Резистентность штаммов Staphylococcus spp. , изолированных от коз с субклиническим маститом Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Резистентность штаммов Staphylococcus spp., изолированных от коз с субклиническим маститом

И. Бочев, Н. Русенова, Тракийский университет, г. Стара Загора (Болгария)

Ключевые слова: антибиотикорезистентность, коза, стафилококки

Сокращения: ЗИМР - зона ингибиции микробного роста; СКн -коагулазонегативные стафилококки; Скп - коагулазозитивные стафилококки; ШРМ - резистентные к метициллину штаммы; Шчм - чувствительные к метициллину штаммы

Введение

В Болгарии в последние годы козоводство развивается все более интенсивно, чему способствуют благоприятные географические условия и экономические преимущества выращивания этого вида животных по сравнению с овцами и крупным рогатым скотом. Одновременно возрастает значение патологий молочной железы коз, особенно мастита. Чтобы профилактика и этиотропная терапия этих болезней были эффективными, необходимы точный бактериологический диагноз и определение чувствительности выделенных микроорганизмов к различным антимикробным препаратам [3, 5, 16].

Роль стафилококков как возбудителей болезней людей и животных возрастает из-за повсеместного распространения этих бактерий, роста их резистентности и мультирезистент-ности к антимикробным препаратам, а также высокой летальности при вызываемых ими заболеваниях. Первоначально возникла проблема с ШРМ Скп (Staph, aureus), а затем с Шрм Скн [23].

Недавно проведенные исследования выявили повышение этиологической роли Скн при субклинических маститах 113, 15, 18, 20, 21]. ШРМ Скн изолировали от коров и овец с клиническим и субклиническим маститом [9, 12, 19], а также цыплят [14]. Инфекции, вызванные ШРМ стафилококков (в т.ч. Скн), невозможно эффективно лечить [3-лактамовыми антибиотиками [17].

Сообщали об обнаружении ШРМ в Болгарии в мясе и молочных продуктах [2], а также молоке коров с субклиническим маститом [24]. Несмотря на увеличение поголовья коз в нашей стране, исследований по распространению среди них ШРМ ранее не предпринимали.

Цель исследования

Цель работы состояла в проведении бактериологического исследования при субклиническом мастите коз и анализе его результатов с этиологической и этиотронной позиций. Изоляция ШрМ стафилококков — важный этап изучения эпизоотической ситуации и оценки чувствительности этих бактерий к применяемым антимикробным препаратам.

Материалы и методы

Взятие и анализ проб. Провели предварительное обследование в Калифорнийском маститном тесте (Kruuse, Дания) 478 коз 6 стад из юго-восточных районов Болгарии на субклинический мастит. Перед взятием проб молока вымя животных осматривали и пальпировали на наличие патологических изменений. В тех случаях, когда последние отсутствовали, но маститный тест дал положительный результат, у коз асептично брали пробы молока во флаконы объемом 10 мл. Пробы хранили при температуре 4 °С в течение срока, не превышавшего 2 ч. Из них делали посевы на 3 агаровые сре-

ды (содержавшую 5% дефибринпрованной крови овцы, ман-нито-солевую и МакКонки). Посевы инкубировали 24...48 ч в аэробных условиях при 37°С. Наличие на среде более трех колоний одинаковой морфологии считали положительным результатом бактериологического исследования [10].

Идентификационные тесты. Рутинную идентификацию стафилококков осуществляли следующими тестами: ката-лазным (с 3% перекиси водорода), оксидазным и коагулаз-ным (наличие свободного фермента определяли в лиофили-зированной плазме крови кролика). Дополнительно тестировали изоляты на ДНК-азную, уреазную, щелочно-фосфатаз-ную активности, чувствительность к новобиоцину и бацитрацину, тест О/Т по оценке утилизации углеводов. Учитывали также гемолитические свойства стафилококков и пигментацию их колоний.

Определение чувствительности к антимикробным препаратам. Проверяли чувствительность изолятов стафилококков к 13 антимикробным препаратам методом дисков на агаре Мюллер—Хинтона. Штаммы классифицировали в соответствии со «Стандартами на проведение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом дисков» [11 по З-баллыюй системе Бауера—Кирби как чувствительные, имеющие умеренную чувствительность и резистентные.

Тест проводили с дисками из фильтровальной бумаги, имевшими диаметр 6 мм и пропитанными антибиотиками в следующих количествах (в расчете на 1 диск): пенициллином (бмкг), амоксициллином (25 мкг), оксациллином (1мкг), амоксициллином в сочетании с клавулановой кислотой (30 мкг), гентамицином (10 мкг), амикацином (30 мкг), тетрациклином (30 мкг), эритромицином (15 мкг), линкомицином (15 мкг), налидиксовой кислотой (30 мкг), пефлоксацином (5 мкг), энрофлоксацнпом (5 мкг) и новобиоцином (5 мкг).

Резистентные к метициллину/оксациллину изоляты дополнительно высевали на агар Мюллер-Хинтона с 4% №0 и 6 мкг/мл оксациллина с последующей инкубацией при 35°С в течение 24...48 ч.

Анализ резистентности к антимикробным препаратам

Изображение результатов в виде кумулятивных графиков. Кумулятивный процент ЗИМР разного диаметра получали сложением относительного количества изолятов, давших соответствующую и большую по диаметру ЗИМР. При построении графиков кумулятивный процент (ось У) сопоставляли с диаметром ЗИМР. Наклон графика рассчитывали по 6-степениому многочленному приближению экспериментальных данных. Уравнения регрессий и коэффициенты корреляций определяли с помощью тех же программ.

Определение амплитуды диаметра ЗИМР. Как и в случае минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков, этот параметр определяли по разнице наибольшего и наименьшего диаметров ЗИМР соответствующих изолятов.

Определение ЗИМР50 и ЗИМР901. Из точки, в которой теоретически должна прерываться кривая графика 50% ЗИМР, опускают перпендикулярную линию на ось X. Обыч-

1 ЗИМРэд и ЗИМРдо - ЗИМР, которые дали не менее 50% и 90% изолятов соответственно.

но эта точка располагается между значениям]! двух соседних величин ЗИМР. По определению выбирали наименьший диаметр ЗИМР, поскольку не менее 50% выделенных изолятов имели ЗИМР такого или большего диаметра. Аналогично определяли ЗИМР90.

Оценка характера резистености изолятов к антимикробным препаратам. Определяли процент изолятов, проявивших резистентность к каждому и нескольким из тестированных антимикробных препаратов.

Статистический анализ. Методом альтернативного анализа [22] оценивали относительное количество ШРМ и Шчм СКн- Границы доверительных интервалов рассчитывали посредством тригонометрического преобразования уравнения ф = 2arcsin.vp, где р — относительная величина параметра в %. Максимальную ошибку ф (Д) определяли по формуле Д = t/Vn, где t — коэффициент, зависящий от выбранного доверительного уровня (в нашем случае он составлял 0,95, что соответствовало t = 1,98), а п выражало число ШРМ и Шчм СКц. Обе границы доверительных интервалов определяли по формулам ф1 = ф ~ Д и Д2 = ф + Д [22].

Результаты и обсуждение

Из 478 обследованных коз у 160 диагностировали субклинический мастит. В 96 (60%) случаев последнего изолировали стафилококки — 19 (19,8%) из них были Скп (Staph, aureus), а остальные 77 (80,2%) Скн.

Скрининг 96 изолятов на оксациллиновом агаре показал, что 15 (15,6%) из них устойчивы к данному антибиотику. 12 резистентных изолятов были Скн (15,6% всех Ски), а 3 изо-лята оказались СКц (15,8% всех Скп)-

Результаты проверки чувствительности коагулазонега-тпвных ШРМ к антимикробным препаратам приведены в таблице 1. Наибольшее число ШРМ проявило устойчивость к (3-лактамам (75% к пенициллину и 83,3% к амоксициллину), в то время как резистентными к линкомицину, эритромицину и новобиоцину оказались 33,3; 41,7 и 50% ШРМ соответственно. Не обнаружили ШРМ, устойчивых к аминогликозидам и тетрациклинам.

Данные об отношении к антибиотикам Шчм СКц представлены в таблице 2. Из них резистентными к пенициллину признали 49,2%, а к амоксициллину 30,8%.

3 Скп оказались устойчивыми к [5-лактамам, а 1 из них проявил, кроме того, резистентность к макролидам, линкоса-мидам и новобиоцину.

Высокий уровень резистентности к (З-лактамам изолятов

1. Чувствительность к 13 антибактериальным препаратам 12 ШРМ Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом

2. Чувствительность к 13 антибактериальным препаратам 65 Шчм Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом

Антибактери- Чувствительные изоляты Умеренно чувствительные

альные и резистентные изоляты

препараты % доверительный % доверительный

интервал интервал

Пенициллин 25,0 17,5-33,3 75,0 66,8-82,4

Амоксициллин 16,7 10,5-24,1 83,3 76,0-89,5

Оксациллин 0 0 100,0 99,7-100,0

Амоксициллин +

клавулановая 83,3 76,0-89,5 16,7 10,5-24,1

кислота

Гентамицин 100,0 99,7-100,0 0 0

Амикацин 100,0 99,7-100,0 0 0

Тетрациклин 100,0 99,7-100,0 0 0

Линкомицин 66,7 57,9-75,0 33,3 25,1-42,1

Эритромицин 58,3 49,3-67,1 41,7 32,9-50,8

Налидиксовая

кислота 8,3 4,0-14,0 91,7 86,0-86,2

Энрофлоксацин 91,6 85,9-86,1 8,4 4,1-14,1

Пефлоксацин 83,3 76,0-89,5 16,7 10,5-24,1

Новобиоцин 50,0 40,0-59,1 50,0 40,0-59,1

Антибактери- Чувствительные изоляты Умеренно чувствительные

альные и резистентные изоляты

препараты % доверительный интервал % доверительный интервал

Пенициллин 50,8 49,3-52,4 49,2 47,7-50,8

Амоксициллин 69,2 67,8-70,6 30,8 29,4-30,9

Оксациллин 100,0 99,9-100,0 0 0

Амоксициллин +

клавулановая 100,0 99,9-100,0 0 0

кислота

Гентамицин 100,0 99,9-100,0 0 0

Амикацин 100,0 99,9-100,0 0 0

Тетрациклин 76,9 75,6-78,2 23,1 21,8-24,4

Линкомицин 100,0 99,9-100,0 0 0

Эритромицин 98,5 98,1-98,9 1,5 1,2-1,9

Налидиксовая

кислота 10,8 9,9-11,8 89,2 88,2-90,2

Энрофлоксацин 100,0 99,9-100,0 0 0

Пефлоксацин 98,5 98,1-98,9 1,5 1,2-1,9

Новобиоцин 96,6 99,4-99,8 3,4 2,9-4,0

стафилококков обеих групп, вероятно, обусловлен частым применением этих антибиотиков для лечения мастита. К числу механизмов резистентности к этим препаратам относятся синтез альтернативных (имеющих пониженный аффинитет к |3-лактамам) пенициллин-связывающих белков, а также более 200 типов р-лактамаз [11]. У стафилококков отмечают перекрестную устойчивость ко всем пенициллинам и цефалоспоринам |8|.

Шчм Скн реже всего проявляли резистентность к эритромицину (1,5%), пефлоксацину (1,5%) и новобиоцину (3,4%); среди них устойчивых к линкомицину и энрофлок-сацпну изолятов не обнаружили. Обе группы стафилококков не проявляли резистентности к аминогликозидам. К тетрациклину чувствительными оказались все Шчм СКн и 76,9% ШРМ. Причины такого отношения к тетрациклину остаются неясными.

Высокую устойчивость к макролидам и линкомицину Шчм Скн можно объяснить их частым применением в ветеринарии и наличием перекрестной резистентности к этим препаратам.

Редкое проявление устойчивости к фторхинолонам (эн-рофлоксацину и пефлоксацину) у Шчм и ШРМ СКн было, по всей видимости, обусловлено тем, что эти антибиотики не применяют для лечения мастита, и отсутствием плазмидного переноса резистентности к ним.

На рисунках 1, 2 и 3 изображены графики, построенные на основе экспериментальных данных и характеризующие чувствительность стафилококков к пенициллину, амоксициллину и линкомицину. Представлены также кумулятивные кривые чувствительности ШРМ и Шчм СКн к пенициллину (рис. 4), линкомицину (рис. 5), амоксициллину (рис. 6), эритромицину (рис. 7) и новобиоцину (рис. 8). Эти графики демонстрируют связь между величиной ЗИМР (ось X) и кумулятивным процентом (ось V).

Кумулятивный график проявления чувствительности к пенициллину 96 изолятами (рис. 1) показывает, что диаметр ЗИМР колебался от 40 мм (максимальный) до 6 мм (минимальный). Величина ЗИМР50 равнялась 8 мм, а ЗИМР90 — 7 мм. Для амоксициллина значения ЗИМР50 и ЗИМРд0 составили 8 и 7 мм соответственно (рис. 2) при колебании диаметра ЗИМР от 6 до 33 мм. Для линкомицина диаметр ЗИМР варьировал в пределах от 6 до 40 мм при уровнях ЗИМР50 и ЗИМР90, равных 25 и 7 мм соответственно.

На рисунке 4 изображен кумулятивный график чувстви-

37 34 31 28 25 22 19 16 13 Диаметр ЗИМР, мм

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

1

г2= 0,9312

ЗИМР эо

у У ЗИМР50

Рис. 1. Кумулятивный график резистентности к пенициллину штаммов Staphylococcus spp., изолированных из молока коз (-♦-); теоретическая кривая (-). г2 -коэффициент корреляции обоих графиков

100

Рис. 2. Кумулятивный график резистентности к амоксициллину штаммов Staphylococcus spp., изолированных из молока коз (-♦-); теоретическая кривая (-). г2 -коэффициент корреляции обоих графиков

43 39 35 31 27 23 19 15 11 Диаметр ЗИМР, мм

100

90-

80"

70-

л т 60-

ш

ЬО-

с 40-

30-

20-

10-

0-

Л

/

- /

33 31 292725 23 21 19 17 15 13 11 9 7 Диаметр ЗИМР, мм

45

41 37 33 29 25 21 17 13 Диаметр ЗИМР. мм

Рис. 5. Кумулятивный график резистентности к линкомицину Шчм {■+■) и ШРМ (♦) Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом. Стрелкой показана граница между чувствительными и резистентными к пенициллину изолятами

Рис. 6. Кумулятивный график резистентности к амоксициллину Шчм (-»-) и ШРМ (-*-)Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом. Стрелкой показана граница между чувствительными и резистентными к пенициллину изолятами

90-

80"

70-

-0 60-

X

ш 50-

к 40-

30-

> 20-

V

10-

0

100-1

90 -

80-

ov

70-

Л

X m 60-

к 50-

с

>. ? 40-

30-

20-

10-

0 -

Г2= 0,9634

JT ЗИМР50 ЗИМР90

3 32 28 24 20 16 12 Диаметр ЗИМР. мм

Рис. 3. Кумулятивный график резистентности к линкомицину штаммов Staphylococcus spp., изолированных из молока коз (-♦-); теоретическая кривая (-). г2 -коэффициент корреляции обоих графиков

5

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 О

Рис. 4. Кумулятивный график резистентности к пенициллину Шчы (-•-) и ШРМ (-•-) Ск„, изолированных от коз с субклиническим маститом. Стрелкой показана граница между чувствительными и резистентными к пенициллину изолятов

\

Химиотера-

/ / певтическии

пробел

45 41 37 33 29 25 21 17 13 9 Диаметр ЗИМР, мм

Рис. 7. Кумулятивный график резистентности к эритромицину Шчм (-Н и Шрц (-•-) Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом. Стрелкой показана граница между чувствительными и резистентными к пенициллину изолятами

Рис. 8. Кумулятивный график резистентности к новобиоцину Шчм Ж и ШРМ (-•-) Скн, изолированных от коз с субклиническим маститом. Стрелкой показана граница между чувствительными и резистентными к пенициллину изолятами

48 44 40 36 32 28 24 20 16 12 8 Диаметр ЗИМР, мм

43 39 35 31 27 23 19 15 Диаметр ЗИМР, мм

11 7

7

7

тельности ШРМ » Шчм Скн к пенициллину. Расположенная слева кривая характеризует низкую резистентность Шц.м Скн к пенициллину. Диаметр ЗИМР коагулазонега-тпвных стафилококков, проявлявших чувствительность к метициллину, колебался от 6 до 48 мм. ШРМ СКн — от 6 до

45 мм. С помощью построенной теоретической кривой определили, что ЗИМР50 и ЗИМР90 первых составляли 32 и 14 мм соответственно. Для Шчм СКц величина ЗИМР50 равнялась 7 мм, причем диаметр ЗИМР у 50% этих изолятов был равен 6 мм.

На рисунке 5 изображены кумулятивные графики чувствительности ШРМ и Шчм Скн к линкомицину. Кумулятивный график первых располагался левее в зоне максимальной ЗИМР, которая варьировала от 22 до 43 мм, а ЗИМР50 и ЗИМР90 составляли 34 и 31 мм соответственно. Распределение чувствительности к линкомицину изолятов этой группы стафилококков носило мономодальный характер. У Шчм Скн диаметр ЗИМР колебался от 6 (около 50% изолятов) до 37 мм, ЗИМР50 составлял 26 мм.

На рисунке 6 изображены кумулятивные графики чувствительности ШРМ и Шчм Скп к другому (З-лактамовому антибиотику — амоксициллину. У ШЧм и ШРМ Скн диаметр ЗИМР составлял 6...45 и 6...33 мм соответственно. Для первых ЗИМР50и ЗИМР90 были равны 28 и 9 мм соответственно. ЗИМР у более половины Шрм оказалась такой же, как в случае пенициллина — 6 мм.

Кумулятивная кривая чувствительности ШРМ и Шчм СКц к эритромицину представлена на рисунке 7. У Шчм и ШРМ СКн диаметр ЗИМР составлял 20...45 и 9...38 мм соответственно. ЗИМР у более 90% Шчм СКн равнялась 23 мм. ЗИМР50 и 311МРЭ0составили у ШРМ СКн 25 и 12 мм соответственно; на кумулятивном графике этих изолятов имеется плато — химиотерапевтический пробел.

ЗИМР новобиоцином для Шчм и ШРМ СКн (рис.8) составила 13...43 и 6...33 мм соответственно. ЗИМР у более 90% Шцм достигала 21 мм, а у ШРМ величины ЗИМР50и ЗИМР90 равнялись 27 и 11 мм соответственно.

Методом альтернативного анализа выявили статистически значимые различия (р < 0,05) частоты проявления резистентности к пенициллину, амоксициллину и новобиоцину ЧМШ и ШРМ Скн-

Наиболее часто проявлялись следующие варианты муль-тирезистентности: к пенициллину/амоксициллину — 83% ШРМ п 26,2% ШЧм; к пенициллину/амоксициллину/новоби-оцину — 50% ШРМ и 1,5% Шчм; к пенициллину/амоксицил-лину/линкомицину — 50% ШРМ.

К оксациллину резистентность проявили 15% штаммов, что значительно ниже частоты изоляции устойчивых к данному антибиотику стафилококков от овец (24% [9]) и цыплят (25,7% [14]). При исследованиях коров с инфекциями вымени результаты были вариабельными: некоторые авторы вообще не выявили ШРМ стафилококков [7], другим это удалось в 25,7% случаев [24].

Наши исследования показали, что резистентность к мети-циллину среди стафилококков (особенно СКп) встречается относительно редко. Полученные результаты подтверждают мнение о возрастании этиологической роли Скн в заболеваниях человека и животных [4|. Установлено, что субклинический мастит, спровоцированный СКн. приводит к снижению молочной продуктивности овцематок на 37% и массы тела подсосных ягнят на 30% по сравнению со здоровыми животными [251. Кроме того, отмечена роль ШРМ СКн как источника факторов антибиотикорезистентиости для других стафилококков |7]. По мнению упомянутых авторов, коров с инфекциями вымени, вызванными ШРМ или мультирезистент-ными СКц, необходимо подвергать убою.

Среди СКн нами отмечена значительно большая частота проявления устойчивости к ряду антибиотиков (например, р-лактамам, макролидам, линкомицину и новобиоцину) ШРМ по сравнению с ШЧм-

Выводы

В эксперименте от коз с субклиническим маститом чаще удавалось выделять СКн, чем СКп (в 80,2 и 19,8% случаев соответственно).

15,6% изолятов СКн и 15,8% изолятов СКп оказались устойчивыми к метициллину.

ШрМ СКн наиболее часто (почти в 50% случаев) демонст-

рировали резистентность к пенициллину, амоксициллину и налидиксовой кислоте, в то время как ШЧм Скн — только к налидиксовой кислоте.

Мультирезистентность Скн в большинстве случаев (в 83,3% у Шрм 11 в 26,2% у ШЧм) проявлялась одновременной устойчивостью к пенициллину и амоксициллину.

БИБЛИОГРАФИЯ

1. Anonymous. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests - 6,h Ed., NCCLS, 1997, M2-A6, v.17, №.1.

2. BojkovaK., Stefanovl. Isolation of methicillin-resistant Staphylococcus from meat and milk foodstuff. In: 1s1 Balkan Confer of Microbiology. Microbiología Balkanica, Plovdiv, Bulgaria, 1999, October 5-9, p. 138.

3. Burriel A.R. Resistance of coagulasenegative staphylococci isolated from sheep to various antimicrobial agents. Res Vet Sci, 1997, 63, 189-190.

4. Burriel A.R., Scott M. A comparison of methods used in species identification of coagulasenegative staphylococci isolated from the milk of sheep. Vet J, 1998, 155, 183-188.

5. Galabinova Т., Korudzhyiski N., Tzankova S. Minimum inhibitory concentrations of antimicrobial drugs against Staphylococcus epidermidis strains isolated from cows and goats with subclinical mastitis. Vet Med, 1999, 5, 3-4, 173-175.

6. Gentillni E., DenamielG., BetancorA. et al. Antimicrobial susceptibility of coagulase-negative staphylococci isolated from bovine mastitis in Argentina. J Dairy Sci, 2002, 85, 1913-1917.

7. Gentilini E., Denamiel G., Liorente P. et al. Antimicrobial susceptibility of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis in Argentina. J Dairy Sci, 2000, 83, 1224-1227.

8. Chambers H.F. Methicillin-resistant staphylococci. Clin Microb Rev, 1988, 1, 173-186.

9. Corrente M., Greco G., Madio A., Ventriglia G. Methicillin resistance in staphylococci Isolated from subclinical mastitis in sheep. New Microbiology, 2003, 26, 1, 39-45.

10. Deinhofer M., Pernthaner A. Staphylococcus spp. as mastitis-related pathogens in goat milk. Vet Microb, 1995, 43, 161-166.

11. Hawkey P.M. Mechanisms of resistance to antibiotics. Intensive Care Medicine, 2000, 26, 1,9.

12. Honkanen-Buzalski Т., Myllls & S. PyoralaV.. Bovine clinical mastitis due to coagulase-negative staphylococci and their susceptibility to antimicrobials. J Vet Med B, 1994, 41, 344-350.

13. Idrissi A.H., Benkirane A., Zardoune M.. Studies on subclinical mastitis in caprine dairy herds in Morocco. Rüvue d'Elevage et de Müdecine Vütürinaire des Pays Tropicaux, 1994, 47, 3, 285-287.

14. KawanoJ., ShimizuA., SaitohY. et al. Isolation of methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci from chickens. J Clin Microb, 1996, 34, 9, 2072-2077.

15. Maisi P., Riipinen I. Use of California mastitis test, N-acetyl-beta-glucosaminidase and antitrypsin to diagnose caprine subclinical mastitis. J Dairy Res, 1988, 55, 3, 309-314.

16. Malinowski E., KlossowskaA., Kaczmarowskl M. et al. Antimicrobial susceptibility of staphylococci isolated from affected with mastitis cows. Bull Vet Inst Pulawy, 2002, 46, 289-294.

17. Mitov G., Tsanev N., Docheva Y. et al. Microbiology. XRSY-Asen Petrov, Sofia, 2000.

18. Ndegwa E.N., Mulei C.M., Munyua S.J. Prevalence of microorganisms associated with udder infections in dairy goats small-scale farms in Kenya. J S African Vet Ass, 2001, 72, 2, 97-98.

19. OwensW.E., Watts J.L. Antimicrobial susceptibility and betalactamase testing of Staphylococci isolated from dairy herds. J Dairy Sci, 1988, 71, 1939-1943.

20. Poutrel В., Cremoux R., Ducelliez M., Verneau D.. Control of intramammary infections in goats: Impact on somatic cell counts. J Animal Sci, 1997, 75, 2, 566-570.

21. Ryan D P., Greenwood P L. Prevalence of udder bacteria In milk samples from four dairy goat herds. AustrVet J, 1990, 67, 10.

22. Sepetliev D. Medical Statistics. Meditsina i Fizkultura, Sofia, 1980.

23. Tiagunenko J., Sotirova P. Clinical Bacteriology. Znanie, Stara Zagora, 1997, pp. 108-110.

24. Urumova V., Lyutskanov M., Vachkov A. Resistance of Staphylococcus aureus isolated from cattle with subclinical mastitis. Bulg J Vet Med, 2002, 5, 3, 145-152.

25. Watkins G.H., Burriel A.R., JonesJ.E.T. A field investigation of subclinical mastitis in sheep in Southern England. British Vet J, 1991, 147, 413.

SUMMARY

I. Bochev, N. Russenova. Resistance of Staphylococcus spp. strains isolated from goats with subclinical mastitis. Bulg J Vet Med, 2005,8,2,109-118.

160 cases of subclinical mastitis were detected in a study on 478 goats from 6 herds in Southeastern Bulgaria. From positive milk samples, 96 Staphylococcus spp. strains were isolated. Nineteen isolates were determined as Staphylococcus aureus (19,8%), and the other 77 (80,2%) - as coagulase-negative staphylococci. The sensitivity of all strains to 13 chemotherapeutics was tested through the disk diffusion method of Bauer-Kirby. Via the oxacillin agar screening test, 15 strains (15,6%) were determined as methicillin-resistant: out of them 12 isolates or 80% were coagulase-negative (MRCNS) and only 3 isolates (20%) - methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The cumulative curves of resistance were drawn and their profiles were analysed. The patterns of resistance of MRCNS and methicillin-sensitive coagulase-negative staphylococci (MSCNS) were determined. The results showed that the percentage of resistance of MRCNS to A lactams (75% to penicillin, 83,3% to amoxycillin), macrolides (41,7% to erythromycin), lincomycin (33,3%) and novobiocin (50%) was higher compared to the respective percentages in MSCNS.