CC BY
27
УДК 575.22:582.632.2 DOI 10.18522/0321-3005-2016-2-72-77
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ФЕНОЛОГИЧЕСКИХ ФОРМ QUERCUS ЯОВиЯ Ь.
С ПОМОЩЬЮ ISSR-МАРКЕРОВ*
© 2016 г. В.А. Чохели, Б.Л. Козловский, М.М. Середа, Т.В. Вардуни
Чохели Василий Александрович - аспирант, младший научный сотрудник, кафедра генетики, факультет биологических наук, Ботанический сад Академии биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского Южного федерального университета, пер. Ботанический спуск, 7, г. Ростов-на-Дону, 344041, e-mail: [email protected]
Chokheli Vasiliyi Aleksandrovich - Post-Graduate Student, Junior Researcher, Department of Genetics, Faculty of the Biological Science, Botanical Garden of the Ivanovsky Academy of Biology and Biotechnology of the Southern Federal University, Botanicheskii Spusk, 7, Rostov-on-Don, 344041, Russia, e-mail: vachokheli@sfedu. ru
Козловский Борис Леонидович - кандидат биологических наук, научный сотрудник, Ботанический сад Академии биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского Южного федерального университета, пер. Ботанический спуск, 7, г. Ростов-на-Дону, 344041, e-mail: [email protected]
Kozlovskiyi Boris Leonidovich - Candidate of Biological Science, Researcher, Botanical Garden of the Ivanovsky Academy of Biology and Biotechnology of the Southern Federal University, Botanicheskii Spusk, 7, Rostov-on-Don, 344041, Russia, email: [email protected]
Середа Михаил Михайлович - кандидат биологических наук, доцент, кафедра ботаники, Академия биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского Южного федерального университета, пер. Ботанический спуск, 7, г. Ростов-на-Дону, 344041, e-mail: [email protected]
Sereda Mikhail Mikhailovich - Candidate of Biological Science, Associate Professor, Department of Botany, Ivanovsky Academy of Biology and Biotechnology of the Southern Federal University, Botanicheskii Spusk, 7, Rostov-on-Don, 344041, Russia, email: [email protected]
Вардуни Татьяна Викторовна - доктор педагогических наук, доцент, профессор, кафедра генетики, факультет биологических наук, директор Ботанического сада Академии биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского Южного федерального университета, пер. Ботанический спуск, 7, г. Ростов-на-Дону, 344041, e-mail: [email protected]
Varduni Tatiana Viktorovna - Doctor of Pedagogical Science, Associate Professor, Professor, Department of Genetics, Faculty of the Biological Science, Director of Botanical Garden of the Ivanovsky Academy of Biology and Biotechnology of the Southern Federal University, Botanicheskii Spusk, 7, Rostov-on-Don, 344041, Russia, e-mail: [email protected]
Проведена генетическая идентификация форм Quercus robur L. из искусственной популяции Ботанического сада ЮФУ с помощью ISSR-маркеров. Объекты исследования - фенологические формы: Q. r. var. praecox Czern. и Q. r. var. tardiflora Czern. Результативным оказался праймер с последовательностью (GA)8YC. Установлен высокий полиморфизм в группе образцов Q. robur, отобранных из искусственной популяции Ботанического сада ЮФУ. Выявлено, что методика не позволяет четко разделить фенологические формы Q. robur. Вместе с тем ISSR-маркеры могут использоваться для генетической паспортизации уникальных и коллекционных образцов видов рода Quercus и последующей их идентификации.
Ключевые слова: Quercus robur L., фенологические формы, генетическая паспортизация, ISSR-метод, онтогенез, дендрограмма.
Conducted genetic identification of the forms of Quercus robur L. from artificial populations of the Botanical garden of Southern Federal University with the help of ISSR markers. The objects of study served as phenological forms: Q. r. var. praecox Czern. and Q. r. var. tardiflora Czern. Scoring was primer with sequence (GA)8YC. Also, the high polymorphism in the sample group Q. robur, selected from artificial populations of the Botanical garden of SFU. It is revealed that the method does not allow to clearly separate phenological forms of Q. robur. However, ISSR markers can be used for genetic certification of unique and collectible specimens of species of the genus Quercus, and their subsequent identification.
Keywords: Quercus robur L., phenological forms, genetic certification, ISSR method, ontogenesis, dendrogramm.
Большой проблемой зеленого строительства и лесного хозяйства степной зоны Юга России является сокращение в условиях культуры продолжительности онтогенеза как у аборигенных, так и у
адвентивных интродуцированных видов древесных растений. Так, продолжительность онтогенеза таких долговечных видов, как Celtis australis L., Celtis occidentalis L., Gymnocladus dioica (L.) K. Koch,
* Исследование выполнено в рамках базовой части государственного задания № 213.01-11/2014-34 в сфере научной деятельности по теме «Развитие комплексных подходов к изучению и инвентаризации биоразнообразия степной зоны юга России». Использовано оборудование ЦКП «Биотехнология, биомедицина и экологический мониторинг», ЦКП «Высокие технологии», лаборатории экологии и физиологии растений и лаборатории клеточных и геномных технологий растений Ботанического сада Академии биологии и биотехнологии Южного федерального университета.
Juglans nigra L., Morus alba L., Quercus robur L., Quercus macrocarpa Michx., Robinia pseudoacacia L., Ulmus pumila L., в пределах Ростовской городской агломерации составляет 80^90 лет, а возраст вступления в сенильную стадию - 60^70 лет [1, 2]. Для решения этой проблемы необходимы поиск перспективных образцов среди долговечных пород, их генетическая идентификация и паспортизация, селекционная работа. В этой связи интерес представляют фенологические формы Q. robur L., описанные В.М. Черняевым [3] в 1858 г., - Q. robur var. praecox Czern. и Q. robur var. tardiflora Czern. Ряд авторов отмечает у этих форм наличие значительных различий в экологии, а также росте и развитии [4-10]. Ранее в Ботаническом саду ЮФУ был выявлен и описан [11] перспективный образец Q. robur var. tardiflora, значительно превосходящий по продолжительности онтогенеза другие образцы.
Цель работы — генетическая идентификация фенологических форм Q. robur из искусственной популяции дубов Ботанического сада ЮФУ с помощью ISSR-маркеров.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
1. Отобрать из искусственной популяции Q. robur образцы, соответствующие по фенологическому ритму Q. robur var. praecox и Q. robur var. tardiflora.
2. Сравнить отобранные формы с помощью микросателлитного анализа.
3. Определить возможность наследования в семенных поколениях свойств плюсовых образцов.
4. Оценить возможности использования ISSR-маркеров для оценки внутривидовой изменчивости Q. robur и последующего отбора перспективных форм.
Объекты и методы исследования
Объектами исследования послужили образцы фенологических форм Q. robur из искусственной популяции Ботанического сада ЮФУ.
У основной части образцов экстракция ДНК проводилась из освобожденных от чешуй покоящихся почек, у трехлетних сеянцев - из молодых листьев.
Выделение ДНК осуществлялось с помощью набора «Сорб-ГМО-А» (производство «Синтол»). Для анализа выделенного ДНК использовался ISSR-метод. Был применен праймер UBC 841 с последовательностью (GA)8YC и температурой отжига 52 °С из набора 100/9 University British Columbia (UBC).
ПЦР-смесь готовили из расчёта на один образец: H2O (DD) - 15,8 мкл; раствор 10x dNTP -2,5 мкл; 10х буфер для ПЦР - 2,5 мкл; Mg -
2,5 мкл; Taq-полимеразы - 0,2 мкл; ДНК-образец -1 мкл и праймер — 0,5 мкл. Общий объём смеси — 25 мкл.
Амплификация проводилась на термоциклере T100 Thermal Cycler. Протокол амплификации: 1. 94 °С - 1:00. 2. 94 °С - 0:30. 3. 52/53 °С - 0:45. 4. 72 °С - 2:00. 5. 35 циклов, начиная со второго пункта. 6. 72 °С - 5:00. 7. Хранение при 4 °С.
Разделение фрагментов проводили электрофорезом в 2%-м агарозном геле с использованием TBE-буфера (Tris, Bor acid, EDTA) на мощности 100 В, 1,5 ч, источник питания — PowerPac Basic.
Окрашивание ДНК производили интеркали-рующим красителем SYBR Green I из соотношения 1 мкл красителя на 5 мкл ДНК, съёмку — в гельдо-кументирующей системе Gel Doc XR+ с программным обеспечением Image Lab версии 4.1.
Маркер длин ДНК фрагментов 100+ bp DNA Ladder добавляли по 7 мкл в лунку.
Иерархический кластерный анализ проводился методами Neighbor-Joining (NJ) и Unweighted pair-group average (UPGMA) с использованием TREECON (version 1.3b) и PyElph 1.4. Матрица сходства и генетической дистанции построена по коэффициенту Жаккарда с помощью программы Winboot [12].
Результаты и их обсуждение
В пределах искусственной популяции Q. robur на территории Ботанического сада преимущественно встречаются экземпляры Q. robur var. prae-cox. Образцы отобраны из трех разных генераций: № 1, 2 взяты из парковых насаждений Ботанического сада (год посадки — 1930); № 3 - из защитных насаждений коллекции орехоплодных растений (год посадки — 1963); № 4, 5 - из насаждений дендрария (год посадки — 1975). Кроме того, для анализа была взята колоновидная форма Q. robur, полученная из семян от сортового экземпляра Q. robur Fastigiata.
Из популяции были отобраны два образца, соответствующие по фенологическому циклу Quercus robur var. tardiflora - первый (№ 6) — 1888 г. посадки, второй (№ 12) — 1975 г.
Основные фенологические особенности, позволяющие диагностировать форму Q. robur var. tardiflora [13]:
1. Распускание почек, облиствение, цветение, начало и окончание роста побегов происходит на 2—3 недели позже.
2. Отмершие листья осенью не опадают и в таком виде остаются на побегах до конца зимы.
Наибольший интерес представляет образец Q. robur var. tardiflora № 6, описанный ранее
Б.Л. Козловским с соавторами [11]. В отличие от экземпляров Q. robur var. praecox, высаженных в сходных условиях в парке Ботанического сада в 1930 г. и находящихся в сенильной стадии или уже отмерших, этот образец не имеет признаков старения. От описанной В.М. Черняевым разновидности Q. robur var. tardiflora он отличается тем, что сбрасывает листья в типичные сроки, что существенно повышает его декоративные качества. Этот образец в настоящее время имеет высоту 26 м, диаметр ствола — 108 см и оценивается нами как плюсовой для получения семенных поколений и селекционной работы.
Годовой срез фенологического цикла образцов Q. robur представлен в табл. 1.
Таблица 1
Фенологический цикл образцов Q. robur в 2014 г.
Фенологическая фаза Календарная дата
Q. r. var. praecox № 1 Q. r. var. tardiflora № 6 Q. r. var. tardiflora № 12
Распускание почек 10.IV 24.IV 21.IV
Начало роста побегов 14.IV 26.IV 25.IV
Распускание листьев 14.IV 26.IV 25.IV
Начало цветения 20.IV 26.IV 25.IV
Конец цветения 30.IV 3.V 2.V
Полное облиствение 7.V 12.V 12.V
Окончание роста побегов 15.V 18.V 18.V
Вторичный рост побегов 26.V - 28.V
Полное вызревание побегов 10.VII - 10.VII
Массовое созревание семян 4.IX 7.IX 10.IX
Массовое опадание плодов 10.IX 14.IX 14.IX
Массовое окрашивание 15.X 15.X 15.X
Массовый листопад 27.X 30.X Зима, начало весны последующего года
Оба образца Q. гоЪиг var. tardiflora являются высокозимостойкими - после типичных и экстремальных зим повреждений не наблюдается. Засухоустойчивы - хорошо растут и развиваются без полива, засуху переносят без повреждения надземных органов, почки и семена нормального развития, хорошо растут и цветут в следующий после засухи год. Листья поражаются листогрызущими насекомыми и мучнистой росой. В отдельные годы образец № 6 «уходит» от первой генерации дубовой листовертки из-за более поздних сроков распускания листьев. Цветет регулярно, но плодоносит с периодичностью в 2^3 года. Для хорошего
плодоношения дуб нуждается в перекрёстном опылении, что для данной формы невозможно из-за расхождения фенологических ритмов с другими образцами искусственной популяции. Предположительно происходит самоопыление. Пораженных семяедами желудей — 10^30 %, неповрежденные семена имеют высокую всхожесть (до 100 %). Декоративная долговечность — более 100 лет.
Получены семенные поколения выделенных форм Q. robur var. tardiflora путем осеннего посева семян. В семенных поколениях хорошо повторяются фенологические особенности материнского растения (образец № 6) - сеянцы начинают вегетиро-вать в среднем на 10 дней позже, чем сеянцы от образцов Q. robur var. praecox.
Ранее установлено [14], что 841-й праймер обладает высокой специфичностью по отношению к взятым образцам; аналогичный результат был получен Aimara Lopez-Aljorna с соавторами [15] при изучении Q. suber L. Выяснилось, что использование буфера для полимеразы без антител не дает четкой картины на электрофореграмме (рис. 1), что, вероятно, связано с присутствием дубильных веществ.
м №1 №2 №3 №4 №5 №6 №12 №13
пи
Рис. 1. Результат ПЦР-детекции образцов Q. гсЪыг с праймером иВС 841 с использованием буфера без антител (номера на рисунке соответствуют номерам образцов)
Использование буфера с антителами, высокой разрешающей способностью, содержащего вещества, снижающие активность ферментов - ингибиторов ПЦР-детекции, дало удовлетворительный результат (рис. 2).
М
н н
**** I » щ ВмЦ t--
и И |
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
На рис. 2 видно, что фореграммы сеянцев № 7-11, произошедших от образца Q. r. var. tardiflora № 6, визуально значительно отличаются от остальных образцов.
На основе полученной фореграммы были построены дендрограммы генетического сходства исследуемого материала. При этом использованы методы попарного внутри-группового невзвешенного среднего (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean, UPGMA) - рис. 3 и присоединения соседей (Neighbor-Joining, NJ) - рис. 4.
Полученные дендрограммы дают сходные результаты по следующим позициям:
- Q. robur var. tardiflora № 9, № 12 лежит вне клад;
- Q. robur var. tardiflora № 6 образует клады совместно О. robur var. praecox № 4;
- сеянцы, полученные от Q. robur var. tardiflora № 6 (образцы № 7-11), распределяются по разным кладам, несмотря на общее происхождение и сходство в фенологии.
Для оценки генетического сходства был использован коэффициент Джакарта. Генетическое сходство для пар образцов дуба представлено в табл. 2.
Наиболее генетически близки образцы Q. robur var. praecox № 1 и Q. robur var. praecox № 2. При этом наиболее генетически удаленными являются № 7, 8; № 8, 10; № 12, 11; № 7, 11; № 1, 7; № 2, 7; № 3, 8; № 3, 11; № 3, 1; № 3, 2; № 5, 9; № 5, 3; № 7, 13; № 10, 13.
Из таблицы следует, что выделенный как плюсовой образец Q. robur var. tardiflora № 6 имеет относительно высокое сходство с образцами Q. robur var. praecox (№ 1-5) и при этом низкую степень сходства с собственным семенным поколением (образцы № 7-11), что может быть результатом эффекта инцухта при самоопылении. При этом, как отмечено выше, Q. robur var. tardiflora № 6 также по фенотипическим признакам значительно отличается от остальных образцов.
Рис. 2. Результат ПЦР-детекции образцов Q. гоЬиг с праймером UBC 841 (номера на рисунке соответствуют номерам образцов)
OJ3
QJ3
Рис. 3. Дендрограмма, построенная методом UPGMA
-1S-9-Q. robur var. tardiflora №10
-2iO-q r0bur var. tardiflora №7
--Q. robur var. praecox №3
7.4
15.4
36.1
—Q. robur var. tardiflora №9
-Q. robur var. tardiflora №12
-Q. robur f. fastigiata №13
В-Q. robur var. tardiflora №8
--p. robur var. tardiflora №6
- S—Q. robur var. praecox №4
—Q. robur var. praecox №2
6.0
^ 8—Q. robur var. praecox №1
-Q. robur var. tardiflora №11
-Q. robur var. praecox №5
Рис. 4. Дендрограмма, построенная методом NJ
Таблица 2
Генетическое сходство исследуемых образцов Q. robur
Номер образца № 1 № 2 № 3 № 4 № 5 № 6 № 7 № 8 № 9 № 10 № 11 № 12 № 13
1 1,000
2 0,778 1,000
3 0,000 0,000 1,000
4 0,455 0,500 0,059 1,000
5 0,273 0,231 0,000 0,455 1,000
6 0,250 0,308 0,063 0,700 0,500 1,000
7 0,000 0,000 0,273 0,077 0,091 0,083 1,000
8 0,364 0,308 0,000 0,308 0,364 0,333 0,000 1,000
9 0,182 0,154 0,071 0,154 0,000 0,077 0,222 0,167 1,000
10 0,077 0,067 0,231 0,143 0,167 0,071 0,333 0,000 0,083 1,000
11 0,400 0,455 0,000 0,333 0,167 0,250 0,000 0,154 0,083 0,077 1,000
12 0,154 0,133 0,063 0,308 0,250 0,231 0,083 0,143 0,167 0,071 0,000 1,000
13 0,273 0,231 0,067 0,333 0,400 0,250 0,000 0,364 0,083 0,000 0,077 0,364 1,000
В целом анализ показывает высокий полиморфизм в группе образцов Q. robur, отобранных из искусственной популяции Ботанического сада ЮФУ. Очевидно, что использованная методика не позволяет четко разделить фенологические формы Q. robur, тем более что сроки наступления фенологических фаз, скорее всего, кодируются полигеном. Вместе с тем ISSR-маркеры могут с высокой надежностью использоваться для генетической паспортизации уникальных и коллекционных образцов видов рода Quercus и последующей их идентификации в случае необходимости.
Заключение
ISSR-маркеры могут быть использованы для паспортизации образцов Q. robur, при этом не позволяют с необходимой надежностью отделить форму Q. robur var. tardiflora от Q. robur var. prae-cox. Четкий рисунок фореграмм позволяет использовать буфер с антителами, высокой разрешающей способностью, в котором содержались вещества, снижающие активность ферментов. Для дальнейших исследований следует привлечь такие методы, как RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) с использованием рандомных праймеров со случайной последовательностью и RFLP-анализ (Restriction Fragment Length Polymorphism) с использованием рестриктаз.
Полученные дендрограммы дают сходные результаты по следующим позициям:
- Q. robur var. tardiflora № 9, № 12 лежит вне клад;
- Q. robur var. tardiflora № 6 образует клады совместно Q. robur var. praecox № 4;
- сеянцы, полученные от Q. robur var. tardiflora № 6 (образцы № 7-11), распределяются по разным
кладам, несмотря на общее происхождение и сходство в фенологии.
Литература
1. Анищенко Л.В., Бурлуцкая Л.В., Жегулова И.В., Мальцева А.Н., Миронова Н.В., Козловский Б.Л., Куро-пятников М.В., Стефановская Е.В., Федоринова О.И., Фирсова А.В., Фирсова А.В., Шишлова Ж.Н., Шма-раева А.Н. Коллекции растений Ботанического сада ЮФУ. Каталог растений, прошедших интродукцион-ное испытание / под ред. В.В. Федяевой. Ростов н/Д., 2014. 357 с.
2. Козловский Б.Л., Огородникова Т.К., Куропят-ников М.В., Федоринова О.И. Ассортимент древесных растений для зеленого строительства в Ростовской области. Ростов н/Д., 2009. 416 с.
3. ЧерняевВ.М. О лесах Украины. М., 1858. 54 с.
4. Вересин М.М. О фенологических формах дуба черешчатого и использовании их в лесоразведении // Изв. вузов. Лесн. журн. 1958. № 3. С. 3 - 15.
5. Миленин А.И. Экологические особенности фенологических разновидностей дуба черешчатого (Quercus robur L.) в условиях ЦЧР : автореф. дис. ... канд. с.-х. наук. Воронеж, 1997. 24 с.
6. Молчанов А.Г. Интенсивность фотосинтеза фенологических форм дуба черешчатого в условиях недостаточного увлажнения // Лесоведение. 2012. № 4. С. 31 - 38.
7. Рубцов В.В., Жиренко Н.Г., Уткина И.А. Интенсивность тока пасоки у разных фенологических форм дуба в южной лесостепи // Лесоведение. 2007. № 5. С. 44 - 55.
8. Сильченко И.И. Фенологические формы дуба черешчатого (Quercus robur L.) в различных типах ландшафтов Брянской области // Вестн. Брянского гос. ун-та. 2012. № 4. С. 158 - 161.
9. Bobinac M., Batos B., Miljkovi D., Radulovi S. Polycyclism and phenological variability in the common
oak (Quercus robur L.) // Archives of biological sciences. 2012. Vol. 64, № 1. P. 97 - 105.
10. Trudic B., Galovic V., Orlovic S., Pap P., Pekec S. A strategy for the identifcation of a canditate gene for drought induced stress in penduculate oak (Quercus robur L. (Q. pedunculata Ehrh.)), Fagaceae // Bulgarian J. of Agricultural Science. 2012. Vol. 19. № 2. P. 338 - 346.
11. Козловский Б.Л., Федоринова О.И., Куропятни-ков М.В. Новый перспективный для зеленого строительства и лесоразведения в Ростовской области образец Quercus robur L. // Политем. сетевой электр. науч. журн. Куб. гос. аграр. ун-та (Научный журнал Куб-ГАУ). 2015. Т. 2, № 106. С. 580 - 591.
12. Yap I. V., Nelson R.J. WinBoot: A program for performing bootstrap analysis of binary data to determine the confidence limits of UPGMA-based dendrograms. Manila, Fhilippines, 1996. 22 p.
13. Щепотьев Ф.Л. Дендрология. М.; Л., 1949. 347 с.
14. Чохели В.А., Козловский Б.Л., Середа М.М., Вар-дуни Т.В. Анализ генетической изменчивости образцов Quercus robur L. из искусственной популяции Ботанического сада ЮФУ // Биоразнообразие. Биоконсервация. Биомониторинг : сб. материалов II Междунар. на-уч.-практ. конф. Майкоп, 2015. С. 130 - 133.
15.Lopez-Aljorna A., Bueno M.A., Aguinagalde I., Marttin J.P. Fingerprinting and genetic variability in cork oak (Quercus suber L.) elite trees using ISSR and SSR markers // Ann. For. Sci. 2007. № 64. P. 773 - 779.
References
1. Anishchenko L.V., Burlutskaya L.V., Zhegulova I.V., Mal'tseva A.N., Mironova N.V., Kozlovskii B.L., Kuropyatnikov M.V., Stefanovskaya E.V., Fedorinova O.I., Firsova A.V., Firsova A.V., Shishlova Zh.N., Shmaraeva A.N. Kollektsii rastenii Botanicheskogo sada YuFU. Katalog rastenii, proshedshikh introduktsionnoe ispytanie [Plant collections of the Botanical Garden of SFU. Catalog of plants that have passed introductory test]. Ed. V.V. Fedyaeva. Rostov-on-Don, 2014, 357 p.
2. Kozlovskii B.L., Ogorodnikova T.K., Kuropyatnikov M.V., Fedorinova O.I. Assortiment drevesnykh rastenii dlya zelenogo stroitel'stva v Rostovskoi oblasti [The range of woody plants for green building in the Rostov region]. Rostov-on-Don, 2009, 416 p.
3. Chernyaev V.M. O lesakh Ukrainy [On forests of Ukraine]. Moscow, 1858, 54 p.
4. Veresin M.M. O fenologicheskikh formakh duba chereshchatogo i ispol'zovanii ikh v lesorazvedenii [About phenological forms of English oak and use them in afforestation]. Izv. vuzov. Lesn. zhurn., 1958., no 3, pp. 3-15.
5. Milenin A.I. Ekologicheskie osobennosti fenologicheskikh raznovidnostei duba chereshchatogo (Quercus robur L.) v usloviyakh TsChR : avtoref. dis. ...
Поступила в редакцию_
kand. s.-kh. nauk [Ecological features of phenological varieties of English oak (Quercus robur L.) in the conditions of the CCA]. Voronezh, 1997, 24 p.
6. Molchanov A.G. Intensivnost' fotosinteza fenologicheskikh form duba chereshchatogo v usloviyakh nedostatochnogo uvlazhneniya [The intensity of photosynthesis of phenological forms of English oak in low moisture]. Lesovedenie, 2012, no 4, pp. 31-38.
7. Rubtsov V.V., Zhirenko N.G., Utkina I.A. Inte-nsivnost' toka pasoki u raznykh fenologicheskikh form duba v yuzhnoi lesostepi [The intensity of the current of sap in different phenological forms of oak in the southern forest-steppe]. Lesovedenie, 2007, no 5, pp. 44-55.
8. Sil'chenko I.I. Fenologicheskie formy duba chereshchatogo (Quercus robur L.) v razlichnykh tipakh landshaftov Bryanskoi oblasti [Phenological forms of English oak (Quercus robur L.) in different types of Bryansk region landscapes]. Vestn. Bryanskogo gos. un-ta, 2012, no 4, pp. 158-161.
9. Bobinac M., Batos B., Miljkovi D., Radulovi S. Polycyclism and phenological variability in the common oak (Quercus robur L.). Archives of Biological Sciences, 2012, vol. 64, no 1, pp. 97-105.
10. Trudic B., Galovic V., Orlovic S., Pap P., Pekec S. A strategy for the identifcation of a canditate gene for drought induced stress in penduculate oak (Quercus robur L. (Q. pedunculata Ehrh.)), Fagaceae. Bulgarian J. of Agricultural Science, 2012, vol. 19, no 2, pp. 338-346.
11. Kozlovskii B.L., Fedorinova O.I., Kuropyatnikov M.V. Novyi perspektivnyi dlya zelenogo stroitel'stva i lesorazvedeniya v Rostovskoi oblasti obrazets Quercus robur L. [New perspective for green building and afforestation in the Rostov region a sample of Quercus robur L.]. Politem. setevoi elektr. nauch. zhurn. Kub. gos. agrar. un-ta (Nauchnyi zhurnal KubGAU), 2015, vol. 2, no 106, pp. 580-91.
12. Yap I.V., Nelson R.J. WinBoot: A program for performing bootstrap analysis of binary data to determine the confidence limits of UPGMA-based dendrograms. Manila, Fhilippines, 1996, 22 p.
13. Shchepot'ev F.L. Dendrologiya [Dendrology]. Moscow; Leningrad, 1949, 347 p.
14. Chokheli V.A., Kozlovskii B.L., Sereda M.M., Varduni T.V. [Analysis of genetic variation patterns of Quercus robur L. artificial population Botanical Garden SFU]. Bioraznoobrazie. Biokonservatsiya. Biomonitoring [Biodiversity. Biopreservation. Biomonitoring]. Sat. II International materials. scient.-pract. conf. Maikop, 2015, pp. 130-133.
15. Lopez-Aljorna A., Bueno M.A., Aguinagalde I., Martrin J.P. Fingerprinting and genetic variability in cork oak (Quercus suber L.) elite trees using ISSR and SSR markers. Ann. For. Sci., 2007, no 64, pp. 773-779.
12 февраля 2016 г
