CC BY
45
УДК 615.22:484.3
РЕЗВЕРАТРОЛ И ЕГО КОМБИНАЦИИ В ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКЦИИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МОДЕЛИРОВАНИИ
В.И. КОЧКАРОВ Л.М. ДАНИЛЕНКО ОА КУЗЬМИЧЕВА
Белгородский
государственный
унивєрситєт
e-mail: kochkarov@bsu.edu.ru
Проведено исследование эндотелиотропной активности резве-ратрола ввиде монотерапии, а также при сочетанном применении с основными антигипертензивными препаратами — эналаприлом, ло-зартаном калия, индапамидом и амлодипином, при 1_-ЫДМЕ — индуцированном дефиците оксида азота у крыс самцов линии Wistaг. При этом выявлено, что резвератрол проявляет выраженные эндотелио-протективные свойства при данной модели экспериментальной патологии. Кроме того, резвератрол при сочетанном использовании с антигипертензивными препаратами усилисивает их эндотелитропные свойства.
Ключевые слова: 1_-ЫДМЕ, резвератрол, эналаприл, лозартан, индапамид, амлодипин.
Результаты экспериментальных и клинических исследований последних лет подтвердили концепцию причинно-следственной взаимосвязи между эндотелиальной дисфункцией и развитием сердечно-сосудистых заболеваний и патологических состояний (атеросклероза, артериальной гипертензии, легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатией, ожирением, гиперлипидемии, сахарным диабетом) [1, 3, 4].
Статистические данные, приведенные, в публикации в медицинского журнала «Lancet», указывали на тот факт, что во Франции, несмотря на предпочтительное употребление продуктов с высоким содержанием жиров, уровень сердечно-сосудистых заболеваний оставался ниже, чем в других развитых странах, и этот так называемый «Французский парадокс» обусловлен регулярным употреблением населения Франции красного вина.
В последствии при изучении состава красных сортов вин было обнаружено вещество — 3,5,4'-тригидрокси-транс-стильбен (резвератрол), которое вырабатывается в виноградных гроздьях в ответ на экстремальные факторы (низкие температуры, инфекции, УФ-воздействия). Дальнейшие исследование показали, гиполипидемическую, антиоксидантную эстрогенную и антиагрегационную активность данного вещества [5].
Наряду с выше перечисленными фармакологическими эффектами литературные данные свидетельствовали также, о кардиопротективной и эндотелиотропной активности резвератрола в опытах in vitro. Эндотелиотропная активность резвератрола обусловлена активацией фермента эндотелиальной NO-синтазы (еИОБ), которая приводит к увеличению выработки окиси азота, который являющегося основным вазоди-латирующим фактором эндотелия сосудов [5].
В связи с выше изложенным представлялось актуальным изучить эндотелио-протективные свойства резвератрола при значительном блокировании фермента eNOS и дальнейшем развитии дефицита оксида азота в условиях эксперимента на животных.
Материал и методы исследований
Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота осуществляли ежедневным внутрибрюшинным введением N-нитро^-аргинин метилового эфира (L-NAME) в течение 7 дней крысам самцам линии Wistar массой 250-300 г. в дозе 25 мг/кг (1 группа, n=10). На фоне введения L-NAME животным осуществляли ежедневное внутрибрюшинное введение резвнратрола в дозе 2 мг/кг — 2 группа (n=10), внутрижелудочное введение эналаприла малеата в дозе 0,5 мг/кг — 3 группа (n=10), внутрижелудочное введение лозартана калия 6 мг/кг — 4 группа (n=10), внутрижелудочное введение индапамида 2 мг/кг — 5 группа (n=10), внутрижелудочное введение
02317728
амлодипина 0,5 мг/кг— 6 группа (п=10), а также комбинаций резвератрола с данными препаратами тех же дозах в соответствующих группах (табл.).
Таблица
Влияние резвератрола и его комбинаций с эналаприлом, лозартаном, индапамидом, амлодипином, на показатели артериального давления и эндотелиальной дисфункции при 1_-МДМБ-индуцированном дефиците
оксида азота
Группы животных Функцио- нальные пробы Систолическое артериальное давление мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление мм рт.ст. Интеграл сосудистой реакции усл.ед. Коэффициент эндотелиальной дисфункции
Интактные Исходные 137,7 ±3,7** 101,9 ± 4,3** 1268,0±74,8** 1,1±0,1
АХ 84,3 ± 4,5 38,7 ±2,8
НП 83,0 ± 3,7 42,1 ± 4,4 1375,3±93,7
_-ЫАМЕ (25мг/кг однократно в/б 7 суток) Исходные 190,3 ± 6,7* 145,0 ± 3,9* 695,3±87,6* 5,4±0,6*
АХ 110,6 ± 5,2* 82,8 ± 6,6
НП 88,7 ± 4,7 50,8± 4,2 3322,7±116,7
Острая проба резвератрола (2мг/кг однократно в/б) Исходные 134,1 ± 6,2** 104,2 ± 4,7** 1108,8±77,5 1,2±0,1**
АХ 78,8 ± 4,0 38,6 ± 2.7
НП 86,2 ± 3,1 36,7 ± 3,4 1422,4±103,9
_-ЫАМЕ + резвератрол (2мг/кг однократно в/б 7 суток) Исходные 183,8 ± 15,0* 140,0 ± 8,3* 1663,4±87,6 1,2±0,1**
АХ 55,2 ± 7,7 32,6 ± 3,3
НП 86,0 ±7,9 49,0 ± 9,9 2077,2±96,7
_-ЫАМЕ +эна-лаприл (о,5мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 183,9 ± 11,4* 138,9 ± 7,0* 1405,5±97,5 3,2±0,1**
АХ 98,0 ± 3,3 61,6 ± 4,7
НП 88,7 ± 4,0 42,7 ± 3,3 5123,9±121,8
_-ЫАМЕ +эналаприл+ резвератрол Исходные 175,9 ± 13,2* 132,6 ± 10,6* 1742,2± 165,2 1,5±0,1**
АХ 85,0 ± 7,5 53,0 ± 5,7
НП 84,8 ± 7,8 46,7 ± 3,0 2329,1 ± 185,3
_-ЫАМЕ +лозартан (6 мг/ кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 192,2 ± 10,5* 138,2 ± 2,4* 1348,9±79,8 2,5±0,3**
АХ 90,0 ± 7,8 51,7 ± 5,0
НП 95,5 ± 8,9 55,5 ± 5,5 3523,4±135,9
_-ЫАМЕ +лозартан+ резвератрол Исходные 144,1 ± 4,9** 117,2±3,4** 1436,5±161,4 1,8±0,2**
АХ 76,4 ± 3,8 40,2 ± 4,1
НП 76,0 ± 5,4 39,1 ± 2,8 2682,3±154,3
_-ЫАМЕ +индапамид (2мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 191,4±10,0* 140,4±2,4* 1442,7 ±94,1 3,3±0,4**
АХ 94,9 ± 5,4 60,6 ± 4,5
НП 85,2 ± 3,3 43,8 ± 4,9 4360,0±316,5
_-ЫАМЕ +индапамид+ резвератрол Исходные 166,5±7,5** 128,5±7,5** 1781,1 ±137,4 2,2±0,1**
АХ 90,9 ± 4,0 50,0 ± 3,0 3961,4±380,0
НП 85,0 ± 2,9 49,9 ± 3,5
_-ЫАМЕ +амлодипин (о,5мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 186,3±15,2* 131,1±7,0* 1350,4±216,9 2,1±0,3**
АХ 93,1 ± 6,0 71,6 ± 9,0
НП 80,2 ± 7,7 44,1 ± 6,6 2771,0±174,3
_-ЫАМЕ +амлодипин+ резвератрол Исходные 166,2±7,3** 138,8±5,6** 1161,6±113,5 1,6±0,1**
АХ 84,4 ± 3,0 53,8 ± 3,4
НП 88,1 ± 6,0 55,3 ± 5,5 1993,9±195,0
Группы животных Функцио- нальные пробы Систолическое артериальное давление мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление мм рт.ст. Интеграл сосудистой реакции усл.ед. Коэффициент эндотелиальной дисфункции
76 НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ И№6 (46) 2008
Окончание табл.
1 2 3 4 5 6
Интактные Исходные 137,7 ±3,7** 101,9 ± 4,3** 1268,0±74,8** 1,1±0,1
АХ 84,3 ± 4,5 38,7 ±2,8
НП 83,0 ± 3,7 42,1 ± 4,4 1375,3±93,7
_-ЫАМЕ (25мг/кг однократно в/б 7 суток) Исходные 190,3 ± 6,7* 145,0 ± 3,9* 695,3±87,6* 5,4±0,6*
АХ 110,6 ± 5,2* 82,8 ± 6,6
НП 88,7 ± 4,7 50,8± 4,2 3322,7±116,7
Острая проба рез-вератрола (2мг/кг однократно в/б) Исходные 134,1 ± 6,2** 104,2 ± 4,7** 1108,8±77,5 1,2±0,1**
АХ 78,8 ± 4,0 38,6 ± 2.7
НП 86,2 ± 3,1 36,7 ± 3,4 1422,4±103,9
_-ЫАМЕ + резве-ратрол (2мг/кг однократно в/б 7 суток) Исходные 183,8 ± 15,0* 140,0 ± 8,3* 1663,4±87,6 1,2±0,1**
АХ 55,2 ± 7,7 32,6 ± 3,3
НП 86,0 ±7,9 49,0 ± 9,9 2077,2±96,7
_-ЫАМЕ +энала-прил (0,5мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 183,9 ± 11,4* 138,9 ± 7,0* 1405,5±97,5 3,2±0,1**
АХ 98,0 ± 3,3 61,6 ± 4,7
НП 88,7 ± 4,0 42,7 ± 3,3 5123,9±121,8
_-ЫАМЕ +эналаприл+ рез-вератрол Исходные 175,9 ± 13,2* 132,6 ± 10,6* 1742,2± 165,2 1,5±0,1**
АХ 85,0 ± 7,5 53,0 ± 5,7
НП 84,8 ± 7,8 46,7 ± 3,0 2329,1 ± 185,3
_-ЫАМЕ +лозартан (6 мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 192,2 ± 10,5* 138,2 ± 2,4* 1348,9±79,8 2,5±0,3**
АХ 90,0 ± 7,8 51,7 ± 5,0
НП 95,5 ± 8,9 55,5 ± 5,5 3523,4±135,9
_-ЫАМЕ +лозартан+резвер атрол Исходные 144,1 ± 4,9** 117,2±3,4** 1436,5±161,4 1,8±0,2**
АХ 76,4 ± 3,8 40,2 ± 4,1
НП 76,0 ± 5,4 39,1 ± 2,8 2682,3±154,3
_-ЫАМЕ +индапамид (2мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 191,4±10,0* 140,4±2,4* 1442,7 ±94,1 3,3±0,4**
АХ 94,9 ± 5,4 60,6 ± 4,5
НП 85,2 ± 3,3 43,8 ± 4,9 4360,0±316,5
_-ЫАМЕ +индапамид+ рез-вератрол Исходные 166,5±7,5** 128,5±7,5** 1781,1 ±137,4 2,2±0,1**
АХ 90,9 ± 4,0 50,0 ± 3,0 3961,4±380,0
НП 85,0 ± 2,9 49,9 ± 3,5
_-ЫАМЕ +амлодипин (0,5мг/кг внутрижелудочно 7 суток) Исходные 186,3±15,2* 131,1 ±7,0* 1350,4±216,9 2,1±0,3**
АХ 93,1 ± 6,0 71,6 ± 9,0
НП 80,2 ± 7,7 44,1 ± 6,6 2771,0±174,3
_-ЫАМЕ +амлодипин+резв ератрол Исходные 166,2±7,3** 138,8±5,6** 1161,6±113,5 1,6±0,1**
АХ 84,4 ± 3,0 53,8 ± 3,4
НП 88,1 ± 6,0 55,3 ± 5,5 1993,9±195,0
Примечание: * — р < 0,05 в сравнении с интактными; ** — р < 0,05 в сравнении с группой _-ЫАМЕ
На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) вводили катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей гемодинамики — систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС), которые измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы “БюзЬвМ”. Исследовали соотношение выраженности эндотелийнезависимой (ЭНЗВ) и эндотелийзависимой (ЭЗВ) вазо-дилатации с внутривенным введением нитропруссида натрия (30 мкг/кг) и ацетилхо-лина (40 мкг/кг) соответственно с выведением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) по методике, описанной нами ранее [2].
B.И. Кочкаров и др. Резвератрол и его комбинации ... 77
Для оценки эндотелийзависимых реакций (ЭЗР) нами исследована функциональная проба с введением дозы 40 мкг/кг ацетилхолина (АХ) и эндотелийнезависи-мая реакция (ЭНЗР) оценивались посредством фармакологической пробы с введением нитропруссида (НП) в дозе 30 мкг/кг [2].
Блокада ЫО-синтазы с помощью ежедневного, в течение 7-суток, внутрибрю-шинного введения _-ЫАМЕ (Ы-нитро-_-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) приводила к достоверному снижению интеграла восстановления АД после введения АХ по сравнению с интактной группой животных (табл.). Напротив, ЭНЗР, являющаяся отражением реакции на введение НП увеличилась в 5 раз (см. табл.).
Для оценки степени эндотелиальной дисфункции мы рассчитывали «коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД)», являющегося отношением интеграла ЭНЗР восстановления АД в ответ на введение НП к интегралу ЭЗР восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали КЭД у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады ЫО-синтазы и получили достоверную разницу КЭД соответственно в 5 раз, соответственно 1,1 у интактных и 5,5 у животных, получавших _-ЫАМЕ.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния фармакологических агентов на эндотелий сосудистого русла в качестве основного нами использован КЭД, как показатель фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции.
Острая проба с резвератролом в дозе 2 мг/кг внутрибрюшинно не выявила достоверных изменений КЭД 1,1±0,1 с группой интактных животных.
Однако, при введение резвератрола в дозе 2 мг/кг в сутки на фоне развития ЫО-дефицита показала, что КЭД у этой группы животных практически был равен таковому у группы интактных животных.
В дальнейшем нами были проведены исследования эндотелиопротективного действия эналаприла (0,5 мг/кг), лозартана (6 мг/кг), индапамида (2 мг/кг), амлоди-пина (0,5 мг/кг), при _-ЫАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота, а также их комбинаций с резвератролом (2 мг/кг). Данные показали, что резвератрол обладает значительной эндотелипротективной активностью при развитии дефицита оксида азота, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции, как при использовании резвератрола в монотерапии, так и в комбинации с эналаприлом, ло-зартаном, индапамидом и амлодипином.
Необходимо отметить, что комбинированное использование резвератрола с эналаприлом, лозартаном, индапамидом и амлодипином позволяло в большей степени достигать снижения показателей артериального давления при _-ЫАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота, чем при использовании их при монотерапии, что говорит о значительном потенцировании эффектов препаратов резвератролом.
Таким образом, приведённые выше доказательства сопоставимых, а в некоторых случаях превышающих по степени эндотелиопротективных эффектов резвератро-ла при моделировании дефицита оксида азота в сравнении с другими группами препаратов, корригирующих эндотелиальную дисфункцию, позволяют рекомендовать его к применению в кардиологической практике. Кроме того, полученные данные доказывают концепцию патогенетически обоснованного подхода при коррекции дефицита оксида азота. В этом случае учитывается фармакологическое действие на различные точки приложения на системном и органном уровне. Результаты исследования позволяют сделать вывод об оправданном дополнительном назначении резвератрола к препаратам базисной фармакотерапии артериальной гипертензии.
Литература
1. Петрищев Н.Н., Власов Т.Д. Функциональное состояние эндотелия при ишемии-реперфузии (обзор литературы)// Рос. физиол. журн. им. И.М.Сеченова. - 2000. - №2. -
C.148-163.
2. Покровский, М.В. Новый взгляд на коррекцию эндотелиальной дисфункции / М.В. Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская и соавт. // Российский журнал иммунологии. - 2006. - Т.9. - С. 60-61
3. Соболева Г.Н., Иванова О.В., Карпов Ю.А. Состояние эндотелия при артериальной гипертонии и других факторах риска атеросклероза (обзор литературы-2) // Тер. архив,—
78
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ
№ 6 (46) 2008
1999,- № 7.- C. 80-83.
4. Basse R. anil l-laning I. Endothelial dysfunction in atherosclerosis // I.Vase.Res. - 1996. -Vol. 33. - P. 181 - 194.
5. J. F. Leikert;, T. R. Rathel;, P. Wohlfart, V. Cheynier et all/ Red Wine Polyphenols Enhance Endothelial Nitric Oxide Synthase Expression and Subsequent Nitric Oxide Release From Endothelial Cells Circulation, September 24, 2002; 106(13): 1614-1617.
REZVERATROL AND ITS COMBINATIONS IN ENDOTHELIOPROTECTION IN EXPERIMENTAL MEDELLING OF NITROGEN OXIDE DEFICIENCY
V.I. KOCHKAROV LM DANILENKO О.А. KUZMICHEVA
Belgorod State University
Are carried out researches endothelioprotective action of resveratrol (3, 4', 5, -tri hydroxy-trance-stilbene) and its combinations with enalapril, lozartan, indapamid and amlodipin, at the L-NAME-induced deficiency nitrogen oxide. Data have shown, that resveratrol possesses appreciable endo-thelioprotective activity at development of deficiency nitrogen oxide that was expressed in depression of factor of endothelial dysfunction, both at use res-veratrol in monotherapy, and in a combination with enalapril, lozartan, in-dapamid and amlodipin.
e-mail: kochkarov@bsu.edu.ru
Key words: L-NAME, resveratrol, enalapril, lozartan, indapamid, amlodipin.
