CC BY
50
8. Brugger IV, Hross К., Frisk ./. et al. // Blood. — 1992. — Vol. 79. — P. 1193—1200.
9. Cohen M. N.. Crcaven P. Fossieck C. ct al. // Canccr Treat. Rep. — 1977. — Vol. 61. — P. 349—354.
10. DeVita V. T. // Canccr Principles and Practice’ of Oncology. — Philadelphia, 1989.— P. 276—300.
11. Einhorn L. II., Crawford E. D., Shipley IV. U. ct al. // Ibid.— P. 1071 — 1089.
12. Gaynor E. R., Ulimann J. E. I/ New Engl. J. Med.— 1984.— Vol. 311. —P. 1506—1508.
13. Giartni A.M., Siena S., Bregni M. ct al. // Lancet.— 1989.— Vol. 2. — P. 580—585.
14. Goodman J. W., Hodgson G. S. II Blood. — 1962. — Vol. 19.— P. 702—714.
15. Haylock D. N.. To L. B„ Dowse T. L. et al. // Ibid. — 1992. — Vol. 89, —P. 1405—1412.
16. Horning S. G., Rosenberg S. A. II New Engl. J. Med.— 1984.— Vol. 311, —P. 1471—1475.
17. Lepage E., Gisselbrecht C., Haionn C. et al. // Blood. — 1992.— Vol. 80 (Suppl. 1). — P. 158.
18. Peters W. P., Kurtzherg J., Atwater S. et al. // Proc. Amer. Soc.
Clin. Oncol. — 1989. — Vol. 8. — P. 702A.
19. Pettengell R„ Demuynck II., Testa N. G. et al. //J. Cell. Cloning. —
1992.— Vol. 10, — P. 59—61.
20. Peterson j., Kirkpatrie G., Ross M. et al. // Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol. — 1991, —Vol. 10.— P. 78.
21. Richmam С. М., Weiner R. S., Yankee R. A. II Blood. — 1976.— Vol. 47.— P. 1031—1039.
22. Samson М. K., Rivcin S. E., Jones S. E. et al. // Cancer (Philad.). — 1984, —Vol. 53, —P. 1029—1035.
23. Sheridan W. P., Begley C. G., Jutther C. A. et al. // Lancet. — 1992. — Vol. 339.— P. 640—644.
24. Sheridan W. P., Morstin G„ WolfM. et al. // Ibid. — 1989. — P. 891— 895.
25. Skipper H. E. II Cancer Res. — 1967. — Vol. 27, —P. 2636—2645.
26. Sokinski M. A., Cannistra S. A., Elias A. et al. // Lancet. — 1988. — Vol. 1, —P. 1194—1198.
27. Taylor К. М., Jagannath S., Spitzer G. et al. // J. clin. Oncol. — 1989. —Vol. 7. —P. 1791—1799.
28. Thomas E. D„ Storh R. II Blood. — 1970. — Vol. 36. — P. 507—515.
29. Thomas E. D„ Storh R„ Clift R. A. II New Engl. J. Med. — 1975. — Vol. 292, —P. 832.
30. Zander A. R., Spitzer G., Verma D. S. et al. // Exp. Hematol. — 1980, —Vol. 8, —P. 521—525.
Поступила 14.04.94 / Submitted 14.04.94
© Коллектив авторов, 1996 УДК 616-006.34-07:612.018
H. Е. Куитинский, О. И. Костылева, А. А. Радченко,
Е. С. Герштейн, Н. А. Макрецов, М. Д. Алиев
РЕЦЕПТОРЫ ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА, ЭСТРОГЕНОВ И ГЛЮКОКОРТИКОИДОВ В ПЕРВИЧНЫХ ОПУХОЛЯХ КОСТЕЙ
HIIII клинической онкологии
Несмотря на постоянное совершенствование медикаментозного и хирургического лечения, злокачественные опухоли костей продолжают отличаться тяжестью течения, низкой чувствительностью к терапии, ранним метастазированием. Неудовлетворительные результаты терапии сарком костей убедительно свидетельствуют
о необходимости глубокого изучения механизмов их роста и метастазирования с целью поиска дополнительных прогностических факторов и новых подходов к их лечению. Для злокачественных опухолей характерно нарушение регуляции пролиферативных процес-
Application of various agents for stimulation of early hemopoiesis progenitors is currently in progress. This allows reduction in cytopenia duration following HDC, on the one hand, and utilization of methods for tumor cell clearing leading to partial loss of the material, on the other.
Analysis of reports on the use of stimulated peripheral HPC for hemopoiesis protection following HDC shows that the recovery lasts 9-11 days or more [27].
In the opinion of some investigators this is because early hemopoiesis progenitors suffer less damage from cryopreservation.
Transplantation of stimulated progenitor cells without prefreezing as well as their stimulation outside the patient’s body have recently been implemented in the clinical practice. This became possible after development of methods for maintenance of short-term HPC culture. These methods give a large yield of progenitors of later generations after their in vitro stimulation with various cytokine combinations [15]. Good results are obtained with combinations of 6 cytokines: IL-1, IL-3, IL-6, CSF, GM-CSF and G-CSF. This cytokine system gives a 500-1000-fold rise in cell count for 12-16 days, i.e. the period sufficient for performance of one HDC cycle and cytostatic clearance from the body. Cells in this culture are mainly promyelocytes and myelocytes (60-70%), while 15-20% are megakaryocytes which is good for countering granulo- and thrombopenia. First clinical results of such transplantations have recently been reported.
The possibility of complete elimination of cytopenia and associated morbidity is of great clinical importance. The in vitro culture of stem cells giving a sufficient HPC yield allows a significant reduction in treatment „ cost which is also of much importance.
N. E. Kushlinsky, O. I. Kostyleva, A. A. Radchenko,
E. S. Gershtein, N. A. Makretsov, M. D. Aliev
ESTROGEN, GLUCOCORTICOID AND EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTORS IN PRIMARY BONE TUMORS
Research Institute of Clinical Oncology
In spite of continuous improvement in the therapy and surgery malignant bone tumors still show severe course, low response to therapy and early metastasizing. The unsatisfactory results of therapy for bone sarcoma prove necessary profound study of mechanisms of tumor growth and metastasizing as well as search for additional prognostic factors and new approaches to the treatment. Malignant tumors are characterized by disorder in regulation of proliferation and by uncontrolled cell growth. Besides, there is a change in cell sensitivity to growth factors that are produced by the tumor cells (autocrine
con, которое сопровождается неконтролируемым клеточным ростом. При этом изменяется спектр чувствительности клеток к факторам роста, которые могут продуцироваться как клетками самом опухоли (ауто-крннный механизм), так и окружающими стромальпы-мп клетками (паракриннын механизм) [3]. Возможно также изменение чувствительности опухоли к эндокринным сигналам.
Одним из важных признаков чувствительности тканей к гормонам или факторам роста является наличие в этих тканях функционально активных рецепторов. Костная и хрящевая ткань являются важными мишенями для действия многих гормонов и факторов роста как в норме, так и при патологии. Данная работа посвящена изучению рецепторного статуса опухолей больных саркомами костей по трем типам рецепторов: эстрогенов (РЭ), глюкокортикоидов (РГ) и эпидермального фактора роста (РЭФР).
Эстрогены влияют на формирование и перестройку костной ткани, передавая или модифицируя сигналы, индуцирующие костеобразование [10, 13, 14]. Они не только поддерживают объем трабекулярной кости, но и стимулируют энхондральное и периостальное костеобразование, минерализацию костной ткани. Эстрогены ускоряют процесс дифференцировки и созревания остеобластов, что сопровождается преждевременным появлением центров окостенения [33]. В клеточной культуре эстрогены стимулируют пролиферацию остеобластов и остеобластоподобных клеток, а также клеток культур остеогенной саркомы [13, 22]. РЭ обнаружены в культурах остеобластов, остеобластоподобных клеток, остеогенных сарком человека и животных [23], а также в операционном и биопсийном материале, полученном у больных остеогенной саркомой [1, 4] и гигантоклеточной опухолью [18, 21]. Обнаружена промоторная роль эстрогенов в индуцированном 9llSr саркомогенезе [8, 19]. Эстрогены влияют также на хрящевую ткань, тормозя дифференцировку остеокластов, способствуя снижению их числа и уменьшению резорбции зоны минерализованного хряща и сосудистой инвазии, что ведет к уменьшению вторичного костеобразования [38].
Важным регулятором метаболизма костной ткани являются глюкокортикоиды, которые, как и эстрогены, могут оказывать прямое действие на костную ткань либо модулировать эффекты факторов роста, понижая при этом степень адгезии остеобластов к костному матриксу и экспрессию иитегрииа [17]. In vivo глюкокортикоиды стимулируют резорбцию костной ткани и уменьшают костеобразование [32]. В исследованиях in vitro глюкокортикоиды стимулируют дифференцировку остеобластов и одновременно подавляют костеобразование, дозозависимо подавляют пролиферативную активность клеток линии остеогенной саркомы HOS-86()3 [36] и изменяют экспрессию ряда генов в остеобластах. Под воздействием кортикостероидов наблюдаются изменения продукции цитокинов, факторов роста и их рецепторов [9, 26, 27, 32]. В исследованиях на культурах клеток обнаружены различия в эффектах кортикостероидов на растущие, дифференцированные и опухолевые остеобласты [26]. Высокоаффинные рецепторы глю-
mcchanism) and by surrounding stromal cells (paracrine mechanism) [3]. The tumor sensitivity to endocrine signals may change as well.
The presence of functionally active receptors is an important characteristic of tissue sensitivity to hormones or growth factors. Bone and cartilaginous tissues are an important target for many hormones and growth factors both in the norm and in blastomogenesis. The purpose of this investigation was to study receptor status of bone sarcomas as concerns three types of receptors: receptors of estrogens (ER), glycocorticoid (GR) and epidermal growth factor (EGFR).
Estrogens influence formation and reconstruction of bone tissue by transmitting or modifying signals that induce osteogenesis [10,13,14]. They both maintain trabecular bone volume and stimulate enchondral, periostal ossification and bone tissue mineralization. Estrogens accelerate differentiation and maturation of osteoblasts which results in untimely ossification [33]. In cell culture estrogens enhance proliferation of osteoblasts and osteoblastoids as well as osteosarcoma cells [13,22]. ER are found in cultures of osteoblasts, osteoblast-like cells, human and animal osteosarcomas [23], as well as in surgical and biopsy specimens from patients with osteosarcoma [1,4] and giant cell tumors [18,21]. Estrogens are known to promote 9(lSr-induced sarcomo-genesis [8,19]. Estrogens also act on cartilaginous tissue by inhibiting osteoclast differentiation, reducing the number of osteoclasts and diminishing zones of cartilage mineralization and vascular invasion which leads to decrease in secondary osteogenesis [38].
Glucocorticoids are an important regulator of bone tissue metabolism. Glucocorticoids, like estrogens, may either act directly on bone tissue or modulate growth factor effects in parallel inducing osteoblast adhesion to bone matrix and integrin expression [17]. Glucocorticoids enhance bone tissue resorption and reduce osteogenesis in vivo [32], stimulate osteoblast differentiation, suppress ossification, inhibit proliferative activity of HOS-8603 osteosarcoma cells in a dose-dependent manner [36] and modify expression of some osteoblastic genes in vitro. Glucocorticoids modify production of cytokines, growth factors and their receptors [9, 26, 27, 32]. Studies in cell culture discovered that corticosteroids produced different effects in growing, differentiated and neoplastic osteoblasts [26]. High affinity glucocorticoid receptors were found in cells of HOS-8603 osteogenic sarcoma [36].
EGFR-related abnormalities may be due to increased expression, changed affinity, phosphorylation, dimeri-zation of the receptors; EGFR ectopic expression may occur in membrane receptor-free tissues. For instance, EGFR are usually absent in normal bone tissue of adult humans while present in various osteoblast and chondrocyte cultures [7, 20, 24, 37, 40], the EGF binding sites being mainly discovered on membranes of colony forming, rapidly dividing young cells. High affinity EGFR pools were found on OST-l-RF osteosarcoma culture cell membranes [39]. While there were no EGFR in culture cells of well differentiated osteosarcoma ROS 17/2.8 [30]. EGF enhanced in a dose-dependent mode
кокортикоидов были обнаружены в клетках остеогенной саркомы линии HOS-8603 [36].
Нарушения, связанные с РЭФР, могут быть обусловлены различными факторами, в том числе увеличением уровня их экспрессии, изменением их аффинности, фосфорилированием, димеризацией; возможно также появление эктопической экспрессии РЭФР в тканях, которым не свойственно наличие мембранных рецепторов. Так, для остеобластов нормальной костной ткани взрослого человека РЭФР не характерны. Однако они были обнаружены в различных клеточных культурах остеобластов и хондроцитов [7, 20, 24, 37, 40], причем места связывания ЭФР определяются преимущественно на мембранах колониеобразующих, быстро-делящихся молодых клеток. Пул высокоаффинных РЭФР обнаружен в мембранах клеток культуры остеогенной саркомы OST-1-PF [39]. В то же время РЭФР не обнаружены в культуре клеток высокодифференцированной остеогенной саркомы ROS 17/2.8 [30]. В культуре остеобластов G292 in vitro ЭФР дозозависимо повышает митогенную активность клеток, и данный эффект подавляется ингибиторами тирозинкиназной активности [41]. Уровень экспрессии РЭФР, помимо ряда других факторов, повышается под влиянием ЭФР [28]. ЭФР стимулирует пролиферацию хондроцитов, а также синтез протеогликанов и коллагена второго типа [38] в хрящевой ткани.
Все вышеприведенные данные явились обоснованием для проведения клинического исследования РЭФР, РЭ и РГ в опухолях больных саркомами костей.
Материалы и методы. В исследование были включены 4 группы нелеченых больных с различными первичными саркомами костей: остеогенной саркомой (ОС) — 26, хондросаркомой (ХС) — 12, злокачественной фиброзной гистиоцитомой (ЗФГ) — 4 и гигантоклеточной опухолью (ГКО) — 6. Средний возраст больных ОС составил 19,5 года, ХС — 45 лет, ЗФГ — 41,7 года, а ГКО — 23 года. Среди больных ОС, ХС и ЗФГ преобладали лица мужского пола (соотношение мужчин и женщин 14:7, 7:5, 4:0 соответственно).
Полученные образцы опухолей (300—500 мг) замораживали в жидком азоте и хранили при -70° С, затем использовали дня определения содержания рецепторов стероидных гормонов и ЭФР.
Для получения цитозоля опухолевые образцы измельчали в жидком азоте, а затем гомогенизировали в ТЭД-буфере (pH 7,4 при 4° С,), содержащем 10 мМ трис-HCl («Merck», ФРГ). 1,5 мМ ЭДТА («Sigma», США), 0,5 мМ дитиотрейтола («Koch-Light Laboratories», Великобритания), 10% (v/v) глицерина (о.с.ч.). Цитозольную фракцию получали после центрифугирования гомогената при 105 000 g, 4° С в течение 30 мин (центрифуга «Beckman», США) и использовали для определения РЭ и РГ стандартным раднолигандным методом, рекомендованным EORTC, с разделением гормонорецепторных комплексов и несвязанного лиганда на угле, покрытом декстраном, с небольшими модификациями, как описано ранее [5]. Радиометрию проб проводили на жидкостном сцинтнлляционном бета-счетчике LS-6500 («Beckman», США). Содержание цитозольного белка определяли, по методу Лоури, на спектрофотометре DU-650 («Beckman», США). Границей регкчпороположительности для РЭ считали 10 фмоль/мг цитозольного белка.
Осадок использовали для получения грубой мембранной фракции клеток опухолей, где определяли содержание РЭФР. Для этого осадок регомогенизнровалн при 4° С в PBS-буфере (pH 7,4), содержащем
I г/л бычьего сывороточного альбумина («Sigma». США) и 0,07 г/л бацитрацина («Sigma», США) и центрифугировали при 2000 g в течение 10 мин при 4° С. В супернатанте, представляющем собой грубую мембранную фракцию, проводили радполнгандныи анализ содержания РЭФР модифицированным методом Benraad и Foekens [6], используя мышиный ЭФР («Sigma», США) в качестве лиганда. Для получения ,251-меченого лиганда ЭФР йодировали Na ,251 (Санкт-Петербург, Россия) в присутствии хлорамина Т. Удельная радно-
mitogenic activity of G292 osteoblasts in vitro, the effect being suppressed by tyrosine kinase inhibitors [41]. EGF increased expression of EGFR and of some other factors [28]. EGF stimulated proliferation of chondrocytes, synthesis of proteoglycans and second type collagen in cartilaginous tissue [38].
Basing on the above-mentioned findings we performed a clinical study of EGFR, ER, GR in patients with bone sarcoma.
Materials and Methods. The study was performed in 4 groups of untreated patients with various types of primary bone sarcoma, including osteosarcoma (OS, 26), chondrosarcoma (CS, 12), malignant fibrous histiocytoma (MFH, 4), and giant cell tumor (GCT, 6). The patients’ mean age was 19.5 (OS), 45.0 (CS), 41.7 (MFH) and 23.0 years (GCT). Males were dominating among the OS, CS and MFH patients (male to female ratio being 14:7, 7:5, 4:0, respectively).
Tumor specimens (300-500 mg) were frozen in liquid nitrogen g? and stored at -70° C to be assessed for steroid and EGF receptors.
The tumor specimens were then minced in liquid nitrogen and homogenized at 4° C in TED buffer (pH 7.4) containing 10 mmol tris-HCl (Merck, FRG), 1.5 mmol EDTA (Sigma, USA), 0.5 mmol dithiotreitol (Koch-Light Laboratories, Great Britain), 10% (v/v) glycerol, to derive cytosol. Cytosol fraction was obtained by homogenate centrifugation at 105,000 g, 4° C for 30 min using an ultracentrifuge from Beckman, USA and evaluated for ER, GR by standard, slightly modified radioligand assay recommended by EORTC and involving separation of hormone-receptor complexes and unbound ligand on dextrane-coated coal as described elsewhere [5]. Radiometry of the specimens was performed using a liquid scintillation beta-counter LS-6500 (Beckman, USA). Cytosol protein content was determined according to Lowry method using a DU-650 (Beckman, USA) spectrophotometer. Tumors were considered ER-and GR-positive if contained not less than 10 fmol/mg cytosol protein.
The precipitate was used to derive tumor cell crude membrane fraction to be assessed for EGFR. The precipitate was rehomogenized at 4° C in PBS-buffer (pH 7.4) containing I g/l bovine serum albumin (Sigma, USA) and 0.07 g/l bacitracin (Sigma, USA) and centrifuged at 2,000 g, 4° C for 10 min. EGFR content was assessed in the supernatant, i.e. crude membrane fraction, by modified radioligand assay according to Benraad and Foekens [6] using mouse EGF (Sigma, USA) as a ligand. To derive l2SI-labeled ligand the EGFR was iodized with Na125I (Sankt-Petersburg, Russia) in the presence of chloramine T. Specific radioactivity of the labeled ligand was 45-100 Ci/mmol. The membrane preparations containing 0.2-1.0 mg per ml protein were incubated 1 hour at room temperature with 3.5 nmol l25I-EGF in the presence or absence of 200-fold excess of unlabeled EGF. The reaction was stopped by addition of 75% hydroxyapatite (Sigma, USA) in PBS buffer (pH 7.4) on ice bath. The specimens then were washed 3 times with PBS buffer at 4° C and their radioactivity was measured using an LKB gamma-counter (Sweden). Tumors were considered EGFR-positive if contained not less than 10 fmol EGFR per mg membrane protein.
Statistical analysis of differences was performed by Student's test.
Results and Discussion. EGFR were detected in all tumor types (table 1), the rates of detection being 67% in OS, 40% in CS, 50% in GCT and 75% in MFH. There were no statistically significant differences in EGFR mean membrane fraction contents between OS, CS and MFH, the respective values being 248±39, 252±69, 185±60 fmol per mg membrane protein. GCT showed a statistically significant (p < 0.05) decrease in EGFR (47±8 fmol/mg protein). The EGFR variation range was the greatest in OS (64 to 605 fmol/mg protein) and the lowest in GCT (30 to 50 fmol/mg protein).
EGFR levels in OS, CS and MFH were compatible with those in EGF-regulated malignant lesions (breast [2], ovarian [34], lung [11] cancers). It seems that the presence and the different EGFR concentrations in OS,
активность полученного меченого лиганда состапляла 45-100 Кн/ммоль. Мембранные препараты, содержащие 0,2— 1,0 мг/мл белка, ппкубпроиалп и течение I ч при комнатном температуре с 3,5 нмоль |251-ЭФР и присутствии пли отсутствии 200-кратного избытка немеченого ЭФР. Реакция прекращалась при добавлении 75% суспстип гндрокспанатпта («Sigma», США) в PBS-буфере (pH 7,4) на льду. После 3 последовательных отмывании PBS-буфером при 4° С пробы радпомстрпровалп па гамма-счетчике LKB (Швеция). РЭФР-поло-жительпымп считали опухоли, содержащие не менее 10 фмоль РЭФР на 1 мг мембранного белка.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью метода Стыодепта.
Результаты п обсуждение. РЭФР были обнаружены во всех четырех типах опухолей (табл. 1). При этом РЭФР были выявлены в 67% ОС, 40% ХС, 50% ГКО и 75% ЗФГ. Не обнаружено статистических отличий в среднем содержании РЭФР в мембранных фракциях \ ОС, ХС и ЗФГ, а их уровни составили 248 ± 39, 252 ± ± 69, 185 + 60 фмоль/мг мембранного белка соответственно. Для ГКО оказалось характерным статистически достоверное (р < 0,05) более низкое содержание РЭФР (47 ± 8 фмоль/мг белка). Наибольшие пределы колебания уровней РЭФР были отмечены среди ОС и составили 64—605 фмоль/мг белка. Минимальные колебания уровней РЭФР отмечались в ГКО (30— 50 фмоль/мг белка).
Уровни РЭФР, обнаруженные в ОС, ХС И ЗФГ, вполне сопоставимы с их содержанием, наблюдаемым в регулируемых ЭФР злокачественных новообразованиях (раке молочной железы [2], раке яичников [34], раке легкого [11]). По-видимому, наличие и разные уровни РЭФР в ОС, ХС и ЗФГ не являются специфической особенностью этих нозологических форм, а характеризуют общую тенденцию всех РЭФР-положи-тельных эпидермальных и мезенхимальных [12] опухолей к быстрому росту.
Существуют данные о взаимодействии между рецепторными механизмами, опосредованными через РЭ и РЭФР [2, 35]. Эндогенная активация в остеобластоподобных клетках протеинкиназы С, которая активируется при взаимодействии ЭФР с РЭФР, изменяет чувствительность клеток к эстрогенам и уровень экспрессии РЭФР [31]. Известно также, что некоторые линии ОС, а также хондроцитов человека [1, 15, 16] содержат РЭ. В исследованиях in vitro на линиях остеобластов и ОС обнаружены прямые, опосредованные рецепторами, эффекты эстрогенов [16, 25, 30]. Однако до сих пор существуют разногласия относительно механизмов действия эстрогенов при бластомогенезе в костной ткани.
РЭ были обнаружены в 17% ОС, 25% ХС, 75% ЗФГ, 34% ГКО (табл. 2). Среднее содержание РЭ (фмоль/мг цитозольного белка) в опухолях составило
20.5 ± 8,0 в ОС, 55,5 ± 43,8 в ХС, 18,8 + 4,1 в ЗФГ,
11.5 ± 1,5 в ГКО. Наибольшие колебания в содержании РЭ были выявлены в ХС, наименьшие — в ГКО и составили 10,0—143,2 и 10,0—12,9 фмоль/мг белка соответственно.
Таким образом, РЭ обнаружены менее чем в 1/3 опухолей. Исключение составила ЗФГ, где РЭ были обнаружены в большинстве (3 из 4; 75%) исследованных образцов. Относительно низкий уровень рецепторов,
Таблица 1 Tablel
Специфическое связывание ЭФР в первичных опухолях костей (М ± т)
Specific EGF binding in primary bone tumors (mean ±_S.E.)
Нозопогическая форма Число исследованных образцов Частота обнаружения РЭФР, % Средний уровень РЭФР, фмоль/мг белка
ОС /OS 26 65 247 ± 39
xc/cs 12 40 252 + 69
ЗФГ/MFH 4 75 185 ± 60
ГКО / GCT 6 50 47 ± 8*
Nosological type No. of specimens studied Percentage of EGFR detection EGFR mean level, fmol per mg protein
* При уровне значимости p < 0,05 имеются достоверные отличия в среднем содержании РЭФР в ГКО по сравнению с ОС, ХС, ЗФГ.
' Shere were significant differences in mean content of EGFR in GCT versus OS, CS, MFH at p < 0.05.
CS and MFH are not characteristic of these particular nosological forms but are a common feature of all EGFR-positive epidermal and mesenchymal [12] tumors reflecting their tendency to rapid growth.
There is evidence of interaction of ER- and EGFR-mediated receptor mechanisms [2, 35]. Endogenous activation of protein kinase С in osteoblast-like cells, particularly due to the EGF-EGFR interaction, changes cellular response to estrogens and EGFR expression [31]. It is also known that some OS and human chondrocyte lines [1, 15, 16] contain ER. Direct receptor-mediated estrogen effects have been discovered in in vitro studies in osteoblast and OS cell lines [16, 25, 30]. However, the opinions about estrogen mechanism of action in bone tissue blastomogenesis are equivocal.
ER were detected in 17% of OS, 25% of CS, 75% of MFH and 34%) of GCT (table 2). ER mean contents were 20.5±8.0 (OS), 55.5±43.8 (CS), 18.8±4.1 (MFH), 11.5±1.5 (GCT) fmol/mg cytosol protein. The variation was maximal in CS and minimal in GCT (10.0 to 143.2 and 10.0 to 12.9 fmol/mg protein, respectively).
Таблица 2 Table 2
Содержание РЭ и РГ в первичных опухолях костей (М ± т)
ER and GR contents in primary bone tumors (mean ;LS.E.)
Нозологичес кая форма Число исследо- ванных образцов Частота обнаружения РЭ, % Средний уровень РЭ, фмоль/мг белка Частота обнаружения РГ, % Средний уровень РГ, фмоль/мг белка
ОС/OS 26 19 20,5 ± 8,0 46 63,5 ± 27,8
XC/CS 12 25 55,5 ± 43,8 42 51,5 ± 9,7
ЗФГ/MFH 4 75 18,8 ± 4,1 57 30,1 ± 10,3
ГКО / GCT 6 33 11,5 ± 1,5 43 45,6 ± 14,2
Nosological type No. of specimens studied Percentage of ER detection ER mean level, fmol per mg protein Percentage of GR detection GR mean level, fmol per mg protein
а также их относительно редкое выявление можно объяснить, вероятно, тем, что в злокачественных опухолях костей происходит снижение концентрации цитозольных РЭ при одновременном повышении их аффинности [18].
Сочетание п опухоли одновременно двух видов рецепторов (РЭФР и РЭ) было наиболее характерно для ЗФГ (75%) и наименее — для ОС (4%) (табл. 3). Только РЭФР чаще выявлялись в ОС (63%), а в ХС и в ЗФГ в 32 и 33% соответственно. Обращает на себя внимание тот факт, что среди РЭФР+РЭ' ХС обнаруживались только опухоли дедифференцированного гистологического типа и опухоли II—III степени анаплазии, которые являются наиболее злокачественным вариантом ХС. Наличие же РЭФР в регулируемых ЭФР опухолях в отсутствие РЭ рассматривается как плохой прогностический признак для некоторых типов опухолей [2, 11, 29, 34].
Отсутствие двух видов рецепторов (фенотип РЭ РЭФР-) чаще обнаруживалось в ХС (44%) I—II степени анаплазии. В ОС, ЗФГ и ГКО данный фенотип выявлен в 20, 25 и 17% наблюдений соответственно.
Комбинация РЭ+РЭФР- практически одинаково часто встречалась в ОС, ХС и ГКО (13, 16, 17% соответственно) и не обнаружена в ЗФГ. Все РЭ+РЭФР~ ХС относятся к наиболее дифференцированному гистологическому варианту (I—II степень анаплазии). Данное сочетание РЭ и РЭФР рассматривается некоторыми исследователями как наиболее благоприятный фактор прогноза, в частности при раке молочной железы [2]. Невысокая частота обнаружения РЭ+РЭФР~ фенотипа в ОС, ХС и ГКО, вероятно, может быть связана с высокозлокачественным характером роста сарком костей.
При анализе рецепторного статуса различных гистологических вариантов ОС удалось охарактеризовать только ее остеобластический вариант, который составил 50%о от общего числа ОС. Большая часть образцов ОС остеобластического типа (62%) содержала РЭФР при отсутствии РЭ. Опухоли, содержавшие оба вида рецепторов, отсутствовали. ОС с фенотипом РЭ+РЭФР_ и РЭ РЭФР- составили 15 и 23% соответственно.
РЭФР и РЭ были обнаружены во всех 4 исследованных нами нозологических формах первичных нелеченых сарком костей, а уровни их содержания статистически достоверно не различались. Средние уровни РЭФР сопоставимы с таковыми в других ЭФР-регу-лируемых опухолях. Для ОС как наиболее злокачественно протекающей опухоли характерным оказалось сочетание рецептороположительности по РЭФР в отсутствие РЭ. Это же сочетание рецепторов выявлено в наиболее злокачественных вариантах ХС, а также в трети исследованных ГКО.
Наиболее благоприятная для других злокачественных опухолей комбинация РЭ+РЭФР~ практически одинаково редко встречалась в ОС, ХС и ЗФГ, что, по-видимому, также отражает высокозлокачественный характер этих новообразований.
РГ были обнаружены во всех 4 типах исследованных опухолей с практически одинаковой частотой, а именно: в 46% ОС, 42% ХС, 57% ЗФГ и 43% ГКО (см. табл. 2). Средние уровни РГ (фмоль/мг белка) в опухолях статистически достоверно не различались и составили
Таблица 3 Table 3
Распределение РЭ и РЭФР в опухолях костей (в процентах)
ER-EGFR percentage in bone tumors
Нозологическая форма РЭ^РЭФР" рэ-рэфр* РЭ*РЭФР* РЭ-РЭФР"
ОС/OS 13 63 4 20
xc/cs 16 32 8 44
ЗФГ/MFH 0 0 75 25
ГКО / GCT 17 33 17 17
Nosological type EFTEGFR- ER-EGFR* ER*EGFR* ER-EGFR-
Thus, ER were detected in less than 1/3 of the tumors, the only exception being MFH where ER were ^ found in most (3/4, 75%) specimens. The receptor relatively low levels and detection rates may be due to reduction in cytosol ER content in parallel with increase in their affinity observed in malignant bone tumors [18].
Both receptor types (EGFR and ER) were encountered most frequently in MFH (75%) and most rarely in OS (4%>) (table 3). EGFR alone were most frequent in OS (63%), the respective rates in CS and MFH being 32% and 33%. Of note that by histology all the EGFR+ER- CS belonged to dedifferentiated and grade II-III anaplasia types, i.e. chondrosarcomas with the greatest malignant potential. The presence of EGFR in the absence of ER in EGF-regulated tumors is a poor prognostic sign for some tumors [2,11,29,34].
The absence of both receptors (ER'EGFR+ phenotype) was mainly observed in grade I-II anaplasia CS (44%). While in the OS, MFH and GCT this phenotype was detected in 20, 25 and 17% of the specimens, respectively.
The ER+EGFR- combination was equally frequent in the OS, CS, GCT (13%, 16%, 17%, respectively) while absent in the MFH. All the ER+EGFR-> CS belonged to the most differentiated histological type (grade
I-II anaplasia). Some investigators consider this ER-EGFR combination as the most favorable prognostic factor, in particular in breast cancer [2]. The low rate of the ER+EGFR~ phenotype in the OS, CS and GCT may be related to the high malignant potential of bone sarcomas.
Analysis of OS histological types with respect to receptor status allowed characterization of its osteoblastic variant which was 50% of the OS total. Most osteoblastic OS (62%o) contained EGFR and no ER. There were no tumors with both receptor types. ER+EGFR~ and ER-EGFR" OS were 15% and 23%, respectively.
Thus, EGFR and ER were detected in all four nosological types of primary untreated bone sarcomas studied, the difference in the receptor levels being not statistically significant. EGFR mean concentrations were compatible with those in other EGF-regulated tumors. The most malignant OS were characterized by the presence of EGFR and the absence of ER. The same receptor combination was discovered in the most malignant types of CS and in one third of GCT studied.
63,5 ±27,8 в ОС, 51,5 ±9,7 в ХС, 30,1 ± 10,3 в ЗФГ и 45,6 ± 14,2 в ГКО.
Был также проведем совместный анализ распределения РЭ, РГ в исследованных опухолях (табл. 4). При этом удалось выявить, что большинство ОС и ХС (41 и 45% соответственно), а также 43% ЗФГ обладали фенотипом РЭ'РГ-. Данный факт может свидетельствовать о возможном выходе опухолей из-под системного контроля роста и переходе к преимущественно локальной регуляции.
Можно предположить, что сочетание рецепторов РЭФР+РЭРГ- является наиболее неблагоприятным. Такое сочетание рецепторов чаще встречалось в ХС
II—III степени злокачественности (18%) и ОС, мета-стазировавших в первые 6 мес после начала специфического лечения (33%), и не обнаружено в ЗФГ и ГКО.
Таким образом, РЭФР, РЭ и РГ были обнаружены во всех 4 исследованных нами нозологических формах первичных нелеченых сарком костей, а их уровни статистически достоверно не различались. Сочетание РЭФР+РЭ"РГ~ предположительно является самым неблагоприятным и наиболее характерно для быстро ме-тастазирующих ОС, ХС II—III степени злокачественности и не встречалось в ЗФГ и ГКО.
По результатам проведенного исследования можно сделать предварительный вывод об участии ЭФР, эстрогенов и глюкокортикоидов в регуляции роста опухолей костей, а клиническое значение совместного анализа трех видов рецепторов необходимо подтвердить при длительном наблюдении за больными, сопоставив их уровни в опухолях с характером ответа на адъювантную химиотерапию, длительностью безрецидивно-го периода и сроками метастазирования. Однако уже сейчас можно предположить, что рецептороположительные опухоли могут быть мишенью для адъювантной химиотерапии антагонистами соответствующих гормонов и факторов роста, что способствовало бы улучшению результатов лечения больных опухолями костей.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
!. Бассалык Л. С., Куишипский II. Е., Соловьев 10. II. и др. // Вопр. оикол. — 1989. — Т. 35, № 6.— С. 31—37.
2. Г"риипейп Е. С., Бассилык Л. С., Летигин В. П. // Вопр. онкол. — 1994. Т.—40, № 7—12.— С. 31—37.
3. Нпащепко Ю. Д., Быкорез А. И. // Полнпептндные факторы роста и канцерогенез. — Киев, 1990. — С. 66—93.
4. Куитипский Н. Соловьев IO. II., Алтраслашт А. 71 II др. // Вести. ОНЦ РАМН. — 1993. — № 2.—С. 31—37.
5. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека/Под ред. Л. С. Бассалык. — М., 1987.— С. 223.
6. Bcuraad Т. J., Fockcns J.F. // Ann. clin. Biocliem. — 1990.— Vol. 27. — P. 272—273.
7. Bernier S. М., Goliznum D. II J. cell. Physiol.— 1992. — Vol. 152, N 2.— P. 317—327.
8. Bierke P., Svcdenstal В. М. II Acta. Oncol. — 1994. — Vol. 33, N 8.— P. 963—967.
9. Centrella М., McCarthy T. L, Canalis E. II Molec. cell. Biol. —
1991, —Vol. 11, N 9.— P. 4490—4496.
Таблица 4 Table 4
Распределение РЭ и РГ в опухолях костей (в процентах)
ER-GR percentage in bone tumors
Нозологическая форма РЭ*РГ* рэ-рг рэ-рг рэ-рг-
ос /OS 16 5 41 38
xc/cs 8 14 33 45
ЗФГ/MFH 57 - - 43
ГКО / GCT 17 16 50 17
Nosological type ER*GR* ER-GR* ER-GR* ER-GR-
The combination ER+EGFR“ most favorable for other malignancies was equally rare in the OS, CS, MFH which seemed to reflect the highly malignant course of the lesions.
GR were detected in all four tumor types under study at similar frequency, the detection percentages being 46 for OS, 42 for CS, 57 for MFH and 43 for GCT (see table 2). GR mean concentrations showed no statistically significant difference 63.5±27.8 (OS), 51.5±9.7 (CS), 30.1±10.3 (MFH), 45.6±14.2 (GCT) fmol per mg protein.
Analysis of ER and GR in the tumors studied (table 4) discovered that most OS and CS (41% and 45%, respectively) as well as 43%> of MFH were ERGR-. This observation may suggest that the tumors have gone out of systemic growth control to pass on to local regulation.
The supposition may be put forward that the EGFR+ER'GR“ combination is the most prognostically poor. This receptor combination was the most frequent in CS with grade II-III malignancy (18%) and in OS giving metastases within 6 months of specific treatment (33%) while absent in MFH and GCT.
Thus, EGFR, ER and GR were found in all four primary untreated bone sarcomas studied, the differences in content being not statistically significant. EGFR mean levels were compatible with those in other EGF-regulated tumors. All OS (the most malignant neoplasms) were EGFR+ER“. The same receptor combination was characteristic of the most malignant CS variants and in one third of GCT. The combination EGFR+ERGR-seems to be the most poor prognostic factor encountered in rapidly metastasizing OS, grade II-III malignancy CS while absent in MFH and GCT.
Our findings allow an interim conclusion on contribution of EGF, estrogens and glucocorticoids to growth regulation in bone tumors while the clinical value of the joint analysis of the three receptor types should be verified in long-term clinical study of correlation of the receptor levels, tumor response to adjuvant chemotherapy, recurrence- and metastasis-free survival time. However, the supposition may be made that receptor-positive tumors may be a target for adjuvant chemotherapy with antagonists of relevant hormones and growth factors which may improve results of treatment for bone tumors.
10. Chow T. Tobias ,1. II., Colston K. II’., Chambers I. II J. din. Invest. - 1992. - Vol. 89, N 1, —P. 74—78.
11. Dlttucli K., (lion M., Pagan V. et ill. // Brit. J. Canccr.— 1991. —
Vol. 64. — P. 741- -744.
12. Diula R. B., Cnnulil) D., Carey Z. A. et al. // Cancer (Pliilatl.).—
1993.— Vol. 71, N 11, —P. 3526—3530.
13. Ernst M., Schmidt C., Froesch E. R. II Proc. nat. Acad. Sci. USA. —
1988.— Vol. 85.— P. 2307—2310.
14. Ernst M., Joan K., Heath, Schmidt C. et al. // J. Sreroid Biochem. —
1989.— Vol. 34, N I—6.— P. 279—284.
15. Franchimont P., Bassleer C. II J. Rheumatol. Suppl.— 1991.— Vol. 27.— P. 68—70.
16. Gray T. K., Koruck K., Nabell L. M. et al. II Osteoporosis. I C. Christiansen, J.C. Johansen, B.J. Riis —1987. — Vol. 1.
17. Grononicz G. A., McCarthy M.B. II Endocrinology. — 1995.— Vol. 136, N 2.— P. 598—608.
18. Han S., He B., Peng Z. et al. // Hua. Hsi. I. Ko. Ta. Hsueh. Hsueh. Pao. — 1993. — Vol. 24, N 2. — P. 160—162.
19. Harraldsim J., Nilson A. II Acta Oncol. — 1988. — Vol. 127, N 4. — P. 176—232.
20. Hsuan J. J. 1/ Anticancer Res. — 1993. — Vol. 13. — P. 2521—2532.
21. Ishibe M., Ishibe Y., Ishibashi T. et al. // Arch. Orthop. Trauma. Surg. — 1994. — Vol. 113, N 2. — P. 106—109.
22. Kaye A. M., Weisman Y., Harell A., Somjen D. II J. Steroid Biochem. Mol. Biol. — 1990.— Vol. 37, N 3. — P. 431—435.
23. Komm B. S., Terpenting C. M., Benz D. J. et al. //Science. — 1988. — Vol. 241, N 4861. — P. 81—84.
24. Kinoshita A., Takiganv M„ Suzuki F. II Biochem biophys. Res. Commun. — 1992. — Vol. 183, N 1, —P. 14—20.
25. Lajeunesse D. II Bone and Mineral. — 1994. — Vol. 24. — P. I —16.
26. Lian J., Stein G., Stein J. et al. // Anticancer. Res. — 1992.— Vol. 12, N 6A. — P. 1781.
© Коллектив авторов, 1996 УДК 616-006.442/.443-053.9
Г. С. Тумян, Е. А. Демина, Н. А. Пирогова,
Ю. В. Червонобаб
ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ И РЕЗУЛЬТАТЫ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ
ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ СТАРШЕ 60 ЛЕТ
НИИ клинической онкологии
Лимфогранулематоз диагностируется у людей всех возрастов, включая новорожденных. Основная масса заболевших все же приходится на возраст 16—35 лет [1, 2, 11, 14].
Вместе с тем хорошо известно, что «стареет» население всех экономически развитых стран. Это неизбежно приводит к увеличению числа больных пожилого (старше 60 лет) и старческого (старше 70 лет) возраста, в том числе и лимфогранулематозом [4, 12, 15, 16].
При обработке данных литературы невольно создается впечатление, что внимание онкологов приковано к изучению проблем лимфогранулематоза лишь у пациентов молодого возраста. В крупных работах отечественных и зарубежных авторов медиана возраста больных, включенных в исследования, как правило, не превышает 35—40 лет [7, 8]. Во многом это объясняется тем, что даже в специализированных клиниках по лечению лимфогранулематоза необходим довольно дли-
27. Mttrusic A., Rais: L. (i. II Endocrinology. — 1991:—Vol. 129,
N 5. — P. 2699—2706.
28. Matsuda N., Kumar N. M., Ramakrishnan P. R. et al. // Arch Oral. Biol. — 1993.—Vol. 38, N 7. — P. 559—569.
29. Melpignano M., Merisio C., Catozzi L. et al. // Acta Bio-Med. Atcneo Parm. — 1993. — Vol. 64. — P. 229—234.
30. Migliaccio S., Davis V. L., Gibson M. K. ct al. // Endocrinology. — 1992, —Vol. 130, N 5.— P. 2617—2624.
31. Migliaccio S., Wetsel W. C„ Fox W. M. et al. // Molec. Endocrinol. — 1993.— Vol. 7, N 9.— P. 1133—1143.
32. Russell R.G. // Brit. J. Rheumatol. — 1993. — Vol. 32, Suppl. 2. — P. 6—10.
33. Simmons D. II Proc. Soc. exp. Biol. Med.— 1996. — Vol. 121,
N 4.— P. 1165—1168.
34. Scambia G., Benedetti P. P., Battaglia F. et al. II J. clin. Oncol. —
1992.— Vol. 10. — P. 529—535. ft
35. Schroeder C., Gibson L., Nordstrom C., Beug H. II EMBO J. —
1993.— Vol. 12, N 3. — P. 951—960.
36. Song L. N. II Oncol. Res. — 1994. — Vol. 6, N 3. — P. — 111 —
118.
37. Stephan E. B., Dziak R. M. II Calcif. Tissue Int.— 1994.—
Vol. 54, N 5, —P. 409—413.
38. Turner R. T., Evans G. L., Wakley G. K. II Endocrinology. —
1994.— Vol. 134, N 1, —P. 461—466.
39. Yamada K., Yoshitake Y, Norimatsu H., Nishikawa K. II Cell. Struct. Funct.—1992, —Vol. 17, N I. —P. 9—17.
40. Ysart G. E„ Mason R. M. II UK Biochem. J. — 1994. — Vol. 303,
P. 3, —P. 713—721.
41. Zhang W„ Dziak R. M„ Aletta J. M. Hi. cell. Physiol. — 1995. —
Vol. 162, N 3, —P. 348—358.
Поступила 14.09.95 / Submitted 14.09.95
G. S. Tumyan, E. A. Demina, N. A. Pirogova,
Yu. V. Chervonobab
PECULIARITIES OF HODGKIN’S DISEASE COURSE AND TREATMENT RESULTS IN PATIENTS OVER 60
Research Institute of Clinical Oncology
Hodgkin’s disease occurs in patients of all ages including newborns. However, the highest incidence is observed at the age of 16 to 35 years [1,2,11,14].
Population of all economically developed countries is known “to be getting older”. This leads to increase in the number of elderly (over 60) and old (over 70) patients including those with Hodgkin’s disease [4,12,15,16].
When reading the literature it seems that oncologists focus on Hodgkin’s disease in younger patients. In large studies of Russian and foreign authors the patients’ age median as a rule does not exceed 35-40 years [7,8]. This may be due to the fact that it takes rather a long time to collect sufficient amount of data for the analysis in the elderly.
Specification of sufficient amount of safe diagnostic procedures, study of particulars of the disease clinical course, development of efficient and safe therapeutic
