CC BY
64
УДК 618.146-006.6-084:378.14-057.875
А.К1. ДОСОВА, Г.В1. ФЕДОТОВСКИХ, Г.М1. ШАЙМАРДАНОВА, М.З2. КАУЛАНБАЕВА, С.С1. САПАРБАЕВ, К.С2. БИМЕНОВ, М.С2. ЖУМАХМЕТОВ, А.К.1 СМАГУЛОВА
гАО «Национальный научный медицинский центр», Астана 2ТОО Научно-производственное предприятие «Антиген», Алматы
РЕГЕНЕРАЦИЯ ТИМПАНАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННЫХ ФИБРОБЛАСТОВ
Изучение особенностей регенерации тимпанальной мембраны в условиях самовосстановления и применения аллогенных фибробластов в эксперименте. Животные разделены на группы: с интактной барабанной перепонкой, с дефектом её в условиях самовосстановления и при трансплантаций аллогенных культивированных фибробластов. Полученные морфологические результаты показывают, что трансплантация аллогенного клеточного материала способствует органотипической регенерации тимпанальной мембраны.
Ключевые слова: перфорация барабанной перепонки, аллогенные фибробласты, регенерация.
Следствием развития и совершенствования клеточной биологии явилось формирование нового направления клеточной и тканевой инженерии, относящегося к биомедицинской технологии, основанной на использование культивированных клеток человека. В настоящее идут активные работы по созданию технологий для восстановления барабанной перепонки -как одной из актуальных проблем микрохирургии среднего уха [1,2].
В цель экспериментального раздела работы входило оценить морфологическую картину заживления дефекта барабанной перепонки в условиях саморегенерации и при использовании культуры аллогенных фибробластов, так как качество структуры регенерирующей барабанной перепонки
непосредственно влияет на акустические свойства тимпано-оссикулярной системы.
Источником культивированных аллогенных
фибробластов явилась кожно-мышечная ткань 8-10 недельных плодов кроликов. Травматический дефект барабанной перепонки моделировали путем перфорации тимпанальной мембраны овец диаметром около 3 мм. Животные разделены на группы: с интактной барабанной перепонкой, с дефектом её в условиях самовосстановления и при трансплантаций аллогенных культивированных фибробластов. В испытуемой группе для восстановления дефекта барабанной перепонки использовали аллогенные фибробласты на коллагеновой губке. Животные выводились из эксперимента на 29 сутки
моделирования. Для гистологических и иммуногистохимических исследований ткань фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и проводили по общепринятой методике. Срезы толщиной 3-5 мкм окрашивались гематоксилином и эозином. Электронномикроскопическая методика включала фиксацию в 2,5% растворе глютаральдегида и заключение материала в эпон. Полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим, азуром-2 и основным фуксином. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу, срезы просматривали в электронном микроскопе Libra-120 (C.Zeiss). Иммуногистохимические исследования проводили с использованием моноклональных и поликлональных антител к CD3, CD8, CD19, CD34, CD45 и CD56 (DAKO).
Барабанная перепонка в условиях ауторегенерации характеризовалась резким фиброзом грануляционной ткани (рисунок 1). Регенерирующий эпителиальный пласт был неполноценен с очагами меж- и подэпителиального отека (рисунок 2). При клеточной терапии регенерирующий эпителий располагался на рыхлой соединительной ткани с многочисленными капиллярами и клеточными элементами (рисунок 3).Внутренний эпителий барабанной перепонки был представлен двумя рядами клеток с ресничками (рисунок 4).
Регенерация барабанной перепонки в условиях самовосстановления
• • ¡'"J"4.'' '
„ V (
.^•'■у *
Ь'Я i V,- .
v v* .»
\ ••» f- - -V - у .
i jf. ^ ^'ЧК * * i
I i® v i\ ; S
Из jn, И/М „'ii- v '
Кмй.:',1 ЖЯШ
Рисунок 1 - Резко фиброзированная
е»
<l *I-
<3 «¿.-.л " э - Л0
• J.4'- , - I
"jr ^ШГг
Рисунок 2 - Отек, деструкция эпителия
грануляционная ткань
Полутонкий срез. Окраска метиленовым синим, азуром-2 Восстановление целостности травматического дефекта
и основным фуксином х1000. барабанной перепонки с использованием культуры
аллогенных фибробластов отличалось от
ауторегенерированной, более зрелой грануляционной тканью выстилающей область дефекта, а также качественной структурой окружающей ткани,
характерной для нормальной барабанной перепонки экспериментальных животных.
Восстановление барабанной перепонки после трансплантации фибробластов
сосуды подлежащей соединительном ткани него эпителия
Полутонкий срез. Окраска метиленовым синим, азуром-2 и основным фуксином. х1000.
Проведенные иммуногистохимические исследования ткани барабанной перепонки с использованием моноклональных и поликлональных антител к CD3, CD8, CD19, CD34, CD45 и CD56 свидетельствовали о прямой взаимосвязи состояния иммунной системы и гистологической картины формирования регенерата. Экспрессия CD34 и CD45 подтверждала процессы ускоренного образования и созревания грануляционной ткани.
Целью клинической части работы было обоснование и определение эффективности использования аллогенных фибробластов как пластического и репаративного материала при дефектах барабанных перепонок. Для клинической оценки восстановления целостности тимпанальной мембраны у 5 больных с дефектом барабанных перепонок разных диаметров (d= от 0,3 до 0,8 см) и различных сроков давности использовали культивированные фетальные фибробласты, полученные в лаборатории клеточных технологий АО ННМЦ. Зона деэпителизации зависела от состояния перепонки, размера перфорации, механизма образования
перфорации. Коллагеновую пленку вырезали по форме приближающейся к очертаниям перфорации и превышающей размеры дефекта тимпанальной мембраны (рисунок 5). Далее на пленку проводили пассаж фетальных фибробластов. Трансплантант фиксировали плотно к барабанной перепонке. При этом большая часть трансплантанта находилась на поверхности неповрежденной тимпанальной мембраны. Фиксация трансплантанта производилась спонгостановой губкой.
Наилучшая динамика восстановления целостности барабанной перепонки была нами отмечена через 1 месяц после проведенной терапии. К 1,5 месяцам с момента трансплантации отмечено практически полное восстановление целостности барабанной перепонки. Барабанная перепонка макроскопически представляла собой натянутую пленку с выраженными процессами неоангиогенеза (рисунок 6).
Эффективность метода определялась визуально по характеру заживления, а также по результатам аудиометрического исследования.
Отоскопические данные пациента с перфорацией барабанной перепонки до- и после лечения
Рисунок 5 - Посттравматическая перфорация
барабанной перепонки левого уха пац. А.25 лет (((=3,3 мм)
Рисунок 6 - Регенерированная барабанная
Пац.А.25 лет через 1,5 месяца после трансплантации фибробластов
Таким образом, как в эксперименте, так и в клинике использование культивированных аллогенных фибробластов способствует полноценному
восстановлению целостности дефекта барабанной перепонки.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 Поматилов A.A. Заживление посттравматического дефекта барабанной перепонки методом трансплантации аллофибробластов человека: автореф. дис. ... канд. мед. / A.A. Поматилов. — М.: 2001. - 22 с.
2 Щетинин В.Н. Пластика дефекта барабанной перепонки трансплантантом из пуповины человека при зирургическом лечении больных хроническим мезотимпанитом : автореф. дис. ... канд. мед. / В.Н. Щетинин. — М.: 2007. - 25 с.
А.К- ДОСОВА, Г.В. ФЕДОТОВСКИХ, F.M. ШАЙМАРДАНОВА, М.З. КАУЛДНБАЕВА, С.С. САПАРБАЕВ, К.С. БИМЕНОВ, М.С. Ж¥МАХМ ЕТОВ, А.К. СMАF¥ЛОВА
АЛЛОГЕНД1 ФИБРОБЛАСТАРДЫ ТРАНСПЛАНТТАУДАЕЫ ТИМПАЛЬДЫ МЕМБРАНАНЫН, ЖАЦАРУЫ
ty^h: Зерттеудщ ма;саты - тимпальды мембрананыц ез-езш ;алпына келтiру жагдайындагы жацару жэне тэжiрибеде аллогендi фибробластарды ;олдану ерекшелттерЫ зерттеу. Жануарлар топтарга белiндi: за;ымданбаган дыбыс жарга;ты, за;ымданган, ез-езiн ;алпына келтiру жагдайындагы жэне аллогендi еартген фибробластарды транспланттаудагы. Алынган морфологиялы; зерттеулер аллогендi жасуша материалын транспланттау тимпальды мембрананыц органотипикалы; ;алпына келуiне эсер ететЫн керсеттi.
ТYЙiндi сездер: дабыл жаргагыныц перфорациясы, аллогендi фибробластар, ;алпына келу.
A.K. DOSSOVA, G.V. FEDOTOVSKIKH, G.M. SHAIMARDANOVA, M.Z. KAULANBAYEVA, S.S. SAPARBAYEV, A.K. SMAGULOVA,
K.S. BIMENOV, M.S. ZHUMAKHMETOV
REGENERATION OF TYMPANIC MEMBRANE AT ALLOGENIC FIBROBLASTS TRANSPLANTATION
Resume: Purpose of investigation - studying of peculiarities of tympanic membrane regeneration under the conditions of self-recovery and using of allogenic fibroblasts in experiment. Animals are divided into groups: with intact tympanic membrane, with its disorder under the conditions of self-recovery and using of allogenic cultivated fibroblasts. Received morphological results show that transplantation of allogenic cell bulk promotes organotypic regeneration of tympanic membrane. Keywords: perforation of the membrane tympani, allogenic fibroblasts, regeneration.
