CC BY
20
8. Melmon K.L., Khan M.M. Histamine and its lymphocyteselective derivatives as immune modulators // Trends Pharmacol. Sci. - 1987. - V 8, N 11. -P. 437-441.
9. Role of macrophages as modulators but not as stimulators in primary mixed leukocyte reaction / K. Naito [et al.] // Cell. Immunol. - 1984. - V 88, N 2. -P. 361-373.
РЕГУЛЯТОРНОЕ ВЛИЯНИЕ АНТИТЕЛ НА ФОРМИРОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФАГОЦИТАРНОЙ РЕАКЦИИ НА МИКРОБНЫЙ АНТИГЕН
© Рочев В.П.*
Пермский государственный национальный исследовательский университет,
г. Пермь
Исследования были проведены с кровью 26 обследуемых лиц в возрасте от 19 до 56 лет, из них 6 доноров и 20 лиц, подлежащих вакцинации против столбнячной инфекции, и 6 кроликов. Установлена обратная корреляция между уровнями специфического изменения фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ) ин витро под влиянием микро-доз микробных антигенов и иммунных сывороток и исходными величинами ФАЛ и титрами антител и прямая зависимость между уровнями изменения ФАЛ ин витро и через 8 дней после вакцинации животных. Доказана возможность прогнозирования эффективности вакцинации против бактериальных инфекций.
Ключевые слова иммунитет, антитела, фагоцитарная активность лейкоцитов, прогнозирование эффективности вакцинации.
Антимикробная защита организма осуществляется факторами неспецифическими и специфическими факторами иммунитета. Иммунная реакция (ИР) выявляется не ранее конца первой - начала второй недели после первичного контакта организма с антигенами Поэтому иммунодиагностика инфекций и оценка эффективности вакцинации, основанные на определении ИР, носят поздний характер [4, 6, 7].
В литературе имеются работы, свидетельствующие о возможности очень быстрого специфического изменения фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ) - в ближайшие часы и даже минуты после введения микробов в организм [1, 3] и в ранние сроки инфекций [2]. Эта специфическая фагоцитар-
* Профессор кафедры Экологии человека и безопасности жизнедеятельности, доктор медицинских наук, профессор.
ная реакция (СФР) воспроизводится и ин витро при взаимодействии крови с микробными антигенами [1, 5]. Однако недостаточно исследована роль антител в формировании СФР на микробный антиген.
Целью настоящего исследования является изучение роли антител в формировании специфического изменения ФАЛ и под влиянием микробного антигена.
Материал и методы исследования
Исследования были проведены с кровью 26 обследуемых лиц в возрасте от 19 до 56 лет, из них 6 доноров и 20 лиц, подлежащих вакцинации против столбнячной инфекции, и 6 кроликов.
В первой серии опытов с кровью 6 доноров изучали взаимозависимость между уровнями специфического повышения ФАЛ при взаимодействии крови ин витро с микроконцентрациями антигена шигелл Ньюкестл: активность антигена 0.01 антигенных единиц в 1 мл в реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА) и иммунной сывороткой титром антител (ТА) к антигену шигелл Ньюкестл 320 в 1 мл.
Во второй серии опытов исследовали взаимосвязь между уровнями специфического изменения ФАЛ у 6 кроликов при взаимодействии крови кроликов ин витро с иммунными антителами к антигену шигелл Ньюкестл (ТА 320 в 1 мл РПГА) и через 8 дней после подкожного введения животным бактерий шигелл Ньюкестл в дозе 300 млн микробных тел.
Исследование ФАЛ производили с эритроцитами из антигенного диаг-ностикума из шигелл Ньюкестл (специфический объект фагоцитоза) и предварительно окрашенными анилиновым красителем эритроцитами из антигенного диагностикума из шигелл Зонне (неспецифический объект фагоцитоза). Такой способ позволяет в одном мазке одновременно производить подсчет специфических и неспецифических объектов фагоцитоза, окрашенных соответственно в синий и черный цвет [1]. Для этой цели к 0.1 мл крови добавляли соответственно по 0.1 мл 1 % взвеси специфических и контрольных эритроцитов. Смесь смешивали и выдерживали 10 мин при 370С. Мазки красили по Романовскому-Гимза.
Величину ФАЛ оценивали по фагоцитарному числу (ФЧ) - среднему количеству фагоцитированных эритроцитов на каждый фагоцит.
В плазме определяли титры антител к антигенам из шигелл Ньюкестл и Зонне в РПГА.
Вычисляли коэффициент специфичности фагоцитарной активности лейкоцитов (КС ФАЛ), отражающий одновременно уровни ФАЛ к специфическому и контрольному объектам фагоцитоза по формуле [4]:
КС ФАЛ _ ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза в % от ее исходной величины ФАЛ к контрольному объекту фагоцитоза в % от ее исходной величины
При статистической обработке результатов исследования вычисляли среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку (±т) и коэффициент достоверности по Стьюденту (Р).
Результаты исследований и их обсуждение
Результаты исследования связи между уровнями специфического повышения ФАЛ у 6 доноров под влиянием микроконцентраций антигена ши-гелл Ньюкестл и иммунной сыворотки к этому антигену в зависимости от исходной активности фагоцитов и ТА отражены в табл. 1.
Таблица 1
Связь между уровнем специфического изменения ФАЛ ин витро под влиянием активизирующих концентраций антигена шигелл Ньюкестл и иммунной сыворотки к этому антигену в зависимости от исходной величины фагоцитоза и ТА
№ крови доноров ТА в РПГА Величина ФАЛ
интактных активизированных
ФАЛ в % к средней величине КС ФАЛ антигеном шигелл Ньюкестл активностью 0,01 АЕ/мл в РТПГА иммунной сывороткой титром 320/мл РПГА к антигену шигелл Ньюкестл
ФАЛ в % к фону КС ФАЛ ФАЛ в % к фону КС ФАЛ
1 16 64 0,10 0,40 72 95 0,76 0,53 0,27 161 66 2,37 0,73 0,43 211 108 2,05
2 64 128 0,43 0,37 93 88 1,06 0,50 0,20 161 54 2,15 0,47 0,23 109 73 1,49
3 64 128 0,33 0,37 72 88 0,82 0,50 0,37 121 100 1,21 1,05 0,50 318 135 2,34
4 64 256 0,63 0,47 137 122 1,22 0,53 0,50 84 106 0,79 0,73 0,43 116 91 1,27
5 128 256 0,67 0,47 146 112 1,30 0,60 0,50 90 106 0,85 0,87 0,67 130 143 0,91
6 128 512 0,37 0,43 80 102 0,78 0,57 0,63 154 147 1,05 0,57 0,67 154 156 0,99
М 77 224 0,46 0,42 100 100 1,00 0.54 0.41 144 124 1,19 0.74* 0.49 161 117 1,38
±ш 18 80 0.09 0.02 0.09 0.08 0.07 0.25 0.10 0.06 0.22
Примечание: * Р < 0,05 в сравнении с исходной величиной.
в числителе - величина ФАЛ и ТА к антигену шигелл Ньюкестл, в знаменателе - к антигену шигелл Зонне.
Из табл. 1 видна прямая корреляционная связь между ТА к антигену шигелл Ньюкестл и шигелл Зонне, между ТА к антигену шигелл Зонне и величинами ФАЛ к контрольному объекту фагоцитоза. При этом индивидуальные величины КС ФАЛ у обследуемых лиц колеблются незначительно: от 0,76 до 1,30.
После взаимодействия крови с антигеном шигелл Ньюкестл активностью 0,01 АЕ/мл в РТПГА и иммунной сывороткой титром 320 в 1 мл РПГА отмечается повышение средней величины ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза. Реакция носит специфический характер. В отношении контрольного объекта фагоцитоза изменение ФАЛ активизированных лейкоцитов имеет несущественный характер. При этом определяется обратная зависимость уровня повышения ФАЛ под влиянием антигена и иммунной сыворотки к специфическому объекту фагоцитоза от исходной ФАЛ (г = -0,81 + 0,2; Р < 0,05 и -0,73 + 0,34; Р < 0,1); между исходными ТА к антигену шигелл Ньюкестл и величинами ИС ФАЛ под влиянием антигена и иммунной сыворотки (г = -0,70 + 0,36; Р < 0,1 и -0,78 + 0,31; Р < 0,05).
Результаты исследований взаимозависимости между уровнями специфического изменения фагоцитоза кроликов при взаимодействии крови ин витро с иммунной сывороткой к антигену шигелл Ньюкестл и через 8 дней после иммунизации животных этими бактериями (табл. 2).
Таблица 2
Связь между уровнями специфического изменения фагоцитоза ин витро под влиянием иммунной сыворотки, к шигеллам Ньюкестл и после иммунизации кроликов этими бактериями
Показатели фагоцитоза
N крови, статистиче ские до иммунизации активизированных фагоцитов ин витро иммунной сывороткой к антигену шигелл Ньюкестл через 8 дней после введения кроликам бактерий шигелл Ньюкестл
фагоцитарное фагоцитарное в % к фагоцитарное в % к
число число фону число фону
1 0,20 1,67 +835 0,83 +415
0,20 0,10 50 0,20 100
2 0,30 1,40 +467 1,67 +557
0,40 0,33 83 0,57 +143
3 0,33 1,80 +545 1,10 +333
0,97 0,30 31 0,60 62
4 0,40 1,37 +343 0,97 +243
0,50 0,53 +106 0,80 +160
5 0,40 1,40 +350 0,80 +200
0,40 0,27 68 0,17 43
6 0,77 1,47 +191 1,47 +191
0,70 0,77 +110 0,63 90
М ± т 0,40+0,09 1,52+0,07* +380 1,14+0,15* +285
0,53±0,11 0,38±0,10 72 0,50±0,10 94
Примечание: * Р < 0,05 в сравнении с исходной величиной;
в числителе - величина ФАЛ к антигену шигелл Ньюкестл, в знаменателе -к антигену шигелл Зонне.
Из табл. 2 видно, что определяется обратная корреляционная связь между исходным фагоцитозом и повышением его величины ин витро под влиянием иммунной сыворотки, а также и в поздний срок после вакцинации
кроликов этими бактериями (r = соответственно -0,86 ± 0,25; Р < 0,01 и -0,71 ± 0,35; Р < 0,01), а также прямая корреляция между уровнями повышения ФАЛ ин витро и после иммунизации кроликов (r = + 0,77 ± 0,32; P < 0,05).
По уровню специфического изменения фагоцитоза ин витро под влиянием микроконцентраций вакцин и иммунных антител установлена возможность прогнозировать изменение продукции иммунных антител до вакцинации против бактериальных инфекций [4].
Список литературы:
1. Каплин В.Н. Нетрадиционная иммунология. - Пермь, 1996. - 233 с.
2. Колесникова А.Ф. Иммунопатогенез шигеллезов. - Новосибирск: Наука, 1984. - 135 с.
3. Черешнев В.А. К обоснованию механизма ранней специфической фагоцитарной реакции на введение бактериальных антигенов // Роль иммунных механизмов в развитии различных заболеваний. - Пермь, 1976. - T. 138. -C. 58-59.
4. Черешнев В.А., Рочев В.П., Фельдблюм И.В. Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций. Патент. N 1800367 от 9.10.1992.
5. Цынкаловский Р.Б., Маслов А.К. Влияние полисахаридосодержащих комплексов клеточных оболочек микробов Зонне и Флекснера на фагоцитарную активность лейкоцитов в пробирке // Материалы к итоговой научной конференции. - Пермь, 1970. - T. 99. - C. 195-198.
6. Melmon K.L.,Khan M.M. Histamine and its lymphocyteselective derivatives as immune modulators// Trends Pharmacol. Sci. - 1987. - V. 8, N 11. -P. 437-441.
7. Role of macrophages as modulators but not as stimulators in primary mixed leukocyte reaction / Naito K., Komatsubara S., Kawai J. et al. // Cell. Immunol. - 1984. - V88, N 2. - P. 361-373.
