CC BY
162
© Ших Е.В., Дорофеева М.Н., 2015
Е.В. Ших, М.Н. Дорофеева
РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИНТЕРФЕРОН АЛЬФА-2Ь С АНТИОКСИДАНТАМИ (АЛЬФА ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТ И АСКОРБИНОВАЯ КИСЛОТА): ЭФФЕКТИВНОСТЬ С ТОЧКИ ЗРЕНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ КОМПОНЕНТОВ
ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова МЗ РФ, Москва, РФ
Shih E.V., Dorofeeva M.N.
RECOMBINANT INTERFERON ALPHA-2b WITH ANTIOXIDANTS (ALPHA TOCOPHEROL ACETATE AND ASCORBIC ACID): EFFICACY IN TERMS OF COMPONENTS INTERACTION
I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Russia
Антибактериальные и химиотерапевтические лекарственные средства часто применяются в терапии инфекционно-воспалительных заболеваний. Но такие факторы, как развитие резистентности микроорганизмов к этим препаратам и их многочисленные побочные эффекты, ставят перед современными специалистами проблему поиска методов рациональной фармакотерапии инфекционно-воспалительных заболеваний. В настоящей статье объясняются механизмы аддитивного эффекта антиоксидантов и интерферона (ИФН) на специфическую противовирусную активность ИФН, усиление его иммуномодулирующего действия, что позволяет повысить эффективность собственного иммунного ответа организма на патогенные микроорганизмы.
Ключевые слова: интерферон-альфа 2Ь, антиоксидант, токоферола ацетат, аскорбиновая кислота.
Antibacterial and chemotherapeutic drugs are commonly used in therapy of infectious and inflammatory diseases. However, such factors as development of microbial resistance to these drugs and their numerous side effects put a problem of searching for methods of rational pharmacotherapy of infectious and inflammatory diseases. This article explains the mechanism of additive effect of antioxidants and interferon (IFN) for the specific antiviral activity of IFN, increasing its immunomodulatory effects that can improve efficacy of immune response to pathogens. Key words: interferon alpha-2b, antioxidant, tocopherol acetate, ascorbic acid.
Интерфероны (ИФН) (лат. inter - взаимно, между собой и ferio - ударяю, поражаю) - ряд цитокинов, обладающих сходными свойствами и выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. «Определяемый в качестве интерферона фактор должен быть белковой природы, обладать антивирусной активностью по отношению к разным вирусам, по крайней мере,
в гомологичных клетках, опосредованной клеточными метаболическими процессами, включающими синтез РНК и белка» [1].
Для классификации ИФН рекомендована система международной номенклатуры, основанная на различиях антигенных, биологических и физико-химических свойств. В настоящее время у человека выделяют 9 видов ИФН,
Контактная информация:
Ших Евгения Валерьевна - д.м.н., проф. каф.
клинической фармакологии ГБОУ ВПО Первый
МГМУ им. И.М. Сеченова МЗ РФ
Адрес: Россия, 119991, г. Москва,
ул. Трубецкая, 8, стр. 2
Тел.: (924) 388-72-68,
E-mail: margaritadorofeeva@yandex
Статья поступила 17.08.15,
принята к печати 26.08.15.
Contact Information:
Shih Evgenia Valer'evna - Ph.D., prof. of Clinical
Pharmacology Department, I.M. Sechenov First
Moscow State Medical University
Address: Russia, 119991, Moscow,
Trubetskaya str., 8/2
Теl.: (924) 388-72-68,
E-mail: margaritadorofeeva@yandex
Received on Aug. 17, 2015,
submitted for publication on Aug. 26, 2015
149
Таблица 1 Интерфероны и их рецепторы
Семейство Типы интерферона
I ШЫа, IFNß, IFNs, IFNk, IFN®
II IFNy
III U, A,2 и X3
отличающихся по способности взаимодействовать с 3 типами рецепторов (табл. 1).
Существуют естественные ИФН, полученные из лейкоцитов и лимфоцитов донорской крови, и рекомбинантные, полученные генно-инженерным способом. Отличительной особенностью рекомбинантных ИФН является то, что они продуцируются вне организма человека бактериальными штаммами (Escherichia coli, Pseudomonas putida, дрожжи), в генетический материал которых встроен ген человеческого ИФН. Технология производства рекомбинантных ИНФ заключается в том, что внутрь клетки специальным способом помещается плазмида pSX50 - важная часть клетки, отвечающая за продукцию белков, которая, находясь внутри клетки, начинает вырабатывать рекомбинантный лейкоцитарный ИФНа, который по своим характеристикам абсолютно идентичен ИФН, вырабатываемому в норме человеческим организмом. В зависимости от содержания аминокислот выделяют а2а-ИФН и а2Ь-ИФН, которые существенно не отличаются по клинической эффективности и безопасности. В последние годы разработаны пегилированные ИФН, получаемые путем присоединения к молекуле ИФН поли-этиленгликоля. Механизм действия ИФН 1-го типа (а, ß) заключается в экспрессии генов, нарушающих проникновение вируса в клетку и трансляцию вирусных белков, а также запускающих апоптоз инфицированных клеток [2]. Кроме того, ИФН участвуют в каскаде цитоки-новых реакций, индуцируя выработку ФНОа, интерлейкинов (ИЛ) 1, 6, 18 и других противовоспалительных факторов. Установлено, что под влиянием ИФН в организме усиливается активность естественных киллеров, цитотоксиче-ских Т-лимфоцитов, Т-хелперов, фагоцитарная активность, экспрессия антигенов HLA-систе-мы 1-го и 2-го типов [3].
ИФН применяются в клинической практике более 30 лет [4]. Важным достоинством препаратов ИФН является их естественность для организма, обусловливающая минимальную токсичность и возможность применения в детском возрасте. Введение экзогенного ИФН позволяет мобилизовать противовирусную защиту быстрее, чем в процессе выработки собственного ИФН, сократить сроки течения и снизить интенсивность воспаления, вызванного вирусами [5].
Преимущества ректальной формы ИФН с точки зрения фармакокинетических параметров
Являясь белками, ИФН разрушаются в желудочно-кишечном тракте, поэтому достаточ-
но долго преимущественным способом введения оставался парентеральный. При внутримышечном и подкожном введении биодоступность составляет 80%, максимальная концентрация в крови достигается в среднем через 3,8 ч. Установлено, что при внутривенном капельном введении 6-9 млн МЕ ИФНа2Ь (реаферон) в течение 1 ч ИФН определялся в сыворотке крови уже через 30 мин от начала введения [6]. Через 2,5 ч титры ИФН снижались на 50%, спустя 4 ч определялись только его следовые количества. Известно, что почки выводят ИФН по крайней мере со скоростью 2% в минуту, таким образом, очищение плазменного пула происходит меньше чем через час. Введение больших доз ИФН, помогающих преодолеть эти быстрые потери, ограничено токсическим порогом действия препарата на ЦНС, а также подавлением системы иммунитета. При внутримышечном введении ИФН поступает в системный кровоток через капилляры, уровень ИФН в плазме снижается медленнее по сравнению с внутривенным введением. При внутримышечном введении повышенное содержание ИФН в плазме регистрируется в период от 1 до 6 ч, снижение до исходного уровня определяется через 12 ч после введения препарата.
В экспериментальном изучении фармако-кинетических параметров рекомбинантного ИФНа2Ь с антиоксидантами (витамины Е и С) (ВИФЕРОН®) у новорожденных и половозрелых кроликов было показано, что введение ИФН в виде суппозиториев в прямую кишку приводит не только к высокому содержанию препарата в плазме крови, но и более длительной циркуляции высоких концентраций ИФН, чем при его введении через катетер (табл. 2) [7].
Расчет фармакокинетических параметров показал, что относительная биодоступность при введении препарата ВИФЕРОН® ректально в виде суппозиториев в дозе 150 000 МЕ новорожденным животным составляет 1,5 по сравнению с введением той же дозы ИФН животным через катетер. У половозрелых кроликов относительная биодоступность при введении препарата ВИФЕРОН® ректально в дозе 150 000 МЕ составляет 1,23 по сравнению с введением той же дозы животным через катетер (табл. 3).
Таким образом, сравнительный анализ основных фармакокинетических параметров рекомбинантного ИФНа2Ь с антиоксидантами, характеризующий биоэффективность препарата, показал, что его применение в виде ректальных суппозиториев имеет значительное преимущество перед введением с помощью катетера.
Интересные данные были получены при изучении терапевтической эффективности лимфо-бластного ИФНа в виде ректальных суппозиториев у 28 больных хроническим вирусным гепатитом С. Авторами было показано, что назначение низких доз (1000 МЕ) ИФН в течение 4 недель способствовало снижению уровня РНК вируса гепатита С с 5,65±0,18 до 5,17±0,7,65 Log МЕ/мл (р=0,01), повышению активности
150
Таблица 2
Динамика концентрации рекомбинантного ИФН^2Ь с антиоксидантами в плазме крови у новорожденных и взрослых кроликов при разных способах введения
Время после введения препарата Новорожденные кролики Взрослые кролики
Концентрация ИФН, МЕ/мл
введение в виде суппозиториев введение через катетер введение в виде суппозиториев введение через катетер
30 мин 19,2±3,2 16,0±4,4 28,8±3,2 25,6±3,9
1 ч 22,4±3,8 16,0±4,4 25,6±3,9 25,6±3,9
2 ч 19,2±3,2 16,0±4,4 25,6±3,9 17,6±3,9
3 ч 19,2±3,2 16,0±4,4 22,4±3,9 14,8±5,0
4 ч 19,2±3,2 12,8±2,0 14,4±1,6 15,2±4,8
5 ч 20,8±4,8 10,4±2,4 12,8±2,0 12,0±2,5
6 ч 10,4±2,4 1,8±0,58 9,0±3,0 3,8±1,3
7 ч 10,4±2, 1,8±0,24 4,8±0,8 3,8±1,3
8 ч 1,6±0,24 1,6±0,24 1,6±0,24 1,6±0,24
Таблица 3
Основные фармакокинетические параметры рекомбинантного ИФН^2Ь с антиоксидантами при разных способах введения новорожденным и взрослым кроликам
Фармакокинетические параметры Новорожденные кролики Взрослые кролики
введение в виде суппозиториев введение через катетер введение в виде суппозиториев введение через катетер
Концентрация-время АиС МЕ, мин/мл 7,58±0,34 4,96±0,24 7,4±0,45 5,97±0,69
Произведение времени на концентрацию-время АиМСМЕ, мин2/мл 1,58±0,12 0,865±0,044 1,3±0,09 0,997±0,15
Клиренс С1, мл/мин 208,6±10 175,9±10 175,0±4,96 163,8±6,97
Период полувыведения Т1/2, мин 19,9±0,9 30,6±1,6 20,6±1,4 26,7±3,4
Максимальная концентрация С ^тах 32,0±3,2 25,6±3,9 32,0±3,2 32,0±3,2
Время достижения максимальной концентрации Т Атах 162,0±52 96,0±35 36,6±6 42,0±7,3
Относительная биодоступность í 1,5 1,23
2'-5'олигоаденилат синтетазы и достоверному снижению соотношения СБ4/СБ8, что позволило сделать вывод, что ректальный способ введения ИФН является безопасным и эффективным и может рассматриваться в качестве альтернативы внутривенному способу [8].
Клинико-фармакологические аспекты преимуществ комбинации ИФН с антиоксидантами.
Фармакокинетическое взаимодействие
В исследовании П.А. Джумиго [9] проведено изучение накопления ИФН у здоровых добровольцев, которые были разделены на 3 группы в зависимости от способа введения препарата: в 1-й группе ИФНа2Ь (реаферон) вводился рек-тально в виде клизмы однократно в дозе 1 000 000 МЕ; во 2-й группе ректальное введение препарата ИФНа2Ь (реаферон) сочеталось с одновременным внутримышечным введением 2 мл 30% масляного раствора а-токоферола ацетата; в 3-й - ректальное введение препарата ИФНа2Ь
(реаферон) сочеталось с одновременным внутримышечным введением 2 мл 30% масляного раствора а-токоферола ацетата и 2 мл 10% раствора аскорбиновой кислоты.
Во всех группах проводилось определение концентрации ИФН в сыворотке крови перед введением и через 1, 2, 4, 8, 12 и 24 ч после его введения.
Исследование фоновых уровней ИФН в крови перед назначением ИФНа2Ь в 1-й группе показало, что высокие титры ИФН выявляются уже через 1 ч после его введения, причем максимальные титры ИФН приходились на промежуток времени, соответствующий 1 и 2 ч после его введения. Через 4 ч концентрация препарата снижалась в 2-4 раза. У одного добровольца этой группы концентрация ИФН в плазме крови возвращалась к фоновым значениям спустя 8 ч. У остальных волонтеров начальные титры ИФН не отличались от таковых в порциях плазмы крови, полученных через 12 ч после введения ИФНа2Ь (реаферона).
151
Сочетание ИФНа2Ь (реаферона) с внутримышечным введением витамина Е (а-токоферола ацетата) изменяло динамику накопления ИФН в сыворотке крови добровольцев 2-й группы. Через 1 ч после введения препаратов наблюдалось повышение уровня ИФН по сравнению с исходными значениями в 4-8 раз, но максимальные уровни сывороточного ИФН были отмечены в порциях сывороток, полученных через 4 ч после введения рекомбинантного ИФН. Через 8 ч титры ИФН у большинства добровольцев оставались более высокими, чем фоновые. Через 12 ч у добровольцев уровень ИФН в плазме крови продолжал снижаться, а у одного волонтера наметилась тенденция к его повышению.
В последней группе, где применение ИФН а2Ь сочеталось с введением двух антиоксидантов (витамин Е и С), повышение уровня сывороточного ИФН регистрировалось через 1 ч после ректального введения. Наиболее высокие показатели у доноров были отмечены через 2 ч после введения комбинации препаратов. К 8 ч происходило снижение титров сывороточного ИФН, но после этого срока до 12 ч сывороточный ИФН держался на высоком уровне и к 24 ч уровни его в 4-8 раз превышали первоначальные фоновые значения сывороточного ИФН.
Сравнение фармакокинетики ректального введения ИФНа2Ь (реаферона), как отдельно, так и в комплексе с антиоксидантами, выявило ощутимые различия. При ректальном введении препарата удается достичь быстрых высоких концентраций ИФН в сыворотке испытуемых, тогда как сочетание с антиоксидантами ведет к постепенному повышению титров ИФН. Так, использование одного ИФНа2Ь дает повышение титров ИФН через 1 ч после введения, а комбинированное применение с антиоксиданта-ми демонстрирует максимальные показатели ко 2-4 ч. Добавление одного из антиоксидантов приводит к быстрой элиминации экзогенного ИФН - возвращение к фоновым показателям наблюдается через 8-12 ч, в то время как сочетание двух антиоксидантов ведет к более длительной циркуляции экзогенно введенного ИФНа2Ь в токе крови и сохранению высоких показателей ИФН через 12 ч наблюдения.
Таким образом, было показано, что ректальное применение ИФНа2Ь дает возможность достичь высоких уровней сывороточного ИФН при относительно небольших дозах препарата, что повышает безопасность его использования и позволяет избежать нежелательных явлений, которые наблюдаются при введении больших доз ИФН (головная боль, артралгии, лейкопения). Применение антиоксидантов также препятствует быстрой элиминации препарата из крови - в течение 12 ч и более.
Фармакодинамическое взаимодействие: изменение противовирусной активности ИФН в присутствии антиоксидантов
Известным является факт взаимосвязи функ-
ционирования системы ИФН и интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран клеток: установлено, что при нормальных уровнях продукции ИФН при нарушении баланса ПОЛ и антиоксидантной защиты (АОЗ) вследствие развития инфекционного заболевания происходит быстрая инактивация как эндогенного, так и экзогенного ИФН и как следствие нарушение противоинфекционной защиты организма.
При составлении лекарственной формы в конечную комбинацию добавляются антиокси-данты. С одной стороны, добавление антиокси-дантов препятствует окислительному разрушению молекул ИФН и способствует сохранению более длительное время фармакологической активности лекарственного средства. С другой стороны, в ряде экспериментальных исследований продемонстрировано наличие у антиокси-дантов противовирусной активности и иммуно-модулирующего эффекта [10, 11].
Инфекционно-воспалительные процессы в организме индуцируют сдвиг в системе ПОЛ-АОЗ в сторону повышения интенсивности ПОЛ, при этом процессы ПОЛ усиливают выход про-теаз из лизосом поврежденных клеток, что обусловливает снижение продукции ИФН и эффективности его действия. Снижение антиокислительного резерва организма создает условия для усиления повреждающего действия продуктов ПОЛ на мембраны клеток. При этом особую опасность вирусная инфекция представляет в раннем периоде развития организма, при котором наблюдаются низкий уровень антиокислительной активности и интенсивный катаболизм липидов [12, 13].
Данное предположение было подтверждено в ходе исследования на мышах, инфицированных вирусом гриппа типа А [14]. На высоте развития инфекции (3-5-й день) наблюдались сдвиги в системе ПОЛ-АОА в сторону снижения АОА сыворотки (на 33%), при этом концентрация малонового диальдегида (МДА) увеличивалась на 82,1%, что совместно с отмеченным снижением устойчивости тканей легкого и печени свидетельствовало о сдвиге равновесия в пользу ПОЛ. Снижение антиокислительного резерва организма, спровоцированное вирусной инфекцией, создавало возможности более выраженной реализации повреждающего действия продуктов ПОЛ на клеточные структуры. Предварительные исследования экзогенного введения витамина Е при вирусной инфекции у мышей показали повышение АОА плазмы и снижение концентрации МДА.
После этих предварительных опытов была проведена серия исследований, при которых витамин Е вводился взрослым и новорожденным мышам в день инфицирования и последующие 2 дня в дозировке 10 мг/кг, ИФН вводили 2 раза в день в течение 3 дней, суммарная доза на мышь составляла 1600 ЕД.
У взрослых и у новорожденных мышей отмечено повышение противовирусного эффекта ИФН
152
ВИФЕРОН
Бережная защита от вирусов
при совместном введении с а-токоферола ацетатом, что фиксировалось по уровню ингибиции репликации вируса гриппа в легких у мышей.
В других литературных источниках [10] опубликованы результаты исследования противо-герпетической активности комбинаций ИФНа-2Ь и антиоксидантов (димеркаптопропансуль-фонат (унитиол), аскорбиновая кислота, амино-этансульфоновая кислота (таурин)) в культуре клеток почки африканской зеленой мартышки VeroE6 в отношении эталонного варианта вируса простого герпеса штамм Л2. С целью оценки цитотоксичности и противовирусной активности соединений был использован химиотерапевтиче-ский индекс (ХТИ), значение которого должно соответствовать 3 и более, а также рассчитаны данные об эффективности комбинаций с помощью фракционно-ингибирующего компонента (ФИК). Авторами сделан вывод о том, что анти-оксиданты унитиол и аскорбиновая кислота не только обладают прямой противогерпесвирус-ной активностью (ХТИ унитиола и аскорбиновой кислоты 3,9 и 5,21 соответственно), но и обеспечивают более высокую эффективность ИФНа-2b при его применении в комбинации. Так, при комбинировании унитиола или аскорбиновой кислоты с ИФНа-2b наблюдается выраженный синергидный эффект: в присутствии указанных соединений концентрация ИФНа-2^ которая предотвращает развитие вирусиндуцирован-ного цитопатического действия в 50% лунок, снижается в несколько раз в зависимости от концентрации антиоксидантов. При сочетании ИФН с унитиолом наблюдалось снижение концентрации в 5 с лишним раз, при этом значение ФИК составило в среднем 0,3, что свидетельствует о выраженном синергизме соединений. При комбинировании ИФН и аскорбиновой кислоты ИД50 ИФН снижается практически в 6 раз, а значение ФИК в среднем составляет 0,23, что показывает выраженный синергизм соединений.
При комбинации ИФН и таурина не выявлено влияния таурина на специфическую противо-герпесвирусную активность ИФН: в присутствии различных концентраций таурина специфическая противогерпетическая активность ИФН соответствовала таковой чистой субстанции.
Аналогичные исследования по изучению противовирусной активности комбинаций ИФН a-2b с а-токоферола ацетатом, таурином, уни-тиолом и аскорбиновой кислотой проводили и в отношении вируса гриппа A/H5N1 при инфекционной множественности заражения вируса 1,0 ТЦД50/лунку в культуре клеток эмбриона легкого человека [11]. Было установлено, что использование ИФНa-2b в концентрациях от 1000 до 10000 МЕ/мл в комбинации с раствором а-токоферола ацетата, унитиола или аскорбиновой кислоты позволило повысить противовирусную активность ИФН в несколько раз, т.е. наблюдался синергидный эффект. В этом исследовании продемонстрировано, что при комбинировании ИФНa-2b и таурина не наблюдали не
Лечение и профилактика широкого спектра вирусных и вирусно-бактериальных инфекций (ОРИ, в том числе грипп, герпесвирусные и урогенитальные инфекции, вирусные гепатиты В, С и 0).
БЛОКИРУЕТ
размножение вируса
ЗАЩИЩАЕТ
здоровые клетки от заражения
ВОССТАНАВЛИВАЕТ
баланс иммунной системы
РАЗРЕШЕН детям с первых дней жизни и будущим мамам с 14 недели беременности
СОЧЕТАЕТСЯ с другими противовирусными и антибактериальными препаратами
Я*
Л^ШЕЕОН
Р N 001142/02
1
Р N 000017/01 © Виферон Суппозитории
фврон I (499)1933060 | viferon.su
только синергидного эффекта комбинации, но и аддитивного действия: противовирусная активность ИФНа-2Ь как в комбинации с таурином, так и без него была одной и той же.
Интересные данные были получены при изучении влияния двух вариантов антиоксидантной терапии у пациентов с хроническим гепатитом С, ранее не получавших ИФНа [12]. Больные были рандомизированы в 3 группы по 8 пациентов в каждой: 1-я группа получала монотерапию ИФН (3x4,5 млн единиц ИФНа-2Ь в неделю), 2-я группа - ИФН и N-ацетилцистеин (NAC) 1800 мг/день плюс селенит натрия (Se) 400 мкг/день в качестве дополнения и пациенты 3-й группы к схеме лечения 2-й группы добавлен витамин Е (544 МЕ/день). Терапию проводили в течение 24 недель. Анализ полученных данных показал, что нормализация уровня АЛТ и снижение уровня РНК вируса гепатита С в конце лечения были достигнуты у 3 из 8 пациентов, получавших монотерапию ИФН, у 2 пациентов, получавших ИФН/NAC/Se, и у 6 пациентов, получавших ИФН^АС^е/витамин Е (р=0,11, тест X2). Анализ общего полного ответа лечения с включением витамина Е (6 респондентов из 8) по сравнению с лечением без витамина Е (5 респондентов из 16) выявил отношение риск 2,4 (95% ДИ: 1,05; 5,50) в пользу пациентов, получавших витамин Е. Авторы сделали вывод, что витамин Е изолированно или в комбинации с гидрофильными (NAC/Se) антиоксидантами усиливает противовирусную эффективность ИФНа.
Иммуномодулирующее действие витаминов-антиоксидантов
Существует целый ряд фундаментальных исследований, которые подтверждают иммуно-модулирующую активность аскорбиновой кислоты. Аскорбиновая кислота повышает количество лимфоцитов, хемотаксис и активность нейтро-фильных лейкоцитов, увеличивает продукцию ИФН, стимулирует макрофаги, усиливает продукцию ими высокоактивных форм и соединений кислорода [13, 14]. Эксперименты показали, что при дозировке от 500 мг до 3 г в день аскорбиновая кислота ускоряет деление лимфоцитов в ответ на внешнюю агрессию вирусов. Также в ряде исследований выявлено, что витамин С концентрируется в нейтрофилах, которые принимают участие в уничтожении носителей инфекции с помощью свободных радикалов, при этом сами нейтрофилы, содержащие аскорбиновую кислоту, защищены от повреждающего действия свободных радикалов [15]. В других работах, посвященных изучению влияния аскорбиновой кислоты на течение и прогноз респираторных инфекций, было показано, что прием витамина С более 1 г/сут не оказывает влияние на частоту простудных заболеваний, но снижает продолжительность и тяжесть клинической симптоматики, что, безусловно, имеет важное экономическое значение [16]. В экспериментальных исследованиях, проводимых Y. Kim и соавт.,
было изучено влияние витамина С на антивирусную защиту у мышей, зараженных интрана-зально вирусом гриппа А (Н3^/1/68/Гонконг) [14]. Мыши были разделены на 3 группы: 1-я группа - дикие мыши, способные продуцировать самостоятельно витамин С; 2-я группа - мыши, у которых был инактивирован фермент L-gulono-y-lactone oxidasel (Gulo), необходимый для биосинтеза аскорбиновой кислоты, и которые получали питьевой раствор витамина С в дозе 3,3 г/л в течение 3 недель; 3-я группа - мыши (Gulo), не получавшие аскорбиновую кислоту. При анализе результатов исследования установлено резкое повышение в крови провоспалительных цитоки-нов ИЛ1а, ИЛ^, ФНОа у мышей 3-й группы. Известным фактом является то, что провоспали-тельные цитокины отвечают за универсальную реакцию организма на внедрение возбудителя и чрезмерная продукция этих цитокинов влечет за собой выраженное повреждение тканей с последующим развитием некроза. Ученые сделали заключение, что витамин С является важным фактором для реализации иммунного ответа на ранней стадии вирусной инфекции, а поддержание достаточного уровня аскорбиновой кислоты в плазме может эффективно предотвратить в естественных условиях развитие вируса гриппа на начальной стадии вирусной инфекции [17].
Витамин Е наряду с тем, что является классическим антиоксидантом, обладает иммуностимулирующим эффектом, усиливая передачу сигнала для активации иммунокомпетентных клеток в ходе иммунного ответа. В частности, потенцирует сигналы для выработки CD4+ лимфоцитами ИЛ2 и ИФН, предупреждает образование связей между низкомолекулярными соединениями с белками организма в печени и крови. В результате этого тормозится укрупнение иммунных комплексов и повреждающих молекул. Такой эффект, очевидно, обусловлен антиоксидантными свойствами препарата. При иммунодефицитах витамин Е способствует защите Т- и В-лимфоцитов от угнетающего действия свободных радикалов, и, как следствие, нормализует активность иммунной системы [18].
Сотрудники Department of Public Health, University of Helsinki (Финляндия) в рамках анализа результатов обследования the Alpha-Tocopherol Beta-Carotene Cancer Prevention Study у 21 796 мужчин-курильщиков провели исследование частоты простудных заболеваний. Среди лиц 65 лет и старше частота простудных заболеваний была несколько ниже при приеме витамина E; это сокращение было самое большое среди пожилых жителей города, кто курил менее 15 сигарет в день [19].
В литературе имеются публикации, подтверждающие эффективность приема витамин-но-минеральных комплексов для снижения риска заболеваний острыми респираторными вирусными инфекциями [20]. Было показано, что среди людей, принимавших биологически активные добавки с витамином Е, заболе-
154
ваемость инфекциями была на 30% меньше. Поскольку с возрастом уровень заболеваемости и смертности от инфекций и опухолевых процессов повышается, ряд исследователей указывает в своих работах на необходимость приема витамина Е у людей пожилого возраста с целью улучшения общего иммунного ответа [21, 22].
Таким образом, было показано, что применение комплексов, содержащих витамины-антиоксиданты, для активации неспецифического иммунитета более эффективно, чем прием отдельных компонентов.
Заключение
Рекомбинантный человеческий ИФНа-2Ь вызывает экспрессию генов, нарушающих проникновение вируса в клетку и трансляцию вирусных белков, а также запускает механизм апоптоза инфицированных клеток. а-токоферола ацетат и аскорбиновая кислота обладают собственной противовирусной активностью, усиливают противовирусное действие ИФН, сохраняют его биологи-
ческую активность в лекарственной форме и способствуют стимуляции неспецифического иммунитета. Эти соединения не изменяют активности ферментов метаболизма и не оказывают влияния на эффективность и безопасность других лекарственных препаратов. Сочетание ИФНа-2Ь реком-бинантного и высокоактивных антиоксидантов: а-токоферола ацетата и аскорбиновой кислоты позволяет снизить терапевтически эффективную концентрацию ИФНа-2Ь и избежать нежелательных явлений интерферонотерапии. В присутствии аскорбиновой кислоты и а-токоферола ацетата специфическая противовирусная активность ИФН возрастает в несколько раз и усиливается его иммуномодулирующее действие, что приводит к повышению эффективности собственного иммунного ответа организма на патогены.
Комбинация рекомбинантного человеческого ИФНа-2Ь с антиоксидантами (витамины Е и С) является рациональной и может быть использована для терапии целого ряда заболеваний у детей и взрослых.
Литература
1. Stewart WE. In: The interferon system. Verlag/Wein-New-York: Springer, 1979: 421.
2. Ершов Ф.И. Система интерферонов в норме и при патологии. М.: Медицина, 1998: 238 с.
3. Щеплягина ЛА., Круглова И.В. Возрастные особенности иммунитета у детей. Русский медицинский журнал. 2009; 23: 39-43.
4. Афанасьева С.С., Онищенко Г.Г., Алешкина ВА и др. Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитации больных. М.: Триада-Х, 2005: 767 с.
5. Mangan NE, Fung KY. Type I interferons in regulation of mucosal immunity. Immunol. Cell. Boil. 2012; 90 (5): 510519.
6. Малиновская В.В., Деленян Н.В., Ариненко Р.Ю., Мешкова Е.Н. Виферон: Руководство для врачей. М.: WORD, 2001: 53 с.
7. Соков Б.Н., Шаманек Т.П., Деланян Н.В. и др. Отчет. Сравнительная оценка биодоступности Виферона при его введении в виде суппозиториев и через катетер. Серпухов: МЗ и МП РФ, Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов, 1996: 195 с.
8. Haruna Y, Inoue A. Minimal dose interferon suppository treatment suppresses viral replication with platelet counts and serum albumin levels increased in chronically hepatitis C virus-infected patients: a phase 1b, placebo-controlled, randomized study. J. Interferon Cytokine Res. 2014; 34 (2): 111-116.
9. Джумиго ПА Интерферонообразование и продукция специфических антител в процессе комбинированной терапии реафероном и антиоксидантами у больных простым рецидивирующим герпесом: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. М., 1990: 24 с.
10. Васильев А.Н. Оценка влияния антиоксидантов на специфическую противовирусную активность интерферона альфа-2Ь человеческого рекомбинантного в отношении вируса простого герпеса в культуре клеток. Антибиотики и химиотерапия. 2010; 55 (7-8): 21-25.
11. Васильев А.Н., Дерябин П.Г., Галегов ГА. Противовирусная активность антиоксидантов и их комбинаций с интерфероном альфа-2Ь человеческим рекомбинантным в отношении вируса гриппа птиц A/H5N1. Цитокины и воспаление. 2011; 56 (9-10): 27-32.
12. Look Markus P, Gerard, Alexandra, Rao Govind S,
Sudhop Thomas. Interferon/antioxidant combination therapy for chronic hepatitis C - a controlled pilot trial. Antivirul research. 1999; 43: 113-122.
13. Kojo S. Vitamin C: basic metabolism and its function as an index of oxidative stress. Curr. Med. Chem. 2004; 11: 1041-1064.
14. Yejin Kim, Hyemin Kim, Seyeon Bae, Jiwon Choi, Sun Young Lim, Naeun Lee, Joo Myung Kong, Young-il Hwang, Jae Seung Kang, and Wang Jae Lee. Vitamin C Is an Essential Factor on the Anti-viral Immune Responses through the Production of Interferon-a/ß at the Initial Stage of Influenza A Virus (H3N2) Infection. Immune Netw. 2013; 13 (2): 70-74.
15. Wintergerst ES, Maggini S, Hornig DH. Immune-enhancing role of vitamin C and zinc and effect on clinical conditions. Ann. Nutr. Met. 2006; 50: 85-94.
16. Anderson R, Oosthuizen R, Maritz R, Theron A, Van RensburgAJ. The effects of increasing weekly doses of ascorbate on certain cellular and humoral immune functions in normal volunteers. Am. J. Clin. Nutr. 1980; 33: 71-76.
17. Douglas RM, Hemila H, Chalker E, Treacy B. Vitamin C for preventing and treating the common cold. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2007; Issue 3. Art. No.: CD000980. DOI: 10.1002/14651858.CD000980.pub3.
18. Meydani SN, Han SN, Wu D. Vitamin E and immune response in the aged: molecular mechanism and clinical implications. Immunol. Rev. 2005; 205: 269-284.
19. The Alpha-Tocopherol, Beta Carotene Cancer Prevention Study Group. The effect of vitamin E and beta carotene on the incidence of lung cancer and other cancers in male smokers. N. Engl. J. Med. 1994; 330 (15): 1029-1035.
20. Graat JM, Schouten EG, Kok FJ. Effect of daily vitamin E and multivitamin/multimineral supplementation on acute respiratory tract infections in elderly persons. J. Am. Med. Assoc. 2002; 288: 715-721.
21. De la Fuente M, Ferrandez MD, Burgos MS, Soler A, Prieto A, Miquel J. Immune function in aged women is improved by ingestion of vitamins C and E. Can. J. Physiol. Pharmacol. 1998; 76: 373-380.
22. Park OJ, Kim HYP, Kim WK, Kim YJ, Kim SH. Effect of vitamin E supplementation on antioxidant defense systems and humoral immune response in young, middle-aged and elderly Korean women. J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2003; 49: 94-99.
4
155
