CC BY
24
УДК 618.14-002:615.32
РЕЦЕПЦИЯ ЭНДОМЕТРИЯ И НЕКОТОРЫЕ ИММУНО-ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЭНДОМЕТРИТЕ НА ФОНЕ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСТРАКТОМ ОРТИЛИИ ОДНОБОКОЙ
Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул Скоропацкая О.А., Фадеева Н.И., Яворская С.Д., Таранина Т.С.
Моноцентровое, проспективное исследование в группе пациенток (п=20) с хроническим эндометритом, которые на этапе реабилитации получали экстракт ортилии однобокой 2,5 мг/сутки в течение двух менструальных циклов. При оценке результатов терапии установлено значимое увеличение эстриола сыворотки крови, активация гуморального противовирусного иммунитета, восстановление структуры эндометрия, и восстановление рецепторного аппарата эндометрия к половым стероидам. Полученные результаты совпадают с результатами, ранее установленными в эксперименте. Ключевые слова: ортилия однобокая, хронический эндометрит, фитотерапия, реабилитационный этап.
Monocentric, prospective study in the group of female patients (p=20) with chronic endometritis, who received the extract of ortilia secunda at the stage of rehabilitation 2,5 mg/day during two menstrual periods. According to the therapy results there was stated a significant increase of estriol in the blood serum, activation of humoral antiviral immunity, restoration of endometrium structure and receptor apparatus of endometrium to sex steroids. The obtained results correspond to the results of the earlier experiment. Key words: ortilia secunda, chronic endometritis, phytotherapy, rehabilitation stage.
Хронический эндометрит остается актуальной проблемой современной гинекологии, так как нередко после этиотропной терапии остаются нарушения микроциркуляции в эндометрии, снижение чувствительности рецепции к стероидным гормонам, неполноценность местного иммунитета [1]. Предлагаются разные методы прегравидарной подготовки при хроническом эндометрите, направленные на устранение вышеперечисленных нарушений. Наиболее часто используются неспецифические иммуномодуляторы, гормонотерапия, ряд пре-формированных факторов [2].
Экспериментально доказаны противовоспалительные, антикоагулянтные и иммуномоду-лирующие свойства сухого экстракта ортилии однобокой [3]. Также подтверждена антимикробная активность отвара листьев ортилии однобокой в отношении энтеробактерий, псевдомонад, стафиллококков, грибов рода Кандида [4]. Нами ранее был проведен эксперимент на 90 белых беспородных крысах, подтвердивший эффективность экстракта ортилии однобокой в быстром восстановлении нормальной структуры эндометрия после экспериментального эндометрита [5]. При гистологическом исследовании эндометрия секреторные изменения установлены у крыс, которые с целью лечения экспериментального эндометрита получали экстракт ортилии однобокой. У ин-тактных крыс такие изменения не установлены. Полученные данные позволили предположить,
что экстракт ортилии однобокой обладает не только противовоспалительными свойствами, но и способствует нормализации рецептор-ного аппарата эндометрия. Полученные в эксперименте результаты явились поводом для дальнейшего исследования - оценки эффективности перорального применения экстракта ор-тилии однобокой у пациенток с хроническим эндометритом.
Материалы и методы
Наше исследование проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
В исследование были включены 20 пациенток в возрасте 30-35 лет, с эхоскопически и гистологически верифицированным хроническим эндометритом. Критериями включения были: верифицированный хронический эндометрит как показание к прегравидарной подготовке. Критериями исключения - прочие органические заболевания гениталий, ановуляции, субкомпенсированные и декомпенсирпован-ные соматические заболевания; возраст пациентки более 35 лет. Всем пациенткам на этапе реабилитации после этиотропного лечения эндометрита был назначен экстракт ортилии
однобокой 2,5 мг/сутки в течение двух менструальных циклов. Используемый в эксперименте экстракт ортилии однобокой был получен на базе лаборатории по изучению и использованию природных ресурсов НИЦФМ Алтайского государственного медицинского университета методом вакуумно-импульсной экстракции. Данная методика экстракции позволяет получать высокоочищенные и высококонцентрированные экстракты трав [6].
Всем пациенткам до и после приема экстракта ортилии однобокой на 21-25-й день менструального цикла наряду со стандартными исследованиями (клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи, бактериоскопия и ПЦР-диагностика отделяемого цервикаль-ного канала) в сыворотке крови были определены эстрадиол, эстриол, прогестерон, ДГЭС, тестостерон, 17-ОПК и кортизол, оценка интер-феронового статуса крови (альфа- и гамма-ин-терфероны) [7]. Пайпель-биопсия эндометрия проводилась на 5-7-й день цикла с последующим гистологическим и гистохимическим исследованиями биоптата. Иммуногистохи-мическое определение характера воспаления проводилось по методу Е.А. Михниной и соавторами [8]. По предлагаемому способу количество клеток СО 56+, СО 16+, ^А DR(П)+ от 0 до 10 в поле зрения характерно для здоровых людей. При повышении только СО 56+ (выше 10) диагностируют аутоиммунный хронический эндометрит. При повышении только СО 16+ и HLA-DR(П)+ (выше 10) - хронический эндометрит с обострением или острый эндометрит. При повышении всех показателей диагностируется хронический эндометрит, вне обострения. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование гормональных рецепторов эндометрия (а-эстрогеновых - ЭР и прогестероновых - ПР)
проводилось с использованием моноклональ-ных антител к а-ЭР (клон SP1, разведение 1:200, Epitomics, США), ПР (клон YR85, разведение 1:350, Epitomics, США). Интенсивность ИГХ-ре-акции ЭР и ПР оценивали по методу гистологического счета «quickscore»: АхВ, где А - процент позитивно окрашенных клеток (подсчет не менее чем 1000 клеток в 10 полях зрения) [9].
Статистический анализ полученных результатов проведен с помощью программы для статистической обработки Statistic 10. Достоверными считались значения р менее 0,05. Для оценки типа распределения признаков использовали критерий Шапиро-Уилка в случае малых выборок, в случае больших выборок использовали критерий Колмогорова-Смирнова. Значения интервальных величин, подчиняющихся нормальному распределению, представлены в виде M±m, где M - выборочное среднее арифметическое и m - стандартная ошибка среднего. Значения качественных признаков представлены в виде наблюдаемых частот и процентов. В случаях нормального распределения, а также равенства выборочных дисперсий для сравнения выборок использовали t-критерий Стьюдента.
Результаты исследования
При оценке гормонального профиля пациенток с хронических эндометритом установлено, что уровни всех исследуемых гормонов до и после терапии экстрактом ортилии однобокой были в пределах возрастных норм. Однако после курса терапии произошло значимое увеличение средних уровней эстрадиола, наметилась тенденция к росту среднего уровня эстриола, прогестерона и кортизола (табл. 1), что можно расценить как усиление активности яичников под влиянием терапии экстрактом ортилии однобокой.
Таблица 1
Динамика средних уровней некоторых гормонов в крови, взятой на 21-23-й день цикла у пациенток с
хроническим эндометритом
Уровень гормонов до лечения Уровень гормонов после лечения Р Референсные значения на 21-23 день цикла
Эстрадиол, пг/мл 152,78±7,34 209,22±10,43 р =0,004 48,3 -211
Кортизол, мкг/дл 2,79±0,53 3,80±0,26 р =0,25 6,2-19,9
Эстриол, нмоль/л 0,8±0,35 1,26±0,31 р =0,004 0 - 1,4
Прогестерон, нмоль/л 5,47±2,62 7,01± 1,89 р =0,17 0,5-9,4
17-ОНП, нмоль/л 5,96 ± 0,32 5,67±0,33 р =0,98 1,0 - 11,5
АКТГ, пг/мл 38,44±22,8 37,66±21,29 р =0,94 0 - 46
ДГЭАС, мкг/дл 295,5± 26,3 302,2±24,8 р =0,95 98,8-340
Общий тестостерон, нмоль/л 0,32±0,03 0,36±0,02 р =0,99 0,45 - 3,75
При гистохимическом исследовании эндометрия до терапии выявлено повышение CD20+, CD138+, естественных киллеров (CD56+, CD16+) и лимфоцитов, экспрессирующих маркер активации комплекса гистосовместимости HLA-DR+II класса, что характерно для хронического эндометрита, вне обострения [4]. Высокий уровень лимфоцитов CD56+ (от 25 до 60), выявленный в 30% случаев, - маркер выраженного аутоиммунного характера хронического эндометрита [4].
После курса терапии произошло снижение частоты выявления в эндометрии повышенной лейкоцитарной активности: СО 20+ (100% и 15%, р=0,0001 ); СО138+ (100% и 30%, р>0,0002); СО 56+ (100% и 20% р>0,0015); СО 16+ (100% и 20% р>0,0015); HLA-DRП+ (100% и 30%, р>0,0002) в сочетании со снижением среднего значения уровня активированных лейкоцитов: СО 20+ (11,15±1,2 и 3,0±1,2 р=0,0002 ); СО138+ (16,44±3,4 и 1,55±0,2, р>0,0025; СО 56+ (26,88 ±3,6 и 9,55±0,32, р=0,015); СО 16+ (17,3±2,43 и 9,11±0,18, р=0,009); HLA-DRП+ (19,55±4,23; 9,88±2,3; р=0,006).
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование гормональных рецепторов эндометрия (а-эстрогеновых - ЭР и прогестероновых - ПР) в динамике позволило установить, что по завершении терапии экстрактом ортилии однобокой у всех пациенток средний уровень эстрогеновой рецепции эндометрия значимо увеличился, как в клетках стромы (22,22±2,3 и 44,88±2,6 р=0,00003), так и в железах (20,22±4,2 и 41±2,2, р=0,00003). Кроме того, значимо увеличился средний уровень прогестероновой рецепции эндометрия в клетках стромы (32,55±4,3 и 48,77±4,3, р=0,008) и в железах (32,66±2,2 и 48,44±2,2, р=0,02).
При оценке уровня альфа- и гамма-интерфе-ронов в гепаринизированной крови на 21-23-й день цикла исходная недостаточность первой степени альфа-интерферона выявлена в 20% случаев, тогда как при завершении терапии частота ее выявления возросла до 40% случаев (р=0,08), что сопровождалось снижением среднего уровня изучаемых показателей в крови (849,55±120 и 646±120 Ед/мл; р=0,06).
Недостаточность гамма-интерферона первой степени исходно определена в 90% случаев, что может быть сопряжено с недостаточным противовирусным иммунитетом [1]. По завершении терапии недостаточность выявлена только в 10% случаев (р=0,0001), отмечена общая тенденция к повышению среднего уровня гам-ма-интерферонов (104,44± 6 и 193,55± 4 Ед/мл, р= 0,0001), что можно расценить как восстановление противовирусной и антипролиферативной активности [1, 2].
При гистологическом исследовании пай-пель-биоптатов эндометрия, на 5-7-й день цикла, во всех случаях обнаружены воспалительные инфильтраты: диффузные - в 40% и очаго-
вые - в 60% случаев. По завершении терапии у всех пациенток отмечено улучшение гистологической картины в виде снижения частоты лейкоцитарной инфильтрации, представленной только диффузной формой (100% и 20%; р=0,00001). Очаговый фиброз, выявленный исходно в 50% случаев, сохранился после терапии только в 20% случаев, в сочетании с диффузным лейкоцитарным инфильтратом. У каждой второй пациентки по завершении курса терапии гистологических маркеров хронического эндометрита не установлено.
Таким образом, двухмесячный курс терапии хронического эндометрита экстрактом ортилии однобокой в дозе 2,5 мг/сутки позволил значимо увеличить средний уровень эстра-диола в сыворотке крови и средний уровень эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в эндометрии; активировать гуморальный противовирусный иммунитет, за счет снижения частоты гамма-интерфероновой недостаточности и повышения среднего уровня гамма-ин-терферонов крови; повысить частоту нормального значения активированных лейкоцитов CD 20+, CD138+, CD 56+, CD 16+, HLA-DRII+; устранить очаговые лейкоцитарные инфильтраты и уменьшить диффузные лейкоцитарные инфильтраты при сохранении очагового фиброза.
Список литературы:
1. Amir W., Micha B., Ariel H., Liat L.G.,
Jehoshua D., Adrian S. Predicting factors for endometrial thickness during treatment with assisted reproductive technology. Fertil Steril. 2007; 87(4): 799-804.
2. Ломбоева С. С., Оленников Д.Н., Танха-ева Л.М. Фармакогностическое исследование надземной части Ортилии Однобокой (Ortilia secunda (L.) House). Химия растительного сырья. 2010; 1:109- 114.
3. Carson D. D., Bagchi I., Dey S. K., Enders A. C., Fazleabas A. T., Lessey B. A., Yoshinaga K. Embryo implantation. Developmental biology. 2000; 223 (2): 217- 237.
4. Feinen B., Jerse A. E., Gaffen S. L., Russell M. W. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal immunology. 2010; 3(3): 312- 321.
5. Iwasaki A. Antiviral immune responses in the genital tract: clues for vaccines. Nature reviews. Immunology. 2010; 10(10): 699- 711.
6. Janeway C. A. The immune system evolved to discriminate infectious nonself from noninfectious self. Immunology today. 1992; 13(1): 11- 16.
7. Lieberman J. The ABCs of granule-mediated cytotoxicity: new weapons in the arsenal. Nature reviews. Immunology. 2003; 3(5): 361- 370.
8. Михнина Е. А., Давыдова Н. И., Калинина Н. М., Эллиниди В. Н. Гормональные и иммунологические нарушения в формировании патологии эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом. Журнал акушерства и женских болезней. 2006; 4(4): С. 1-14
9. Lopes R.G., Baracat E.C., L.C. de Albuquerque Neto, Ramos J.F., Yatabe S., Depesr D.B., Lippi U.G., Minim J. Analysis of estrogen- and progesterone-receptor expression in endometrial polyps. Invasive Gynecol. 2007; 14(3): 300-303.
10. Mor G., Cardenas I. The immune system in pregnancy: a unique complexity. American journal of reproductive immunology. 2010; 63(6): 425-433.
Контактные данные
Автор, ответственный за переписку: Скоро-пацкая Ольга Алексеевна, аспирант кафедры акушерства и гинекологии Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул.
656038, г. Барнаул, ул.Молодежная, 9.
Тел.: (3852) 368587.
Email: lipsi-gutan@yandex.ru
