CC BY
17
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
имплантации и развития оплодотворенной яйцеклетки. Ранее нами был выявлен дефицит и дисбаланс фактора стромальных клеток SDF-1a и трансформирующего фактора роста TGF-P в сыворотке крови и семенной плазме бесплодных пациентов. Понимание, какие цитокины и каким образом вовлечены в снижение фертилизацион-ного потенциала эякулята, принципиально для дизайна терапии репродуктивной патологии различного происхождения, в том числе идиопатических форм мужского бесплодия.
Цель. Оценка влияния препарата карнитина на уровень некоторых хемокинов и факторов роста в семенной плазме при инфертильности неясного генеза.
Материалы и методы. Под наблюдением находилось 69 мужчин в возрасте 23-39 лет, состоящих в бесплодном браке от 1 года до 8 лет (основная группа). Пациенты получали L-карнитина тартрат (по 0,5 г дважды в сутки пе-рорально) в течение 3 мес., что соответствует продолжительности сперматогенеза. Группу сравнения (контроль) составили 30 фертильных мужчин, имеющих 1-3 здоровых детей. Исследование спермы проводили по протоколу Всемирной организации здравоохранения (2010). В семенной плазме определяли уровень цитокинов им-муноферментным методом с помощью наборов фирмы BCM Diagnost (США) по стандартному протоколу согласно рекомендациям производителя. Для статистической обработки использовали пакет программ MS Excel 2003 SPSS 12.0 для Windows. О достоверности различий между средними величинами судили по t-критерию Стьюдента.
Результаты. При анализе спермограмм пациентов при приеме препарата статистически значимых изменений концентрации сперматозоидов, содержания патологических форм и двигательной активности установлено не было, несмотря на выраженную тенденцию к нормализации последнего показателя, что не соответствует литературным данным о положительном эффекте карнитина на моторику и другие свойства гамет.
Особенностью цитокинового статуса семенной жидкости фертильных пациентов явилось преобладание хемокинов и ростовых факторов (SDF-1a, IL-8, IL-7 и TGF-P), превалирование уровня отдельных противовоспалительных цитокинов (IL-4 и IL-5) и относительно низкое содержание провоспалительных медиаторов (IL-1P, IL-18 и TNFa). Доминирование фактора стро-мальных клеток и трансформирующего фактора роста обеспечивает создание привилегированного иммунного положения сперматогенного эпителия и низкую имму-ногенность эякулята, которые ранее связывали главным образом с гематотестикулярным барьером. У бесплодных пациентов обнаружены выраженные сдвиги цитокино-вого зеркала семенной плазмы: снижение концентрации и нарушение соотношения SDF-1a и TGF-P, регуляторов иммунных/пролиферативных процессов в гаметах, причастных также к индукции молекулярных и клеточных изменений в эндометрии при имплантации. Что касается провоспалительных цитокинов, то увеличения их содержания, которое является серьезным препятствием для осуществления основной функции сперматозоидов, не найдено.
Для коррекции выявленных изменений нами был использован L-карнитин, обладающий выраженной анти-оксидантной, мембранопротекторной и липотропной активностью. Цитокиновый профиль спермоплазмы пациентов основной группы на фоне препарата претерпевал определенные изменения. Прием карнитина
сопровождался статистически значимым увеличением концентрации SDF-1a, IL-7 и TGF-ß практически до показателей фертильных мужчин. Нормализация уровня этих цитокинов имеет первостепенное значение для восстановления оплодотворяющей способности сперматозоидов, поскольку им принадлежит ключевая роль в формировании толерантности половых клеток и повышении рецептивности матки к оплодотворенной яйцеклетке.
Заключение. Таким образом, карнитин является эффективным средством коррекции цитокинового статуса эякулята, что позволяет рекомендовать его включение в качестве базисного компонента эмпирической терапии идиопатического бесплодия.
РЕГУЛЯЦИЯ ЭНДОГЕННЫМ МЕЛАТОНИНОМ Т-КЛЕТОЧНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ Th17 И Treg В ПЕРИОД ГЕСТАЦИИ
Глебездина Н.С.1, Олина А.А.2, Некрасова И.В.1, Куклина Е.М.1
1 Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия
2 ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ, Пермь, Россия
Эпифизарный гормон мелатонин регулирует широкий спектр биологических реакций, в том числе играет важную роль во время беременности: будучи эффективным антиоксидантом, он защищает ткани плода и плаценты от окислительных повреждений. В то же время, гормон является эффективным иммунорегулятором, и изменение его уровня в период гестации должно сказываться на активности иммунных процессов. Особый интерес представляет роль мелатонина в контроле баланса двух Т-клеточных субпопуляций, Th17 и Treg: с одной стороны, этот баланс важен для успешного развития беременности; с другой стороны, клетки Th17 и Tregs находятся под непосредственным контролем мелатонина, поскольку экспрессируют специфические мембранные рецепторы для гормона, МТ1 и МТ2, а один из двух диф-ференцировочных факторов для Th17 — RORa — эффективно регулируется мелатонином и до недавнего времени рассматривался как третий, внутриклеточный, рецептор для данного гормона.
Цель. Оценить роль эндогенного мелатонина в регуляции дифференцировки Th17/Treg на разных стадиях беременности.
Объектами исследования служили лейкоциты женщин, находящихся в I и III триместрах беременности, и лейкоциты здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста. Уровень и активность Th17 и Treg оценивали ex vivo и in vitro, в ответ на поликлональную активацию (анти-CD3/CD28), — по экспрессии маркеров дифференцировки Th17/Treg — транскрипционных факторов RORyt и FoxP3, а также по продукции ключевых цитокинов этих клеток, IL-17A и TGF-ß. Вклад эндогенного мелатонина в дифференцировку определяли при культивировании лимфоцитов в присутствии аутологич-ной сыворотки (как источника гормона) на фоне блокады мембранных рецепторов для мелатонина, МТ1/МТ2. Одновременно ex vivo определялись уровень мелатонина в сыворотке, а также экспрессия CD4+Т-лимфоцитами ключевого мембранного рецептора для мелатонина, МТ1, и мелатонин-регулируемого фактора RORa.
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
Установлено, что уровень мелатонина в сыворотке крови увеличивается к III триместру беременности (концентрация мелатонина, Ме (Q0 25-U0 75), пг/мл: небеременные - 21,37 (18,69; 38,47), Штриместр - 48,59 (42,41; 135,85); p < 0,05). Оценка уровня экспрессии мелатонино-вого рецептора, МТ1, не выявила различий в группах беременных и небеременных женщин, однако показала достоверное снижение процента RORa в ходе беременности (процент CD4+RORa+ клеток: небеременные — 1,03 (0,50; 1,58); I триместр — 0,94 (0,76; 1,35); III триместр — 0,50 (0,44; 0,78), p < 0,05 в сопоставлении с беременными I триместра). Одновременно в ходе гестации изменялось соотношение уровня и активности Th17/Treg, что подтверждалось изменением баланса как самих клеток (CD4+RORyt+/ CD4+FoxP3+), так и их продуктов, IL-17A/TGF-ß в периферической крови. Анализ роли эндогенного мелатонина в контроле дифференцировки Th17 и Treg in vitro в ответ на поликлональную активацию у небеременных женщин выявил позитивное действие гормона на соотношение Th17/ Treg, опосредованное сигналами с мембранных рецепторов для гормона (отношение CD4+RORyt+/CD4+FoxP3+T-клеток: активированная культура — 3,76 (2,50; 4,57); активированная культура на фоне блокады МТ1/МТ2 — 1,84 (1,67; 3,55), p < 0,05). Для беременных показано участие эндогенного мелатонина непосредственно в активации CD4+RORyt+ (процент CD4+RORyt+ клеток в активированной культуре: небеременные — 2,48 (2,10; 2,95); I триместр — 1,68 (1,36; 3,66); III триместр — 2,66 (2,20; 3,10); в активированной культуре на фоне блокады МТ1/МТ2: небеременные — 1,47 (1,16; 1,85), p < 0,05; I триместр — 1,32 (0,92; 1,86), p < 0,05; III триместр — 1,79 (1,31; 2,20), p < 0,05) и CD4+FoxP3+Т-клеток (процент CD4+FoxP3+ клеток в активированной культуре: I триместр — 0,24 (0,21; 0,34); III триместр — 0,45 (0,35; 0,57); в активированной культуре на фоне блокады МТ1/МТ2: I триместр — 0,18 (0,12; 0,25), p < 0,05; III триместр — 0,34 (0,23; 0,42), p < 0,05). В целом такие же закономерности показаны и для цитокинов в культуральных супернатантах.
Полученные данные указывают на эффективную регуляцию эндогенным мелатонином исследуемых Т-клеточных субпопуляций Treg и Th17 с более выраженным влиянием на последние, и на участие в этом процессе мембранных рецепторов для гормона.
АНАЛИЗ СВЯЗИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА HLA-G У ЖЕНЩИН С РИСКОМ РАННИХ САМОПРОИЗВОЛЬНЫХ ВЫКИДЫШЕЙ
Гордеева Л.А.1, Воронина Е.Н.2, Оскорбина О.С.1, Оленникова Р.В.3, Нерсесян С.Л.3
1ФГБУН «Федеральный исследовательский центр угля и углехимии» РАН (Институт экологии человека СО РАН), Кемерово, Россия
2 ФГБУН «Институт химической биологии
и фундаментальной медицины» СО РАН, Новосибирск, Россия
3 ГАУЗ «Кемеровская областная клиническая больница», Кемерово, Россия
При патологии беременности (невынашивание, пре-эклампсия) наблюдается снижение уровня экспрессии неклассических антигенов Главного комплекса гистосов-местимости человека — HLA-G в плаценте и в материнском кровотоке, это приводит к активации цитотокси-ческих эффектов иммунной системы матери. Полимор-
физм в гене HLA-G оказывает влияние на биологические функции молекул HLA-G, связанные с особенностями продукции их изоформ, взаимодействия с клеточными рецепторами и модуляции иммунного ответа.
Цель. Изучить ассоциации полиморфизма в кодирующей (Thr31Ser, rs41551813; Leu110Ile, rs12722477; 1597 АС, rs41557518) и в З'-нетранслируемой (3'-UTR, 14 bp Ins/ Del, rs66554220) области гена HLA-G у женщин с риском развития ранних самопроизвольных выкидышей.
Материалы и методы. Исследуемые выборки составили женщины с двумя самопроизвольными выкидышами (n = 75, группа I) и тремя и более выкидышами (n = 37, группа II) до 12 недель беременности. Основным условием включения таких женщин в исследование было отсутствие мед. абортов, внематочных беременностей и родов. Средний возраст женщин был 30,0±4,7 (SD) лет. Группу сравнения (контроль) составили образцы ДНК 233 репродуктив-но здоровых женщин, имеющих или вынашивающих ребенка без врожденных аномалий развития и не имеющих самопроизвольных выкидышей в анамнезе. Средний возраст женщин в группе был 28,9±4,3 (SD) лет. Типирование HLA-G Thr31Ser (rs41551813) в экзоне 2, HLA-G Leu110Ile (rs12722477) и HLA-G 1597 АС (rs41557518) в экзоне 3 проводили методом асимметричной ПЦР в режиме реального времени. Полиморфизм гена HLA-G (14 bp Ins/Del, rs66554220) определяли с помощью электрофоретического разделения продуктов амплификации. Статистический анализ полученных результатов проводился с помощью пакета статистических программ GenABEL, Genetics программного обеспечения R-project (www.r-project.org). Соответствие частот генотипов гена HLA-G равновесию Хар-ди-Вайнберга оценивали с помощью критерия х2 Пирсона. Нулевую гипотезу отвергали при P < 0,05. Отношение шансов (OR) и его доверительный интервал (95%CI) оценивали с помощью логистического регрессионного анализа для аддитивной модели наследования признака.
Результаты. Распределение частот генотипов rs41551813, rs12722477, rs41557518 и rs66554220 в контроле и среди женщин групп I и II соответствовало равновесию Харди—Вайнберга (P > 0,05). Выявлена ассоциация полиморфизма Leu110Ile (rs12722477) гена HLA-G у женщин с двумя выкидышами (аллель 110Ile: OR = 3,04 [1,71-5,39]; Рс = 0,001). Аллель Ins (14 bp Ins/Del, rs66554220) в два раза увеличивал у женщин риск трех и более выкидышей (OR = 2,15 [1,28-3,62]; Рс = 0,03). Статистически значимые ассоциации полиморфизмов Thr31Ser (rs41551813) и 1597 АС (rs41557518) гена HLA-G у женщин с самопроизвольными выкидышами отсутствовали.
Заключение. Полученные нами результаты указывают на то, что полиморфные локусы Leu110Ile (rs12722477) и 14 bp Ins/Del (rs66554220) у женщин могут оказывать влияние на риск развития ранних самопроизвольных выкидышей во время беременности.
ДИАГНОСТИКА РЕЗУС-КОНФЛИКТА И ТАКТИКА ВЕДЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ
Дударева М.В., Авруцкая В.В.
ФГБУ«Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии», Ростов-на-Дону, Россия
Резус-конфликт — иммунологическая несовместимость по резус-фактору крови резус-отрицательной матери и резус-положительного плода, характеризующаяся
