CC BY
81
© Е. В. шипицына1, Е. А. Степанова 1, А. А. Максимова2, Е. В. Нестерова 3, Т. А. Елисеева 3, О. В. Будиловская 1, И. В. Литвиненко 3, Т. С. Смирнова 3, А. М. Савичева1
РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ШТАММОВ NEISSERIA GONORRHOEAE, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ, К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ
1 Лаборатория микробиологии, ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
2 Кафедра кожных и венерических болезней с клиникой, Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет имени академика
И. П. Павлова, Санкт-Петербург
3 Санкт-Петербургское государственное учреждение здравоохранения «Городской кожно-венерологический диспансер»,
Санкт-Петербург УДК: 616.973-07
■ Целью данного исследования было охарактеризовать чувствительность штаммов Neisseria gonorrhoeae, циркулирующих в Санкт-Петербурге в 2007-2008 годах, к антибактериальным препаратам с использованием Е-тестов и диско-диффузионного метода, а также сравнение этих двух методов. Клинический материал (соскобы эпителия цервикаль-ного канала у женщин и уретры у мужчин) был получен от пациентов СПб ГУЗ «Городской кожно-венерологический диспансер» (ГорКВД). Всего было выделено, размножено и идентифицировано как N. gonorrhoeae 42 изолята. Цефиксим и спектиномицин показали 100 % активность в отношении гонококковой инфекции. Только один из 42 штаммов (2,4 %) проявил промежуточную чувствительность к цефтриаксону, остальные штаммы были к нему чувствительны. Более половины всех штаммов продемонстрировали резистентность или промежуточную чувствительность к пенициллину, тетрациклину и ципрофлоксацину (69, 57 и 55 %, соответственно). Количество штаммов, чувствительных к цефурокси-му, составило 88 % (37 из 42). При сравнении Е-тестов и диско-диффузионного метода было показано значимое согласие лишь в отношении ципрофлоксацина, цефуроксима и цефтриаксона. В отношении пенициллина и тетрациклина были получены значительные расхождения в результатах.
■ Ключевые слова: N. gonorrhoeae; антибиотикочувствительность; Е-тест.
Введение
Гонорея остается одной из самых распространенных инфекций, передаваемых половым путем, в большинстве стран, в том числе и в России. Заболеваемость гонореей в мире составляет около 62 миллионов случаев в год [16]. Зарегистрированное количество случаев гонореи в некоторых Восточно-Европейских странах, таких как Российская Федерация, Республика Беларусь и Прибалтийские страны, начало снижаться почти ежегодно с середины 1990-х годов [12, 14]. Однако говорить о точных цифрах, отражающих реальный уровень заболеваемости в большинстве Восточно-Европейских стран, пока не приходится. Главным образом это обусловлено неоптимальной диагностикой [17] и недостаточно эффективной системой регистрации и эпидемиологического надзора, а также широко распространенным самолечением в связи с легкой доступностью антибактериальных препаратов (АБП) [1].
Применение эффективных, доступных и приемлемых с позиций стоимости и схемы применения АБП — первостепенное условие адекватного контроля над этим заболеванием и предотвращения развития антибиотикорезистентности у N. gonorrhoeae. Для лечения гонореи используются пеницил-лины, цефалоспорины, тетрациклины, макролиды и фторхи-нолоны. Во всем мире, в том числе и в России, продолжается рост резистентности гонококков к антибиотикам, начавшийся с середины 70-х годов XX века. При этом наблюдается как увеличение устойчивости к традиционным, менее дорогим препаратам — пенициллинам и тетрациклинам, так и появление штаммов гонококков, резистентных к новым АБП, таким, как фторхинолоны [8, 25].
Существует тесная корреляция между чувствительностью гонококков in vitro и клинической неэффективностью лечения гонококковой инфекции. В целом считается, что антибиотик не должен использоваться для лечения гонококковой инфекции, если к нему устойчивы более 5 % штаммов гонококков. С целью снижения риска развития антибиотикорезистентности и распространения устойчивых штаммов N. gonorrhoeae
в популяции этих пациентов должны использоваться режимы терапии, эффективность которых приближается к 100 %. В связи с этим глобальные и локальные данные о чувствительности N. gonorrhoeae являются определяющим фактором при выборе АБП [25].
Существует несколько методов определения чувствительности N. gonorrhoeae к антибактериальным препаратам. Количественные методы (метод разведения в агаре и E-тест) позволяют определить минимальную подавляющую концентрацию (МПК) антибиотика, то есть наименьшую концентрацию антибиотика, при которой ингибируется видимый рост микроорганизма. К полуколичественным методам относится диско-диффузионный метод, позволяющий отнести микроорганизм к категории чувствительного или устойчивого на основании диаметра зоны подавления роста. К качественным относятся методы, основанные на выявлении специфических генетических маркеров, кодирующих резистентность к определенным классам антибиотиков, с применением молекулярно-биологических методов. Кроме того, для выявления штаммов, продуцирующих фермент р-лактамазу, разрушающую пе-нициллины, используется тест с нитроцефином (хромогенным цефалоспорином) [2].
Референтным методом определения чувствительности гонококков к АБП является метод серийных разведений в агаре. Принцип его заключается в посеве тестируемых штаммов на чашки с питательной средой, содержащей серийные разведения антибиотиков. Несмотря на то что данный метод является наиболее точным и информативным, его использование в клинических лабораториях сопряжено со значительными методическими трудностями. Прежде всего, речь идет о необходимости использования антибактериальных препаратов с известным уровнем активности, строгого соблюдения режимов хранения, тщательного выполнения контроля качества питательных сред, трудоемкости приготовления рабочих растворов антибиотиков. По этим причинам метод серийных разведений в агаре применяется только в специализированных лабораториях при исследовании большого количества штаммов одновременно, так как в этом случае он является наиболее экономически выгодным [25, 27].
E-тест представляет собой полоску полимера, на которую нанесен градиент концентрации АБП. Подавление роста микроорганизма вокруг полоски E-теста происходит только в той зоне, где концентрация АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при этом образуется каплевидная зона подавления роста. Значения концентрации АБП в каждом участке носителя нанесены на
наружной поверхности E-теста. Этот метод прост в применении и, по мнению многих авторов [10, 15, 27], может использоваться в качестве альтернативы методу серийных разведений в агаре в лабораториях, где тестируется небольшое количество штаммов.
Принцип диско-диффузионного метода (ДДМ) основан на способности антибиотиков диффундировать из пропитанных ими бумажных дисков в питательную среду и угнетать рост микроорганизмов, посеянных на поверхности агара. Результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный). Для определения чувствительности ДДМ следует использовать только стандартизированные качественные диски. ДДМ практичен благодаря низкой стоимости и технически прост для использования. Кроме того, он позволяет тестировать большое количество антибиотиков одновременно. Благодаря этому ДДМ может использоваться в лабораториях с недостаточными ресурсами [9, 25].
Несмотря на большую медицинскую и социальную значимость гонококковой инфекции и наблюдающуюся во всем мире тенденцию к неуклонному росту антибиотикорезистентности гонококков, в России проводились лишь единичные исследования чувствительности N. gonorrhoeae к АБП, и при этом нет никаких данных о чувствительности к АБП штаммов N. gonorrhoeae, циркулирующих в Санкт-Петербурге. Целью данного исследования явилась характеристика чувствительности штаммов N. gonorrhoeae, циркулирующих в Санк-Петербурге в 2007-2008 годах, к антибактериальным препаратам, наиболее часто применяемым для лечения гонококковой инфекции (пенициллин, тетрациклин, ципро-флоксацин, цефуроксим, цефиксим, цефтриаксон и спектиномицин) с помощью Е-тестов и диско-диффузионного метода, а также сравнение этих двух методов.
Материал и методы
Клинический материал
Клинический материал (отделяемое церви-кального канала у женщин и уретры у мужчин) был получен от 48 пациентов ГорКВД и поликлиники ГУ НИИ АГ им. Д. О. Отта РАМН. Среди них было 36 мужчин (средний возраст 29,9 года) и 12 женщин (средний возраст 23,1 года). У всех пациентов были выявлены клинические (выделения, зуд, дизурия) и лабораторные (грамотри-цательные диплококки при микроскопическом исследовании окрашенных по Граму препаратов) признаки гонококковой инфекции.
Материал собирали в транспортную среду Amies Rayon (Deltalab, Испания) и доставляли в лабораторию микробиологии ГУ НИИ АГ им. Д. О. Отта в течение 1-2 часов после взятия.
Культивирование и идентификация N. gonorrhoeae
Культивирование проводилось параллельно на селективной и неселективной питательных средах, приготовленных в лаборатории. Для приготовления питательной среды для выделения гонококков к 36 г основы агара для гонококков GC Agar Base (Difco Laboratories Ltd, США) добавляли 600 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивали, нагревали, часто помешивая, и кипятили 1 мин для полного растворения ингредиентов. Для приготовления раствора гемоглобина к 10 г гемоглобина (BBL, США) добавляли 300 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивали на шейкере в течение 30 мин. Автоклавировали отдельно GC агар-среду и раствор гемоглобина при 121 °C в течение 15 мин, затем охлаждали растворы до 50 °C. Для восстановления питательной добавки к ампуле лиофолизированной питательной добавки IsoVitaleX (BBL, США) асептически добавляли стерильным шприцем прилагаемый растворитель IsoVitaleX (BBL, США) в количестве 10 мл, затем тщательно перемешивали до получения однородного раствора. Соединяли компоненты среды путем добавления к 600 мл GC агар-среды 300 мл раствора гемоглобина, 10 мл восстановленной питательной добавки IsoVitaleX (BBL, США) и 100 мл сыворотки лошади (Биолот, Россия), предварительно нагретой до комнатной температуры. Аккуратно и тщательно перемешивали и разделяли на 2 части, объемом 500 мл каждая. Одну часть (неселективную среду) разливали в стерильных условиях в стерильные чашки Петри диаметром 90 мм по 20 мл. Ко второй части добавляли 5 мл раствора VCNT (HiMedia Laboratories, Индия). Полученную селективную среду разливали в стерильных условиях в стерильные чашки Петри диаметром 90 мм по 20 мл. Чашки со средой помещали в термостат при 36 ± 1 °C на 1 час для удаления конденсата. Готовая среда, разлитая по чашкам, хранилась в холодильнике при температуре 6 ± 2 °C до трех недель в герметично закрытых полиэтиленовых пакетах крышками вниз. Перед проведением посева чашки прогревали в термостате при температуре 36 ± 1 °C в течение 30 минут.
Клинический материал стерильной бактериологической петлей штриховыми движениями наносили на поверхность, равную примерно % площади поверхности среды чашки. Затем с помощью петли материал распределяли по оставшейся поверхности питательной среды штриховыми
движениями в 3-4 разных направлениях с целью создания условий для роста отдельно расположенных колоний гонококков. Засеянные чашки помещали в инкубатор, содержащий 5 ± 2 % CO2, приблизительно 70 % влажности, с температурой 36 ± 1 °С. Чашки просматривали через 18-24 часа, а в случае отсутствия роста — через 48 часов. При отсутствии признаков роста через 72 часа инкубации наблюдение прекращалось.
При выявлении подозрительных колоний первичная идентификация N. gonorrhoeae заключалась в оценке морфологии колоний, выросших на селективной питательной среде, проведении оксидазного теста и микроскопического исследования преператов, окрашенных по Граму. Для окончательной идентификации использовался иммунологический метод коагглютинации.
Для метода коаглютинации в данном исследовании применялся коммерческий набор Phadebact Monoclonal GC Test (Bactus AB, Швеция), в котором используются моноклональные антитела к белку наружной мембраны PorB.
Исследование проводилось в соответствии с инструкцией производителя. Несколько изолированных колоний из 18-24 часовой культуры суспендировали в 0,5 мл физиологического раствора. Далее суспензию кипятили в течение 5 минут на водяной бане, после чего охлаждали до комнатной температуры. Затем на пластину наносили каплю реагента, добавляли каплю микробной суспензии и все это размешивали стерильной одноразовой петлей. Результат оценивали при покачивании пластины в течение 1 минуты. Наличие хлопьев свидетельствовало о положительной реакции, отсутствие — об отрицательной. В качестве отрицательного контроля использовалась культура Escherichia coli.
После окончательной идентификации для сохранения культур гонококков проводили от 3 до 6 пассажей на неселективной среде. Среду для сохранения гонококков готовили в лаборатории путем смешивания 30 г триптиказного соевого бульона (BioMerieux, Франция), 3 г дрожжевого экстракта (Becton Dickinson, США) и 0,5 г агара № 2 (Lab M, Великобритания) с 700 мл дистиллированной воды. Полученную смесь нагревали, часто помешивая, и кипятили 1 мин для полного растворения ингредиентов, затем автоклавировали при 121 °C в течение 15 мин и охлаждали до 50 °C. После охлаждения добавляли 300 мл сыворотки лошади (Биолот, Россия), перемешивали и разливали полученную среду для сохранения гонококков по 1 мл в стерильные пробирки для замораживания. В готовом виде среду хранили в холодильнике при 2-8 °C в течение 1 месяца.
Для сохранения штаммов N. gonorrhoeae 3-5 колоний суточной культуры, выращенной на не-
Таблица 1
Критерии интерпретации результатов определения чувствительности Neisseria gonorrhoeae с использованием Е-тестов в соответствии с инструкцией производителя
Таблица 2
Критерии интерпретации результатов определения чувствительности Neisseria gonorrhoeae: пограничные значения диаметров зон подавления роста (Методические указания МУК 4.2.1890-04)
Антибактериальный препарат МПК, мкг/мл
Р П Ч
Пенициллин > 2 0,12-1 < 0,06
Тетрациклин > 2 0,5-1 < 0,25
Ципрофлоксацин > 1 0,5-1 < 0,06
Цефуроксим — — < 0,5
Цефиксим — — < 0,25
Цефтриаксон — — < 0,25
Спектиномицин > 128 64 < 32
Р — резистентность. П — промежуточная чувствительность. Ч — чувствительность.
Антибактериальный препарат Содержание в диске, мкг Диаметр зон подавления роста, мм
Р П Ч
Пенициллин 10 > 26 27-46 <47
Тетрациклин 30 > 30 31-37 < 38
Ципрофлоксацин 5 > 27 28-40 <41
Цефуроксим 30 > 25 26-30 < 31
Цефиксим 5 — — < 31
Цефтриаксон 30 — — < 35
Р — резистентность. П — промежуточная чувствительность. Ч — чувствительность.
селективной среде, суспендировали в 1 мл среды для сохранения гонококков и помещали в морозильную камеру на -70 °С.
Определение чувствительности N. gonorrhoeae к антибактериальным препаратам с помощью Е-тестов
Процедура проведения исследования состояла из нескольких этапов. Сначала готовили суспензию микроорганизмов, соответствующую плотности 0,5 по стандарту МакФарланда. Для этого несколько (примерно 3-5) изолированных колоний из суточной культуры, выращенной на неселективной питательной среде, суспендировали в 1 мл физиологического раствора и тщательно перемешивали. Если плотность превышала 0,5, добавляли физиологический раствор, а если была меньше, вносили культуру. Исследование проводилось в чашках Петри диаметром 150 мм, содержащих не менее 60 мл питательной среды. Для определения чувствительности гонококков к АБП использовали питательную среду, не содержащую лошадиную сыворотку. Для инокуляции использовали стерильные тампоны из хлопковой ваты на деревянных палочках. Тампон погружали в стандартную суспензию, затем избыток удаляли отжатием тампона о стенки пробирки. Суспензию наносили штриховыми движениями в трех направлениях, поворачивая чашку на 60 °. Следующий этап — нанесение полосок Е-теста (AB Biodisk, Швеция) — проводили через 10-15 минут после инокуляции. Полоски наносились на поверхность агара с помощью стерильного пинцета и укладывались по радиусу чашки. Для того, чтобы полоски плотно прилегали к агару, их аккуратно приглаживали пинцетом в направлении от низкой концентрации к высокой. Сразу после инокуляции чашки помещались в инкубатор, со-
держащий 5 ± 2 % CO2, приблизительно 70 % влажности, с температурой 36 ± 1 °С. Результаты оценивались после 18-24 часов инкубации по МПК каждого тестируемого антибиотика согласно критериям, представленным в таблице 1.
Определение чувствительности N. gonorrhoeae к антибактериальным препаратам с помощью диско-диффузионного метода
Для ДДМ использовались чашки Петри диаметром 90 мм, содержащие не менее 20-25 мл питательной среды. Диски с антибиотиками (НИЦФ, Санкт-Петербург) наносили с помощью стерильного пинцета через 10-15 минут после посева. Расстояние от диска до края чашки и между дисками составляло 15-20 мм. Чтобы диски равномерно контактировали с поверхностью агара, аккуратно прижимали их пинцетом. Сразу после этого чашки помещали в инкубатор, содержащий 5 ± 2 % CO2, приблизительно 70 % влажности, с температурой 36 ± 1 °С. Оценка результатов проводилась через 18-24 часа инкубации. При помощи линейки измерялся диаметр зоны подавления роста микроорганизмов. Результаты интерпретировали согласно критериям, представленным в таблице 2.
Сравнение двух методов тестирования чувствительности N. gonorrhoeae к антибактериальным препаратам
Для сравнения двух методов определения чувствительности гонококков к антибактериальным препаратам — метода Е-тестов и ДДМ — использовалась мера согласия между двумя группами качественных измерений на одних субъектах, или каппа Кохена (к), с поправкой Берта [11]. Для расчета значения к для каждого антибактериального препарата (кроме спектиномицина, для которого использовали только Е-тесты) строили таблицы 2 х 2. Полученные
Таблица 3
Интерпретация меры согласия между двумя методами на основании значения к
Значение к Интерпретация
< 0,00 Плохое
0,00-0,20 Незначительное
0,21-0,40 Удовлетворительное
0,41-0,60 Среднее
0,61-0,80 Значительное
0,81-1,00 Отличное
значения к интерпретировали согласно методике Лэндиса-Коха [18] (табл. 3).
Результаты
Всего было получено 48 клинических изолятов N. gonorrhoeae. Из них 6 изолятов погибли при культивировании. Таким образом, были выделены, размножены и идентифицированы как N. gonorrhoeae 42 изолята — от 11 женщин и 31 мужчины.
Результаты тестирования чувствительности штаммов N. gonorrhoeae к пенициллину, тетрациклину, ципрофлоксацину, цефуроксиму, цефиксиму, цефтриаксону и спектиномицину суммированы в таблице 4. Для спектиномицина использовался только метод Е-тестов по причине отсутствия дисков со спектиномицином у данного производителя (НИЦФ, Санкт-Петербург). Для характеристики чувствительности к АБП N. gonorrhoeae использовали только результаты
Е-тестов (ДДМ использовался с целью его оценки по отношению к стандартизованным, коммерческим Е-тестам).
Цефиксим и спектиномицин показали 100 % активность в отношении гонококков. Один из 42 штаммов N. gonorrhoeae (2,4 %) проявил промежуточную чувствительность к цефтриаксону, остальные штаммы были к нему чувствительны. Более половины всех штаммов продемонстрировали резистентность или промежуточную чувствительность к пенициллину, тетрациклину и ципрофлоксацину. Количество штаммов, чувствительных к цефуроксиму (37 из 42, 88,1 %), значительно превышало количество штаммов, чувствительных к пенициллину, тетрациклину и ципрофлоксацину, однако это число ниже 95 %, поэтому цефуроксим также не должен использоваться для лечения гонококковой инфекции.
Результаты сравнения двух методов определения чувствительности к антибактериальным препаратам представлены в таблице 5. Самое высокое значение к было получено для цефиксима, а самое низкое — для тетрациклина.
Обсуждение результатов
До недавнего времени в России наиболее часто применяемыми препаратами для лечения гонореи были пенициллины, тетрациклин и фторхиноло-ны. Однако в большинстве стран, в том числе и в России, наблюдается высокий уровень резистентности к этим АБП [5, 6, 8, 19, 22, 24]. Сейчас пре-
АБП Количество чувствительных штаммов (%) Количество штаммов с промежуточной чувствительностью (%) Количество резистентных штаммов (%)
Е-тест ДДМ Е-тест ДДМ Е-тест ДДМ
Пенициллин 13 (30,9) 0 27 (64,3) 24 (57,1) 2 (4,8) 18 (42,9)
Тетрациклин 18 (42,9) 0 19 (45,2) 11 (26,2) 5 (11,9) 31 (73,8)
Ципрофлоксацин 19 (45,2) 12 (28,6) 0 7 (16,6) 23 (54,8) 23 (54,8)
Цефуроксим 37 (88,1) 31 (73,8) 1 (2,4) 6 (14,3) 4 (9,5) 5 (11,9)
Цефиксим 25* (100) 41 (97,6) 0 1 (2,4) 0 1 (2,4)
Цефтриаксон 41 (97,6) 39 (92,9) 1 (2,4) 3 (7,1) 0 0
Спектиномицин 42 (100) — 0 — 0 —
* — на чувствительность к цефиксиму с использованием Е-тестов было протестировано 25 штаммов N. gonorrhoeae
Таблица 5
Мера согласия между методом Е-тестов и диско-диффузионным методом
Антибактериальный препарат Значение к Интерпретация
Пенициллин 0,38 Хорошее
Тетрациклин 0,14 Незначительное
Ципрофлоксацин 0,66 Значительное
Цефуроксим 0,62 Значительное
Цефиксим 0,92 Отличное
Цефтриаксон 0,8 Значительное
Таблица 4
Результаты определения чувствительности штаммов Neisseria gonorrhoeae с использованием Е-тестов и диско-диффузионного метода (n=42)
паратами первой линии являются цефалоспорины третьего поколения (цефиксим и цефтриаксон) и спектиномицин. Однако в последнее время все чаще появляются сообщения о снижении чувствительности N. gonorrhoeae и к этим препаратам [5, 19, 22, 26]. Также появляются сообщения о муль-тирезистентных штаммах [21]. В связи с этим постоянный мониторинг устойчивости клинических изолятов N. gonorrhoeae к АБП на национальном, региональном и местном уровнях, исследования по эффективности лечения и обновление рекомендаций по лечению гонореи являются важнейшими элементами эпидемиологического контроля над этим заболеванием.
До недавнего времени в России проводились лишь единичные исследования антибиотикорези-стентности N. gonorrhoeae к антибактериальным препаратам [3, 4, 6, 7]. Недавно были опубликованы результаты исследования, в котором была охарактеризована чувствительность штаммов N. gonorrhoeae (n = 1030), собранных во всех 7 федеральных округах Российской Федерации, к пенициллину, тетрациклину, ципрофлоксацину, цеф-триаксону и спектиномицину методом серийных разведений в агаре [22]. В этом исследовании были показаны значительные различия между округами как в показателях распространенности гонореи, так и в уровне антибиотикорезистентности выделенных штаммов гонококков. Так, в Дальневосточном, Сибирском и Уральском регионах распространенность гонококковой инфекции и устойчивость гонококков к АБП выше, чем в Южном, Волжском и Северо-Западном регионах. Вероятно, это связано с большой протяженностью территорий и ограниченными лабораторными и терапевтическими возможностями в данных округах. К тому же Дальневосточный регион граничит с азиатскими странами, такими как Китай, Япония и Корея, где уровень резистентности N. gonorrhoeae к большинству АБП очень высок [26]. Центральный район также нельзя назвать благополучным, так как, несмотря на гораздо более развитую медицинскую инфраструктуру, он является местом пересечения многих миграционных путей.
В нашем исследовании было показано, что уровень промежуточной чувствительности и резистентности к пенициллину, тетрациклину и ци-профлоксацину в Санкт-Петербурге, так же как и в других регионах России, очень высок. Только один изолят N. gonorrhoeae в нашем исследования проявил помежуточную чувствительность к цеф-триаксону, тогда как все остальные штаммы были к нему чувствительны, что также согласуется с данными по другим регионам России [6] и другим странам [13, 19, 20, 23]. Что касается чувствительности к спектиномицину, в 2005 году промежуточ-
ная чувствительность или резистентность была редкой в Российской Федерации (1,4 %), однако уже в 2006-м данный показатель достиг 7,9 % [22], что может отражать возрастающую резистентность N. gonorrhoeae к этому препарату в мире в связи с его частым использованием. В нашем исследовании все изоляты были чувствительны к спектиномици-ну, однако различия в полученных результатах являются, возможно, отражением методологических различий между двумя исследованиями.
При сравнении Е-те стов и диско-диффузионного метода было показано значимое согласие лишь в отношении ципрофлоксацина, цефуроксима и цеф-триаксона. В отношении пенициллина и тетрациклина были получены значительные расхождения в результатах. Это может быть связано с качеством дисков, а также с недостаточно стандартизованными критериями интерпретации результатов. Поэтому для дальнейших исследований рекомендуется использовать, возможно, более качественные диски других производителей и применять диско-диффузионный метод для тестирования чувствительности гонококков к антибактериальным препаратам только после оценки по отношению к более стандартизованному методу.
Выводы
1. Большинство штаммов N. gonorrhoeae, циркулирующих в Санкт-Петербурге, устойчивы к пенициллину, тетрациклину и ципрофлокса-цину, поэтому они не должны использоваться для лечения гонококковой инфекции.
2. Более 5 % штаммов N. gonorrhoeae резистентны к цефуроксиму, поэтому его также не следует рекомендовать для лечения гонококковой инфекции.
3. Препаратами выбора должны быть цефтриак-сон, спектиномицин и цефиксим, так как практически все штаммы N. gonorrhoeae, циркулирующие в Санкт-Петербурге, чувствительны к этим препаратам.
4. Диско-диффузионный метод может использоваться для тестирования чувствительности гонококков к антибактериальным препаратам только после оценки по отношению к более стандартизованному тесту.
Литература
1. Антибактериальная терапия гонореи в свете последних международных рекомендаций / Кубанова А. А. [и др.] // КМАХ. — 2002. — Т. 4, № 4. — C. 364-378.
2. Определение чувствительности гонококков к антибактериальным препаратам / Сехин С. В. [и др.] // КМАХ. — 2003. — Т. 5, № 2. — C. 175-182.
3. Устойчивость к фторхинолонам среди российских изоля-тов Neisseria gonorrhoeae / Верещагин В. А. [и др.] // Мо-
лекулярная генетика, микробиология и вирусология. — 2005. — № 1. — С. 23-27.
4. Чувствительность клинических штаммов Neisseria gonorrhoeae, циркулирующих в Екатеринбурге и Свердловской области / Кобенко Э. Г. [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. — 2005. — № 4. — С. 41-42.
5. AGSP. Australian Gonococcal Surveillance Programme. Annual report of the Australian Gonococcal Surveillance Programme // Commun. Dis. Intell. — 2006. — Vol. 30. — P. 205-210.
6. Antibiotic susceptibility of Neisseria gonorrhoeae in Arkhangelsk, Russia / Vorobieva V. [et al.] // Sex. Transm. Infect. — 2007. — Vol. 83. — P. 133-135.
7. Antimicrobial resistance of Neisseria gonorrhoeae, and emerging fluoroquinolone resistance in Russia / Zoubkov M. [et al.] // Clin Microbiol Infect. — 2004. — Vol. 10, Suppl. 3. — P. 1592.
8. Antimicrobial susceptibility of Neisseria gonorrhoeae isolated in Jiangsu province, China, with a focus on fluoroquinolone resistance / Wang B. [et al.] // Journal of medical microbiology. — 2006. — Vol. 55. — P. 1251-1255.
9. BalaM., Ray K., Gupta S. M. Comparison of disc diffusion results with minimum inhibitory concentration (MIC) values for antimicrobial susceptibility testing of Neisseria gonorrhoeae // Indian J. Med. Res. — 2005. — Vol. 122. — P. 48-51.
10. Biedenbach D. J., Jones R. N. Comparative assessment of E-test for testing susceptibilities of Neisseria gonorrhoeae to penicillin, tetracycline, ceftriaxone, cefotaxime and cipro-floxacin: investigation using 510 (k) review criteria, recommended by the food and drug administration // J. Clin. Mi-crobiol. — 1996. — Vol. 34, № 12. — P. 3214-3217.
11. Byrt T., Bishop J., Carlin J. B. Bias, prevalence, and kappa // J. Clin. Epidemiol. — Vol. 46. — P. 423-429.
12. CISID. Gonorrhoea - Incidence rate (per 100,000 population). Published by World Health Organization Regional Office for Europe. Available at: Centralized information system for infectious diseases (CISID) // Sexually transmitted infections (STI) URL: [http://data.euro.who.int/cisid] (дата обращения: 22.04.2009).
13. Diversity of penA alterations and subtypes in Neisseria gonorrhoeae strains from Sydney, Australia, that are less susceptible to ceftriaxone / Whiley D. [et al.] // Antimi-crob. Agents Chemother. — 2007. — Vol. 51, № 9. — P. 3111-3116.
14. EpiData / Gonorrhoea. Available at: EpiNorth, A Co-operation Project for Communicable Disease Control in Northern Europe URL: [http://www.epinorth.org] (дата обращения: 22.04.2009).
15. Evaluation of in vitro activity of azithromycin, clarithromycin, and erythromycin tested against strains of Neisseria gonor-rhoeae by reference agar dilution, disk diffusion, and E-test methods / Mehaffey P. C. [et al.] // J. Clin. Microbiol. — 1996. — Vol. 34, № 2. — P. 479-481.
16. Global prevalence and incidence estimates of selected curable STDs / Gerbase A.C. [et al.] // Sex. Transm. Infect. — 1998. — Vol. 74, Suppl. 1. — P. S12-S16.
17. Laboratory diagnosis of Neisseria gonorrhoeae in St. Petersburg, Russia: inventory, performance characteristics and rec-
ommended optimizations / Unemo M. [et al.] // Sex. Transm. Infect. — 2006. — Vol. 82. — P. 41-44.
18. Landis J. R., Koch G. G. The measurement of observer agreement for categorical data // Biometrics. — 1977. — Vol. 33. — P. 159-174.
19. Martin I. M, Hoffmann S., Ison C.A. Europian Surveillance of Sexually Transmitted Infections (ESSTI): the first combined antimicrobial susceptibility data for Neisseria gonorrhoeae in Western Europe // J. Antimicrob. Chemother. — 2006. — Vol. 58. — P. 587-593.
20. Mosaic-like structure of penicillin-binding protein 2 gene (penA) in clinical isolates of Neisseria gonorrhoeae with reduced susceptibility to cefixime / Ameyama S. [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. — 2002. — Vol. 46, № 12. — P. 3744-3749.
21. Multidrug-resistant Neisseria gonorrhoeae with decreased susceptibility to cefixime — Hawaii, 2001 / Wang S. A. [et al.] // CID. — 2003. — Vol. 37. — P. 849-852.
22. National surveillance of antimicrobial susceptibility in Neisseria gonorrhoeae in 2005-2006 and recommendation of first-line antimicrobials for gonorrhoea treatment in Russia / Kubanova A. [et al.] // Sex. Transm. Infect. — 2008. — Vol. 84. — N 4. — P.285-289.
23. Neisseria gonorrhoeae isolates with reduced susceptibility to ce-fixime and ceftriaxone: association with genetic polymorphisms in penA, mtrR, porB1b, and ponA / Lindberg R. [et al.] // Antimicrob. Agents Chemother. — 2007. — Vol. 51, № 6. — P. 2117-222.
24. Tapsall J. Antibiotic resistance in Neisseria gonorrhoeae // CID. — 2005. — Vol. 41, Suppl. 4. — P. S263-268.
25. Tapsall J. Antimicrobial resistance in Neisseria gonorrhoeae // World Health Organization: report. — Geneva: WHO, 2001.
26. Tapsall J. The WHO Western Pacific Gonococcal Antimicrobial Surveillance Programme. Surveillance of antibiotic resistance in Neisseria gonorrhoeae in the WHO Western Pacific Region, 2005 // Commun Dis Intell. — 2006. — Vol. 30. — P. 430-433.
27. VanDyckE, Smet H.,PiotP. Comparison of E-test with agar dilution for antimicrobial susceptibility testing of Neisseria gonorrhoeae // J. Clin. Microbiol. — 1994. — Vol. 32, № 6. — P. 1586-1588.
Статья представлена Э. К. Айламазяном, ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта,
Санкт-Петербург
ANTIMICROBIAL RESISTANCE
OF NEiSSERiA GONORRHOEAE STRAINS CIRCULATING IN ST. PETERSBURG
Shipitsyna E. V., Stepanova E. A., Maximova A. A., Nesterova E. V., Eliseeva T. A., Budilovskaya O. V., Litvinenko I. V., Smirnova T. S., Savicheva A. M.
■ Summary: The aim of the study was to characterize the antibiotic susceptibility of Neisseria gonorrhoeae strains isolated in St. Petersburg in 2007-2008 to antimicrobials using E-test and disc diffusion method, as well as to compare these two methods. Clinical materials (cervical swabs from women and urethral swabs from men) were obtained from patients of the City Dermato-venerological Dispen-
34
ОРЕШ^т^т иccлEД0ВAHия
sary. In total, 42 strains of N. gonorrhoeae were isolated, propagated and identified. Cefixime and spectinomycin showed 100 % activity against gonococcal infection. Only one out of 42 strains (2,4 %) showed intermediate susceptibility to ceftriaxone, while the other strains were susceptible. More than half of the strains displayed resistance or intermediate susceptibility to penicillin, tetracycline and cip-rofloxacin (69 %, 57 % and 55 %, respectively). The amount of strains
■ Адреса авторов для переписки-
Шипицына Елена Васильевна — к. б. н., старший научный сотрудник лаборатории микробиологии.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: [email protected]
Степанова Елена Алексеевна — студентка Санкт-Петербургского государственного университета.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: [email protected]
Будиловская Ольга Викторовна — научный сотрудник лаборатории микробиологии.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: [email protected]
Савичева Алевтина Михайловна — заведующая лабораторией микробиологии, д. м. н., профессор. ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: [email protected]
Максимова Анна Александровна — аспирант кафедры кожных и венерических болезней с клиникой.
Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова. 197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6-8. E-mail: [email protected]
Нестерова Елена Викторовна — врач-бактериолог. Санкт-Петербургское государственное учреждение здравоохранения «Городской кожно-венерологический диспансер». 192102, Санкт-Петербург, наб. реки Волковки, д. 3. E-mail: [email protected]
Елисеева Татьяна Андреевна — врач-бактериолог. Санкт-Петербургское государственное учреждение здравоохранения «Городской кожно-венерологический диспансер». 192102, Санкт-Петербург, наб. реки Волковки, д. 3. E-mail: [email protected]
Литвиненко Ирина Викторовна — заведующая клинико-диагностической лабораторией.
Санкт-Петербургское государственное учреждение здравоохранения «Городской кожно-венерологический диспансер». 192102, Санкт-Петербург, наб. реки Волковки, д. 3. E-mail: [email protected]
Смирнова Татьяна Сергеевна — главный врач, к. б. н. СПбГУЗ«Городской кожно-венерологический диспансер». 192102, Санкт-Петербург, наб. реки Волковки, д. 3. E-mail: [email protected]
susceptible to cefuroxime was 88 % (37 of 42). Comparison of E-test and disk diffusion method results showed significant agreement for ciprofloxacin, cefuroxime and ceftriaxone, whereas significant discrepancy was observed regarding penicillin and tetracycline.
■ Key words: N. gonorrhoeae; Russia; antibiotic susceptibility; E-test.
Shipitsyna Elena Vasilyevna — PhD, senior researcher of the microbiology laboratory.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: [email protected]
Stepanova Elena Alekseyevna — student of St. Petersburg State University.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: [email protected]
Budilovskaya Olga Victorovna — researcher of the microbiology laboratory.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: [email protected]
Savicheva Alevtina Mikhaylovna — head of the microbiology laboratory, MD, professor.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: [email protected]
Maximova Anna Aleksandrovna — resident of the department of skin and venereal diseases.
St. Petersburg State Medical University. 197022, St. Petersburg, 6-8 Lev Tolstoy St. E-mail: [email protected]
Nesterova Elena Victorovna — bacteriologist. City Dermato-venerological Dispensary, St. Petersburg, Russia. 192102, St. Petersburg, nab. Volkovki, 3. E-mail: [email protected]
Eliseeva TatyanaAndreyevna — bacteriologist. City Dermato-venerological Dispensary, St. Petersburg, Russia. 192102, St. Petersburg, nab. Volkovki, 3. E-mail: [email protected]
Litvinenko Irina Victorovna — head of the clinical diagnostics laboratory. City Dermato-venerological Dispensary, St. Petersburg, Russia. 192102, St. Petersburg, nab. Volkovki, 3. E-mail: [email protected]
Smirnova Tatyana Sergeyevna — head physician, PhD. City Dermato-venerological Dispensary, St. Petersburg, Russia. 192102, St. Petersburg, nab. Volkovki, 3. E-mail: [email protected]
