CC BY
39
шиитам мшииш!
Результаты двойного слепого рандомизированного
сравнительного перекрёстного исследования фармакокинетики и фармакодинамики препаратов генно-инженерного инсулина человека
Майоров А. Ю.1, Авдеева О. И.2, Кокшарова Е. О.1, Беликова Т. М.2,
Мишина Е. Е.1, Драй Р. В.2
1 - ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Минздрава России, Москва
2 - ГК «Герофарм», Санкт-Петербург
Резюме. Обоснование. В среднем, из всех мировых расходов на здравоохранение на сахарный диабет приходится около 12 %. Одним из первых отечественных препаратов инсулина человека стал Ринсулин® Р, биосимиляр (биоаналог) препарата Хумулин® Регуляр. В программу клинических исследований биосимиляров препаратов инсулина входят исследования фармакологии: фармакокинетика, фармакодинамика и исследование клинической безопасности. Цель. Оценка биосимилярности препаратов Ринсулин® Р (биосимиляр) и Хумулин® Регуляр (оригинальный) в условиях гиперинсулинемического эуглике-мического клэмпа на здоровых добровольцах. Материалы и методы. Исследование проведено на здоровых добровольцах мужского пола в возрасте от 18 до 50 лет. Дизайн исследования - двойное слепое рандомизированное перекрёстное исследование сравнительной фармакокинетики и фармакодинамики препаратов. Препараты вводили подкожно в переднюю брюшную стенку в дозе 0,3 МЕ/кг однократно. Длительность забора крови для определения фар-макокинетических параметров составила 10 ч: концентрацию инсулина в крови определяли методом иммуноферментного анализа. На основании уровня гликемии корректировали скорость инфузии глюкозы, данные которой использованы для расчёта фармакодинамических параметров. Результаты и обсуждение. Установлено, что исследуемые препараты характеризуются высокой степенью сходства показателей фармакокинетики и фармакодинамики. 90 % доверительные интервалы для отношений средних геометрических значений первичных показателей фармакокинетики AUC¡nsJM и Cinsmax полностью соответствуют допустимым пределам 80-125 % и составляют, соответственно, 88,61-111,52 и 85,41-109,51 %. 95 % доверительные интервалы для отношений средних геометрических значений первичных показателей фармакодинамики AUCGIR0-t и GIRmax полностью соответствуют допустимым пределам 80-125 % и составляют, соответственно, 93,48-112,29 и 95,75-109,17 %. Особую клиническую значимость имеют синхронное начало действий препаратов, время наступления максимального эффекта и продолжительность действия. Частота нежелательных явлений была сопоставима в группах препаратов. Выводы. Препараты Ринсулин® Р и Хумулин® Регуляр являются эквивалентными.
Ключевые слова: инсулин генно-инженерный человеческий; биосимиляр; фармакокинетика; фармакодинамика; гиперинсулинемический эугликемический клэмп
Для цитирования:
Майоров А.Ю., Авдеева О.И., Кокшарова Е.О., Беликова Т.М., Мишина Е.Е., Драй Р.В. Результаты двойного слепого рандомизированного сравнительного перекрёстного исследования фармакокинетики и фармакодинамики препаратов генно-инженерного инсулина человека // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2019. - № 3. - С. 47-55. DOI: 10.24411/2587-7836-2019-10055
Results of a double-blind, randomized, comparative, cross-sectional study of the pharmacokinetics and pharmacodynamics
of genetically engineered human insulin preparations
Mayorov AYu1, Avdeeva OI2, Koksharova EO1, Belikova TM2, Mishina EE1, Dry RB2 1 - FSBI «National Medical Research Center for Endocrinology, Ministry of Health of Russia », Moscow
2 - GEROPHARM, Sankt-Peterburg
Resume. Justification. On average, about 12 % of all global healthcare spending on diabetes. One of the first domestic human insulin preparations was Rinsulin® R, the biosimilar (bioanalog) of Humulin® Regular. The clinical research program for biosimilars of insulin preparations includes pharmacology studies: pharmacokinetics, pharmacodynamics and clinical safety research. Purpose. Evaluation of the biosimilarity of the Rinsulin® R (biosimilar) and Humulin® Regular (original) preparations in the conditions of hyperinsulinemic euglycemic clamp in healthy volunteers. Materials and methods. The study was conducted on healthy male volunteers aged 18 to 50 years. Study design is a double-blind, randomized, cross-sectional study of comparative pharmacokinetics and pharmacodynamics of drugs. The drugs were injected subcutaneously into the anterior abdominal wall at a dose of 0.3 IU / kg once. The duration of blood sampling to determine the pharmacokinetic parameters was 10 hours: the concentration of insulin in the blood was determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Based on the level of glycemia, the glucose infusion rate was adjusted, the data of which were used to calculate the pharmacodynamic parameters. Results and discussion. It was found that the studied drugs are characterized by a high degree of similarity of pharmacokinetics and pharmacodynamics. 90 % confidence intervals for the ratios of the geometric mean values of the primary pharmacokinetics AUCinsJM and Cinsmax fully correspond to the permissible limits of 80-125 % and are, respectively, 88.61-111.52 and 85.411-109,51 %. 95 % confidence intervals for the ratios of the geometric mean values of the primary pharmacodynamics AUCGIR0-t and GIRmax fully correspond to the permissible limits of 80-125 % and are, respectively, 93.48-112.29 and 95.75-109.17 %. Of particular clinical significance are the synchronous onset of action of drugs, the time of onset of the maximum effect and duration of action. The frequency of adverse events was comparable in the drug groups. Conclusions. Rinsulin® R and Humulin® Regular are equivalent.
Keywords: genetic engineering human insulin; biosimilar; pharmacokinetics; pharmacodynamics; hyperinsulinemic euglycemic clamp
For citations:
Mayorov AYu, Avdeeva OI, Koksharova EO, Belikova TM, Mishina EE, Dry RB. Results of a double-blind, randomized, comparative, cross-sectional study of the pharmacokinetics and pharmacodynamics of genetically engineered human insulin preparations. Farmakokinetika i farmakodinamika. 2019;3:47-55. (In Russ). DOI: 10.24411/2588-0519-2019-10055
нише« (»ушшшшда
Введение
Сахарный диабет (СД) представляет собой серьёзнейшую медицинскую и социально-экономическую проблему во всем мире. По данным Международной Диабетической Федерации, в настоящий момент в мире около 425 млн человек страдают СД. К 2045 г. прогнозируется рост числа больных СД до 629 млн [1]. По данным Российского Федерального регистра, больных сахарным диабетом на 1 января 2019 г. зарегистрировано 4,62 млн человек с СД, за начало 2019 г. зафиксировано ещё 78,8 тыс. человек [2]. СД связан с колоссальными экономическими потерями практически во всех странах мира. Согласно исследованиям, в 2010 г. СД нанёс прямой ущерб мировой экономике в размере 376 млрд долларов США. Предполагается, что эта цифра увеличится к 2030 г. до 490 млрд. Косвенные экономические потери также весьма велики. В среднем, из всех мировых расходов на здравоохранение на СД приходится около 12 %. Экономические потери, связанные с СД, составляют в России около 3,12 млрд долларов США в год. К 2030 г. эта сумма может увеличиться до 3,35 млрд [3].
Главным направлением лечения больных с инсу-линозависимым СД является заместительная инсу-линотерапия, поскольку инсулин является наиболее действенным гипогликемическим агентом, применяемым в настоящее время в клинической практике. За время своего существования препараты инсулина прошли эволюцию от природного инсулина, получаемого из поджелудочной железы сельскохозяйственных животных, до рекомбинантных препаратов и аналогов человеческого инсулина, не отличающихся по степени проявления нежелательных явлений от эндогенного инсулина.
Отечественное фармацевтическое производство позволяет увеличить надёжность обеспечения больных препаратами, конкуренцию производителей и, в итоге, повысить доступность препаратов инсулина для людей, страдающих СД.
Препарат Ринсулин® Р, производства ООО «ГЕРОФАРМ» успешно применяется в Российской Федерации с 2004 г. как воспроизведенный (био-симилярный) препарата Хумулин® Регуляр [4]. За время применения не было выявлено случаев отмены или приостановки действия регистрационного удостоверения. В рамках рутинных мероприятий по фармаконадзору также не было выявлено различий между препаратами.
Однако, в связи с изменением нормативных требований [5—12] к программе доказательства биосимиляр-ности препаратов инсулина, были проведены дополнительные сравнительные исследования, в том числе исследование клинической фармакологии. Золотым стандартом исследования клинической фармакологии инсулинов является метод гиперинсулинемического эугликемического клэмпа (ГЭК), рекомендуемый
действующими нормативными стандартами [5, 11, 12]. Использование данного метода позволяет оценить как фармакокинетические (ФК), так и фармакодинами-ческие (ФД) профили инсулинов и сделать вывод о подобии (биосимилярности) сравниваемых препаратов или выявить различия.
Благодаря этому, ГЭК отводят основную роль в программе доказательства биосимилярности [5, 6] как наиболее чувствительному методу сравнения ФК/ФД профилей [13, 14]. При этом полученные данные о сравнительной фармакологии тестируемого препарата (ТП) и препарата сравнения (ПС) могут служить подтверждением и их терапевтической эквивалентности, так как ФД показатель скорость инфузии глюкозы (СИГ) является принятым суррогатным маркером, который прямо измеряет эффект инсулина, заключающийся в утилизации экзогенно вводимой глюкозы [14]. Таким образом, проводить отдельные исследования эффективности при изучении биосимилярности инсулинов не требуется, поскольку конечные точки, изучаемые в этих исследованиях (обычно это НЬА1с), считаются недостаточно чувствительными для выявления потенциальных клинически значимых различий между двумя инсулинами [5, 6, 11, 12].
Цель исследования. Доказательство биосимилярности препаратов Ринсулин® Р, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия) и Хумулин® Регуляр, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл («Лилли Франс», Франция) в условиях ГЭК на здоровых добровольцах.
Материалы и методы
В качестве дизайна исследования было выбрано двойное слепое рандомизированное перекрёстное исследование сравнительной ФК и ФД ТП Ринсулин® Р (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия) и ПС Хумулин® Регуляр («Лилли Франс», Франция).
В соответствии с нормативными рекомендациями [5, 11], исследование было проведено на добровольцах мужского пола в возрасте от 18 до 50 лет (включительно) европеоидной расы, с индексом массы тела 18,5— 27 кг/м2 с верифицированным диагнозом «здоров» по данным стандартных клинических, лабораторных и инструментальных методов обследования. Основными критериями невключения были: эпизоды гипогликемии в анамнезе или наличие в семейном анамнезе случаев верифицированного диагноза СД у ближайших родственников; уровень глюкозы в плазме натощак
> 6,1 ммоль/л; уровень НЬА1С >6 %; пероральный глюкозотолерантный тест — уровень глюкозы в крови
> 7,8 ммоль/л (через 2 ч после нагрузки глюкозой).
Исследование было проведено на базе клинического центра ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Для участия в исследовании были привлечены здоровые
шиитам мшииш!
добровольцы из базы данных добровольцев исследовательского центра.
Длительность исследования для каждого добровольца не превысила 43 дней. Общая продолжительность исследования составила 2,5 мес. (с 19.02.2018 по 04.05.2018 гг.).
Каждый доброволец в данном исследовании прошёл 5 визитов в исследовательский центр.
Визит 1 — скрининг. На данном визите был собран медицинский анамнез, проводили стандартные клинический и биохимический анализы крови, анализ мочи, фи-зикальный осмотр, оценку индекса массы тела, измерение жизненно важных показателей (артериального давления, частоты сердечных сокращений, частоты дыхательных движений, температуры тела). На основании результатов врач-исследователь делал вывод о соответствии добровольца критериям для участия в исследовании.
Визит 2 и 4 — ГЭК. Добровольцев, успешно прошедших скрининг (сокращённый скрининг, см. визит 3), допускали к проведению исследовательских периодов ГЭК. В периоде I ГЭК (Визит 2) проводили рандомизацию добровольцев в одну из двух исследуемых групп; за исключением этого, период I ГЭК (Визит 2) и период II ГЭК (Визит 4) проходили аналогично. Добровольцев накануне проведения ГЭК госпитализировали в клинический центр. Последний приём пищи был не позднее 19.00 с целью обеспечения проведения процедур исследования натощак с периодом голодания не менее 12 ч до инъекции исследуемого препарата (ИП).
Утром перед началом проведения процедур ГЭК проводили обследование в рамках изучения безопасности ИП согласно протоколу (физикальный осмотр, оценка жизненно важных показателей). Также проводили забор крови на ФК и определения базального уровня глюкозы в крови.
Примерно за 60 мин до планируемого введения ИП участники принимали горизонтальное положение, производили подготовку к процедуре ГЭК с постановкой внутривенных катетеров и линий для инфузий в локтевую вену одной руки и вену кисти другой руки. Проводили мониторинг концентрации глюкозы в крови добровольцев. При соответствии уровня глюкозы в крови целевому диапазону (4,4—5,6 ммоль/л) в течение 2 часов до инъекции ИП такого добровольца подвергали процедуре ГЭК. Если уровень глюкозы в крови находился за пределами этих границ, исследователь мог перенести ГЭК для данного участника на другой день.
С целью снижения возможной необъективности исследователя ИП поступал в клинический центр в одинаковых упаковках разослеплённой команде, основной обязанностью которых, помимо прочего, была подготовка ИП перед введением субъекту исследования. Приготовление осуществляли за определённое время до инъекции в соответствии с предоставленными инструкциями. После этого ИП в инсулиновом шприце передавали заслеплённой команде для осуществления инъекции. ИП вводили непосредственно перед ГЭК в
дозе 0,3 МЕ/кг [5, 11, 12] однократно подкожно в область подкожно-жировой клетчатки передней брюшной стенки.
После инъекции ИП начинали контролировать уровень глюкозы в крови. За начало действия ИП принимали снижение уровня глюкозы в крови на величину более 5 % от изначальной величины. После начала действия ИП начинали управляемую инфузию раствора глюкозы для поддержания целевого уровня глюкозы в крови 4,4—5,6 ммоль/л (80—100 мг/дл). Контроль и коррекцию скорости инфузии глюкозы (СИГ) производили каждые 5 мин в течение первых 8 часов, далее до 10 часов — каждые 10 мин.
Визит 3 — сокращённый скрининг. Визит проходил перед II периодом ГЭК (визитом 4), с целью подтверждения соответствия добровольца критериям для продолжения исследования. Проводили процедуры аналогичные визиту 1, кроме сбора медицинского анамнеза и подписания информированного согласия.
Визит 5 — заключительный визит безопасности. На данном визите проводили стандартные клинический и биохимический анализы крови, анализ мочи, физикальный осмотр, оценку индекса массы тела, измерение жизненно важных показателей (артериального давления, частоты сердечных сокращений, частоты дыхательных движений).
Первичными конечными точками в настоящем исследовании являлись ФК показатели ИП: суммарная площадь под кривой (АиС) «концентрация исследуемого инсулина — время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы биоматериала с определяемой концентрации активного вещества (АиС1п8.0_4), максимальная концентрация инсулина в крови за период наблюдения (С1п8шах), и ФД показатели ИП: суммарная площадь под кривой (АиС) «СИГ—время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы биоматериала (АиСожм), максимальная СИГ за период исследования (0!Яшах).
Вторичными конечными точками в настоящем исследовании являлись ФК показатели ИП: АиС1ш0-2; АиС1п8.0-4; АиС1ш.0-6; время достижения максимальной концентрации инсулина — 1^; период полувыведения инсулина — ^/2; а также следующие ФД показатели: АиСожз_2; АиСожз_4; АиСожз_6; время достижения максимальной СИГ — tGIRmax; время между введением ИП и началом инфузии глюкозы — tGIRlag.
Критериями оценки безопасности в настоящем исследовании являлись: частота и тяжесть возникновения нежелательных явлений (НЯ); отклонения от нормы жизненно важных показателей: артериального давления, частоты сердечных сокращений, частоты дыхательных движений, температуры тела; частота возникновения местных реакций в месте инъекции; отклонение от нормы уровня калия в крови; отклонения от нормы лабораторных показателей и ЭКГ.
Анализ результатов проводили на данных, полученных непосредственно после введения ТП и ПС, группы Ринсулин® Р и Хумулин® Регуляр, соответственно.
пишем (»ушшшшда
Каждому добровольцу вводили ТП и ПС (в разные периоды ГЭК). С целью исключения предвзятости и иных факторов, влияющих на получаемые данные, а также формирования однородных групп, добровольцы после прохождения скрининга были рандомизированы в соотношении 1:1. Для создания рандомизационной последовательности использованы стандартные функции программного обеспечения R 3.4.2. Информацию о ран-домизационных номерах передавали в исследовательский центр в запечатанных конвертах. Первая группа получила во время первого периода ТП, а во время второго периода — ПС. Вторая группа наоборот — во время первого периода получила ПС, а во время второго периода — ТП. Очередность периодов была неизвестна для добровольцев и исследователей.
Фармакокинетика. Для получения первичных данных по ФК отбор крови для определения концентрации инсулина в крови производили за —60 и —30 мин, непосредственно до введения ИП и после введения ИП по следующей схеме: первые 3 часа отбор осуществляли каждые 15 мин, затем до конца исследования — каждые 30 мин. Общая продолжительность наблюдения составила 10 ч.
Для подтверждения угнетения выработки собственного инсулина осуществляли отбор образцов плазмы для определения концентрации С-пептида в точках отбора крови для определения концентрации инсулина.
Количественное определение инсулина и С-пептида было проведено в аналитической лаборатории ООО «Квинта-Аналитика Ярославль» методом иммунофер-ментного анализа (ИФА) по заранее валидированной методике. Транспортировка из исследовательского центра была выполнена с соблюдением холодовой цепи не выше -20 оС. Анализ выполнен на автоматическом иммуноферментном анализаторе Personal Lab, производства Adaltis S.r.l., Италия.
Фармакодинамика. Количественное определение уровня глюкозы в крови в период ГЭК производили в образцах цельной венозной крови с помощью от-калиброванных глюкометров StatStrip Glucose and P-Ketone Hospital Meter производства Nova Biomedical, США [15, 16].
До начала процедур исследования каждый доброволец подписал информированное согласие. Исследование было проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации, принципами Надлежащей клинической практики и локальными регуляторными требованиями. Протокол исследования был одобрен Министерством Здравоохранения РФ (разрешение №124 от 19.02.2016), а также независимым этическим комитетом при клиническом центре ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации (выписка протокола № 15 от 28.08.2017).
Принципы расчёта размера выборки. Ввиду того, что первичной целью исследования являлось сравнение
ФК и ФД свойств препаратов Ринсулин® Р и Хумулин® Регуляр у здоровых добровольцев, для расчёта размера выборки были использованы данные по среднему значению и стандартному отклонению первичных ФК показателей АиС1ш04 и С1штах и ФД показателей АиСошм и 01Ятах [17]. Расчёт размера выборки был выполнен для более вариабельного показателя.
Методы статистического анализа данных. Статистическую обработку данных и оформление результатов проводили с помощью пакетов программного обеспечения Я 3.4.2. Площадь под кривой рассчитывали методом трапеций.
Статистический анализ выполнен в предположении о лог-нормальном распределении основных ФК и ФД параметров. Сравнение средних значений параметров для ТП и ПС проводили на основе мультипликативной модели, а доверительные интервалы строили для отношений соответствующих средних геометрических значений.
После проведения логарифмического преобразования исследуемые показатели анализировали с помощью дисперсионного анализа (АЫОУА). Дисперсионный анализ применяли для проверки гипотез о статистической значимости вклада различных факторов (различия между препаратами, различия между испытуемыми, последовательность введения препаратов, периоды исследования) в наблюдаемую вариабельность. Полученная с помощью дисперсионного анализа оценка остаточной вариации использована при расчёте доверительного интервала для отношения средних геометрических значений соответствующего параметра.
Процедура статистического сравнения состояла в вычислении параметрических двусторонних 90 % доверительных интервалов для ФК параметров и 95 % доверительных интервалов для ФД параметров для отношений соответствующих геометрических средних ТП и ПС.
Согласно регламентирующим стандартам, препараты считались эквивалентными, если 90 % доверительные интервалы для геометрических средних, вычисленных для индивидуальных отношений логарифмически преобразованных значений АИС^..^ и С^,.^, и 95 % доверительные интервалы для геометрических средних, вычисленных для индивидуальных отношений логарифмически преобразованных значений АиС01Я0и 01Яшах, находились в пределах 80,00-125,00 % (0,80-1,25) [5,11, 12].
Вторичные ФК параметры (АиС1п8.0_2, АиС1п8.0_4, АИС^-б, 11/2, О и ФД параметры (АиС01М_2, АиС01ИМ, АиСошз_6, Ю1Ятах, ЮЖ^) анализировали с помощью показателей описательной статистики.
Анализ нежелательных явлений проведён в виде описания случаев, а также градации их по степени тяжести и причинно-следственной связи с введением препаратов.
Результаты и их обсуждение
После прохождения скрининга в исследование было включено 20 здоровых добровольцев, соответствующих
критериям включения/невключения. Характеристика добровольцев представлена в табл. 1. Все субъекты закончили исследование в соответствии с протоколом, ни один субъект не исключён из анализа ФК и ФД свойств ИП.
Таблица 1
Демографическая и антропометрическая информация обо всех рандомизированных субъектах (среднее ± стандартное отклонение, п = 20)
Показатель Значения
Возраст (лет) 28,65 ± 5,40
Масса тела (кг) 77,45 ± 9,98
Рост (см) 180,95 ± 7,39
ИМТ (кг/м2) 23,65 ± 2,75
Были рассчитаны показатели, подтверждающие качество ГЭК, основанные на результатах измерения уровня глюкозы в крови в течение ГЭК. Полученные результаты подтверждают удовлетворительное качество проведенных ГЭК (табл. 2).
На рис. 1 и в табл. 3 представлены усреднённые ФК кривые «концентрация—время» ТП и ПС в плазме добровольцев. Отмечена сопоставимость основных ФК характеристик. Так, С1штах составила 155,02 ± 74,34 и 153,74 ± 60,43 мкМЕ/мл, а АиС1ш(М - 605,09 ± 217,82 и 611,99 ± 242,89 (мкМЕ/мл) х ч, соответственно.
Ху U . Г1 и ■ Регуляр Ринсулин®- Р
2S0
-10 1 33-156783 10 Время, ч
Рис. 1. Усреднённые фармакокинетические профили концентрации инсулина в плазме участников после подкожного введения тестируемого препарата Ринсулин® Р и препарата сравнения Хумулин® Регуляр (n = 20)
Точечные оценки индивидуальных отношений AUCins 01 (ТП)/ AUC^ (ПС) составила 99 %, а C^ (ТП)/ C^ (ПС) — 97 %. 90 % доверительные интервалы для геометрических средних отношений составили, соответственно, 88,61-111,52 % и 85,41-109,51 %, что находится в рамках допустимого диапазона (80,00-125,00 %).
Таблица 2
Параметры качества гиперинсулинемического эугликемического клэмпа (среднее ± стандартное отклонение, n = 20)
Параметр Ринсулин® Р Хумулин® Регуляр
CV, % 6,07 ± 0,81 5,98 ± 0,80
Средний уровень удержания глюкозы, ммоль/л 4,99 ± 0,04 4,99 ± 0,05
Отклонение уровня глюкозы от цели, ммоль/л 0,26 ± 0,04 0,25 ± 0,04
Отклонение уровня глюкозы от допустимых границ, ммоль/л 0,0020 ± 0,0070 0,0005 ± 0,0022
Примечания: CV — коэффициент вариации, рассчитан как SD (глюкозы плазмы ммоль/л)/ mean (глюкозы плазмы ммоль/л); отклонение уровня глюкозы от цели, ммоль/л — отклонение уровня глюкозы от целевого уровня 5,6 ммоль/л, рассчитано как mean| 5,6 — xi |, где xi — результат измерения глюкозы плазмы в каждый момент времени; отклонение уровня глюкозы от допустимых границ, ммоль/л — отклонение уровня глюкозы от допустимых границ 5,04—6,16 ммоль/л (5,6 ± 0,56 ммоль/л), рассчитано как li = | 5,04 — xi |, ui = | 6,16 — xi | (расстояние до нижней и верхней границы, соответственно), где xi — результат измерения глюкозы плазмы в каждый момент времени, тогда расчётная величина равна mean (zi, ti).
Фармакокинетические параметры исследуемых препаратов, результаты оценки эквивалентности
Параметры N Ринсулин® Р (Ш)1 N Хумулин® Регуляр (ПС)1 Отношение Ш/ПС [90 % ДИ]2
C , кМЕ/мл îns.max' ' 20 155,02 ± 74,34 20 153,74 ± 60,43 0,97 [85,41; 109,51]
AUCins0_t, (мкМЕ/мл) х ч 20 605,09 ± 217,82 20 611,99 ± 242,89 0,99 [88,61; 111,52]
AUCins.0-2, (мкМЕ/мл) х ч 20 161,78 ± 88,29 20 180,73 ± 89,69
AUCta(M, (мкМЕ/мл) х ч 20 374,38 ± 156,17 20 390,51 ± 162,61
AUCins0_6, (мкМЕ/мл) х ч 20 494,00 ± 184,55 20 519,86 ± 210,28
t , ч max' 20 2,74 ± 1,49 20 2,50 ± 1,57
V ч 20 2,53 ± 3,12 193 1,76 ± 0,72
Примечания: 1 — результаты представлены в виде среднего ± стандартное отклонение; 2 — представлено отношение геометрических средних, для отношения ФК параметров приведен 90 % ДИ; 3 — поскольку для вычисления ^ требуется не менее 3 ненулевых убывающих точек, то для субъектов, у которых отсутствовали таковые, не рассчитывали.
Таблица 3
нише« (»ушшшшда
Эти данные в совокупности с характерами кривых «концентрация — время» свидетельствуют о сопоставимости ФК ИП.
На рис. 2 и в табл. 4 представлены усреднённые ФД кривые «СИГ—время». Зафиксирована сопоставимость параметров действия ТП и ПС у здоровых добровольцев. Так, время между введением ИП и началом инфузии глюкозы (Ю1Я1а8) составило 25,8 ± 12,6 и 27,0 ± 13,2 мин, соответственно. Площади под кривыми
Рис. 2. Усреднённые фармакодинамические кривые «скорость инфузии глюкозы — время» после подкожной инъекции тестируемого препарата Ринсулин® Р и препарата сравнения Хумулин® Регуляр (п = 20)
АиС01Я0-1 составили 53,85 ± 15,98 и 51,98 ± 13,77 (мг/кг) х х 60, а максимальные СИГ С1Ятах 10,11 ± 2,78 и 9,99 ± 3,16 мг/кг/мин, соответственно. Точечные оценки индивидуальных отношений АИС01Я0 4 (ТП)/ АИС01Я0 4 (ПС) и С1Ятах (ТП)/ С1Ятах (ПС) составили 102 % для обоих параметров. 95 % доверительные интервалы для геометрических средних отношений составили, соответственно, 93,48—112,29 % и 95,75—109,17 %, что находится в рамках допустимого диапазона (80,00—125,00 %). Значения коэффициентов внутрииндивидуальной вариабельности ФД параметров АиСШЯ(М и 01Яшах составили, соответственно, 13,86 и 9,89 %. Эти данные в совокупности с характерами кривых «СИГ—время» свидетельствуют о сопоставимости ФД эффектов ИП.
Сводная информация по НЯ представлена в табл. 5. В ходе проведения исследования серьёзных НЯ не наблюдалось. Ни один из испытуемых не прекратил участие в исследовании по причине развития нежелательного явления.
У 2 добровольцев (10 %) в группе ТП было зарегистрировано 2 НЯ: 1 НЯ было определено врачами-исследователями как имеющее возможную связь с введением ИП и 1 НЯ — как вероятную.
У 2 добровольцев (10 %) в группе ПС было зарегистрировано 2 НЯ: 1 НЯ было определено врачами-исследователями как не имеющее связь с введением ИП и 1 НЯ как имеющее вероятную связь.
Частота выявленных нежелательных явлений была одинакова в сравниваемых группах.
Таблица 4
Фармакодинамические параметры исследуемых препаратов, результаты оценки эквивалентности (п = 20)
Показатели Ринсулин® Р (ТП)1 Хумулин® Регуляр (ПС)1 Отношение ТП/ПС [95 % ДИ]2
АиС01Я0-1, мг/кг х 60 53,85 ± 15,98 51,98 ± 13,77 1,02 [93,48; 112,29]
01Яшх, мг/кг/мин 10,11 ± 2,78 9,99 ± 3,16 1,02 [95,75; 109,17]
АиС01Я0.2, мг/кг х 60 7,06 ± 4,28 7,29 ± 4,32
АиС01Я0-4, мг/кг х 60 22,96 ± 9,98 23,12 ± 9,63
АиС01Я0-6, мг/кг х 60 38,63 ± 13,86 38,64 ± 13,08
ч 4,09 ± 1,16 4,09 ± 1,31
Ю1Я1а8, мин 25,8 ± 12,6 27,0 ± 13,2
Примечания: 1 — результаты представлены в виде среднего ± стандартное отклонение; 2 — представлено отношение геометрических средних, для отношения ФД параметров приведен 95 % доверительный интервал (ДИ).
Таблица 5
Нежелательные явления
Ринсулин® Р (п = 20) Хумулин® Регуляр (п = 20)
Количество Степень НЯ Количество Количество Степень НЯ Количество
субъектов (%) случаев субъектов (%) случаев
Лёгкая 2 Лёгкая 2
Нежелательные 2 (10,0) Средняя 0 2 (10,0) Средняя 0
явления Тяжёлая 0 Тяжёлая 0
Всего 2 Всего 2
В настоящем исследовании были зафиксированы следующие виды НЯ:
♦ Связанные с введение ИП:
«Повышение активности КФК» (1 случай у 1 участника в группе ТП);
«Гипербилирубинемия» (2 случая у 2 участников по одному в каждой группе).
♦ Не связанные с введением ИП:
«Геморрагическая анемия» (1 случай у 1 участника
в группе ПС).
Все НЯ были оценены врачами-исследователями как несерьёзные, полностью обратимые, лёгкой степени тяжести. Все НЯ завершились выздоровлением без применения медикаментозной терапии.
Все жизненно важные показатели и показатели, полученные с помощью лабораторных и инструментальных способов исследования, оставались в пределах нормы или вариантов нормы или имели клинически незначимые отклонения (кроме отклонений в рамках НЯ). Уровень ионов калия в крови оставался стабильным в течение исследования. Местных реакций на введение ИП не обнаружено.
В соответствии с регуляторными требованиями [5, 6, 11, 12] статистическая оценка эквивалентности ИП была проведена на основании укладывания 90 % доверительных интервалов отношений первичных ФК конечных точек ТП к ПС и 95 % доверительных интервалов отношений первичных ФД параметров ТП к ПС в заранее определённые границы эквивалентности. Границами эквивалентности служили рекомендованные Европейскими и отечественными требованиями к изучению биоаналогичных (биоподобных) лекарственных препаратов, содержащих рекомбинантный инсулин и аналоги инсулина — 80—125 %. В данном исследовании было выявлено, что доверительные интервалы для логарифмически преобразованных отношений значений параметра С1штах составил 85,41—109,51 %, АиС1ш0(. — 88,61—111,52 %, GIRmax — 95,75—109,17 % и АиС^ — 93,48—112,29 %. Это подтверждает высокое подобие ТП Ринсулин® Р оригинальному препарату.
При выполнении дисперсионного анализа ФК параметров АиС1ш04 и С1п8тах (логарифмически преобразованные данные) установлено, что значимый вклад в наблюдаемую вариабельность данных внесли факторы «Последовательность» (р-уа1ие = 0,00242 и 0,00004, соответственно) и «Субъект» (р-уа1ие < 0,00001), вклад остальных факторов («Период» и «Препарат») был статистически незначимым (р-уа1ие > 0,05). При этом были получены значения остаточной вариации, равные 0,04396 и 0,05137 для АиСЬ8М и С1штах, соответственно, которые в дальнейшем были использованы при расчёте доверительных интервалов для отношений средних значений рассматриваемых параметров.
При выполнении дисперсионного анализа ФД параметров АиСшшм и GIRmax (логарифмически преобразованные данные) установлено, что значимый вклад в наблюдаемую вариабельность данных внес
фактор «Субъект» (р-уа1ие < 0,00001), а для параметра GIRmax также «Последовательность» (р-уа1ие = 0,00908), вклад остальных факторов («Период» и «Препарат», а для параметра АиСстим и «Последовательность») был статистически незначимым (р-уа1ие >0,05). При этом получены значения остаточной вариации, равные 0,01903 и 0,00974, соответственно, для АиСстжм и GIRmax, которые в дальнейшем были использованы при расчёте доверительных интервалов для отношений средних значений рассматриваемых параметров.
Считается, что при относительно коротком промежутке между введениями препаратов и при адекватном периоде «отмывки» (значительно превышает период полувыведения препарата, который для человеческого инсулина составляет несколько минут, а продолжительность действия не более 8 ч), выявляемый статистически значимый фактор «Последовательность» является, скорее всего, как и фактор «Субъект», частью межиндивидуальной вариабельности (случайная рандомизация субъектов в две последовательности), и не влияет на оценку доверительного интервала, основанного на остаточной внутрииндивидуальной вариации, а значит и на вывод о биосимилярности препаратов.
Проанализированные ФК и ФД параметры сравниваемых препаратов были сопоставимы. Особую клиническую значимость имеет синхронное начало действие препаратов, время наступления максимального эффекта и продолжительность действия.
Качество проведённого ГЭК, определённого по степени подавления секреции собственного инсулина и уровню удержания нормогликемии в течение ГЭК, было удовлетворительным и сопоставимым между группами.
Ограничения исследования. При использовании популяции здоровых волонтеров было минимизировано влияние факторов сопутствующих заболеваний на показатели концентрации инсулина и глюкозы в плазме. Тем не менее, полученные данные на однородной выборке без сопутствующих факторов искажения можно экстраполировать на всю популяцию пациентов с СД.
Выводы
На основании проведённого двойного слепого рандомизированного сравнительного перекрестного исследования ФК и ФД препаратов Ринсулин® Р, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия) и Хумулин® Регуляр, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл («Лилли Франс», Франция) с использованием метода гиперинсулинемического эугликемического клэмпа на здоровых добровольцах ТП Ринсулин® Р и ПС Хумулин® Регуляр являются эквивалентными.
Сходность фармакологических (ФК/ФД) характеристик данных типов инсулинов позволяет экстраполировать эффективность референтного препарата Хумулин® Регуляр, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл («Лилли Франс», Франция) на ТП Ринсулин® Р, раствор для инъекций, 100 МЕ/мл (ООО «ГЕРОФАРМ», Россия).
пишем мшмии
Декларация о финансовых и других взаимоотношениях
Все авторы принимали участие в разработке концепции, дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами.
Майоров А.Ю., Кокшарова Е.О., Мишина Е.Е. являются представителями клинического центра, проводившего описываемое клиническое исследование при финансовой поддержке ГК «ГЕРОФАРМ». Драй Р.В., Авдеева О.И., Беликова Т.М. являются сотрудниками ГК «ГЕРОФАРМ».
Выражение признательности.
Авторы выражают признательность сотрудникам аналитической лаборатории ООО «Квинта-Аналитика Ярославль», специалисту по биомедицинской статистике Севастьяновой Юлии Александровне, руководителю проекта Афонькиной Олене Валерьевне, а также редакции журнала «Фармакокинетика и фармакодинамика».
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
Майоров Александр Юрьевич
ORCID ID: 000-0001-5825-3287 SPIN-код: 4275-7779 д. м. н., профессор, зав. отделом прогнозирования и инноваций диабета Института диабета ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Минздрава России
Авдеева Ольга Ильинична Автор, ответственный за переписку
e-mail: olga.avdeeva@geropharm.com ORCID ID: 0000-0002-6759-4283 SPIN-код: 2395-3691 к. фарм. н, медицинский писатель департамента клинических исследований ГК «ГЕРОФАРМ»
Кокшарова Екатерина Олеговна
ORCID ID: 0000-0001-9896-4681 SPIN-код: 335-3438 н. с. лаборатории клэмп-технологий Института диабета ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Минздрава России
Беликова Татьяна Михайловна
ORCID ID: 0000-0002-9865-6387 SPIN-код: 4450-8633
руководитель отдела клинических операций ГК «ГЕРОФАРМ»
Мишина Екатерина Евгеньевна
ORCID ID: 0000-0002-5371-8708 SPIN-код: 2115-7697 н. с. лаборатории клэмп-технологий Института диабета ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр эндокринологии» Минздрава России
Mayorov Alexander
ORCID ID: 000-0001-5825-3287 SPIN-code: 4275-7779
PhD, professor, Head Diabetes Forecasting and Innovation Division, Institute of Diabetes, Federal State Budgetary Institution National Medical Research Center for Endocrinology, Ministry of Health of Russia
Avdeeva Olga Corresponding author
e-mail: olga.avdeeva@geropharm.com ORCID ID: 0000-0002-6759-4283 SPIN-code: 2395-3691
PhD in Pharmaceutical Science, medical writer, Department of Clinical Research, GEROPHARM
Koksharova Ekaterina
ORCID ID: 0000-0001-9896-4681 SPIN-code: 335-3438
researcher, Laboratory of Clamp Technologies, Institute of Diabetes, National Medical Research Center for Endocrinology, Ministry of Health of Russia
Belikova Tatyana
ORCID ID: 0000-0002-9865-6387 SPIN-code: 4450-8633
руководитель отдела клинических операций ГК «ГЕРОФАРМ»
Mishina Ekaterina
ORCID ID: 0000-0002-5371-8708
SPIN-code: 2115-7697
researcher, Laboratory of Clamp Technologies, Institute of Diabetes, National Medical Research Center for Endocrinology, Ministry of Health of Russia
Драй Роман Васильевич Bochkov Pavel
ORCID ID: 0000-0003-4594-6097 ORCID ID: 0000-0003-4594-6097
SPIN-код: 5271-0404 SPIN-code: 5271-0404
к. м. н., директор R&D ГК «ГЕРОФАРМ» к. м. н., директор R&D ГК «ГЕРОФАРМ»
Литература / References
1. Diabetes Atlas. IDF, 2017.
2. Федеральный регистр больных сахарным диабетом. [Federal'nyj registr bol'nyh saharnym diabetom. [Internet] (In Russ).] URL: http:// diaregistry.ru (дата обращения 03.2019).
3. King P, Peacock I, Donnelly R. The UK prospective diabetes study (UKPDS): clinical and therapeutic implications for type 2 diabetes. British journal of clinical pharmacology. 1999;48(5):643—648.
4. Демидов Н.А., Мишра О.А. Эффективность и безопасность использования Ринсулина Р и Ринсулина НПХ в условиях амбулатор-нойпрактики // РМЖ. - 2016. - № 12. - С. 782-785. [Demidov NA, Mishra OA. Effektivnost' i bezopasnost' ispol'zovaniya Rinsulina R i Rinsulina NPH v usloviyahambulatornojpraktiki. RMJ. 2016;12:782-785. (In Russ).]
5. Guideline on non-clinical and clinical development of similar biological medicinal products containing recombinant human insulin and insulin analogues (EMEA/CHMP/BMWP/32775/2005_Rev. 1).
6. Guideline on similar biological medicinal products (CHMP/437/04 Rev. 1).
7. Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: non-clinical and clinical issues (EMEA/CHMP/BMWP/42832/2005 Rev. 1).
8. Guideline on the clinical investigation of the pharmacokinetics of therapeutic proteins (EMEA/CHMP/ 89249/2004).
9. Guideline on the investigation of bioequivalence (CPMP/EWP/ QWP/1401/98).
10. Guideline on Immunogenicity Assessment of Biotechnology-derived Therapeutic Proteins (EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006).
11. Решение № 89 от 3 ноября 2016 года "Об утверждении правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза», глава 15.7 «Доклиническая и клиническая разработка биоаналогичных (биоподобных) лекарствен-
ных препаратов, содержащих рекомбинантный инсулин и аналоги инсулина». [Decision № 89 of Nov 3 2016 "Ob utverzhdenii pravil provedeniya issledovaniy biologicheskikh lekarstvennykh sredstv Evraziyskogo ekonomicheskogo soyuza", glava 15.7 "Doklinicheskaya i klinicheskaya razrabotka bioanalogichnyh (biopodobnyh) lekarstvennyh preparatov, soderzhashchih rekombinantnyj insulin i analogi insulina". (In Russ).]
12. Разработка биоаналогичных (биоподобных) лекарственных препаратов, содержащих в качестве фармацевтической субстванции генно-инженерный инсулин человека или аналоги инсулина человека // Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том IV. - М.: Полиграф-плюс; 2014. [Razrabotka bioanalogichnykh (biopodobnykh) lekarstvennykh preparatov, soderzhashchikh v kachestve farmatsevticheskoy substvantsii genno-inzhenernyy insulin cheloveka ili analogi insulina cheloveka. In: Rukovodstvo po ekspertize lekarstvennykh sredstv. "Vbl. IV. Moscow: Poligraf-plyus; 2014. (In Russ).]
13. Heinemann L, Anderson JH. Measurement of insulin absorption and insulin action. Diabetes Technol Ther. 2004 Oct;6(5):698-718.
DOI: 10.1089/dia.2004.6.698
14. Heise T, Zijlstra E, Nosek L, et al. Euglycaemic glucose clamp: what it can and cannot do, and how to do it. Diabetes Obes Metab. 2016 Oct;18(10):962-972. DOI: 10.1111/dom.12703
15. Rabiee A, Magruder JT, Grant C, et al. Accuracy and reliability of the Nova StatStrip® glucose meter for real-time blood glucose determinations during glucose clamp studies. J Diabetes Sci Technol. 2010 Sep 1 ;4(5): 1195-1201. DOI: 10.1177/193229681000400519
16. Lindquist KA, Chow K, West A, et al. The StatStrip glucose monitor is suitable for use during hyperinsulinemic euglycemic clamps in a pediatric population. Diabetes technology & therapeutics. 2014;16(5):298-302.
17. Heinemann L, Weyer C, Rauhaus M, et al. Variability of the metabolic effect of soluble insulin and the rapid-acting insulin analog insulin aspart. Diabetes Care. 1998;21(11):1910-1914. DOI: 10.2337/diacare.21.11.1910
