CC BY
156
GENETIC TYPING OF BOVINE LEUKEMIA VIRUS (BLV): SCIENTIFIC AND PRACTICAL ASPECTS P.N. Smirnov, N.V. Bateneva, I.V. Mikhnovich
Summary. In article problems genotyping a virus BLV are shown. Reflected perspective directions of development of scientific researches are. Results genotyping BLV on gag and env to genes at animals of a different pedigree and territorial accessory are resulted.
Key words: bovine leukemia virus (BLV), gag gene, env gene, genotyping, restriction fragment length polymorphism (RFLP).
УДК 636.082.453.5/636.934.2
РЕПРОДУКТИВНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ЗВЕРОВОДСТВЕ
A.Р. ЖВАКИНА, научный сотрудник НИИПЗК Россельхозакадемии
B.А. БАГИРОВ, доктор биологических наук, член-корреспондент РАСХН
ВНИИ животноводства Россельхозакадемии В.Б. КУДРЯВЦЕВ, кандидат сельскохозяйственных наук, исполнительный директор
ООО «Звероплемзавод «Савватьево»
E-mail: [email protected]
Резюме. На сегодняшний день существует несколько цветовых типов лисиц и песцов (в том числе, завезённых из других стран), не включённых в Государственный реестр, но представляющих интерес с точки зрения оригинальности окраски. Среди лисиц это сапфир, санглоу, беломордая, смоук, «огонь и лёд»; среди песцов - полярный и др. Решение проблемы сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов возможно путём применения искусственного осеменения, создания криобанка семени производителей различных типов и окрасов с последующим использованием ценного биоматериала.
Цель наших исследований - усовершенствование биотехнологических методов сохранения и рационального использования генетических ресурсов в звероводстве.
С 2006 по 2008 гг. в ОАО «Племзавод «Пушкинский» искусственно осеменено внутриматочным способом 2044 самки лисиц, при этом беременными оказались 81,5 %.
При использовании охлаждённого семени самцов лисиц 77,8 % самок ощенилось благополучно, плодовитость составила 4,4 щенка.
Создан криобанк семени лисиц и песцов уникальных цветовых типов российской и финской селекций, в котором сохраняется генетический материал 15 цветовых типов лисиц и 5 цветовых типов песцов. Разработаны новые криопротективные среды, подвижность сперматозоидов в которых после оттаивания составляет около 50...60 %. Получено потомство с использованием заморожено-оттаянной спермы.
Ключевые слова: криобанк семени, искусственное осеменение, расширение ассортимента производимой пушнины, транспортировка охлаждённого семени.
В последние годы на мировом рынке пушнины спрос на шкурки лисиц и песцов российской селекции снизился. Отечественные производители столкнулись с жёсткой конкуренцией со стороны скандинавских фермеров. Решить эту проблему можно путем увеличения размера, улучшения качества опушения, расширения цветового ассортимента пушнины. С помощью искусственного осеменения все это можно реализовать за 1...2 года.
Так, фермеры Финляндии за последние 15 лет резко улучшили такие показатели голубого песца, как длина и масса тела, однородность цвета, густота, плотность и уравненность волоса. По скандинавской сортировке 70 % шкурок по качеству соответствуют классам Saga
и Saga royal, а по размеру 60 % пушнины относится к категориям «40» (0000) и «50» (00000). Средняя длинна песцовых шкурок в Финляндии превышает 110 см, средняя площадь - 33 дм2. Такого эффекта удалось добиться, в частности, благодаря практически полному переходу на искусственное осеменение маточного поголовья и оценку всех производителей по качеству потомства. Однако расплатой за быстрые селекционные успехи в увеличении размеров песца при принятой системе кормления стали относительно невысокие показатели воспроизводства: выход молодняка на самку не превышает 6.. .6,5 щенка. Главная причина такой ситуации заключается в том, что 20.25 % самок не дают приплода [1].
В то же время сравнение результатов искусственного осеменения и естественного покрытия [2] показало, что число пустых самок песцов составляет соответственно 29,2 и 19,9 %, среднее количество щенков на одну самку - 5,8 и 5,3 шт.; по серебристо-чёрным лисицам величины этих показателей составили соответственно 32 и 15 %, 2,95 и 3,7 шт.
В естественных условиях лисицы и песцы не спариваются. Хотя иногда самец лисицы может покрыть самку песца. Использование искусственного осеменения позволяет вводить семя самцов лисицы в половые пути самок песца (и наоборот) и получать при этом жизнеспособное потомство [3, 4].
Кроме того, при искусственном осеменении можно увеличивать нагрузку на одного самца, что позволяет сократить их численность на ферме на 60 % и более, с одновременным повышением количества самок на 15 % и более [5].
Таким образом, создание криобанков семени, использование качественных и количественных показателей спермы, как селекционных критериев при отборе на улучшение продуктивных свойств животных будут способствовать повышению эффективности производства пушнины, а также сохранение генетических ресурсов животных [6].
Цель наших исследований - усовершенствование биотехнологических методов сохранения и рационального использования генетических ресурсов в звероводстве.
Условия, материалы и методы. Работу проводили в 2005-2009 гг. на лисо-песцовой ферме ОАО «Племзавод «Пушкинский». Кормление, содержание и уход за подопытным поголовьем были общепринятыми для хозяйства.
Период охоты у самок определяли по состоянию внешних половых органов (петель), поведению самки
в присутствии самца-пробника и с использованием метода влагалищных мазков [7].
Семя у лисиц и песцов брали по методике [8, 9] со сбором эякулята в пластмассовый спермоприёмник.
Взятое семя оценивали по качеству по общепринятой технологии В.К. Милованова, затем разбавляли специально приготовленной синтетической средой и исследовали под микроскопом.
Осеменение проводили с использованием разработанных норвежскими учёными инструментов - пластмассовой направляющей трубки и металлического катетера.
В период гона 2006 г. искусственно осеменили внутриматочным способом 54,2 % самок лисиц ОАО «Племзавод «Пушкинский», в 2007 г. - 75,7 %, в 2008 г. - 83,7 %. Для осеменения использовали самцов, привезённых из Финляндии, плодовитость которых заведомо ниже, чем у лисиц российской селекции. Кроме того, использовали молодых самцов, продуктивные качества которых еще не достигли пика. Естественное покрытие проводили в начале гона, когда финские самцы ещё не давали семя. В этот период в течку приходили в основном взрослые, более плодовитые самки.
По итогам гона и щенения анализировали воспроизводительные качества самок. Результаты обрабатывали статистически.
Параллельно мы сравнили эффективность искусственного осеменения с использованием шприца-катетера (семя вводят в шейку матки, но без прохождения её), изученного Е.П. Баутиной в 1973-1975 гг. на 157 лисицах, с внутриматочным осеменением, которое мы провели на 2044 самках этого вида животных.
Опыты с охлаждением семени проводили в 2007 г. Семя, разбавленное разными разбавителями, помещали в пенопластовую коробку и оставляли в холодильнике при 1 = -2.-4 °С. Затем его постепенно подогревали до температуры 19.20 °С и определяли выживаемость и подвижность сперматозоидов, а также оценивали характер их движений.
Результаты и обсуждение. На начало 2005 г. стадо лисиц в хозяйстве насчитывало 900 самок и было представлено 4 окрасами (серебристо-чёрные пушкинского типа - 700 гол., огнёвка Вятская из ООО «Зверохозяйство «Вятка» - 173 гол., жемчужная - 4 гол., снежная - 23 гол).
Для повышения экономической эффективности искусственного осеменения осенью 2005 г. на племзавод «Пушкинский» были завезены самцы и самки лисиц финской селекции серебристо-чёрные и прочих окрасов.
На начало 2006 г. стадо лисиц увеличилось до 950 гол. Стадо самок было представлено 5 окрасами (серебристо-чёрные пушкинские - 678 гол., серебристо-чёрные финского типа - 63 гол., огнёвки
- 190 гол., арктический мрамор финского типа - 4 гол., снежные - 13 гол., жемчужные - 2 гол.).
К 2007 г. поголовье самок достигло 1000 гол. При этом доля животных серебристо-черной пушкинской лисицы снизилась до 50,4 %, поголовье серебристо-чёрной лисицы финского типа увеличилось до 8,3 %, появились полукровки - 10,7 %, количество огнёвок осталось на прежнем уровне - 20 %. Доля животных с окрасом арктический мрамор достигла 1,0 % (10 гол.); снежная - 2,5 % (25 гол.); жемчужная и сиводушка - по 0,4 % (4 гол.); красная (полукровки) - 4,3 % (43 гол.); смоук, «огонь и лёд» (полукровка) и платиновая - по 0,3 % (3 гол.), беломордая и коликотт - по 0,2 % (2 гол.), появилась белая самка, полученная от покрытия снежной самки семенем
мраморного самца. В конце января 2007 г. из опытного хозяйства ГНУ НИИПЗК на племзавод завезли самок и самцов окрасов бургундия, санглоу, голд, сиводушка, коликотт. В этом же году они пошли в гон и дали приплод.В результате число окрасов в стаде достигло 16.
В 2008 г. поголовье выросло до 1100 самок. При этом доля серебристо-чёрных самок пушкинского типа сократилась до 36,6 (403 гол.), финского типа - до 7,5 % (83 гол.), полукровок увеличилась до 21,1 % (232 гол.), огневок осталась без изменений - 20 % (220 гол.). Количество животных с окрасом арктический мрамор составило 1,1 % (12 гол.), снежная - 4,5 % (50 гол.), жемчужная - 0,5 % (6 гол.), красная (полукровка) -2,7 % (30 гол.), красная финского типа - 1,8 % (20 гол.), смоук - 0,9 % (10 гол.), сиводушка - 1,1% (12 гол), «огонь и лёд» - 0,4 % (4 гол.), беломордая и коликотт
- по 0,5 % (5 гол.), платиновая и санглоу - по 0,3 % (3 гол.), бургундская - 0,1 % (1 гол.).
В целом искусственное осеменение выполнило свою задачу и обеспечило массовое прилитие крови при увеличении полигамии и снижении затрат на содержание самцов, а также расширение цветового разнообразия стада. Кроме того, удалось взять и криоконсервировать семя ценных самцов.
Сравнивая показатели продуктивности самок, осеменённых искусственно и покрытых естественно, без учёта их возраста, мы установили, что с 2006 по 2008 гг. наблюдался рост числа беременных самок при использовании искусственного осеменения с 70,1 до 87,0 % и к концу периода исследований величина этого показателя достигла уровня естественного покрытия, при котором она варьировала от 87,4 до 91,7 %.
Плодовитость при естественном покрытии составляла 6,4.6,7 щенков, после искусственного осеменения - 5,2...5,5 щенков.
Количество благополучно ощенившихся самок при естественном покрытии снижалось с 89,3 % в 2006 г., до 84,8 % в 2007 г. и 83,4 % в 2008 г., а при искусственном осеменении возрастало с 66,8 % в 2006 г., до 79,7 % в 2007 г. и 83,6% в 2008 г., что привело к выравниванию величин этого показателя. Аналогичный характер носило изменение выхода щенков на одну самку. При естественном покрытии он уменьшился с 5,5 до 5,1, а после искусственного осеменения увеличился с 3,4 до 4,3.
Известно [10], что при использовании для осеменения спермы разных самцов можно получать плодовитость сопоставимую с естественным спариванием. Однако в рамках проведения селекционно-племенной работы в звероводстве использование этого приема недопустимо.
На способность к воспроизводству и плодовитость самок влияет возраст, у взрослых самок лисицы они выше, чем у молодых. В 2006 г. 83,5 % самок, покрытых естественным путем, были взрослыми, тогда как среди искусственно осеменённых таких оказалось лишь 35,9 %. Доля забеременевших среди них составила соответственно 92,4 и 76,0 %, а среди молодых - 88,2 и 66,8 %. Благополучно родили 89,5 % взрослых самок, покрытых естественным путем и 72,6 % искусственно осемененных.
В 2007 г. среди покрытых естественно было 89,6 % взрослых самок, искусственно осеменённых - 46,9 %. Вне зависимости от возраста воспроизводственные показатели животных, оплодотворённых естественным путем уменьшались, а осеменённых искусственно -увеличивались.
В 2008 г. доля взрослых самок среди покрытых путем спаривания составляла 83,4 %, искусственно
осемененных - 56,4 %. Количество забеременевших взрослых и молодых самок, покрытых самцами, осталось на уровне 2006 г., а у искусственно осеменённых, возросло почти до величины этого показателя при естественном оплодотворении и составило по взрослым самкам - 87,1 %, а по молодым - 86,8 %. Доля благополучно ощенившихся взрослых самок при покрытии естественным путем снизилась до 84,6 %, по молодых - до 77,8 %. При использовании искусственного осеменения величина этого показателя у взрослых самок практически выровнялась (84,1 %), а по молодым даже превзошла (83,0 %) уровень покрытых самцами.
Увеличение показателей воспроизводства при использовании метода внутриматочного осеменения связано с усовершенствованием разбавителя семени и отбором лучших производителей по результатам щене-ния. Кроме того, в 2006 г. наряду с определением течки по состоянию внешних половых органов, поведению самки в присутствии самца-пробника, влагалищным мазкам, использовали метод определения охоты с помощью прибора Б1^1-3 по сопротивлению слизистой влагалища, показания которого часто расходились с другими способами определения охоты. Поэтому возникали спорные ситуации и самок осеменяли позже оптимального времени оплодотворения.
Анализ результатов воспроизводства лисиц при цервикальном (в шейку матки) и внутриматочном способе осеменения показал, что количество беременных самок при втором способе составило 81,5 %, или на 5,8 % больше, чем при цервикальном, а доля нормально ощенившихся самок оказалась выше на 12,6 %. Плодовитость и выход щенков при внутрима-точном осеменения были выше на 1 щенка, чем при цервикальном способе.
Самая лучшая выживаемость спермы после охлаждения отмечена в гликол-цитрат-желточной среде, в которой подвижность сперматозоидов после оттаивания составляла около 50.60 %.
Из 9 самок осемененных спермой полученной от самцов цветовых типов колликот голубой, перл и сапфир в зверосовхозе «Салтыковский» и доставленной в племзавод «Пушкинский» в охлажденном состоянии 7 (77,8 %) благополучно ощенились. Родился 31 щенок, плодовитость составила 4,4 щенка, а выход - 3,44.
В ходе исследований мы создали криобанк семени высокоценных производителей песцов и лисиц российской и финской популяций с разными типами окрасок. Он включает семя 15 цветовых типов лисицы, в том числе таких уникальных, как колликот, бургунди, перл, сапфир, санглоу, «огонь и лед», огневка вятская, арктический мрамор и 5 цветовых типов песца, в том числе вуалевого пушкинского типа и серебристого салтыковского типа, которых сегодня не выгодно разводить из-за низких цен на шкурки.
Выводы. Таким образом, использование репродуктивных технологий в звероводческих хозяйствах ускоряет селекционно-генетический прогресс и позволяет получать новые селекционные формы (желаемых типов и окрасов) лисиц в соответствии с требованиями рынка.
В сравнении с цервикальным способом, при использовании внутриматочного осеменения доля беременных самок увеличивается на 5,8 %, нормально ощенившихся - на 12,6 %, показатели плодовитости и выхода - на 1 щенка (Р>0,95).
При осеменении самок охлажденным семенем более 75,0 % самок благополучно ощенились, плодовитость составила 4,4 щенка, а выход - 3,44.
В созданном с целью сохранения генофонда криобанке находится семя 15 цветовых типов лисицы и 5 цветовых типов песца.
Литература.
1. Кудрявцев В.Б., Николаев О.А. Ускорение селекционного процесса с помощью искусственного осеменения.//Кролико-водство и звероводство. - 2002. - №6. - С. 8-9.
2. Clausen J. Raeveinseminering 1986// Dansk Pelsdyravl. - 1986. - T. 49. - №12. - P. 855- 857.
3. Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Лесин С.А., Воеводин В.А., Зиновьева Н.А., ЭрнстЛ.К., Калашников В.В., Солошенко В.А. Сохранение и рациональное использование генофонда животных.//Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2009. - № 2. - С. 37-40.
4. Багиров В. Генетические ресурсы животноводства.//Животноводство России. - 2008. - № 2. - С. 10-12.
5. Кудрявцев В.Б., Николаев О.А. Искусственное осеменение песцов и лисиц в «Гагаринском звероплемхозе»//Кролико-водство и звероводство. - 2004. - №4. - С.7-8.
6. Методы получения и криоконсервации семени для сохранения генетических ресурсов животных/ Насибов Ш.Н, Воеводин В.А, Багиров В.А., Иолчиев Б.С., Кленовицкий П.М., Амиршоев Ф.С., Лесин С.А.// Вестник Казанского ГАУ. - 2009. -Т. 18. - №4. - С. 139-141
7. Чекалова Т.М. Новое в методах определения оптимальных сроков спаривания у лисиц и песцов. - ЦБТИ Центросоюза, серия: «Кооперативное звероводство», М., 1984. - вып. № 2. - 20 с.
8. Aamdal J., Andersen K., Fougner J.A. Insemination with frozen semen in the Blue Fox//7 th. Int. Congr. on animalreproduction.-Munchen,1972.-P. 1713-1716.
9. Fougner J.A., Aamdal J., Andersen K. Intra uterine insemination with frozen semen in the bluefox// Vet. - Med. - 1973. - №25.
- P. 144-149.
10. Баутина Е.П. Методы взятия семени, его разбавление, хранение и использование для искусственного осеменения серебристо- черных лисиц; Автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.13. - ВИЖ, Дубровицы, М.О., 1978.- 19 с.
REPRODUCTIVE TECHNOLOGIES IN FUR FARMING A. R. Zhvakina, V.A.Bagirov, V.B. Kudrjavcev
Summary. Currently, there are several color types of foxes and arctic foxes (including imported from other countries) is not listed in the National Register of interest in terms of originality painting. Among the foxes is: sapphire sanglou, white-beaked, Smoke, fire and ice, including polar foxes, and others. At present, there was an urgent need for conservation and sustainable use of genetic resources, foxes and arctic foxes. To carry out this task was made possible by the use of artificial insemination, cryopreservation of semen, a Cryobank seed producers of various types and colors, and then use a valuable biomaterial. The purpose of research
- development of biotechnological methods for conservation and sustainable use of genetic resources, foxes and arctic foxes. From 2006 to 2008 years of Plemzavod «Pushkii» artificially inseminated by intra-vixen way in 2044, while pregnant women were 81.5%.
Conducted testing transport chilled semen insemination and male foxes they have obtained offspring (77.8 % of females successfully whelp). Created cryobank foxes and arctic foxes unique color types of Russian and Finnish selections. To Cryobank’s genetic material is preserved 15 color types of foxes, and 5 color types arctic foxes. Developed new krioprotektivnye environment, which, after thawing yield about 50-60% of sperm motility. Progeny obtained from the use of frozen-thawed semen.
Key words: cryobank semen, artificial insemination, broadening the range of manufactured furs, transported cooled semen.
