CC BY
88
УДК 619: 616.98:578.882.11+576.807.7:636.4
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ «НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА СВИНЕЙ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА».
Евстифеев В.В. - к.в.н., доцент, зав лабораторией Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности
г. Казань, тел.(843) 239-53-49
Ключевые слова: диагностика, хламидиоз, антиген, ИФА, РСК.
Key words: Diagnostics, Chlamydiosis, Antigen, ELISA-test, reaction fixation compliments.
Среди поголовья свиней в Российской Федерации хламидиоз имеет значительное распространение. Однако, ввиду отсутствия четкого симптомокомплекса, часто латентного течения и сложности диагностики, а также отсутствия должного внимания ветеринарных специалистов к этой проблеме хламидиоз зачастую остается нераспознанным, а переболевание животных ведет к серьезным убыткам, которые нередко списываются на сопутствующие инфекции.
Ущерб при хламидиозе свиней складывается из потерь абортов, мертворождений и рождения слабых нежизнеспособных поросят. Хламидии являются этиологическим фактором пневмоний, полиартритов,
конъюнктивитов, энцефаломиэлитов,
уретритов и других болезней, которые могут охватывать от 7 до 15, а иногда до 80% животных [1,7,8].
Наиболее доступным средством проведения серологического мониторинга хозяйств на хламидиоз в ветеринарии, на сегодняшний день, является реакция связывания комплемента (РСК) с группоспецифическим хламидийным
антигеном. К сожалению, этот метод имеет ряд недостатков, связанных с низкой чувствительностью, длительностью
получения ответа и т.п. [2,6].
Наиболее перспективным
диагностическим тестом является иммуноферментный анализ (ИФА). По чувствительности иммуноферментный анализ в 5-10 раз, а по специфичности в 2-3 раза превосходит РСК [3,5,9].
Исходя из этого, ранее были проведены исследования по разработке специфического хламидийного антигена для ИФА [4] и на его основе создан «Набор препаратов для диагностики хламидиоза
КРС методом ИФА», который был испытан в лабораторных и производственных условиях.
Материал и методы. Для
исследований использовали 995 проб сывороток крови свиней из 30 не благополучных по хламидиозу хозяйств РТ и других регионов РФ.
ИФА ставили в непрямом варианте, согласно «Инструкции по применению набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом
иммуноферментного анализа (ИФА)», утвержденной для производственных испытаний.
Учет результатов реакции проводили инструментально на спектрофотометре модели Bio-RadModel 680,при длине волны 490. Для оценки результата вычисляли критический уровень(ОП крит.), который определяется как значение оптической плотности отрицательного контроля (ОП отр.) умноженное на 2:
ОП крит. = ОП отр. х 2
Результат считали положительным, если значение оптической плотности данного образца выше критического уровня (ОП исп. > ОП крит).
Если оптическая плотность испытуемой пробы меньше или равна оптической плотности отрицательного контроля (ОП исп. < ОП отриц.), то результат считали отрицательным.
Если же оптическая плотность испытуемого образца больше оптической плотности отрицательного контроля и меньше или равна ОП крит. (ОП крит. > ОП исп. > ОП отр.), то результат реакции считается сомнительным.
Параллельно все сыворотки крови исследовали в РСК, используя «Набор
антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиоза
сельскохозяйственных животных» (№ РОСС ЯИ. ФВ01. Н21898) производства ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Результаты оценивали визуально, по феномену гемолиза эритроцитов. Полное отсутствие гемолиза эритроцитов оценивали как положительную реакцию (4 креста), а полный гемолиз соответственно как отрицательную реакцию.
Результаты исследований.
Испытания экспериментальных серий «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом
иммуноферментного анализа» проводили в 2 этапа: в лабораторных и «производственных» условиях.
На первоначальном этапе, в лабораторных условиях, в РСК и ИФА с применением разработанного набора исследованию было подвергнуто 6 неблагополучных хозяйств РТ и других регионов России. Всего было исследовано 174 проб сывороток крови свиней. Все
пробы параллельно исследовались в РСК. При этом в РСК положительно реагировало 35 проб, что составило 20%, а в ИФА 78 (44%), что больше в 2,2 раза. Титры специфических антител в РСК колебались в пределах 1:5 - 1:20, что соответствует иммунному фону неблагополучных по хламидиозу хозяйств. В ИФА этот показатель колебался в пределах 1:100 -1:800.
Производственные испытания
проводились на базе ФГУ «Татарская межрегиональная ветеринарная
лаборатория» (г.Казань).
С применением экспериментальных серий «Наборов препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа» было исследовано 821 проба сывороток крови свиней из 24 не благополучных по хламидиозу хозяйств РТ и других регионов РФ. Параллельно все сыворотки крови были исследованы в РСК. Результаты этих исследований обобщены в таблице.
Таблица - Результаты сравнительного исследования сывороток крови свиней в РСК и ИФА
Наименование метода исследования Кол-во исследованных проб Реагировало положительно
Кол-во %
РСК 821 119 14
ИФА 239 29
В ИФА было выявлено в 2 раза больше положительных результатов, чем в РСК.
Следует отметить, что в сравнительных опытах результаты ИФА показали хорошую корреляцию с данными базовой реакции - РСК, хотя она и не была полной. Расхождения в результатах ИФА и РСК, по-видимому, связаны с разными классами иммуноглобулинов (антител), выявляемых этими реакциями, а также с наличием «неполных» антител в сыворотках крови свиней, которые в РСК не выявляются.
Также, очень важно подчеркнуть, что интенсивность проявления титров антител в серологических тестах напрямую зависела от интенсивности проявления клинических признаков заболевания у животных в неблагополучных хозяйствах, т.е. в
ЛИТЕРАТУРА: 1.Бортничук, В.А. ;
хозяйствах, где течение хламидиоза носило острый характер, процент
серопозитивности животных был значительно выше, чем в хозяйствах с латентной стадией течения хламидийной инфекции. В ряде случаев результаты серологических исследований
подтверждены прямой РИФ другими методами.
Заключение. Результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свинейметодом
иммуноферментного анализа» в условиях научно-исследовательской и
производственных ветеринарных
лабораторий доказали специфичность и высокую активность компонентов разработанной тест-системы, что позволяют рекомендовать её для ретроспективной диагностики хламидиоза свиней. щоз свиней / В.А. Бортничук. - Киев:
«Урожай», 1991. - 191 с.2. Домейка, М.А. Некоторые методические особенности проведения иммуноферментного анализа для изучения хламидиозов КРС / М.А. Домейка, В.П. Ришкявичене, В.И. Люткивячене // Тезисы докладов научно-практической конференции -«Ферментативные препараты в ветеринарии и животноводстве». Каунас, 28-29 сентября 1989. -С. 32-33.3. Евстифеев, В.В. Изучение набора диагностикумов для иммуноферментного анализа при хламидиозе свиней / В.В. Евстифеев, Ф.М. Хусаинов, Л.А. Барбарова // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» - «Ветеринарная биотехнология настоящее и будущее» 20-23 сентября, 2004. - С. 189-191.4. Евстифеев, В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Равилов А.З. Усовершенствование комплементсвязывающего антигена для диагностики хламидиоза животных // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» - «Ветеринарная биотехнология настоящее и будущее» 20-23 сентября, 2004. - С. 187-188.5. Коллинз, У.П. Новые методы иммуноанализа / У.П. Коллинз - Москва: «Мир», 1991. - С. 117-121.6. Хамадеев, Р.Х. Хламидиозы: совершенствование диагностики, мер борьбы и специфической профилактики / Р.Х. Хамадеев, Ф.М. Хусаинов, В.В. Евстифеев, Л.А. Барбарова, А.З. Равилов // Материалы международной научно-практической конференции - «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» Т. I, 2526 сентября, 2003. - С 188-192.7. Хамадеев, Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней: автореф. дис. ... докт. вет. наук: 16.00.03 / ХамадеевРифнурХазиевич - Казань, 1991. - 40 с.8. Щербань, Г.П. Хламидиоз свиней. Хламидиоз сельскохозяйственных животных / Г.П. Щербань. - М.: Колос, 1984. - 54 с.9. Donn, А., Jones G.E., Ruiu A., Ladu M., Machell J., Stancanelli A. Serological diagnosis of chlamydial abortion in sheep and goat: comparison of the complement fixation test and enzyme-linked immunosorbent assay employing solubilised proteins as antigen // Veterinary microbiology an infectional journal 1997. - P. 27-36.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ «НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА СВИНЕЙ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА»
Евстифеев В.В.
Резюме
В статье изложены результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа» в условиях научно-исследовательской и производственных ветеринарных лабораторий. Приведены результаты сравнительных исследований в РСК и ИФА 995 проб сывороток крови свиней из 30 неблагополучных по хламидиозу хозяйств РФ.
Установлено, что компоненты испытанной тест-системы обладают специфичностью, высокой активностью и позволяют эффективно проводить диагностические исследования поголовья свиней на хламидиоз.
TEST RESULTS «A SET OF PRODUCTS FOR THE DIAGNOSIS OF CHLAMYDIAL INFECTION OF PIGS BY ENZYME IMMUNOASSAY»
Evstifeev V.V.
Summary
The article presents the results of the test «A set of products for the diagnosis of chlamydial infection of pigs by enzyme immunoassay» in terms of research and production of veterinary laboratories. The results of comparative studies in the RSK and ELISA 995 blood serum samples of pigs from 30 farms chlamydia disadvantaged by the Russian Federation.
It is established that the components of proven test systems have specificity, high activity and can effectively carry out a diagnostic study of pigs for chlamydia.
