CC BY
16
ВОПРОСЫ ОБЩЕЙ И ЧАСТНОЙ ХИРУРГИИ
«Вестник хирургии» • 2014
© Коллектив авторов, 2014 УДК 616.37-002-06:612.112.94
Д. Ю. Семёнов, З. Х. Османов, А. Г. Тоноян, Л. Г. Шапкина, А. В. Соколов, М. В. Горчакова
РЕЗУЛЬТАТЫ ДИНАМИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ МЕЛАТОНИНА В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ ПАНКРЕАТИТОМ НЕТЯЖЁЛОГО И ТЯЖЁЛОГО ТЕЧЕНИЯ
Кафедра общей хирургии с клиникой (зав. — проф. Д. Ю. Семёнов), Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова
Ключевые слова: острый панкреатит, мелатонин, экспрессия рецепторов мелатонина
Введение. Медицинская и социально-экономическая значимость проблемы острого панкреатита обусловлена продолжающимся ростом заболеваемости [7]. Больные с острым панкреатитом (ОП) составляют 10% от общего количества пациентов хирургического профиля. На фоне увеличения числа больных с ОП прослеживается тенденция к возрастанию доли деструктивных форм, что, по данным некоторых авторов, составляет 15-25% госпитализированных пациентов [8]. Стабильно высокий уровень летальности (до 30%) при ОП обусловлен сложным, многоуровневым патогенезом заболевания, при этом некоторые механизмы реализации патологических реакций остаются неясными до настоящего времени [1]. Возможность прогнозирования тяжести течения ОП на самых ранних стадиях приобретает особую важность для своевременного проведения необходимых лечебных мероприятий [2].
Одним из факторов, препятствующих развитию деструкции ткани поджелудочной железы, является мелатонин. В настоящий момент уже доказан рецептор-опосредованный механизм противовоспалительного эффекта мелатонина. В экспериментах на животных было доказано, что при взаимодействии мелатонина с рецепторами II типа запускается каскад биохимических реак-
ций, который за счёт вазодилатации и улучшения кровотока, а также повышения устойчивости клеточной стенки к продуктам перекисного окисления липидов инициирует противовоспалительный механизм в ткани поджелудочной железы [6]. В то же время, имеются данные о том, что воздействие мелатонина на мелатонин! (МТ^-рецепторы приводит к хронизации панкреатита вследствие ухудшения регионарного кровообращения [4].
Различные исходы ОП при сходных начальных проявлениях могут быть патогенетически обусловлены качеством и количеством рецепторов I и II типов (МТ1 и МТ2) к мелатонину, их соотношением и активацией эндогенным мелато-нином, что может стать основой для построения динамического прогноза данного заболевания.
Материал и методы. Проведенным нами клиническим исследованиям предшествовали экспериментальные, при которых выявлялась экспрессия рецепторов мелатонина в лимфоцитах и панкреатоцитах биоптатов поджелудочной железы крыс. Установлено, что у всех животных отмечается равное соотношение МТ-рецепторов в лимфоцитах и панкреатоцитах, что позволило представленную методику изучения экспрессии рецепторов мелатонина в лимфоцитах крови использовать в клиническом исследовании.
В рамках нашего исследования были обследованы 102 пациента с ОП различной степени тяжести. Соотношение мужчин и женщин — 65:37. Средний возраст пациентов — (44,5±3,2) года. Все больные находились на лечении в клинике общей хирургии Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И. П. Павлова и на хирургическом отделении № 1 больницы Св. Георгия в период с 2009 по 2013 г.
Сведения об авторах:
Семёнов Дмитрий Юрьевич (e-mail: semenov_du@mail.ru), Османов Зейнур Худдусович (e-mail: zhosmanov@mail.ru), Тоноян Андраник Гегамович (e-mail: dr_tonoyan@mail.ru), Шапкина Любовь Геннадьевна (e-mail: lyuba-sh@yandex.ru), Соколов Алексей Викторович (e-mail: abiochem@yandex.ru), Горчакова Маргарита Валерьевна (e-mail: rita_gorchakova_@mail.ru), кафедра общей хирургии с клиникой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова, 197022, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6-8
Том 173 • № 1
Экспрессия рецепторов мелатонина
Диагноз ОП ставился на основании данных осмотра больного и результатов динамической клинико-лабораторной и инструментальной диагностики.
Из исследования исключались больные с любым вариантом желчнокаменной болезни, другими поражениями общего желчного протока и большого дуоденального сосочка, так как у таких пациентов ОП мог представлять билиарную форму, которая этиологически и патогенетически отличается от токсикогенной формы заболевания. При оценке полученных в ходе исследования результатов мы придерживались Международной классификации острого панкреатита, принятой в Атланте в 1992 г. [5].
Исследование содержания мембранных рецепторов мелатонина в лимфоцитах выполнялось в динамике: в 1-, 4-е и 7-е сутки с момента поступления больного в хирургический стационар. Кровь получали из кубитальной вены в промежутке времени между 10.00 и 12.00 утра в объёме не менее 1,0 мл. Транспортировка и хранение полученных образцов осуществлялись в герметичных пробирках (вакутейнерах) с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) при температуре не более 4 °С.
Определение содержания рецепторов мелатонина в клетках крови осуществлялось при помощи метода непрямой иммунофлюоресценции. Выделяется фракция лимфоцитов центрифугированием на градиенте плотности, после чего выделенные клетки конъюгируются с антителами первого слоя, а те, в свою очередь, взаимодействуют со «сшитыми» с флюоресцентной меткой антителами второго слоя. Количественный анализ экспрессии интересующих нас маркёров проводился в проточном цитофлюориметре «Beckman Coulter FC 500» [3].
Экспрессия рецепторов мелатонина выражается в процентах от общего количества клеток лимфоцитарной популяции. С целью универсализации проводимой методики в качестве прогностического маркёра выбрано соотношение МТ2/МТ1.
Для сравнительной оценки экспрессии МТ-рецепторов в лимфоцитарных клетках крови людей, не страдающих заболеваниями поджелудочной железы и других органов пищеварительной системы, были обследованы 50 добровольцев из числа жителей Санкт-Петербурга, которые в дальнейшем составили контрольную группу. Все добровольцы на момент исследования были условно здоровы, в течение предшествующего месяца не страдали острыми воспалительными заболеваниями и не имели в анамнезе патологии поджелудочной железы. В качестве скрининга им выполнены все вышеописанные исследования, что и больным с ОП.
Результаты и обсуждение. У больных с острым панкреатитом наблюдается снижение экспрессии МТ1- и МТ2-рецепторов в лимфоцитах крови по сравнению со здоровыми добровольцами (p<0,05). Снижение экспрессии МТ^рецепторов на 24-25% характерно для всех пациентов с ОП. У здоровых добровольцев значения экспрессии МТ1- и МТ2-рецепторов равны (табл. 1).
У больных с ОП тяжёлого течения наблюдается снижение экспрессии МТ2-рецепторов на 40% на фоне общего снижения экспрессии рецепторов мелатонина. У пациентов с ОП нетяжёлого
Таблица 1
Результаты средних значений экспрессии рецепторов мелатонина в лимфоцитах крови (М±т)
Здоровые люди (%) Острый панкреатит
Рецептор Тяжёлое Нетяжёлое
течение (%) течение (%)
МТ1 70,54±4,03 52,77±7,04 53,73±4,63
МТ2 71,84±4,19 42,93±6,88 60,63±7,04
Таблица 2
Результаты средних значений показателя МТ2/МТ1 в лимфоцитах крови в динамике у пациентов с ОП и здоровых добровольцев (М±т)
Сутки от момента поступления Острый панкреатит Здоровые добровольцы (n=50)
Нетяжёлое течение (n=55) Тяжёлое течение (n=47)
1-е 1,09±0,08 0,80±0,16 1,02±0,02
4-е 1,12±0,07 0,79±0,08 -
7-е 1,17±0,09 0,81±0,12 -
течения снижение экспрессии МТ2-рецепторов не столь значимое — на 15,5%. Минимальные значения экспрессии МТ2-рецепторов характерны для больных с ОП тяжёлого течения — 35,6; тогда как максимальные значения составляют 78,3 при ОП нетяжёлого течения.
Для пациентов с ОП тяжёлого течения характерно снижение индекса МТ2/МТ1<1 по сравнению с контрольной группой (р<0,05), причём в динамике этот показатель не претерпевает существенных изменений (р>0,05). Это обусловлено резким снижением экспрессии МТ2-рецепторов у таких больных (табл. 2).
В группе пациентов с нетяжёлым течением ОП отмечается повышение индекса МТ2/МТр1 по сравнению с контрольной группой (р<0,05) за счёт общего снижения экспрессии МТ-рецепторов и незначительного снижения экспрессии МТ2-рецепторов. В динамике этот показатель также существенно не меняется. Средние значения показателя МТ2/МТ1 при ОП нетяжёлого течения составляют 1,13±0,09, а при тяжёлом течении — 0,81±0,09.
Выводы. 1. У пациентов с деструктивными формами ОП отмечается снижение экспрессии МТ2-рецепторов в лимфоцитах крови.
2. Выявлена корреляция индекса МТ2/МТ1 с тяжестью ОП. Данный показатель не меняется в течение первой недели заболевания, что позволяет использовать его в качестве прогностического
Д. Ю. Семёнов и др.
«Вестник хирургии» • 2014
маркёра развития деструктивных форм ОП на момент поступления больного в стационар.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Винник Ю. С., Миллер С. В., Теплякова О. В. Совершенствование дифференциальной диагностики и прогнозирования течения деструктивных форм острого панкреатита // Вестн. хир. 2009. № 6. С. 16-20.
2. Лысенко М. В., Девятов А. С., Урсов С. В. и др. Острый панкреатит: дифференцированная лечебно-диагностическая тактика. М.: Литтерра, 2010. С. 10-11.
3. Aust S., Jäger W., Kirschner H. et al. Pancreatic stellate/myofibro-blast cells express G-protein-coupled melatonin receptor 1 // Wien. Med. Wochenschr. 2008. Vol. 158, № 19-20. P. 575-578.
4. Bradley E. L. The necessity for a clinical classification of acute pancreatitis: the Atlanta system. In: E. L. Bradley (edit.). Acute pancreatitis: diagnosis and therapy. New York: Raven Press, 1994, Vol. 4. P. 27-32.
5. Jaworek J., Konturek J. S., Leja-Szpak A. et al. Role of endogenous melatonin and its MT2 receptor in the modulation of caer-ulin-induced pancreatitis in the rat // J. Physiol. Pharmacol. 2002. Vol. 53. P. 791-804.
6. Mayerle J., Hlouschek V., Lerch M. M. Current management of acute pancreatitis // Nat. Clin. Pract. Gastroenterol. Hepatol. 2005. Vol. 2, № 10. P. 473-483.
7. Pitchumoni C. S., Patel N. M., Shah P. Factors influencing mortality in acute pancreatitis: can we alter them? // J. Clin. Gastroenterol. 2005. Vol. 39, № 9. P. 798-814.
8. (Roit A.) Ройт А., Бростофф Д., Мейл Д. Иммунология: Пер. с англ. М.: Мир, 2000. 582 с.
Поступила в редакцию 20.09.2013 г.
D. Yu. Semyonov, Z. H. Osmanov, A. G. Tonoyan, L. G. Shapkina, A. V. Sokolov, M. V. Gorchakova
RESULTS OF DYNAMIC ASSESSMENT OF MELATONIN RECEPTOR EXPRESSION IN LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH ACUTE MILD AND SEVERE PANCREATITIS
Department of general surgery, clinic of Pavlov First State Medical University, Saint-Petersburg
The authors present results of the investigation of melatonin receptors expression in lymphocytes in dynamics in 102 patients with acute pancreatitis of mild and severe form and in 50 volunteers. A correlated analysis was made between obtained results of laboratory and instrumental researches and clinical course of acute pancreatitis. The decrease of MT1 receptors expression was noted on 25% in patients with acute pancreatitis. The decline of MT2 receptors expression was observed on 40% of patients with acute severe pancreatitis and in a case of acute mild pancreatitis — on 15,5%, respectively. Values of MT1 and MT2 expression were equal between healthy volunteers. The decline of MT2 expression was a prognostic unfavourable sign. Obtained results of dynamic expression assessment of MT-receptors were presented as MT2/MT1 indices. Given index didn't change during disease, because of this, the index could be used as a prognostic development marker of destructive form of acute pancreatitis at the moment of patient's admission to hospital. Mean values of MT2/MT1 were determined for the purpose of universalization of used method (1,13±0,09 for mild form and 0,81±0,09 for severe form of acute pancreatitis, respectively).
Key words: acute panceatitis, melatonin, melatonin receptors expression
