CC BY
14
КЛ1Н1ЧНА ТА ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА МЕДИЦИНА
DOI 10.29254/2077-4214-2017-4-3-141-95-100 УДК 612.6.05-02:616-03688-02:616.831-005.1]-053.32
Артьомова Н. С., Ковальова О. М., Похилько В. I., Цв 'ренко С. М., Жук Л. А.
РОЛЬ 4a4b ПОЛ1МОРФ1ЗМУ ГЕНУ eNOS У РОЗВИТКУ ЛЕТАЛЬНИХ НАСЛ1ДК1В ПРИ ВАЖКИХ ВНУТР1ШНЬО-ШЛУНОЧКОВИХ КРОВОВИЛИВАХ
У ПЕРЕДЧАСНО НАРОДЖЕНИХ Д1ТЕЙ
ВДНЗ «Укра'Гнська медична стоматологiчна aKaAeMiq» (м. Полтава)
umsakafped@ukr.net
Зв'язок публiкацГГ з плановими науково-до-слiдними роботами: представлена публiкацiя е фрагментом НДР Державно! установи «1нститут пе-дiатрiI, акушерства i гiнекологiI НацiональноI Акаде-мп медичних наук Украши», державний реестрацй ний номер: 0117и004538 «Розробити та впровадити систему медико-психолопчного супроводу для но-вонароджених груп ризику з формуванням хроыч-них захворювань, Ывалщност та затримки розви-тку».
Вступ. Важкi внутрiшньо-шлуночковi кровови-ливи (ВШК) у передчасно народжених дiтей е оды-ею з основних педiатричних проблем громадського здоров'я [16,22], так як упродовж останых 20 роюв смертнiсть при цьому захворюваннi не зменшуеть-ся, а до 50% немовлят, яю вижили, мають когнггивы та розвитковi порушення [13,23,25]. У Полтавсьюй областi, починаючи з 2010 року, показники леталь-ностi при ВШК серед передчасно народжених дтей, як i загалом в Укра1ы, не знижуються i становлять 20-21% [2]. Низка кгмычних дослiджень доводить багатофакторнють етiологiI виникнення захворювань у передчасно народжених дтей [18,19], при цьому, все бтьше з'являеться наукових робiт, якi доводять вплив на розвиток патологи не ттьки фак-торiв навколишнього середовища, але й геному лю-дини [1,3].
На сьогодн вiдомi основнi патофiзiологiчнi меха-нiзми розвитку ВШК, основними з яких е запалення, порушення коагуляци та анпогенезу [8,9], тому ми припустили, що саме гени-кандидати, яю кодують цi механiзми, можуть бути факторами ризику розвитку ВШК та його несприятливих наслщюв.
Ренш-анпотензинова система (РАС) приймае важливу участь у регулюванн системного артерiаль-ного тиску та об'ему кров^ а II генетичн модифiкацiI можуть вплинути на наслiдки захворювань неона-тального перюду у передчасно народжених немовлят. У попередых дослiдженнях було повщомлено про можливий зв'язок мiж полiморфiзмом анпотен-зин-перетворюючого ферменту (АСЕ), рецептором анпотензину 1 типу (АОТЯ1) та ризиком розвитку бронхо-легенево! дисплазп [5,24], ретинопатiI [18], синдрому артерiальноI гiпотензiI [1], асфiксiI ново-народженого [3]. Лiтературнi джерела свiдчать про
сприятливий вплив окису азоту (NO) на рют та за-хист судин у передчасно народжених дггей [4], що пщтверджуеться даними про зв'язок мiж активнiстю генiв ендотелiальноI NO-синтази (eNOS) та ризиком розвитку ВШК у цм популяцiI [14], тобто судинн дiI eNOS можуть бути критичними у запоб^аны крово-виливiв у мозок, який розвиваеться.
На пiдставi цих мiркувань, ми висунули ппотезу, що на виникнення важких ВШК, а також 1х несприятливих наслщюв, може впливати полiморфiзм у генах, яю кодують фермент eNOS та бтки реын-ан-гiотензиновоI системи (AGTR1, АСЕ).
Мета досл1дження: пiдтвердити гiпотезу, що розвиток важких ВШК, а також 1х несприятливих наслщюв, у передчасно народжених дтей, пов'язаний з полiморфiзмом геыв eNOS, AGTR1 та АСЕ.
Об'ект i методи досл1дження. Проведено про-спективне дослiдження, в яке включено 97 передчасно народжених дтей (хлопчиюв - 54 [55,67%], дiвчаток - 43 [44,33%]), яю лiкувалися в акушер-ських та дитячих л^вальних установах Полтавсько1 област упродовж 2012-2015 рр. Критерiями вщбо-ру дiтей до групи дослщження стали: гестацiйний вiк менше за 34 тижыв, маса тiла при народженн менше 2000 г Факторами виключення стали: на-явнiсть вроджених аномалiй розвитку, маса ново-народженого бiльше 2000 г при народжены, пщ-тверджена TORCH-iнфекцiя, дiти, народжен вiд багатоплiдноI вагiтностi, з яких одна дитина померла. У подальшому, для доведення ролi полiморфних варiантiв генiв РАС на розвиток летальних випадюв, дiти з ВШК важкого ступеня були розподiленi на 2 групи: у першу групу включено немовлят, яю вижили, а у другу групу - немовлят, переб^ захворювання у яких завершився летальним наслщком. Клiнiчнi та демографiчнi данi дiтей, включених у дослщження, представлен у тaблицi 1.
Дiагностика ВШК вiдбувалась шляхом проведен-ня новонародженим нейросонографiI. Огляд вщбу-вався щонайменше три рази за перюд перебування у стацiонарi. Стади ВШК виставлялися за класифка-^ею Papile [12]. У групу дтей з важкими ВШК вщне-сено немовлят з III-IV ст.
Метою нашого дослiдження було оцiнити вплив на розвиток летальних випадюв таких факторiв:
маси тта (г) та гестацiйного вiку (тижы) при наро-джены, статi, типу полопв (вагiнальнi або шляхом операци кесаревого розтину), антенатально! стеро-щно'! терапiI, оцiнки за шкалою Апгар на 5 хв. (бали), асфксп (рН <7,0 у пуповиннм кровi та оцiнка за шкалою Апгар <6 балiв на 10 хв.), проведення Ыфузмно'! терапiI в першм 7 дiб життя кристалощами (болюс 10-15 мл/кг) та/чи кристалощами для л^вання ар-терiальноI ппотензи, проведення штучно! вентиляцiI легень та !! тривалiсть, введення сурфактант-замю-них препара^в, iнших супутнiх захворювань (рест-раторного дистрес синдрому, сепсису, некротизую-чого ентероколiту).
Таблиця 1.
Демографiчнi та клiнiчнi характеристики немовлят, включених у дослiдження, М+т; п (%)
Результати досл1дження. Серед передчас-но народжених дiтей включених у до^дження у 25 (43,86%) немовлят дiагностовано сепсис, у 36 (37,11%) - рестраторний дистрес синдром (РДС), у 58 (59,79%) немовлят - важк ВШК, у 5 (5,38%) немовлят - некротизуючий ентероколiт (НЕК). Трид-цять чотири (35,05%) новонароджених з дiагнозом важкi ВШК померли.
Вивчення розподту полiморфних генотипiв геыв РАС в обстежених немовлят залежно вщ наявностi або вiдсутностi ВШК не виявило достовiрних вщмш-ностей (табл. 2). Генетичну модель Ю+йй гену АСЕ виявлено у 84,62% немовлят без ВШК та у 77,59% дггей з важкими ВШК; генетичну модель АС+СС АСЕ гену - у 59,26% та 50,0% новонароджених, а генетичну модель аЬ+ЬЬ гену вЫОБ - у 28,21% та 34,48% обстежуваних, вщповщно.
Таблиця 2.
Розподш полiморфних генотишв гешв вМОБ та ренш-анпотензиновоТ системи в обстежених немовлят з або без важких ВШК, п (%)
Показники n=97
Маса тта при народженш (г) 1320,8+54,68
Гестацмний в1к (тижн.) 29,07+0,34
Кесарев розтин 58 (59,8)
Антенатальш стеро'щи 37 (38,14)
Стать чолов1ча 54 (55,67)
Оц1нка за Апгар на 5 хвилиш (бали) 6,1+0,13
Сурфактант-замюш препарати 41 (42,27)
Штучна вентиляц1я легень 43 (44,3)
Рестраторний дистрес синдром III-IV ст. 36 (37,11)
Сепсис 25 (25,77)
ВШК 58 (59,79)
Некротизуючий ентерол1т 5 (5,38)
Ген Генотип Дiти без ВШК n=39 Дiти з ВШК Ш-1У ст. n=58 Р
АСЕ II 6 (15,38) 13 (22,41)
ID+DD 33 (84,62) 45 (77,59) 0,392
АйТР1 AA 11 (40,74) 29 (50,0)
AC+CC 16 (59,26) 29 (50,0) 0,426
еЫОБ bb 28 (71,79) 38 (65,52)
ab+bb 11 (28,21) 20 (34,48) 0,516
Матерiалом для проведення лабораторних до-слщжень слугувала кров (0,25 мл) новонароджених, яку брали на 1-3 добу життя. Для визначення полiморфних варiантiв геыв АСЕ, Л0Т2Я1 та вЫОБ проводили полiмеразну ланцюгову реакцiю з по-дальшим рестрикцмним аналiзом продуктiв реакцiI амплiфiкацiI. Детекцю проводили в агарозному гелi, амплiфiкацiю видiленоI ДНК - у реакцмнм сумiшi за М. Arand. Продукти амплiфiкацiI дiлянок генiв пщ-лягали гщролггичному розщепленню за допомо-гою ендонуклеази рестрикцiI Л!ш261. Амплiфiкованi фрагменти розподтяли з використанням горизонтального електрофорезу в 1,5% агарозному гелi iз забарвленням бромистим етидieм.
Для щентифкаци достовiрних факторiв ризику використовували покроковий лопстичний регресм-ний аналiз. На першому етапi встановлено фактори ризику, якi з достовiрнiстю р<0,1 асоцiювалися з ле-тальними наслщками. На наступному етапi поступо-во виключено фактори ризику, якi при множинному лопстичному регресiйному аналiзi не асо^ювалися з летальними наслiдками у передчасно народжених дггей з важкими ВШК (р>0,05). Для кожного з потен-цмних факторiв ризику визначено вщношення шан-сiв та 95% довiрчий iнтервал (ВШ; 95% Д1). Розподiл генотипу порiвнювали мiж групами за допомогою аналiзу х2. Обчислення статистичних величин проводилось за допомогою лщензмного пакету програми БТАТА 11.
Вивчення розподiлу полiморфних генотитв генiв вЫОБ та ренiн-ангiотензиновоI системи у обстежених немовлят з важкими ВШК засвщчив вщсут-нють достовiрних вiдмiнностей у частотi генетично'! моделi Ю+йй гену АСЕ (83,3% та 73,53%, р=0,378) та генетично! моделi АС+СС гену ЛОТЯ1 (37,5% та 58,82%, р=0,110) мiж д^ьми, якi вижили та дiтьми, як померли. Натомiсть, рiзниця мiж частотою генетично! моделi аЬ+аа гену вЫОБ серед дгтей двох груп виявилася на межi статистично! значущост (табл. 3). Так, домiнантна модель аЬ+аа гену вЫОБ частою виявлялась серед дтей, якi померли, ыж серед дiтей, якi вижили (44,12% та 20,83%, р=0,058). Ми припускаемо, що зв'язок на межi статистично! зна-чущостi мiж генетичною моделлю 4аа+4аЬ вЫОБ гену та несприятливими наслщками у пащен^в з ВШК при простому лопстичному регрессному ана-лiзi пояснюеться багатофакторнiстю захворювання та наявнютю у обстежених дтей супутньо! патологi! (сепсису, НЕК, РДС), яка асо^юеться переважно з малим гестацмним вiком [11].
Тому ми проаналiзували асоцiацi! мiж вказаним полiморфiзмом та розвитком летальних випадкiв у передчасно народжених дгтей з ВШК шляхом мно-жинного регресiйного лопстичного аналiзу з корек-цiею дм iнших факторiв.
Аналiз акушерського, анте/штранатального анамнезу матерi не виявив достовiрних чинникiв, якi асоцiювалися з летальними наслщками. Дослг дження показало, що при простому лопстичному
Таблиця 3.
Розподш полiморфних генотишв reHiB eNOS та ренш-анпотензиново'Гсистеми в обстежених немовлят з важкими ВШК,
як вижили та якi померли, n (%)
Ген Генотип Дiти з ВШК III-IV ст., як вижили, n=24 Дiти з ВШК III-IV ст., як померли, n=34 Р
АСЕ II 4 (16,67) 9(26,47)
ID+DD 20 (83,33) 25(73,53) 0,378
AGTR1 AA 15 (62,5) 14 (41,18)
AC+CC 9 (37,5) 20 (58,82) 0,110
eNOS bb 19 (79,17) 19 (55,88)
ab+aa 5 (20,83) 15 (44,12) 0,058
регресiйному аналiзi з летальними випадками до-стовiрно асоцiювалися: вмаса тта при народжен-нi, гестацмний вiк, знижений артерiальний тиск на 1 добу життя, РДС III-IV ст., сепсис та генетична модель 4aa+4ab&4bb eNOS-гену (табл. 4). При множинному лопстичному регресiйному аналiзi до-стовiрними факторами ризику ви-явились меншн маса тiла та геста-цiйний вiк при народженнi, важкий РДС та генотип модель 4aa+4ab eNOS гену. Тобто ab+bb генетична модель eNOS-гену е незалежним предиктором збтьшення ризи-кiв розвитку летальних наслщюв у новонароджених з важкими ВШК, навггь пiсля корекцiI дм ваги тiла та гестацiйного вiку при народженнi.
Обговорення. Внутршньо-шлуночковi крововиливи е серйоз-ною патолопею для передчасно народжених дiтей, основними па-тогенетичними механiзмами якого е ламюсть судин гермiнального матрiксу та порушення продук-L^iI спинномозковоI рщини [9,10]. Причини пiдвищеноI проникливос-т та ламкостi судин вже добре вщо-мi i полягають у: прискоренм про-лiферацiI ендотелiю, пов'язано! з високим рiвнем ендотелiального фактору росту судин та анпопоетину-2; зниженн експресiI трансформуючого фактора росту-в, порiв-няно з iншими дiлянками мозку, якi стимулюються п-поксiею [6]; висоюй метаболiчнiй активностi [9,10]; низькому рiвнi фiбронектину в базальнiй мембран [21] та у зменшеннi експреси глiального фiбриляр-ного кислотного протешу (glial fibrillary acidic protein) в астроцитах [7]. У регуляци продукци лквору бере участь низка вазоактивних речовин, включаючи й оксид азоту [28]. Розлади синтезу NO можуть бути результатом генетично обумовлених порушень ак-тивностi eNOS. Вважаеться, що в присутност пол^ морфних варiантiв гену, його ферментна активнють може бути порушена [4].
У нашому дослщжены ми оцЫили можливий зв'язок мiж полiморфiзмом генiв eNOS, AGTR1,
ACE та розвитком найчастшого ускладнення, яке виникае серед передчасно народжених немовлят, а саме: важких ВШК та ix несприятливих наслщюв. Нашi дан демонструють, що наявнiсть а алелi 4a4b полiморфiзму eNOS гену е незалежним предиктором пщвищеного ризику летальних випадюв у передчасно народжених немовлят.
Ми не спостер^али достовiрниx зв'язкiв мiж по-лiморфiзмом генiв eNOS, AGTR1, ACE та ризиком виникнення важких ВШК, як могли б пщтвердити, що генетична модель 4aa+4ab eNOS-гену е фактором ризику розвитку важких ВШК. У той же час, Vannemreddy Р. та Ы., доотджуючи mini полiморфiз-ми вказаного гену виявив, що серед носив C алелi (TC + CC) гену eNOS rs2070744 достовiрно частiше виникали ВШК, ыж серед пацiентiв групи контролю i, що цей генотип е значним фактором ризику розвитку ^ei' патологи [21]. У бтыш тзньому дослiдженнi, проведеному Poggi С. та ш., не пiдтверджено досто-вiрного впливу полiморфiзму генiв eNOS -786T> C на розвиток ВШК [17]. Що стосуеться генотипу GT eNOS 894G> T, то у робот D. Szpecht показано, що
дгги з цим генотипом, народжен до 29 тижня вапт-носД мають в 3,4 рази вищий ризик розвитку ВШК [27].
На сьогодн добре вiдомi патофiзiологiчнi меха-нiзми N0, якi можуть захищати головний мозок передчасно народжених дтей вiд ураження, а при де-фiцитi цiеI важливоI молекули, навпаки, створювати умови, що сприяють пошкодженню головного мозку i, насамперед, його найбтьш чутливоI до ппокси зони - гермiнального матрiксу [26]. Так, окис азоту вщграе центральну роль у регуляци мiсцевого арте-рiального тиску, сприяе мозковiй вазодилятаци [15], що забезпечуе адекватний кровооб^ через тканини; протидiе речовинам (ендотелЫу 1, ангiотензину II), що спричиняють сильний вазоконстрикцю при-гнiчуе агрега^ю та адгезiю тромбоцитiв шляхом
Таблиця 4.
АсощацГГ мiж факторами ризику та летальними наслщками у передчасно народжених д^ей з важкими ВШК при простому та множинному лопстичному регресшному аналiзi
Фактори ризику Простий логiстичний регресiйний aнaлiз Множинний лопстичний регресмний aнaлiз
ВШ (95% ДI) р ВШ (95% ДО р
Маса тта при народженш (г) 0,99 (0,994-0,997) 0,000 0,99 (0,996-0,999) 0,023
Гестацмний BiK (тижж) 0,53 (0,41-0,68) 0,000 0,72 (0,54-0,96) 0,028
М^мальний дiaстолiчний АТ на 1 добу (мм рт. ст.) 0,87 (0,81-0,94) 0,001 0,93 (0,86-1,01) 0,133
РДС III-IV ст. (так, ж) 8,5 (2,29-31,62) 0,001 11,3 (2,02-63,03) 0,006
Сепсис (так, ш) 3,1 (1,03-9,3) 0,043 2,8 (0,72-10,84) 0,137
Генетична модель 4aa+4ab eNOS гену (так, ж) 2,1 (0,89-5,19) 0,086 6,05 (1,08-33,79) 0,040
зменшення продукцп ендотелiем фактору активацi,i тромбоцитiв (РАР), а також захищае стiнки судин, шпбуючи окислення лiпiдiв та шактивуючи вiльнi ра-дикали кисню [4].
Враховуючи виршальну роль N0 у сприянн ан-гiогенезу протягом антенатального/неонатального перюду [27], можна обфунтовано припустити, що носи а алелi 4аЬ полiморфiзму вЫОБ гену мають пщ-вищенi ризики розвитку летальних наслщюв через зменшення синтезу ендотелiального N0, який, у свою чергу, попршуе зростання та формування судин не ттьки у головному мозку, а й у легенях, тим самим пояснюючи результати нашого дослщження щодо достовiрного впливу РДС III-IУ ст. на розвиток летальних наслщюв у немовлят з ВШК. Доведено,
що у формуванн РДС також вагому роль вщграе по-рушення анпо- та альвеологенезу [20].
Висновки. аЬ+ЬЬ полiморфiзм вЫОБ гену е не-залежним предиктором збiльшення ризикiв розвитку летальних наслщюв у передчасно народжених немовлят з важкими ВШК.
Перспективи подальших дослщжень. Май-бутнi дослiдження полiморфiзму в генах, пов'язаних iз судинами та кровотоком у головному мозку, мо-жуть надати цЫну iнформацiю щодо патогенетичних механiзмiв, якi лежать в основi розвитку несприят-ливих наслiдкiв при ВШК, для розроблення заходiв з попередження !х розвитку та контролю за переб^ом захворювання.
^iTepaTypa
1. Analyz assotsyatsiy mezhdu polymorfyzmom gena angyotenzyn-prevrashchaiushchego fermenta y razvytyem arteryalnoi hypotenzyy u prezhdevremenno rozhdennykh detei s bakteryalnymy ynfektsyiamy ranneho neonatalnoho peryoda / V.Y Pokhylko, E.M. Kovaleva, iu.Y Cherniavskaia [i dr.] // GEORGIAN MEDICAL. - 2015. - S. 60.
2. Dynamyka chastoty yntraventrykuliarnykh krovoyzlyianiy y ykh yskhodov sredy prezhdevremenno rozhdennykh detei Poltavskoi oblasty za 2007-2016 hh / E.A. Kaliuzhka, N.S. Artemova, N.Y Hasiuk [et al.] // Wiadomosci Lekarskie. - 2017. - T. LXX, № 3 (I). - S.493-499.
3. Korobka O.V. Asotsiatsii mizh polimorfizmom genu eNOS ta perebigom asfiksii u novonarodzhenykh / O.V. Korobka // Aktualni problemy suchasnoi medytsyny. - 2015. - № 1 (49). - S. 119-124.
4. A novel truncated form of eNOS associates with altered vascular function / E. Galluccio, L. Cassina, I. Russo [et al.] // Cardiovasc. Res. - 2014. - № 101. - P. 492-502.
5. ACE gene deletion/deletion polymorphism may be a protective factor for respiratory distress in preterm infants / E. Sivasli, M. Yurdakuk, E. Babaoglu [et al.] // Turk. J. Pediatr. - 2007. - № 49. - P. 69-74.
6. Angiogenic inhibition reduces germinal matrix hemorrhage / P. Ballabh, H. Xu, F Hu [et al.] // Nat. Med. - 2007. - № 13. -P. 477-485.
7. Astrocyte end-feet in germinal matrix, cerebral cortex, and white matter in developing infants / N. El-Khoury, A. Braun, F. Hu [et al.] // Pediatr. Res. - 2006. - Vol. 59, № 5. - P. 673-679.
8. Baier R.J. Genetics of perinatal brain injury in the preterm infant / R.J. Baier // Front Biosci. - 2006. - № 11. - P. 1371-1387.
9. Ballabh P. Intraventricular hemorrhage in premature infants: mechanism of disease / P. Ballabh // Pediatr. Res. - 2010. - Vol. 67, № 1. - P. 1-8.
10. Ballabh P. Pathogenesis and Prevention of Intraventricular Hemorrhage / P. Ballabh // Clinics in Perinatology. - 2014. - Vol. 41, № 1. - P. 47-67.
11. Bassan H. Intracranial hemorrhage in the preterm infant: understanding it, preventing it / H. Bassan // Clin. Perinatol. - 2009. -Vol. 36, № 4. - P. 737-762.
12. Benders M.J. Neuroimaging of white matter injury, intraventricular and cerebellar hemorrhage / M.J. Benders, K.J. Kersbergen, L.S. de Vries // Clin Perinatol. - 2014. - Vol. 41, № 1. - P. 69-82.
13. Confidence in the prediction of neurodevelopmental outcome by cranial ultrasound and MRI in preterm infants / P. Nongena, A. Ederies, D.V. Azzopardi, A.D. Edwards // Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. - 2010. - Vol. 95, № 6. - P. 388-390.
14. Dani C. Inhaled nitric oxide for the treatment of preterm infants with respiratory distress syndrome / C. Dani, G. Bertini // Neonatology. - 2008. - Vol. 94, № 2. - P. 87-95.
15. Endothelial nitric oxide synthase polymorphism (-786T->C) and increased risk of angiographic vasospasm after aneurysmal subarachnoid hemorrhage / N.U. Ko, P. Rajendran, H. Kim [et al.] // Stroke. - 2008. - Vol. 39, № 4. - P. 1103-1108.
16. Executive and memory function in adolescents born very preterm / T.M. Luu, L. Ment, W. Allan [et al.] // Pediatrics. - 2011. - Vol. 127, № 3. - P. 639-646.
17. Genetic contributions to the development of complications in preterm newborns / C. Poggi, B. Giusti, E. Gozzini [et al.] // PLoS One. - 2015. - Vol. 10, № 7. - P. 1-13.
18. Genetic contributions to the development of retinopathy of prematurity / S. Mohamed, K. Schaa, M.E. Cooper [et al.] // Pediatr. Res. - 2009. - Vol. 65, № 2. - P. 193-197.
19. Hallman M. Premature birth and diseases in premature infants: common genetic background? / M. Hallman // J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. - 2012. - Vol. 25, № 1. - P. 21-24.
20. Is an endothelial nitric oxide synthase gene mutation a risk factor in the origin of intraventricular hemorrhage? / P. Vannemreddy, C. Notarianni, K. Yanamandra [et al.] // J. Neurosurg. Focus. - 2010. - Vol. 28, № 1. - P. 11.
21. Mao Y Fibronectin fibrillogenesis, a cell-mediated matrix assembly process / Y Mao, J.E. Schwarzbauer // Matrix Biol. - 2005. -Vol. 24, № 6. - P. 389-399.
22. Neonatal head ultrasound abnormalities in preterm infants and adolescent psychiatric disorders / A.H. Whitaker, J.F Feldman, J.M. Lorenz [et al.] // Arch. Gen. Psychiatry. - 2011. - Vol. 68. - P. 742-752.
23. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network / B.J. Stoll, N.I. Hansen, E.F. Bell [et al.] // Pediatrics. - 2010. - Vol. 126, № 3. - P. 443-456.
24. Polymorphisms in the Renin-Angiotensin system and outcome of very-low-birthweight infants / J. Spiegler, A. Gilhaus, I.R. Konig [et al.] // Neonatology. - 2010. - Vol. 97, № 1. - Р. 10-14.
25. Predictors of cerebral palsy in very preterm infants: the EPIPAGE prospective population-based cohort study / G. Beaino, B. Khoshnood, M. Kaminski [et al.] // Dev. Med. Child Neurol. - 2010. - Vol. 52, № 6. - Р. 119-125.
26. Regulation of hypoxia-inducible factor 1a and induction of vascular endothelial growth factor in a rat neonatal stroke model / D. Mu, X. Jiang, R.A. Sheldon [et al.] // Neurobiol. Dis. - 2003. - Vol. 14, № 3. - Р. 524-534.
27. Role of endothelial nitric oxide synthase and endothelin-1 polymorphism genes with the pathogenesis of intraventricular hemorrhage in preterm infants / D. Szpecht, J. Gadzinowski, A. Seremak-Mrozikiewicz [et al.] // Sci. Rep. - 2017. - № 7. -Р. 42541.
28. Toda N. Cerebral blood flow regulation by nitric oxide: recent advances / N. Toda, K. Ayajiki, T. Okamura // Pharmacol. Rev. - 2009. - Vol. 61. - P. 62-97.
РОЛЬ 4a4b ПОЛ1МОРФ1ЗМУ ГЕНУ eNOS У РОЗВИТКУ ЛЕТАЛЬНИХ НАСЛ1ДК1В ПРИ ВАЖКИХ ВНУТР1ШНЬО-ШЛУНОЧКОВИХ КРОВОВИЛИВАХ У ПЕРЕДЧАСНО НАРОДЖЕНИХ Д1ТЕЙ
Артьомова Н. С., Ковальова О. М., Похилько В. I., ^ipeHKO С. М., Жук Л. А.
Резюме. Важю внутршньо i±myH04K0Bi крововиливи у передчасно народжених дтей е одыею з осно-вних педiатричних проблем громадського здоров'я, так як смертнють при цьому захворюванн упродовж останых 20 роюв не зменшуеться, а до 50% немовлят, яю вижили, мають когытивы та руховi порушення. Зважаючи на вiдомi нин патогенетичн мехаызми розвитку захворювання, основними з яких е запалення, порушення коагуляцп та судинн фактори, ми припустили, що саме полiморфiзм у генах, що кодують фермент eNOS та ренш-анпотензинову систему (AGTR1, АПФ) можуть впливати на розвиток важких ВШК та виникнення летальних наслщюв.
Мета. Пщтвердити ппотезу, що розвиток важких ВШК, а також летальних випадюв, у передчасно народжених дтей пов'язаний з полiморфiзмом геыв eNOS, AGTR1 та АСЕ
Об'ект i методи. Проведене проспективне до^дження, в яке включено 97 передчасно народжених дтей (середы значення гестацмного в^ 29,07±0,34 тижыв; ваги при народженн 1320,8±54,68), яю лку-вались у лкувальних закладах Полтавсько'| област упродовж 2012-2015 рр. Вивчали розподш серед об-стежених дтей генотитв I/D АСЕ-гену, A/C AGTR1 -гену та 4a4b eNOS-гену. Для доведення зв'язку мiж виникненням летальних випадюв при важких ВШК у передчасно народжених дтей та дiею клнычних та ге-нетичних факторiв ризику використовували простий та множинний лопстичний регресмний аналiз.
Результати дослiдження. Розподш генотитв eNOS, AGTR1, АСЕ геыв серед немовлят з ВШК та без ВШК достовiрно не вiдрiзнявся. Отримано достовiрнi асо^аци мiж розвитком летальних випадюв у передчасно народжених дтей з важкими ВШК та генетичною моделлю ab+bb eNOS-гену пюля корекци дм маси тша, гестацмного вку при народжены, важкого респiраторного дистрес синдрому та сепсису (ВШ 6,05; 95% Д1 1,08-33,79; р=0,040).
Висновок. ab+bb полiморфiзм eNOS-гену е незалежним предиктором збшьшення ризикiв розвитку летальних наслщюв у передчасно народжених дтей з важкими ВШК.
Ключовi слова: передчасно народжеы, важкi внутрiшньо-шлуночковi крововиливи, летальнi наслiдки, полiморфiзм геыв eNOS, AGTR1, АСЕ.
РОЛЬ 4a4b ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА eNOS В РАЗВИТИИ ЛЕТАЛЬНЫХ СЛУЧАЕВ ПРИ ТЯЖЕЛЫХ ВНУТРИ-ЖЕЛУДОЧКОВЫХ КРОВОИЗЛИЯНИЯХ У ПРЕЖДЕВРЕМЕННО РОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ
Артемова Н. С., Ковалева А. М., Похилько В. И., Цвиренко С. М., Жук Л. А.
Резюме. Тяжелые внутри-желудочковые кровоизлияния у преждевременно рожденных детей являются одной из основных педиатрических проблем общественного здоровья, так как смертность при этом заболевании в течение последних 20 лет не уменьшается, а до 50% выживших младенцев имеют когнитивные и двигательные нарушения. Несмотря на известные ныне патогенетические механизмы развития заболевания, основными из которых являются воспаление, нарушение коагуляции и сосудистые факторы, мы предположили, что именно полиморфизм в генах, кодирующих фермент eNOS и ренин-ан-гиотензиновую систему (AGTR1, АПФ) могут влиять на развитие тяжелых ВЖК и возникновения летальных исходов.
Цель. Подтвердить гипотезу, что развитие тяжелых ВЖК, а также летальных случаев у недоношенных детей связано с полиморфизмом генов eNOS, AGTR1 и АСЕ.
Объект и методы. Проведено проспективное исследование, в которое включено 97 преждевременно рожденных детей (средние значения гестационного возраста 29,07±0,34 недель, вес при рождении 1320,8 ± 54,68 г.), которые лечились в лечебных учреждениях Полтавской области на протяжении 20132015 гг. Изучено распределение среди обследованных детей генотипов I/D АСЕ-гена, A/C AGTR1 -гена и 4a4b eNOS гена. Для доказательства связи между возникновением летальных случаев при тяжелых ВЖК у преждевременно рожденных детей и действием клинических и генетических факторов риска использовали простой и множественный логистический регрессионный анализ.
Результаты исследования. Распределение генотипов eNOS, AGTR1, АСЕ генов среди младенцев с ВЖК и без ВЖК достоверно не отличалось. Получены достоверные ассоциации между развитием леталь-
ных исходов у преждевременно рожденных детей с тяжелыми ВЖК и генетической моделью ab+bb eNOS-гена после коррекции действия веса, гестационного возраста при рождении, тяжелого респираторного дистресс синдрома и сепсиса (ОШ 6,05; 95% ДИ 1,08-33,79; р=0,040).
Вывод. ab+bb полиморфизм eNOS гена является независимым предиктором повышения рисков развития летальных исходов у преждевременно рожденных детей с тяжелыми ВЖК.
Ключевые слова: преждевременно рожденные дети, тяжелые внутри-желудочковые кровоизлияния, летальный исход, полиморфизм генов, eNOS, AGTR1, АСЕ.
THE ROLE OF 4a4b POLYMORPHISM OF THE eNOS GENE IN THE DEVELOPMENT OF LETHAL OUTCOMES OF SEVERE INTRAVENTRICULAR HAEMORRHAGE IN PRETERM INFANTS
Artyomova N. S., Kovalova O. M., Pokhylko V. I., Tsvirenko S. M., Zhuk L. A.
Abstract. Severe intraventricular haemorrhage in preterm infants are one of the main paediatric public health problems, since mortality in this disease in the last 20 years is not decreasing, and up to 50% of the surviving infants have cognitive and developmental disorders. Taking into account the currently known pathogenetic mechanisms of the disease development, the main of which are inflammation, coagulation disorders and vascular factors, we hypothesized that it is polymorphism in the enzymes encoding the enzyme of eNOS and renin-angiotensin system (AGTR1, ACE), that may affect the development of severe IVH and occurrence of lethal outcomes.
The aim of the research is to confirm the hypothesis that the development of severe IVH, as well as lethal outcomes in preterm infants is associated with the polymorphism of the genes eNOS, AGTR1, and ACE.
Object and methods. The prospective study was conducted, which included 97 preterm infants (average gestational age 29.07 ± 0.34 weeks; birth weight 1320.8 ± 54.68) who were treated at the medical institutions of Poltava region during 2012-2015. The distribution of I/D genotypes of ACE gene polymorphism, A/C polymorphism of AGTR1 gene and 4a4b polymorphism of eNOS gene among the examined children was studied. Intraventricular haemorrhages were diagnosed according to Papil's criteria. The material for conducting laboratory studies was blood (0.25 ml) of newborns, which was taken on the first day of life. To determine the polymorphic variants of the ACE, AGT2R1 and eNOS genes, polymerase chain reaction was performed followed by the restriction analysis of amplification reaction products.
A simple and multiple logistic regression analysis was used to establish the relationship between the occurrence of severe IVH and lethal outcomes in preterm infants and the effect of clinical and genetic risk factors.
Research results. The distribution of polymorphic genotypes of eNOS, AGTR1, ACE genes in infants with and without IVH did not significantly differ. The genetic model of the ID + DD of ACE gene was found in 84.62% of infants without IVH and in 77.59% of infants with severe IVH; the genetic model of AC + CC of ACE gene in 59.26% and 50.0% of infants, and the genetic model ab + bb of eNOS gene in 28.21% and 34.48% of infants, respectively.
The study of the distribution of polymorphic genotypes of renin-angiotensin system genes in the examined survivors with severe IVH and those who died showed a lack of significant differences in the frequency of genetic model of ID + DD of ACE gene (83.3% and 73.53%, p = 0.378), the genetic model of AS + SS of AGTR1 gene (37.5% and 58.82%, p = 0.110), and on the verge of statistical significance, the frequency of the genetic model ab + aa of eNOS gene (20.83 + 44.12 p = 0.058).
Relevant associations were found between the development of lethal outcomes preterm infants with severe IVH and the genetic model of ab + bb of eNOS gene (OR 6.05 (95% CI 1.08-33.79; p = 0.040) with birth weight (OR 0, 99 (95% CI 0.996-0.999), p = 0.023), gestational age (OR 0.72 (95% CI 0.54-0.96), p = 0.028) and severe RDS (OR 11.3 (95% CI 2.02-63.03), p = 0.006).
Conclusion. аb+bb polymorphism of eNOS gene is an independent predictor of the increased risk of developing lethal outcomes in preterm infants with severe IVH.
Keywords: preterm infants, severe intraventricular haemorrhage, lethal outcomes, polymorphism of genes eNOS, AGTR1, ACE.
Рецензент - проф. Крючко Т. О.
Стаття надшшла 14.11.2017 року
