CC BY
200
Ирина Александровна Хитрово1, Кирилл Игоревич Кирсанов2, Екатерина Андреевна Лесовая3, Геннадий Альтерович Белицкий4, Марианна Геннадиевна Якубовская5
РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНИТЕЛЬНОГО АНАЛИЗА МУТАГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ КРАСИТЕЛЕЙ ДНК БРОМИСТОГО ЭТИДИЯ И SYBR GOLD
1 К. б. н., старший научный сотрудник, лаборатория механизмов химического канцерогенеза НИИ канцерогенеза РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
2 Аспирант, лаборатория механизмов химического канцерогенеза НИИ канцерогенеза
РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
3 Аспирант, лаборатория механизмов химического канцерогенеза НИИ канцерогенеза
РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
4 Профессор, д. м. н., ведущий научный сотрудник, лаборатория механизмов химического канцерогенеза НИИ канцерогенеза РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
5 Д. м.. н., заведующий лабораторией механизмов химического канцерогенеза НИИ канцерогенеза РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
Адрес для переписки: 115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, НИИ канцерогенеза РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, лаборатория механизмов химического канцерогенеза, Якубовская Марианна Геннадиевна: e-mail: [email protected]
Использование нового несимметричного цианинового красителя SYBR Gold обеспечивает более эффективную визуализацию ДНК при электрофорезе в агарозном геле по сравнению с бромистым этиди-ем — красителем ДНК фенантридинового ряда, широко используемым в молекулярно-биологических лабораториях. Кроме того, SYBR Gold способен связываться с однонитевой ДНК и РНК, легко отмывается от нуклеиновых кислот и не влияет на различные молекулярно-биологические реакции. Проанализированы токсичность и мутагенность этого перспективного красителя в тесте Эймса по сравнению с бромистым этидием. В проведенных экспериментах SYBR Gold не проявил мутагенного эффекта, в то время как бромистый этидий вызывал у сальмонеллы (штамм Salmonella typhimurium ТА98) мутации со сдвигом рамки считывания в присутствии активирующей системы S9.
Ключевые слова: SYBR Gold, бромистый этидий, мутагенность, тест Эймса.
В настоящее время все большее распространение в молекулярно-биологических исследованиях получают флуоресцентные цианиновые красители, среди которых одним из лучших является SYBR Gold [1; 2]. Использование SYBR Gold обеспечивает высокую эффективность визуализации одно- и двунитевой ДНК, а также РНК [1; 3]. Чувствительность этого метода сравнима с чувствительностью окрашивания серебром [4] и превышает чувствительность методов визуализации ДНК при использовании радиоактивного фосфора и бромистого этидия [1]. Кроме того, SYBR Gold хорошо отмывается с помощью стандартной процедуры переосаждения нуклеиновых кислот этанолом, что необходимо при изучении конформационных характеристик ДНК, РНК и влияния
© Хитрово И. А., Кирсанов К. И., Лесовая Е. А., Белицкий Г. А., Якубовская М. Г., 2009 УДК 577.214/.215:57.088
их конформации на различные межмолекулярные взаимодействия. Например, при оптимизации химического расщепления мисметчей — метода, применяемого для детекции точечных мутаций ДНК, нами установлено, что использование бромистого этидия в процессе очистки фрагментов ДНК и приготовления гетеродуплексов приводит к высокому фоновому расщеплению ДНК в последующем анализе. Для снижения фонового расщепления было необходимо проводить тщательную очистку ДНК фенолом от бромистого этидия, что приводило к высоким потерям образца и повышению трудоемкости анализа [5]. SYBR Gold не обладает этими недостатками и не влияет на эффективность полимеразной цепной реакции, обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции и ряда других реакций, используемых в молекулярнобиологических исследованиях [1].
Несмотря на все указанные преимущества SYBR Gold, в настоящее время наиболее часто для окрашива-
ния ДНК используется бромистый этидий, т. к. он является более дешевым реагентом. Помимо проблем, связанных с техникой его использования, в ряде исследований было показано, что этот краситель является мутагенным соединением [6—8]. В целях повышения безопасности работы в молекулярно-биологических лабораториях ведется поиск менее вредных флуоресцентных красителей ДНК. В частности, предложен краситель SYBR Green, имеющий строение, сходное со строением SYBR Gold, и обладающий очень слабой мутагенной активностью [6]. Мутагенная активность SYBR Gold ранее не изучалась, поэтому мы сочли необходимым исследовать этот важный параметр перспективного красителя.
Наиболее широко распространенным и принятым в международной практике тестом на мутагенную активность является тест Эймса, позволяющий выявлять как мутагены прямого действия, так и латентные их формы (промутагены) путем активации последних микросом-ными монооксигеназами, получаемыми из печени крыс. Показателем мутагенной активности в этом тесте является возникновение обратных генных мутаций у индикаторных штаммов Salmonella typhimuríum, дефектных по синтезу гистидина [9].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Потенциальную мутагенную активность изучали в соответствии с международным стандартом «International Standard ISO 10993-3:1992(E) Biological evaluation of medical devices. Part 3: Tests for genotoxicity, carcinogenicity and reproductive toxicity. Method 471 Genetic toxicology: Salmonella typhimurium, Reverse Mutation Assay», а также с «Руководством по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ» (ВОЗ, Женева, 1989) и «Методическими рекомендациями по оценке мутагенности новых лекарственных средств», утвержденными Фармакологическим комитетом Минздрава СССР от 15.01.1988 [10; 11].
Использовали индикаторные штаммы S. typhimurium TA100 и TA98 [12]. Индукция ферментов микросомного окисления была осуществлена с помощью предварительного введения крысам линии Вистар смеси полихлорированных бифенилов Совол однократно, в дозе 300 мг/мл внутрибрюшинно, за 5 сут до забоя [13].
Микросомная активирующая смесь состояла из
6 мг/мл белка фракции S9, 4 мМ НАДФ («Sigma», США), 5 мМ глюкозо-6-фосфата («Reanal», Венгрия), 33 мМ KCl («Реахим», Россия), 8 мМ MgCl2 («Реахим», Россия) и 0,1 М фосфатного буфера («Реахим», Россия), рН 7,4.
В 0,7% L-агар без гистидина последовательно вносили 0,1 мл препарата необходимой концентрации, 0,1 мл суспензии бактерий, 0,5 мл микросомной активирующей смеси (либо соответствующий объем буфера). После полного застывания L-агара чашки Петри инкубировали при температуре 37 °С. Учет результатов проводили через 48—72 ч инкубации.
В качестве положительных контролей были использованы вещества, индуцирующие мутации у соответствующих штаммов-тестеров при наличии или в отсутствие условий активации. Для вариантов тестирования без активирующей смеси были использованы №метил-№ нитро-№нитрозогуанидин (МННГ) («Serva», Германия) и
2,7-диамино-4,9-диокси-5,10-диоксо-4,5,9,10-тетрагидро-4,9-диазапирен (ДДДТДП) (Россия) [14; 15], при использовании фракции S9 адекватность системы тестирования была проконтролирована по бенз(а)пирену (БП) («Fluka», Германия) и 2-аминофлуорену (2-АФ) («Sigma», США).
Тестируемые вещества — бромистый этидий («Sigma», США) и SYBR Gold («Molecular Probes», США) — были растворены в стерильной бидистиллированной воде. При тестировании бромистого этидия были использованы 3 дозы: 0,5, 5 и 50 мг на чашку, что соответствовало 1,3, 13 и 130 нмоль; при тестировании SYBR Gold были использованы 6 доз: 0,20, 1,00, 4,00, 10,00, 20,00 и 40,0 нмоль.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Интенсивность флуоресценции как бромистого этидия, так и SYBR Gold резко возрастает при связывании с нуклеиновыми кислотами. Однако структура этих красителей различна. Бромистый этидий принадлежит к семейству фенантридиновых красителей, тогда как SYBR Gold относится к несимметричным цианиновым. SYBR Gold был разработан и запатентован в 1999 г., и в настоящее время структура данного соединения является закрытой информацией для пользователей. Он поставляется в 10 000-кратном растворе, используемом для приготовления однократных растворов для окрашивания агарозных и полиакриламидных гелей после проведения электрофорезов. Однако, используя коэффициент молярной экстинкции [2], можно определить молярную концентрацию SYBR Gold и соотнести эффекты бромистого этидия и SYBR Gold в эксперименте.
В тесте Эймса мутагенная активность бромистого этидия была изучена в единственном исследовании, проведенном V. L. Singer и соавт. [6]. Авторы изучили эффект бромистого этидия в дозах 0,5, 5,0 и 50,0 мкг, что соответствует 1,3, 13,0 и 130 нмоль на чашку. Мы использовали такие же дозы с тем, чтобы иметь возможность сравнить полученные результаты с результатами этого исследования. По данным V. L. Singer и соавт., дальнейшее увеличение дозы бромистого этидия до 350— 700 нмоль оказывало токсическое действие на культуры сальмонеллы. Относительно токсичности SYBR Gold данные литературы отсутствуют, поэтому мы использовали широкий диапазон доз, максимальная из которых составляла 40 нмоль на чашку. Ранее V. L. Singer и соавт. изучали токсический эффект другого несимметричного цианинового красителя SYBR Green [6]. Максимальная доза SYBR Green, при которой токсический эффект отсутствовал, составила 20 нмоль на чашку [6]. В наших экспериментах на штамме ТА100 токсичной оказалась доза 20 нмоль, а на штамме ТА98 слабая токсичность наблюдалась при дозе 40 нмоль. Полученные данные сопоставимы с результатами тестирования SYBR Green V. L. Singer и соавт. [6].
В табл. 1 и 2 содержатся результаты исследования мутагенной активности бромистого этидия на штамме ТА100, чувствительном к веществам, коорые индуцируют мутации с заменой оснований, а также на штамме ТА98, который чувствителен к соединениям, индуцирующим мутации со сдвигом рамки считывания.
Таблица 1
Результаты тестирования мутагенного эффекта бромистого этидия на индикаторном штамме ТА100
Исследуемое вещество Доза на чашку, нмоль Штамм ТА100
^9 +S9
М ± та Мі/Мо6 МАв М ± т Мі/Мо МА
Контроль 0 92 ± 7,1 1,0 - 143 ± 5,8 1,0 -
БП 40 - - - 747 ± 35,6 5,2 +
2-АФ 110 - - - 1120 ± 53,3 7,8 +
МННГ 68 1040 ± 240,0 11,3 + - - -
Бромистый этидий 1,3 84 ± 13,0 0,9 - 143 ± 2,4 1,0 -
13 80 ± 3,0 0,9 - 181 ± 58,0 1,3 -
130 114 ± 4,0 1,2 - 113 ± 6,0 0,8 -
а Среднее число ревертантов на чашку ± стандартное отклонение. б Отношение числа ревертантов в опыте к числу ревертантов в контроле.
в Мутагенная активность препарата («+» — наличие, «-» — отсутствие мутагенной активности).
В отрицательном контроле (при добавлении лишь растворителя без мутагена) частота индуцируемых мутаций не превышает стандартную, соответствующую генетическим особенностям каждого тестового штамма [8]. В ва-
риантах положительного контроля выявлена высокая активность фракции S9: промутагены 2-АФ и БП индуцируют высокий уровень реверсий. Специфичность мутагенного ответа в системе без активации ферментами
Таблица 2
Результаты тестирования мутагенного эффекта бромистого этидия на индикаторном штамме ТА98
Исследуемое вещество Доза на чашку, нмоль Штамм ТА98
^9 +S9
М ± та Мі/Мо6 МАв М ± т Мі/Мо МА
Контроль 0 29 ± 6,9 1,0 - 50 ± 4,7 1,0 -
БП 40 - - - 241 ± 7,3 4,8 +
2-АФ 110 - - - 2042 ± 106,0 40,8 +
ДДДТДП 67 2120 ± 120,0 73,1 + - - -
Бромистый этидий 1,3 19 ± 2,5 0,7 - 86 ± 9,8 1,7 -
13 28 ± 0,1 1,0 - 350 ± 120,4 7,2 +
130 25 ± 1,5 0,9 - 2444 ± 566,7 48,8 +
а Среднее число ревертантов на чашку ± стандартное отклонение. б Отношение числа ревертантов в опыте к числу ревертантов в контроле.
в Мутагенная активность препарата («+» — наличие, «-» — отсутствие мутагенной активности).
микросомных монооксигеназ была подтверждена при испытаниях штамма ТА98 с мутагеном ДДДТДП и штамма ТА100 с мутагеном МННГ.
В результате проведенных нами экспериментов показано, что бромистый этидий вызывает мутации со сдвигом рамки считывания (ТА98) только в присутствии активирующей смеси S9 (максимальное увеличение в 48,8 раза при концентрации 130 нмоль на чашку) и не вызывает мутации с заменой оснований (ТА100). При этом мутагенный эффект имеет четкую дозовую зависимость (табл. 3). Полученные данные согласуются с результатами работы V. L. Singer и соавт. [6] и свидетельствуют о том, что этот агент является промутагеном, а мутагенный эффект оказывают его метаболит или метаболиты, образующиеся в системе цитохрома Р450.
В отличие от бромистого этидия, SYBR Gold не увеличивает частоту реверсий (табл. 4) во всем диапазоне исследуемых концентраций — от 0,20 до 40 нмоль на чашку (см. табл. 2, 4).
В отсутствие фракции S9 ни один из красителей не вызывает увеличения числа ревертантов при использовании обоих штаммов.
На штамме ТА100, в котором мутаген вызывает замену одного из оснований, ни бромистый этидий, ни SYBR Gold не приводили к увеличению частоты реверсий независимо от наличия или отсутствия активирующей смеси S9 (см. табл. 1, 3). Мы предполагаем, что различия в мутагенных свойствах у бромистого этидия и SYBR Gold обусловлены типом связывания каждого из красителей.
Известно, что бромистый этидий связывается с ДНК, интеркалируя между комплементарными основаниями [16]. Он также связывается с олигонуклеотидами и РНК, что, вероятно, обусловлено образованием областей дуплексной структуры и ионным взаимодействием катионов красителя с отрицательно заряженной молекулой нуклеиновых кислот [17]. Однако основную роль играет интеркаляция бромистого этидия между парами оснований, что может приводить к сдвигу рамки считывания. Интеркаляция является самым прочным из возможных взаимодействий красителя с ДНК, и этим объясняются затруднения при отмывке проб ДНК, окрашенных бромистым этидием.
SYBR Gold, исходя из исследований типа связывания с нуклеиновыми кислотами красителей SYBR Green, ТОТО,
Таблица 3
Результаты тестирования мутагенного эффекта SYBR Gold на индикаторном штамме ТА100
Иссле- дуемое вещество Доза на чашку, нмоль Штамм TA1OO
-S9 +S9
Опыт 1 Опыт 2 MA8 Опыт 1 Опыт 2 MA
M ± m“ Ml/Mo6 M ± m Ml/Mo M ± m Ml/Mo M ± m Ml/Mo
Контроль О 87 ± 1О,О 1,О 98 ± 5,6 1,О - 1О5 ± 5,6 1,О 12О ± 2О,2 1,О -
БП 4О - - - - - 564 ± О,О 3,7 446 ± 48,7 3,7 +
2-АФ 11О - - - - - 1О32 ± 121,4 1О,7 1277 ± 148,4 1О,6 +
МННГ 68 1422 ± 52,2 16,3 1333 ± 111,1 13,6 + - - - - -
SYBR Gold О,2О - - 119 ± 11,8 1,2 - - - 136 ± 4,2 1,1 -
1,ОО - - 9О ± 6,4 О,9 - 1О1 ± 3,3 1,О 11О ± 1,3 О,9 -
4,ОО 83 ± 6,4 1,О 94 ± 1,1 1,О - 83 ± 15,8 О,8 1О5 ± 16,7 О,9 -
1О,ОО - - 86 ± 8,9 О,9 - - - 97 ± 17,3 О,8 -
2О,О (Т)г 41 ± 11,1 О,5 - - - 63 ± 26,2 О,6 - - -
4О,О (Т) 25 ± 4,9 О,3 - - - 21 ± 2,4 О,2 - - -
а Среднее число ревертантов на чашку ± стандартное отклонение. б Отношение числа ревертантов в опыте к числу ревертантов в контроле.
в Мутагенная активность препарата («+» — наличие, «-» — отсутствие мутагенной активности). г Токсичность при данной дозе соединения.
Таблица 4
Результаты тестирования мутагенного эффекта SYBR Gold на индикаторном штамме ТА98
Исследуемое вещество Доза на чашку, нмоль Штамм TA98
-S9 +S9
Опыт 1 Опыт 2 MAS Опыт 1 Опыт 2 MA
M ± m¡l Ml/Mo6 M ± m Ml/Mo M ± m Ml/Mo M ± m Ml/Mo
Контроль О 28 ± 3,1 1,О 31 ± 5,8 1,О - 41 ± 2,7 1,О 48 ± 11,1 1,О -
БП 4О - - - - - 142 ± 6,4 3,5 212 ± 25,1 4,4 +
2-АФ 11О - - - - - 1О93 ± 71,1 26,7 94О ± 66,7 19,6 +
ДДДТДП 67 57О ± 3О,О 2О,4 534 ± 37,3 17,2 + - - - - -
SYBR Gold О,2О - - 31 ± 5,1 1,О - - - 47 ± 2,2 1,О -
1,ОО - - 44 ± 8,9 1,4 - - - 49 ± 3,8 1,О -
4,ОО 29 ± 2,9 1,О 33 ± 3,3 1,1 - 39 ± 4,2 1,О 55 ± 1,1 1,1 -
1О,ОО - - 37 ± 5,1 1,2 - - - 43 ± 2,О О,9 -
2О,О 25 ± 5,6 О,9 - - - 34 ± 6,4 О,8 - - -
4О,О (Т) 21 ± 4,4 О,8 - - - 28 ± О,9 О,7 - - -
а Среднее число ревертантов на чашку ± стандартное отклонение. б Отношение числа ревертантов в опыте к числу ревертантов в контроле.
в Мутагенная активность препарата («+» — наличие, «-» — отсутствие мутагенной активности).
YOYO, представляющих его аналоги, при связывании с ДНК должен взаимодействовать по малой бороздке спирали ДНК за счет водородных связей [18—20], а также образовывать ионные связи с отрицательно заряженными фосфатными группами ДНК [6; 20]. Такая локализация молекул красителя способствует легкости в отмывке проб ДНК при переосаждении этанолом. Как считают V. L. Singer и соавт., такой тип связывания не препятствует корректной работе клеточных ферментов [6].
Таким образом, SYBR Gold, обладающий способностью к высокоэффективному окрашиванию одно- и дву-нитевой ДНК и РНК, не проявляет мутагенной активности в тесте Эймса.
ЛИТЕРАТУРА
1. Characterization of SYBR Gold nucleic acid gel stain: a dye optimized for use with 300-nm ultraviolet transilluminators / Tuma R. S., Be-audet M. P., Jin X., Jones L. J., Cheung C.-Y., Yue S., Singer V. L. // Analytical Biochem. — 1999. — Vol. 268. — P. 278—288.
2. Photophysical properties of fluorescent DNA-dyes bound to single- and double-stranded DNA in aqueous buffered solution / Cosa G., Focsaneanu K.-S., McLean J. R. N., McNamee J. P., Scaiano J. C. // Pho-tochem. Photobiol. — 2001. — Vol. 76, N 6. — P. 585—599.
3. McKee D. R., Thomson M. S. Nucleic acid stain-dependent single strand conformation polymorphisms // Biotechniques. — 2004. — Vol. 37. — P. 46—50.
4. Bassam B. J., Gresshoff P. M. Silver staining DNA in polyacryl-
amide gels // Nat. Protoc. — 2007. — Vol. 2, N. 26. — P. 49—54.
5. Sponatenous DNA-DNA interaction of homologous duplexes and factors affecting the result of heteroduplex formation / Neschastno-va A. A., Gasanova V. K., Popenko V. I., Lambrinakos A., Belitsky G. A., Cotton R. G. H., Yakubovskaya M. G. // Biol. Chem. — 2006. — Vol. 387. — P. 257—261.
6. Singer V. L., Lawlor T. E., Yue S. Comparison of SYBR Green I nucleic acid gel stain mutagenicity and ethidium bromide mutagenicity in the Salmonella/mammalian microsome reverse mutation assay (Ames test) // Mutat. Res. — 1999. — Vol. 439. — P. 37—47.
7. Effect of ethidium bromide on Drosophila melanogaster and Drosophila simulans / Marcos R., Lopez de Sepulveda J., Xamena N., Creus A. // Experientia. — 1981. — N 37. — P. 559—560.
8. Induction of male recombination in Drosophila melanogaster by chemical treatment / Ferres M. D., Alba P., Xamena N., Creus A., Marcos R. // Mutat. Res. — 1984. — N 126. — P. 245—250.
9. Ames B. N. Carcinogens are mutagens: their detection and classification // Environ. Health Perspect. — 1973. — P. 115—118.
10. Гигиенические критерии состояния окружающей среды 51. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ // Совместное издание Программы ООН по окружающей среде, Международной организации труда и Всемирной организации здравоохранения. — Женева, 1989.
11. Белицкий Г. А. Прогноз канцерогенности фармакологических средств и вспомогательных веществ в краткосрочных тестах // Ведомости фармкомитета. — 1999. — № 1. — С. 18—31.
12. Maron D. M., Ames B. N. Revised methods for the Salmonella mutagenicity test // Mutat. Res. — 1983. — Vol. 113. — P. 173—215.
13. Белицкий Г. А., Фонштейн Л. М., Худолей В. В. Совол как индуктор микросомных ферментов, активирующих проканцероге-
ны // Экспер. онкол. — 1987. — Т. 9, № 3. — С 20.
14. Мигачев Г. И., Андриевский А. М., Докунихин Н. С. Синтез производных 5,10-диоксо-4,5,9,10-тетрагидро-4,9-диазопирена // Химия гетероциклических соединений. — 1975. — № 12. — С. 1699—1700.
15. О мутагенном действии производного тетрагидродиазопире-на на бактерии / Абилев С. К., Фонштейн Л. М., Мигачев Г. И., Андриевский А. М. // Генетика. — 1979. — Т. 15, № 5. — С. 807—811.
16. Waring M. J. Complex formation between ethidium bromide and nucleic acids // J. Mol. Biol. — 1965. — Vol. 13. — P. 269—282.
17. Зенгер В. Принципы структурной организации нуклеиновых кислот. — М.: Мир, 1987. — 384 c.
18. Suh D., Chaires J. B. Criteria for the mode of binding of DNA binding agents // Bioorgan. Med. Chem. — 1995. — Vol. 3, N. 6. — P. 723—728.
19. Petty J. T., Bordelon J. A., Robertson M. E. Thermodynamic characterization of the association of cyanine dyes with DNA // J. Phys. Chem. — 2000. — Vol. 104. — P. 7221—7227.
20. Investigations on DNA intercalation and surface binding by SYBR Green, its structure determination and methodological implications / Zipper H., Brunner H., Bernhagen J., Vitzihum F. // Nucleic Acids Res. — 2004. — Vol. 32, N. 12. — P. 103.
Поступила 04.05.2009
Irina Alexandrovna Khitrovo1, Kyrill Igorevich Kirsanov2, Ekaterina Andreevna Lesovaya3, Gennady Alterovich Belitsky4, Marianna Gennadievna Yakubovskaya5
COMPARISON OF FLUORESCENT DNA DYES ETHIDIUM BROMIDE AND SYBR GOLD BY MUTAGENIC ACTIVITY
1 PhD, DSc, Senior Researcher, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms, Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478)
2 Postgraduate Student, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms, Carcinogenesis Research
Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478)
3 Postgraduate Student, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms, Carcinogenesis Research
Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478)
4 MD, PhD, DSc, Professor, Leading Researcher, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms,
Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478)
5 MD, PhD, DSc, Head, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms, Carcinogenesis Research
Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478)
Address for correspondence: Yakubovskaya Marianna Gennadievna, Laboratory of Chemical Carcinogenesis Mechanisms, Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS, 24, Kashirskoye sh., Moscow, Russian Federation, 115478; e-mail: [email protected];
A new asymmetric cyanine dye, SYBR Gold, ensures a more effective DNA visualization in agarose gel electrophoresis as compared with ethidium bromide, a phenantridine DNA dye commonly used in molecular biology laboratories. The SYBR Gold can also bind to single stranded DNA and RNA, is easily cleared from nucleic acids and has no effect on molecular biology reactions. This promising dye was tested for toxicity and mutagenic activity against ethidium bromide in Ames test. In these experiments SYBR Gold demonstrated no mutagenic activity while ethidium bromide induced mutations with a reading frame shift in the presence of activating system S9 in Salmonella (strain Salmonella typhimurium TA98).
Key words: SYBR Gold, ethidium bromide, mutagenic activity, Ames test.
