эстрогенов в жировой ткани, коже, имплантах во время лечения агонистами. Следовательно, блокада ароматазной активности в экстраовариальных местах с ингибитором ароматазы может приводить к ремиссии продолжительное время у определенного количества пациентов.
Недавние публикации показывают, что пациентки с эндометриозом в периоде перименопаузы успешно лечатся комбинацией ингибитора ароматазы с геста-геном. Эти женщины предварительно не отвечали на радикальную хирургию или медикаментозное лечение, которое послужило причиной многократного рецидивирования или персистенции боли в период лечения. После 6 мес. лечения с летрозолом и норэ-тиндрон ацетатом большая часть из них отмечала облегчение боли и уменьшение лапароскопически выявляемого эндометриоза [22,23,26,27,31]. О повышении результатов ЭКО при тяжелых формах эндометриоза в случае комбинации с аналогами гонадоропин рилизинг гормона (аГРГ) анастрозола на этапе десен-ситизиции гипофиза сообщают К.В. Краснопольская, А.С. Калугина [4]. Таким образом, ароматазе, как
X
го
X
0
го
СО ГО
С
01 о QÛ
О
одному из молекулярно-биологических факторов, отводится ключевая роль в обеспечении так называемой локальной гиперэстрогении, которая поддерживая пролиферацию, препятствует нормальным секреторным преобразованиям клеток эндометрия, тем самым создавая условия для их выживания.
Цель исследования - повышение эффективности лечения генитального эндометриоза путем уточнения некоторых аспектов патогенеза эндометриоза.
Задачи исследования:
1. Определить экспрессию ароматазы в эутопиче-ском и эктопическом эндометрии при аденоми-озе и эндометриоидных кистах яичников.
2. Определить роль экспрессии ароматазы в эндометрии во взаимосвязи с другими молекулярно-биологическими факторами и ее значение в клиническом течении заболевания.
3. Выявить взаимосвязь полиморфизмов гена ароматазы и генов детоксикации глутатион-Б трансфераза (ЭБТМ) и глутатион-М трансфе-раза (ОБТТ) у больных эндометриоидными кистами яичников и основными клиническими проявлениями заболевания.
4. На основании полученных данных оптимизировать алгоритм обследования и лечения больных генитальным эндометриозом.
Материалы и методы
В группу больных наружным эндометриозом, которым были проведены генетические исследования, вошли 17 пациенток с обычным вариантом клинического течения с хорошим ответом на медикаментозную терапию, а также 11 пациенток с рецидивирующим течением, с проявлениями побочных эффектов от медикаментозной терапии или ее непереносимостью (см. табл. 1). Данные пациенты находились на стационарном лечении с 2014 по 2015 г. в гинекологических отделениях ГКБ №15 г. Москвы, являющихся
Параметр Количество (абс.) Количество (%)
Контроль 16 100%
Родственники пациентов контрольной группы 8 100%
Больные наружным генитальным эндометриозом: 28 100%
рецидивирующая форма 11 36%
нерецедивирующая форма 17 64%
Таблица 1. Характеристика обследуемых групп.
клинической базой кафедры репродуктивной медицины и хирургии ФПДО МГМСУ (зав. кафедрой -академик РАН Л.В. Адамян). Контрольную группу составили 16 пациенток без клинических признаков эндометриоза репродуктивного возраста, а также восемь родственниц первой степени родства.
В работе были использованы следующие реактивы, ферменты, биопрепараты: акриламид, ЭДТА, 5% раствор глицерина, протеиназа К (фирма «Sigma» США), ТЕМЕД, додецилсульфат натрия, трис HCL (фирма «Serva», ФРГ), 2-меркаптоэтанол (фирма «Ferax», ФРГ), дезоксинуклеотид-трифосфаты, тритон Х100, хлорид магния, сульфат аммония, персульфат аммония, ферменты рестрикции: Tag 1, Kpn1, Hinc11, BamH, Dra1, EcoRV, Rsal (компания «Сибэнзим», Россия), термостабильная ДНК-полимераза Thermus aquaticus (НПО «Биотекс», Россия), прибор для амплификации фирмы «ДНК-технология», (Россия), олиго-нуклеотидные праймеры (НПО «Сибэнзим», Россия).
Исследование полиморфизма гена ароматазы CYP19
Изучены особенности генетического полиморфизма гена ароматазы CYP19 и двух генов фазы детоксикации GSTM1 и GSTT1. Характеристика изученных полиморфных вариантов представлена в таблице 2.
Ген Полиморфизм
CYР19 (ТТТА)п повтор в интроне 4
GSTM1 DelIdel (0I0)
GSTT1 DelIdel (0I0)
к
о
H
2 ^ ■
X
го
X
0
го m го
с
01 о QÛ
О s
LU CL
О m
* Ö
К -О ^ Ц
CD CD
н го ч
со
x
Таблица 2. Характеристика исследованных генов.
Образцы ДНК получали из лимфоцитов периферической крови, выделение ДНК из ядер лимфоцитов проводили в соответствии с методикой, приведенной в руководстве Самбрук с соавт. с некоторыми модификациями [30].
Определение полиморфных вариантов генов GSTM1 и GSTT1 проводили методом ПЦР со специфическими олигопраймерами, полиморфных вариантов гена CYP19 - методом ПЦР со специфическими олигопраймерами с последующим рестрикционным анализом. Для амплификации использовали программируемый термоциклер фирмы «ДНК-технология».
Смесь для амплификации объемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера; 67 мМ трис-HCl; pH 8,8; 16,6 мМ сульфата аммония; 6,7мМ MgCl; 7 мкМ ЭДТА; 10 мМ меркаптоэтанола; 170 мкг BSA; 1,0 мМ каждого dNTP и 1U ДНК-полимеразы (производства компании «Бион», Россия).
Для амплификации фрагмента гена GSTM1 использовали праймеры:
GST M1 F: 5'< GAA CTC CCT GAA AAG CTA AAG C>3';
GST M1 R: 5'< GTT GGG CTC AAA TAT ACG GTG G>3'.
Для апмлификации фрагмента GSTT1 использовали праймеры:
GST T1 F: 5'< TTC CTT ACT GGT CCT CAC ATC TC>3';
GST T1 R: 5'< TCA CCG GAT CAT GGC CAG CA>3'.
Для амплификации фрагмента CYP19 использовали праймеры:
CYP19 F: 5'< GGT ACT TAG TTA GCT ACA ATC>3';
CYP19 R: 5'< GTT ACA GTG AGC CAA GGT CGTGAG>3'.
о s ® со
ÍS
к ^
S Q.
X О
s °
° d
со d .0
О çn
5 ë
к Vö
¡H
о _
р
ГО о X со го
X
05
£ ю
О. СП
с I
® s
Х сЪ
=¡ S
tO X
!Z Ю ^ О) CT St
I ? ü
s ц
Q. CD
го
о ™
О Щ
го
X
го т го
ы
о
го
-D
ю
т ^
о
о
X
*
о ™ 2 о X к ГС
§ Ü st
СР <ü
I- о.
Ï о
О. О р ^
S О-
£ я
ГО X
CIS
Ген Денатурация Денатурация Отжиг Синтез Синтез
GSTM1 95 Со - 4 мин. 95 Со - 40 сек. 61 Со - 40 сек. 72 Со - 40 сек. 72 Со - 1 мин.
GSTT1 95 Со - 4 мин. 95 Со - 40 сек. 61 Со - 40 сек. 72 Со - 40 сек. 72 Со - 1 мин.
CYP19 95 Со - 12 мин. 95 Со - 1 мин. 30 сек. 42 Со - 1 мин. 72 Со - 1 мин. 72 Со - 1 мин.
Таблица 3. Условия проведения ПЦР.
х
ГО
X
0
го
СО ГО
С
01 о QÛ
О
При анализе делеций в генах глютатион S-трансфе-раз гомозиготы и гетерозиготы по нормальному аллелю «+» определяли на электрофореграммах по наличию продуктов амплификации размером 271 (GSTM1) и фрагмента 315 п.н. (GSTT1). Отсутствие соответствующих фрагментов указывало на гомози-готность индивидуума по делеции обоих аллелей. Гетерозиготные особи «0/+» были исключены.
Количество ТТТА-повторов в гене CYP19 определяли на электрофореграммах по наличию продуктов амплификации определенного размера. Размеры ПЦР-продукта, соответствующие определенным повторам, были следующие: (TTTA)7 - 169 п.о., (TTTA)8
- 173 п.о., (TTTA)9 - 177 п.о., (TTTA)10 - 181 п.о., (TTTA)11
- 185 п.о., (TTTA)12 - 189 п.о., (TTTA)13 - 193 п.о.
Анализ полученных данных производился с помощью стандартных методов математико-статистиче-ской обработки с использованием программного обеспечения MS Office Excel (Microsoft, США) и Statistica 6.0 (StatSoft, Inc, США). Для представления итоговых данных использовались методы описательной статистики и доказательной медицины. Количественные показатели представлены в виде средних и стандартных квадратических отклонений, а качественные признаки сгруппированы в таблицы сопряженности. Использовали методику сравнения групп по качественному бинарному признаку хи-квадрат (х2 с поправкой Йетса).
Сравнение выборок, не связанных напрямую друг с другом, по количественному признаку проводилось непараметрическим методом - по U-критерию Манна-Уитни. Для сравнения двух зависимых (связанных) групп использовался непараметрический метод -вычисление Т-критерия Вилкоксона. Также опреде-
лялся доверительный интервал для средней разности. Для сравнения трех независимых (несвязанных) групп использовался параметрический дисперсионный анализ вариаций (ANOVA).
Результаты
Нами изучены особенности генетического полиморфизма трех генов - гена ароматазы (CYP19) и двух генов детоксикации 2-й фазы - GSTM1 и GSTT1 у 28 пациенток с наружным генитальным эндометриозом (16 условно здоровых женщин и восемь родственниц 1-й степени родства составили контрольную группу).
Результаты исследования гена CYP 19
Для выявления возможной связи полиморфизма гена CYP 19 ((ТТТА)п повторов в интроне 4) с развитием эндометриоза проведен сравнительный анализ частот генотипов и аллелей изученных генов между выборкой больных с эндометриозом и контролем, а также в группе родственников по материнской линии 1-й степени родства.
При анализе повторов ТТТА в интроне гена CYP 19 нами выявлено шесть различных аллелей изучаемого гена, содержащих 7, 8, 9, 11, 12, 13 повторов. К мажорным аллелям можно отнести (ТТТА)7, (ТТТА)8, (ТТТА)11, встречающихся с частотой 46,4%, 14,3%, 32,1% в группе больных с эндометриозом соответственно. В контрольной группе частота этих аллелей составила 48,9%, 14,4%, 30%, а в группе родственников - 25%, 37,5%, 37,5% соответственно. К редким аллелям относятся (ТТТА)10, (ТТТА)12 и (ТТТА)13, встречающиеся с частотой менее 5%. Аллель (ТТТА)9 не был обнаружен ни в группе больных эндометриозом, ни в группе контроля (см. табл. 4).
Аллели Эндометриоз Родственники Контроль
п % N % n %
7 26 46,4% 8 25,0% 15 48,9
8 8 14,3% 12 37,5% 4 14,4
9 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0
10 0 0,0% 0 0,0% 1 2,2
11 18 32,1% 12 37,5% 9 30,0
12 2 3,6% 0 0,0% 1 4,4
13 2 3,6% 0 0,0% 0 0,0
Всего 56 32 30 100
Таблица 4. Распределение частот аллелей по гену СУР19 ((ТТТА)п полиморфизм) в группе больных эндометриозом и в контрольной группе.
Сравнительный анализ частот аллелей гена СУР19 не выявил статистически значимых различий между группой больных эндометриозом, родственниками и контрольной группой (р>0,05) (см. табл. 4).
При анализе частот генотипов изучаемого гена также не выявлено статистически значимых различий между сравниваемыми группами (р>0,05). Результаты представлены в таблице 5.
Частота генотипа (ТТТА)7\(ТТТА)7 в изучаемом гене в группе родственников снижена в 2 раза по сравнению с контрольной группой и группой больных, однако данное различие статистически недостоверно (р>0,05).
Отличий в распределении частот аллелей с различными повторами ТТТА, а также в частоте генотипов по стадиям распространения эндометриоза выявлено не было.
Результаты исследования гена GSTM1
Для определения ассоциации полиморфизма гена ЭБТМ1, кодирующего фермент глютатион-Б-трансфе-разу М, важного участника второй фазы детоксикации ксенобиотиков у больных наружным генитальным эндометриозом, было проведено исследование полиморфизма гена ЭБТМ1.
Сравнительный анализ частоты делеции (0\0) гена 0БТМ1 (см. табл. 6) между сравниваемыми группами не выявил статистически значимых различий (р>0,05). Частота «нулевого» генотипа 0БТМ1 0\0 и нормального 0БТМ1+ в группе больных эндометриозом составила соответственно 21,4% и 78,6%, а в контрольной группе и группе родственников - соответственно 40% и 60%, 75% и 25% (см. табл. 6). Отмечалось преобладание «нулевого» генотипа ОБТМ1 в группе родственников (р<0,05).
Результаты исследования полиморфизма гена GSTТ1
Для оценки полноценности главных ферментов детоксикации у этих же пациентов было проведено исследование полиморфизма гена ЭБТТ1, кодирующего глютатионтрансферазу Т1, другого представителя этой группы ферментов, который активнее глютатионтрансферазы М1 в несколько раз.
Сравнительный анализ частоты делеции ОБТТ 0\0 в группе больных эндометриозом и в контрольной группе, а также в группе родственников не выявил статистически значимых различий (р>0,05). Частоты генотипов ОБТТ 0\0 и ОБТТ1+ составили в группе больных эндометриозом 21,4% и 78,6%, а в группе
(ТТТА)п полиморфизм Эндометриоз Родственники Контроль
п % N % п %
7..7 8 28,6% 2 12,5% 4 26,7%
7..8 2 7,1% 0 0,0% 2 13,3%
7..10 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
7..11 8 28,6% 4 25,0% 4 26,7%
7..12 0 0,0% 0 0,0% 1 6,7%
7..13 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
8..8 0 0,0% 4 25,0% 0 0,0%
8..10 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
8..11 6 21,4% 4 25,0% 2 13,3%
8..12 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
10..11 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
11..11 2 7,1% 2 12,5% 1 6,7%
11..12 0 0,0% 0 0,0% 0 0,0%
11..13 2 7,1% 0 0,0% 1 6,7%
всего 28 16 15 100%
к о н
2 ^ ■
х
ГО
а X
0
го со го а с
01 о 00
о ^
ю о.
о са
х Ё
К -О ^ Ц
си 01
I-
го ч
со
X
о ^ ® <0
к ^
^ О.
X о
2 О
со г: .о
О (Л
5 ё
к V»
¡И
о _
Р
ГО о X
со
го
X
05 £ ¿,"
СП
С I
® 3
Х сЪ
= 3
(Л
С Ю
^ а> ст -"¡г
I ?
:
^ Ц
О. 01
го
о ™
О Щ
го
X
го т го
¡г
о
т ^
о
го Ц
с
Ю О
5 *
.0 Л
I- о
{5
О X
к ГС
§ и
СР аЗ
I- о.
£ о ^ 2
Таблица 5. Распределение частот генотипов по гену СУР19 ((ТТТА)п полиморфизм) в группе больных эндометриозом и в контрольной группе.
Генотипы Контроль Эндометриоз Родственники
п % п % п %
0БТМ1 0/0 6 40,0% 6 21,4% 6 75,0%
0БТМ1+ 9 60,0% 22 78,6% 2 25,0%
Итого: 15 100,0% 28 100% 8 100%
Таблица 6. Распределение частот генотипов гена 08ТМ1 в группе больных эндометриозом и в контрольной группе.
£ ^ £ 8
контроля и родственников соответственно 20% и 80%, 25% и 75% (см. табл. 7).
Главным методом консервативного лечения эндо-метриоза является гормонотерапия. Действия всех средств гормональной терапии опосредованы через метаболизм стероидов, в процессе которого образуются свободные радикалы. Глютатионтрансферазы, выполняя антиоксидантную функцию, способствуют удалению этих молекул из клеток и тканей и при их неполноценности, например, «нулевом» генотипе развивается окислительный стресс. Мы провели корреляционный анализ между наиболее неблагоприятными сочетаниями генотипов исследованных генов с некоторыми клиническими проявлениями (см. табл. 8).
Оценка ассоциативной связи сочетаний генов с основными клиническими проявлениями проводилась с использованием критерия хи-квадрат (х2). Нулевой вариант гена 0БТМ0 ассоциировался с интенсивностью болевого синдрома (х2=4,46; р<0,05) и частотой рецидивирующих форм (х2=8,78; р<0,05). Наиболее часто генотип СУР19 - (ТТТА)7\(ТТТА)11 сочетался с нулевым вариантом гена 0БТМ0 (х2=14,8; р<0,001) и при этом сочетании обнаруживалась высокая коррелятивная связь между интенсивностью болевого синдрома (х2=7,3; р<0,05), рецидивирующим течением (х2=13,9; р<0,001) и 3-4-й степенью развития заболевания (х2=5,46; р<0,05).
Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что сочетание двух неполноценных генов в геноме является фактором риска развития выраженного болевого синдрома, рецидивирования заболевания, то есть более агрессивного клинического течения наружного генитального эндометриоза.
Результаты проведенного исследования являются попыткой выяснения информативности генетических систем в манифестации эндометриоза. Полученные
результаты не претендуют на исчерпывающую характеристику молекулярно-генетических основ заболевания, однако могут явиться важным шагом к пониманию значимости углубленного изучения генетической природы эндометриоза для выработки стратегии целенаправленной профилактики этой патологии. Важная роль генетического полиморфизма генов системы детоксикации уже установлена для многих онкологических и не онкологических заболеваний [1,3,8,12,15,18]. Основываясь на многочисленных данных литературы об участии экзогенных факторов в развитии эндометриоза, проживание всех обследованных нами пациенток в мегаполисе, а также указаний на различные вредные производственные факторы в 76% случаев, мы решили определить значение некоторых генов «внешней среды» в клинике заболевания. Частота генотипа (ТТТА)7\(ТТТА)7 в изучаемом гене в группе родственников была снижена в два раза по сравнению с контрольной группой и группой больных, однако данное различие статистически недостоверно (р>0,05). По частоте аллелей и генотипов с различными повторами ТТТА других различий не было выявлено. Несмотря на отсутствие статистически значимых различий в частоте встречаемости в общей группе больных, была выявлена сопряженная связь определенного генотипа (ТТТА)7\(ТТТА)11 с «нулевым» вариантом гена ОБТМ1 (х2=14,8; р<0,001) при отсутствии такой ассоциации с генотипом ОБТТ1 (х2=0,05; р=0,08). При корреляционном анализе распределения выявленных генотипов с основными клиническими проявлениями была установлена статистически значимая связь с болевым синдромом различной интенсивности (х2=7,3; р=0,007) и с 3-4-й стадией заболевания (х2=5,46; р=0,019). «Нулевой» вариант гена ОБТМ ассоциировался с тазовыми болями различной интенсивности, а также рецидивирующими формами заболевания (х2=8,78; р<0,05), что
X
ГО
а X
0
го со го а с
01 о 00
о
Генотипы Контроль Эндометриоз Родственники
п % п % п %
йБТП 0/0 3 20,0% 6 21,4% 4 25,0%
йБТП + 12 80,0% 22 78,6% 12 75,0%
Итого: 15 100,0% 28 100% 16 100%
Таблица 7. Распределение частот генотипов 08ТТ1 в группе больных эндометриозом и в контрольной группе.
Параметр Генотип CYP19 (ТТТА)7/(ТТТА)11 GSTМ0
йБТМ0 14,8 (р=0,00011)
йБТ Т0 0,05 (р=0,08)
Редицив эндометриоза 13,9 (р=,00019) 8,78 (р=,00304)
Болевой синдром 7,3 (р=,00702) 4,46 (р=,03479)
3-4 ст. эндометриоза 5,46 (р=,01946)
Таблица 8. Ассоциация между сочетаниями генов и основными клиническими проявлениями эндометриоза.
имеет важное значение в прогнозе клинического течения заболевания. По гену 0БТТ1 каких-либо различий в группах, а также связи с клиническими проявлениями эндометриоза получено не было. Однако другими исследователями получены достоверные корреляционные связи этого гена с развитием и тяжелым течением наружного генитального эндометриоза [5,12,16,25].
Исходя из анализа полученных нами результатов и данных литературы, можно сделать вывод об определенной роли полиморфных вариантов исследованных генов ароматазы и генов второй фазы детокси-кации ксенобиотиков ОБТМ и ОБТТ в генезе эндометриоза. Несмотря на отсутствие достоверных различий между группой пациентов с эндометриозом в контрольной группе и группой родственников в частоте полиморфных генотипов в настоящем исследовании, мы получили статистически значимые корреляционные связи с определенными клиническими проявлениями, что позволяет нам согласиться с исследователями [12,16,25], предполагающими важное значение полиморфизма исследованных генов в патогенезе и клиническом течении эндоме-триоза. Таким образом, сочетание полиморфизма гена ароматазы и одного из генов глютатион-Б-тран-сфераз ОБТМ обнаруживает ассоциацию с наружным эндометриозом, особенно с болевым синдромом, более тяжелыми стадиями и рецидивирующими формами заболевания, что имеет важное клиническое значение.
Известно, что в физиологических условиях в эндометрии отсутствует экспрессия ароматазы (АЦР450). По нашим данным, ни в одном образце эндометрия контрольной группы положительной экспрессии не было выявлено. В нашем исследовании экспрессия ароматазы была положительной во всех случаях в эктопическом эндометрии и при аденомиозе, и при наружном эндометриозе. Положительная экспрессия ароматазы в эутопическом эндометрии у пациенток с аденомиозом (I группа) (п=26) составила 57,7% (п=15), соответственно отсутствовала экспрессия ароматазы в эндометрии у 42,3% (п=11), а также в эпителиальных и в стромальных клетках эутопиче-ского эндометрия в 80% случаев наружного эндометриоза. Ви1ип БегЬаг Е. и соавт. [11,12,14] изучили экспрессию ароматазы в эндометриоидной и гиперпластической ткани эндометрия и показали высокий уровень экспрессии ароматазы в обоих случаях.
Нами выявлено, что экспрессия ароматазы при изученных формах эндометриоза положительно коррелирует со стадией заболевания, что имеет важное клиническое значение. Так, при 3-4-й стадии аденомиоза положительная экспрессия была 100%, в то время как при 1-2-й стадии - 38,9%, а в группе с отрицательной экспрессией ароматазы оказались больные только начальных стадий распространения.
На долю пациенток с 3-4-й стадией распространения наружного эндометриоза пришлось 86% из числа больных с положительной экспрессией ароматазы. Эти данные согласуются с результатами Ви1ип БегЬаг Е. и соавт. [11,14], исследовавшими эутопиче-ский эндометрий у женщин с эндометриозом, результаты которого позволили им считать показатель уровня ароматазы как маркер диагностики и «плохого» прогноза клинического течения. Однако необходимо помнить о ее неспецифичности при эндометриозе, поскольку экспрессия ароматазы положительная и при других гиперпластических заболеваниях репродуктивной системы, в т.ч. и при злокачественных [15].
Выводы:
1. Существенным молекулярно-биологическим фактором, обнаруженным в эутопическом эндометрии при эндометриозе, является патологическая экспрессия ароматазы, способной в силу своей биологической активности привести к локальной гиперэстрогении. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнями экспрессии ароматазы и стадией заболевания, выраженностью болевого синдрома.
2. Сочетание полиморфных вариантов гена ароматазы (СУР 19) и гена детоксикации ОБТМ ассоциировано с более тяжелыми стадиями (3-4-я) развития эндометриоза, болевым синдромом и рецидивирующими формами заболевания. По исследованию гена детоксикации ОБТТ не обнаружено какой-либо ассоциативной связи как с другими изученными генами, так и с основными клиническими проявлениями заболевания.
3. Обнаружение положительной экспрессии ароматазы в эктопических очагах, а также в эутопическом эндометрии при аденомиозе (в 58%) и наружном эндометриозе (80%), ее связи со стадией распространения заболевания и выраженностью болевого синдрома позволяет рассматривать данный фермент как перспективный для диагностики и разработки новых подходов к терапии эндометриоза с применением ингибиторов ароматазы. Высокая ассоциация положительной экспрессии ароматазы с воспалительными заболеваниями женской половой сферы обосновывает необходимость их своевременного выявления и лечения.
4. Исследование сочетанного полиморфизма генов ароматазы СУР19 и детоксикации ОБТМ можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития и прогноза клинического течения эндометриоза.
к
о
I-
2 ^ ■
х
го а X
0
го со го а с
01 о 00
о ^
ю о.
о са
х Ё
к -О ^ ц
си 01
I-
го ч
со
х
о ^ ® со
си
к ^
^ О.
X о
2 О
° з
СО .0
О (Л
5 ё
к V»
¡И
о _
р
ГО о
X П.
со
2 5
8
СП с I
® я
Х сЪ
= 3
<Л X с ю ^ а> ст ^
I?
О. 01
го
О ™ О Щ
го
X
го т го
¡г
о
го
-Л
ю
т ^
о
О X
СР аЗ
I- Ор
2 о
^ 2
р ^
£ ^ £ Я
Литература:
2.
3.
4.
5.
Адамян Л.В., Андреева Е.Н. Генитальный эндометриоз: этиопатогенез, клиника, диагностика, лечение. Методическое пособие для врачей. М. 2001. Адамян Л.В., Кулаков В.И., Андреева Е.Н. Эндометриозы. Издание 2-е. М. 2006; 416 с. Баскаков В.П., Цвелев Ю.В., Кира Е.Ф. Эндометриоидная болезнь. СПб. 2002; 452 с.
Краснопольская К.В, Калугина. А.С. Первый опыт использования ингибитора ароматазы анастрозола в программе ЭКО при лечении бесплодия. Проблемы репродукции. 2001; 6: 24-28.
Савицкий Г.А., Горбушин С.М. Перитонеальный эндометриоз и бесплодие (клинико-морфологическое исследование). СПб. 2002; 170 с.
6. Сидорова И.С., Коган Е.А., Зайратянц О.В. и др. Новый взгляд на природу эндометриоза (аденомиоза). Акушерство и гинекология. 2002; 3:32-38.
7. Стрижаков А.Н., Давыдов А.И. Эндометриоз. Клинические и теоретические аспекты.
М. 1995.
8. Унанян А.Л., Сидорова И.С., Леваков С.А., Гуриев Т.Д., Игнатьева Н.Н. Новые аспекты патогенетической терапии аденомиоза в сочетании с миомой матки. XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Сборник материалов конгресса. М. 2007; 230-231.
9. Abushahin F., Goldman K.N., Barbieri E., Milad M., Rademaker A., Bulun S.E. Aromatase inhibition for refractory endometriosis-related chronic pelvic pain. Fertility and Sterility. 2011; 96 (4): 939-942. DOI: https://doi.org/10.1016/]. fertnstert.2011.07.1136.
10. Ailwadi R.K., Jobanputra S., Kataria M. et al. Treatment of endometriosis and chronic pelvic pain with letrozole and norethindrone acetate: a pilot study. Fertil.Steril. 2003; 81: 290-6. DOI: https://doi.org/10.1016/]. fertnstert.2003.09.029. Bulun S.E., Zeitoun K., Takayama K., Noble L., Michael D., Simpson E., Johns A., Putman M., Sasano H. Estrogen production in endometriosis and use of aromatase inhibitors to treat endometriosis. Endocr Relat Cancer. 1999; 6 (2): 293-301. DOI: https://doi. org/10.1677/erc.0.0060293.
11
12. Bulun S.E., Zeitoun K.M., Kilic G. Expression of dioxin-related transactivating factors and target genes in human eutopic endometrial and endometriotic tissues. Am J Obstet Gynecol. 2000; 182 (4): 767-75. DOI: https:// doi.org/10.1016/s0002-9378(00)70325-5.
13. Bulun S.E., Yang S., Fang Z., Gurates B., Tamura M., Sebastian S. Estrogen production and metabolism in endometriosis. Ann N Y Acad Sci. 2002; 955: 75-88. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1749-6632.2002.tb02767.x.
14. Bulun Serdar E., Gonca Imir, Hiroki Utsunomiya, Thung Steven Bilgin Gurates, Mitsutoshi Tamura, Zhihong Lin. Aromatase in endometriosis and uterine leiomyomata. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 2005; 95 (1-5): 57-62. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. jsbmb.2005.04.012.
15. Bulun S.E, Lin Z., Zhao H., Lu M., Amin S., Reierstad S., Chen D.Ann. Regulation of aromatase expression in breast cancer tissue. N. Y. Acad Sci. 2009; 1155: 121-31. DOI: https://doi.org/10.1016Zj.canlet.2008.05.038.
16. Bulun S.E. Endometriosis. N. Engl. J. Med. 2009; 360 (3): 268-79.
DOI: https://doi.org/10.1056/nejmra0804690 .
17. Cobellis L., Razzi S., Fava A., Severi F.M., Igarashi M., Petraglia F. A danazol-loaded intrauterine device decreases dysmenorrhea, pelvic pain, and dyspareunia associated with endometriosis. Fertility and Sterility. 2004; 82 (1): 239-240. DOI: http://dx.doi org/10.1016/j. fertnstert.2003.11.058 .
18. Dodson Michael M., Simpson Evan R. A CRE-like sequence that binds CREB and contributes to cAMP-dependent regulation of the proximal promoter of thehuman aromatase P450 (CYP19) gene. Molecular and Cellular Endocrinology.1997; 134 (2): 147 to 156. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/s0303-7207(97)00178-0.
19. Halme J., Hammond M.D., Hulka J.F. et al. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis. Obstet. and Gynec. 1984; 64: 151-154. DOI: https://doi. org/10.1093/humupd/8.1.84.
20. Halme J., Becker S., Haskill S. Altered maturation and function peritoneal macrophages: possible role in pathogenesis of endometriosis. Amer. J. Obstet. Gynec. 1987; 156: 783-789. DOI: https://doi. org/10.1016/0002-9378(87)90333-4.
21. Halme J., Hammond M.D., Hulka J.F. et al. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis. Obstet. and Gynec. 1984; 64: 151-154.
DOI: https://doi.org/10.1093/humupd/8.1.84
22. Hatem A.H. Potential role of aromatase inhibitors in the treatment of endometriosis. Int J Womens Health. 2014; 6: 671-680. DOI: 10.2147/IJWH.S34684.
23. Henzl M.R., Corson S.L., Moghissi K. et al. Administation of nasal nafarelin as compared with oral danasol for endometriosis. N. Engl. J. Med. 1988; 318: 485-9. DOI: https://doi. org/10.1056/nejm198802253180805.
24. Hill J.A. Immunology and endometriosis. Fertil.Steril. 1992; 58: 262-4.
DOI: https://doi.org/10.1016/s0015-0282(16)55213-3.
25. Huang J.C., Dawood M.Y., Wu K.K. Regulation of cyclooxygenase-2-gene in cultured endometrial stromal cells by sex steroids. Am. Soc. Reprod. Med. Meeting. 1996; 5. DOI: https://doi.org/10.1016/s0015-0282(98)00260-x.
26. Langoi D., Pavone M.E., Gurates B. , Chai D., Azleabas A.F., Bulun S.E. Aromatase inhibitor treatment limits progression of peritoneal endometriosis in baboons. Fertility and Sterility. 2012; 99 (3): 656-662.e3.
DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. fertnstert.2012.11.021.
27. Madny E. Efficacy of letrozole in treatment of endometriosis-related pain. Science direct. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. mefs.2013.04.007.
28. Noble L.S, Simpson E.R., Johns A. et al. Aromatasae expression in endometriosis. J. Clinic Endocrinol. Metab. 1996; 81: 174-9.
29. Pavone M.E., Bulun S.E. Aromatase inhibitors for the treatment of endometriosis.
Fertility and Sterility. 2012; 98 (6): 1370-1379. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. fertnstert.2012.08.053.
30. Sambrook Joseph, Russell David W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. The Quarterly Review of Biology. 2001; 76 (3): 348-349. DOI: https://doi.org/10.1086/394015.
31. Taylor N.R., Hummelshoj L., Stratton P., Vercellini P. Pain and endometriosis: Etiology, impact, and therapeutics. Middle East Fertility Society Journal. 2012; 17 (4): 221-225.
DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. mefs.2012.09.002.
x
TO
a X о
го m го a с
ai о CG
о
References:
1. Adamyan L.V., Andreeva E.N. Genital endometriosis: etiopathogenesis, clinical picture, diagnosis, treatment. Methodological manual for doctors [Genital'nyi endometrioz: etiopatogenez, klinika, diagnostika, lechenie. Metodicheskoe posobie dlya vrachei
(in Russian)]. Moscow. 2001.
2. Adamyan L.V., Kulakov V.I., Andreeva E.N. Endometriosis. Edition 2-e [Endometriozy. Izdanie 2-e (in Russian)]. Moscow. 2006; 416 s.
3. Baskakov V.P., Tsvelev Yu.V., Kira E.F. Endometriod disease [Endometrioidnaya bolezn! (in Russian)]. SPb. 2002; 452 s.
Krasnopol'skaya K.V, Kalugina. A.S. Problemy reproduktsii. 2001; 6: 24-28. Savitskii G.A., Gorbushin S.M. Peritoneal endometriosis and infertility (clinico-morphological research) [Peritoneal'nyi endometrioz i besplodie (kliniko-morfologicheskoe issledovanie) (in Russian)]. SPb. 2002; 170 s.
Sidorova I.S., Kogan E.A., Zairatyants O.V. et al. Akusherstvo iginekologiya. 2002; 3: 32-38. Strizhakov A.N., Davydov A.I. Endometriosis. Clinical and theoretical aspects [Endometrioz. Klinicheskie i teoreticheskie aspekty (in Russian)]. Moscow. 1995. Unanyan A.L., Sidorova I.S., Levakov S.A., Guriev T.D., Ignat'eva N.N. New aspects of the
pathogenesis of adenomyosis treatment in combination with uterine myoma. XIV Russian National Congress "Man and medicine". Collection of congress materials [Novye aspekty patogeneticheskoi terapii adenomioza v sochetanii s miomoi matki. XIV Rossiiskii natsional'nyi kongress «Chelovek i lekarstvo». Sbornikmaterialovkongressa (in Russian)]. Moscow. 2007; 230-231. Abushahin F., Goldman K.N., Barbieri E., Milad M., Rademaker A., Bulun S.E. Aromatase inhibition for refractory endometriosis-related chronic pelvic pain. Fertility and Sterility. 2011; 96 (4): 939-942. DOI: https://doi.org/10.1016/j. fertnstert.2011.07.1136.
10. Ailwadi R.K., Jobanputra S., Kataria M. et al. Treatment of endometriosis and chronic pelvic pain with letrozole and norethindrone acetate: a pilot study. Fertility and Sterility. 2003; 81: 290-6. DOI: https://doi.org/10.1016/]. fertnstert.2003.09.029.
11. Bulun S.E., Zeitoun K., Takayama K., Noble L., Michael D., Simpson E., Johns A., Putman M., Sasano H. Estrogen production in endometriosis and use of aromatase inhibitors to treat endometriosis. Endocr Relat Cancer. 1999; 6 (2): 293-301. DOI: https://doi. org/10.1677/erc.0.0060293.
12. Bulun S.E., Zeitoun K.M., Kilic G. Expression of dioxin-related transactivating factors and target genes in human eutopic endometrial and endometriotic tissues. Am J Obstet Gynecol. 2000; 182 (4): 767-75. DOI: https:// doi.org/10.1016/s0002-9378(00)70325-5.
13. Bulun S.E., Yang S., Fang Z., Gurates B., Tamura M., Sebastian S. Estrogen production and metabolism in endometriosis. Ann N Y AcadSci. 2002; 955: 75-88. DOI: https://doi. org/10.1111/j.1749-6632.2002.tb02767.x.
14. Bulun Serdar E., Gonca Imir, Hiroki Utsunomiya, Thung Steven Bilgin Gurates, Mitsutoshi Tamura, Zhihong Lin. Aromatase in endometriosis and uterine leiomyomata. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 2005; 95 (1-5): 57-62. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/jjsbmb.2005.04.012.
15. Bulun S.E, Lin Z., Zhao H., Lu M., Amin S., Reierstad S., Chen D.Ann. Regulation of aromatase expression in breast cancer tissue. N. Y. Acad Sci. 2009; 1155: 121-31. DOI: https://doi.org/10.1016Zj.canlet.2008.05.038.
16. Bulun S.E. Endometriosis. N. Engl. J. Med. 2009; 360 (3): 268-79. DOI: https://doi. org/10.1056/nejmra0804690 .
17. Cobellis L., Razzi S., Fava A., Severi F.M., Igarashi M., Petraglia F. A danazol-loaded intrauterine device decreases dysmenorrhea, pelvic pain, and dyspareunia associated with endometriosis. Fertility and Sterility. 2004; 82 (1): 239-240. DOI: http://dx.doi org/10.1016/j.fertnstert.2003.11.058 .
18. Dodson Michael M., Simpson Evan R. A CRE-like sequence that binds CREB and contributes to cAMP-dependent regulation of the proximal promoter of thehuman aromatase P450 (CYP19) gene. Molecular and Cellular Endocrinology.1997; 134 (2): 147 to 156. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/ s0303-7207(97)00178-0.
19. Halme J., Hammond M.D., Hulka J.F. et al. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis. Obstet. and Gynec. 1984; 64: 151-154. DOI: https://doi.org/10.1093/humupd/84.84.
20. Halme J., Becker S., Haskill S. Altered maturation and function reritoneal macrophages: possible role in pathogenesis of endometriosis. Amer. J. Obstet. Gynec. 1987; 156: 783-789. DOI: https://doi. org/10.1016/0002-9378(87)90333-4.
21. Halme J., Hammond M.D., Hulka J.F. et al. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis. Obstet. and Gynec. 1984; 64: 151-154. DOI: https://doi.org/10.1093/humupd/84.84
22. Hatem A.H. Potential role of aromatase inhibitors in the treatment of endometriosis. Int J Womens Health. 2014; 6: 671-680. DOI: 10.2147/IJWH.S34684.
23. Henzl M.R., Corson S.L., Moghissi K.
et al. Administation of nasal nafarelin as compared with oral danasol for endometriosis. N. Engl. J. Med. 1988; 318:
485-9. DOI: https://doi.org/10.1056/ nejm198802253180805.
24. Hill J.A. Immunology and endometriosis. Fertility and Sterility. 1992; 58: 262-4. DOI: https://doi.org/10.1016/s0015-0282(16)55213-3.
25. Huang J.C., Dawood M.Y., Wu K.K. Regulation of cyclooxygenase-2-gene in cultured endometrial stromal cells by sex steroids. Am. Soc. Reprod. Med. Meeting. 1996; 5. DOI: https://doi.org/10.1016/s0015-0282(98)00260-x.
26. Langoi D., Pavone M.E., Gurates B. , Chai D., Azleabas A.F., Bulun S.E. Aromatase inhibitor treatment limits progression of peritoneal endometriosis in baboons. Fertility and Sterility. 2012; 99 (3): 656-662.e3.
DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j. fertnstert.2012.11.021.
27. Madny E. Efficacy of letrozole in treatment
of endometriosis-related pain. Science direct. DOI: http://dx.doi.org/10.10164 mefs.2013.04.007.
28. Noble L.S, Simpson E.R., Johns A. et al. Aromatasae expression in endometriosis. J. Clinic Endocrinol. Metab. 1996; 81: 174-9.
29. Pavone M.E., Bulun S.E. Aromatase inhibitors for the treatment of endometriosis. Fertility and Sterility. 2012; 98 (6): 1370-1379. DOI: http:// dx.doi.org/10.1016/j.fertnstert.2012.08.053.
30. Sambrook Joseph, Russell David W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. The Quarterly Review of Biology. 2001; 76 (3): 348-349. DOI: https://doi.org/10.1086/394015.
31. Taylor N.R., Hummelshoj L., Stratton P., Vercellini P. Pain and endometriosis: Etiology, impact, and therapeutics. Middle East Fertility Society Journal. 2012; 17 (4): 221-225. DOI: http://dx.doi.org/10.10164mefs.2012.09.002
Сведения об авторах:
Адамян Лейла Вагоевна - академик РАН, д.м.н., профессор, заведующий кафедрой репродуктивной медицины и хирургии факультета дополнительного профессионального образования ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России. Адрес: ул. Делегатская, 20, стр. 1, Москва, Россия, 127473. E-mail: adamyanleila@gmail.com.
Сонова Марина Мусабиевна - д.м.н., профессор кафедры репродуктивной медицины и хирургии факультета дополнительного профессионального образования ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России. Адрес: ул. Делегатская, 20, стр. 1, Москва, Россия, 127473. E-mail: msonova@mail.ru.
Логинова Ольга Николаевна - к.м.н., ассистент кафедры репродуктивной медицины и хирургии факультета дополнительного профессионального образования ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России. Адрес: ул. Делегатская, 20, стр. 1, Москва, Россия, 127473. E-mail: poddubnay@yandex.ru.
Арсланян Карине Норайровна - к.м.н., доцент кафедры репродуктивной медицины и хирургии факультета дополнительного профессионального образования ФГБОУ ВО МГМСУ им. А.И. Евдокимова Минздрава России. Адрес: ул. Делегатская, 20, стр. 1, Москва, Россия, 127473. E-mail: karslanyan@mail.ru.
About the authors:
Adamyan Leila Vagoevna - Academician of RAS, MD, PhD, professor, Chief of the Department of reproductive medicine and surgery, Faculty of postgraduate professional education. Moscow State Dental University. Address: ul. Delegatskaya, 20-1, Moscow, Russia, 127473. E-mail: adamyanleila@gmail.com.
Sonova Marina Musabievna - MD, PhD, professor of the Department of reproductive medicine and surgery, Faculty of postgraduate professional education. Moscow State Dental University. Address: ul. Delegatskaya, 20-1, Moscow, Russia, 127473. E-mail: msonova@mail.ru.
Loginova Olga Nikolaevna - MD, PhD, assistant of the Department of reproductive medicine and surgery, Faculty of postgraduate professional education. Moscow State Dental University. Address: ul. Delegatskaya, 20-1, Moscow, Russia, 127473. E-mail: poddubnay@yandex.ru.
Arslanyan Karine Norairovna - MD, PhD, associate professor of the Department of reproductive medicine and surgery, Faculty of postgraduate professional education. Moscow State Dental University. Address: ul. Delegatskaya, 20-1, Moscow, Russia, 127473. E-mail: karslanyan@mail.ru.
к
о
IQ
■
x
со a X
0
со m со a с
01
о
CG <j
s
LH CL
o m
x Ö
К -О ^ Ц
CD CD ^ ICO
CO
X
О s ® CD
o.
CD
CN
К ^
s а
X о
2 о
° d
со d .0
О (Л
5 £
к Vö
¡H
о _
p
CO о
X П.
со
ig 5
я "b"
СП с I
® Ю
х d,
= S
to X d ю ^ а> ст -"t
I?
Q. CD
ГС ее
О ™
О Щ
со
X
со т
со ^
о
со
-О
ю
т ^
о
О X
СР и
I- а
£ О
О. О
р ^
£ О-£ 8
со х CIS
