Референсные значения агрегации тромбоцитов у взрослого населения Астраханской области на агрегометре Multiplate Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

коагулология

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 612.111.7.083

Петрова О.В., Шашин С.А., Тарасов Д.Г., Жукова Е.Р., Панова Е.В., Грачева Н.П.

референсные значения агрегации тромбоцитов у взрослого населения астраханской области на агрегометре mumplate

ФГБУ «Федеральный центр сердечно-сосудистой хирургии» Минздрава России, 414011, Астрахань

Современные международные стандарты рекомендуют каждой лаборатории разработать или подтвердить имеющиеся в литературе референсные интервалы для каждого лабораторного показателя. У 128 практически здоровых мужчин и женщин Астраханской области исследовали агрегационную функцию тромбоцитов импедансным методом на агрегометре Multiplate ("Verum Diagnostica", Германия). В качестве индукторов использовали пептид, активирующий рецептор тромбина; арахидоновую и аденозиндифосфорную кислоты. Референсный интервал агрегации тромбоцитов с пептидом, активирующим рецептор тромбина, на агрегометре Multiplate у здорового взрослого населения Астраханской области составил 815,2-1498,4AU/мин, с арахидоновой кислотой - 660-1341 AU/мин, с аденозиндифосфорной кислотой - 598-1120 AU/мин.

Ключевые слова: референсный интервал; агрегация тромбоцитов; автоматический агрегометр Multiplate.

Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61 (1): 46-48. Petrova O.V., Shashin S.A., Tarasov D.G., Jukova E.R., Panova E.V., Gracheva N.P. THE REFERENCE VALUES OF AGGREGATION OF PLATELETS IN ADULT POPULATION OF THE ASTRAKHAN OBLAST USING AGGREGOMETER MULTIPLATE

The Federal center of cardiovascular surgery of Minzdrav of Russia, 414011 Astrakhan, Russia

The modern international .standards recommend each laboratory to develop or to confirm available in literature the reference intervalsfor every laboratory indicator. In the Astrakhanskaia oblast, sampling of 128 healthy males andfemales were examinedfor aggregation function of thrombocytes using impedance technique and applying aggregometer Multiplate ("Verum Diagnostica", Germany). The study used as inductors peptide activating receptor of thrombin; arachidonic and adenosine diphosphoric acids. The reference range of aggregation of thrombocytes with peptide activating receptor of thrombin, at aggregometer Multiplate, in healthy population of the Astrakhanskaia oblast made up to 815.2-1498.4AU/min, with arachidonic acid - 660-1341 AU/min. with adenosine diphosphoric acid - 598-1120 AU/min.

Keywords: reference range; aggregation of thrombocytes; automated aggregometer Multiplate

Citation: Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2016; 61 (1): 46-48. (in Russ.)

Введение. В настоящее время общепринятым методом в лабораторной практике оценки агрегационной функции тромбоцитов является агрегатометрия [1-3]. В основе данного метода лежит способность тромбоцитов под действием индукторов активизироваться и образовывать агрегаты. По типу исследуемого материала агрегометры делятся на анализаторы, в которых используется цельная кровь, и анализаторы, в которых исследуется обогащенная тромбоцитами плазма. По типу регистрации изменений агрегатометрия делится на импедансную и оптическую [4, 5].

Для оценки результатов лабораторного исследования применяется референсный интервал (РИ). Клинические лаборатории используют РИ, указанные в инструкции к наборам реактивов или справочной литературе, однако использование таких РИ может привести к неправильной интерпретации результатов лабораторных исследований. Зарубежные и отечественные специалисты по клинической лабораторной диагностике рекомендуют каждой лаборатории установить РИ для каждого лабораторного параметра или подтвердить имеющиеся в справочной литературе данные о РИ [6-9].

Для корреспонденции: Петрова Ольга Владимировна, students_asma@mail.ru

For correspondence: Petrova O.V., atudents_asma@mail.ru

Цель работы - установить РИ агрегации тромбоцитов у взрослого населения Астраханской области на агрегометре МиШрЫе.

Материалы и методы. Для установления РИ использовали классический подход с применением строгих критериев включения и исключения, проводили расчет РИ [7, 8].

Критерий включения в исследование - отсутствие в целом патологии. Критерии исключения - наличие соматической патологии, влияющей на состояние гемостаза; прием антитромботических препаратов.

Обследования проводили в рамках профилактического медицинского осмотра в Федеральном центре сердечнососудистой хирургии (Астрахань). Все участники исследования дали информированное согласие.

Референсная группа была сформирована следующим образом: 70 здоровых мужчин и 70 здоровых женщин в возрасте от 40 до 60 лет, проживающих в Астраханской области.

Стандартизация преаналитического долабораторного этапа была обеспечена инструкциями для медицинского персонала: инструкцией по подготовке пациентов к исследованию системы гемостаза, инструкцией по взятию крови для исследования системы гемостаза, хранения и транспортировки биологического материала.

Образцы крови для исследования собирали путем пункции кубитальной вены после наложения жгута (не более 1 мин) в положении пациента лежа с помощью двухкомпо-

КОАГУЛОЛОГИЯ

Таблица 1

Значения РИ агрегации тромбоцитов с пептидом, активирующим рецептор тромбина

Результаты Собственные результаты (n = 128) Данные фирмы-производителя [10-12] (n = 82)

X, AU/min 1156,8

SD 174,27

50%о 1130 1206

5%о 890 923

95%о 1485 1509

РИ (5-95%о), AU/мин* 890-1485 923-1509

РИ (Х±1,96 SD), AU/мин** 815,2-1498,4 -

П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 2 и 3: * - значения РИ, рекомендованные фирмой-производителем агрегометра; ** - значения РИ приведены в соответствие с рекомендациями ГОСТ Р 53022.3-2008.

нентных систем для забора крови - одноразовых полипропиленовых пробирок с 17 U/мл литий-гепарина («Sarsted», Германия).

Образцы крови доставляли в лабораторию в сроки 15-20 мин после венепункции и анализировали в течение 30-35 мин с момента поступления.

Для стандартизации преаналитического лабораторного этапа проводили оценку поступающего биологического материала в лабораторию на наличие сгустков.

Стандартизация аналитического этапа была обеспечена:

- ежегодным техническим обслуживанием автоматического агрегометра Multiplate (фирмы «Verum Diagnosticа», Германия);

- ежедневной проверкой точности (правильности) работы измерительных частей (электродов) посредством электронного контроля качества согласно инструкции по эксплуатации прибора;

- ежедневном контролем качества импедансной агрего-метрии с использованием сертифицированных контрольных материалов для проведения внутрилабораторного контроля качества, согласно инструкции по эксплуатации прибора;

- наличием лабораторной информационной системы.

Агрегационную функцию тромбоцитов исследовали в

цельной крови импедансным способом согласно инструкции производителя на автоматическом агрегометре Multiplate («Verum Diagnosticа», Германия).

В качестве индукторов использовали пептид, активирующий тромбин; арахидоновую кислоту; аденозиндифосфорную кислоту. Результаты исследования агрегации тромбоцитов представлены в виде площади под кривой агрегации (AU/мин).

Все статистические процедуры выполняли с помощью программного пакета Statistica 6.0 for Windows («StatSoft, Inc.», США). Вычисляли X - среднее арифметическое и SD

(стандартное отклонение), 2,5%о, 50%о (медиану), 95%о про-центили распределения. Тип распределения определяли по критерию Колмогорова - Смирнова. Для оценки различий средних тенденций между группами использовали критерий Манна-Уитни (И). Разделение считали целесообразным при уровне р < 0,05.

Определяли и исключали из дальнейшего исследования статистические выбросы при исследовании агрегационной функции тромбоцитов с арахидоновой кислотой. Выбросы определяли с помощью метода Тьюки на основе интервала нормальных значений:

- 1,5^Я, Q3 + 1,5^Я],

где Q1, Q3 - границы первого и третьего квартилей, = Q3 - Q1 - межквартильный размах. С помощью метода Тью-ки из исследования исключили 12 результатов определения агрегационной функции тромбоцитов, что составило 8,57%.

Результаты и обсуждение. Для определения РИ использовали статистические подходы, рекомендованные Институтом клинических и лабораторных стандартов CLSI А28-3 [7, 8].

Значения РИ, установленные нами у взрослого населения Астраханской области, и данные из инструкции производителя представлены в табл. 1-3.

При сравнении результатов полученных нами, с результатами, представленными производителем, можно отметить, что значения РИ (5-95%о) практически не различались (см. табл. 1).

При сравнении значений РИ, представленного в виде 5-95%о (см. табл. 2), обращает на себя внимание тот факт, что значения верхней границы РИ, полученные нами, ниже значений, указанных фирмой-производителем в инструкции к набору реактивов.

РИ 5-95%о (см. табл. 3), установленный нами, практически не отличался от РИ, указанного фирмой-производителем в инструкции к набору реактивов.

Сравнить значения РИ в виде Х±1,96 SD не представляется возможным, так как производитель не указал его в инструкции к наборам реактивов (см. табл. 1-3).

Согласно стандартам способ (метод) расчета РИ зависит от численности референсной группы и типа распределения значений лабораторного показателя. При численности группы меньше 120 человек и ненормальном распределении лабораторных показателей используется расчет РИ в виде 5-95%о, согласно которому у 90% здоровых лиц обнаруживаются нормальные лабораторные показатели и у 10% здоровых лиц - ненормальные. При численности группы больше 120 человек и нормальном распределении лабораторных показателей используется расчет РИ в виде Х±1,96 SD, согласно которому у 95% здоровых лиц обнаруживаются нормальные лабораторные показатели и у 5% здоровых лиц - ненормальные [7, 8].

В нашем исследовании распределение агрегации тромбоцитов было нормальным и численность референсной группы составила 128 человек. Согласно CLSI А28-3 и ГОСТу

Таблица 2

Значения РИ агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой

Результаты Собственные результаты (n = 128) Данные фирмы-производителя [10-12] (n = 150)

X, AU/мин 1000,5 -

SD 173,7 -

50%о 940 1063

5%о 790 790,0

95%о 1290 1410

РИ (5-95%о), AU/мин* 790-1310 790-1410

РИ (Х±1,96 SD), AU/мин** 660-1341 -

Таблица 3

Значения РИ агрегации тромбоцитов с аденозиндифосфорной

кислотой

Результаты Собственные результаты (n = 128) Данные фирмы-производителя [10-12] (n = 150)

X, AUC 870,9 -

SD 141,5 -

50%о 860 830

5%о 620 548

95%о 1120 1167

РИ (5-95%о), AU/мин* 620-1120 548-1167

РИ (Х±1,96 SD), AU/мин** 598-1120 -

Р 53022.-2008 при нормальном распределении РИ должен быть рассчитан по формуле Х±1,96 SD [7, 8]. Выводы

1. РИ агрегации тромбоцитов составили с пептидом, активирующим рецептор тромбина, 815,2-1498,4 AU/мин, с арахидоновой кислотой - 660-1341 AU/мин, с аденозинди-фосфорной кислотой - 598-1120 AU/мин.

2. Установленные интервалы агрегации тромбоцитов могут быть использованы в качестве референсных в клинико-диагностической лаборатории ФГБУ «Федеральный центр сердечно-сосудистой хирургии» (Астрахань), так как они разработаны с учетом всех особенностей формирования ре-ференсных групп и стандартизацией всех этапов лабораторных исследований.

3. Приведенные нами интервалы агрегации тромбоцитов могут быть использованы как референсные в лабораториях Астраханской области при работе на аналогичных аналитических системах (автоматическом агрегометре Multiplate).

ЛИТЕРАТУРА (пп. 3, 8, 10-12 см. REFERENCES)

1. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. М.: Ньюдиамед; 2008.

2. Чарная М.А., Морозов Ю.А. Современные антиагрегантные препараты и их применение в клинике (обзор литературы). Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. 2009; 1: 34-40.

4. Вавилова Т.В. Гемостазиология в клинической практике: пособие для врачей. СПб.: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова; 2005.

5. Долгов В.В., Свирин В.П. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. Тверь: Триада; 2005.

6. Казакова М.С., Луговская С.А., Долгов В.В. Референсные значения показателей общего анализа крови взрослого работающего населения. Клиническая лабораторная диагностика. 2012; 5: 43-9.

7. ГОСТ Р 53022.3-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Правила оценки информативности лабораторных тестов. М.: ФГУП «Стандартинформ»; 2009.

9. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2007.

Поступила 01.08.15

REFERENCES

1. Barkagan Z.S., Momot A.P. Diagnostics and Controlled Therapy of Violations of a Hemostasis [Diagnostika i kontroliruemaya terapiya narusheniy gemostaza]. Moscow: N'yudiamed; 2008. (in Russian)

2. Charnaya M.A., Morozov Yu.A. Modern antiagregantny preparations and their application in clinic (the review of literature). Kardiologiya i serdechno-sosudistaya khirurgiya. 2009; 1: 34-40. (in Russian)

3. Siller J.M., Haberl K., Prillinger K., Panzer S., Lang I., Jilma B. The effect of antiplatet drugs clopidogrel and aspirin is less immediately after stent implantation. Thromb. Res. 2009; 123 (6): 874-80.

4. Vavilova T.V. Haemostasiologiya in Clinical Practice: a Grant for Doctors. [Gemostaziologiya v klinicheskoy praktike: posobie dlya vrachey]. St. Petersburg: Sankt-Peterburgskiy gosudarstvennyy meditsinskiy universitet im. akad. I.P. Pavlova; 2005. (in Russian)

5. Dolgov V.V., Svirin V.P. Laboratory Diagnostics of Violations of an Haemostasis. [Laboratornaya diagnostika narusheniy gemostaza]. Tver': Triada; 2005. (in Russian)

6. Kazakova M.S., Lugovskaya S.A., Dolgov V.V. Reference interval of indicators of the total blood analysis of the adult working population. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2012; 5: 43-9. (in Russian)

7. State Standard P 53022.3-2008. Technologies the laboratory clinical. Requirements to quality of clinical laboratory trials. Rules of an assessment of informational content of laboratory tests. Moscow: Federal State Unitary Enterprise Standartinform; 2009. (in Russian)

8. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory, Approved Guideline - Third Edition. Wayne: CLSI; 2008: C28A3E.

9. Kishkun A.A. Guide to Laboratory Methods of Diagnostics [Rukovodstvo po laboratornym metodam diagnostiki]. Moscow: GEOTAR - Media; 2007. (in Russian)

10. Valarche V., Desconclois C., Boutekedjiret T., Dreyfus M., Proulle V. Multiplate whole blood impedance aggregometry: a new tool for von Willebrand disease. J. Thromb. Haemost. 2011; 9 (8): 1645-7.

11. Toth O., Calatzis A., Penz S., Losonczy H., Siess W. Multiple electrode aggregometry: A new device to measure platelet aggregation in whole blood. Thromb. Haemost. 2006; 96 (6): 781-8.

12. Johnson A., Dovlatova N., Heptinstall S. Multiple electrode aggregometry and P2Y (12) antagonists. Thromb. Haemost. 2008; 99 (6): 1127-9.

Received 01.08.15

микробиология

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 616.9-022-078.33

Антонов В.А., Викторов Д.В.

о совершенствовании средств иммунодиагностики инфекционных

болезней. проблемы диагностики iN ViVO и iN ViTRO

ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, 400131, Волгоград, Россия

В статье обсуждается ряд проблемных вопросов разработки эффективных средств иммунодиагностики инфекционных заболеваний бактериальной и микотической этиологии, связанных с подходами к выбору адекватных диагностических мишеней.

Ключевые слова: иммунодиагностика; инфекционные болезни; фазовые вариации.

Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61 (1): 48-51.

Для корреспонденции: Антонов Валерий Алексеевич, vari2@sprint-v.com.ru For correspondence: Antonov V.A. vari2@sprint-v.com.ru