CC BY
33
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
30-38% по сравнению с контролем. При применении данной комбинации наблюдается выраженный (100%) антиметастатический эффект, т. е. полное отсутствие метастазов у животных, тогда как в контрольной группе они выявлены у 60% мышей в количестве 12 (9 в легких и 3 в селезенке). Торможение роста опухоли сопровождается морфологически регистрируемыми дистрофическими изменениями опухолевых клеток и выраженной лейкоцитарной инфильтрацией. Морфологическое исследование тимуса выявило развитое корковое вещество с плотным расположением тимоцитов, что свидетельствует об активном состоянии Т-клеточного звена иммунитета, которое подтверждается результатами субпопуляционного анализа спленоцитов: содержание Т-клеток было выше контроля (60,33±1,42% против 46,1±2,06%) за счет ТИ. При этом уровень ТИ у мышей данной группы был максимальным среди животных всех групп, составляя 47,9±1,5%, тогда как в других он колебался от 15 до 35%. Все указанные различия статистически достоверны, р < 0,05. По-видимому, стимуляция Х-клеточного звена в данной группе происходит преимущественно под действием Ронколейкина, который обнаруживает аналогичный эффект и при паратуморальном введении в монорежиме. Однако введение одного Ронколейкина не вызывает торможения роста опухоли и только частично ингибирует развитие метастазов. Добавление к комбинации Ронко-лейкин + Ингарон третьего иммуномодулятора Рефнота не приводит к дальнейшей положительной динамике: антиметастатический эффект сохраняется, но составляет 95,4% на фоне незначительного торможения роста меланомы. Сравнение групп, получавших Доксорубицин в монорежиме и Доксорубицин с Ронколейкином, показывает, что Ронколейкин усиливает торможение опухолевого роста как в процессе введения (-27 против -16,2%), так и на момент эвтаназии (-11,55 против +1,9%), но не оказывает значимого влияния на метастазирование в данной комбинации. Иммунологические показатели в комбинации Ронколей-кин + Доксорубицин обнаруживают динамику, аналогичную таковой в других группах, получавших Ронколей-кин (повышение уровня Т-клеток за счет ТИ и снижение В-клеток по сравнению с контролем), в то время как Доксорубицин вызывает депрессию Х-клеточного звена.
Заключение. Проведенные исследования свидетельствуют об антиметастатическом и иммуномодулирую-щем эффекте паратуморального применения комбинации Ронколейкин + Ингарон в эксперименте, а также
0 целесообразности ее использования в лечении онкологических больных. Дальнейший поиск может выявить и другие эффективные сочетания иммунопрепаратов, что позволит оптимизировать цитокинотерапию и уточнить ее роль и место в комплексном лечении злокачественных опухолей, в том числе в комбинации с химиотерапией.
РЕДАКТИРОВАНИЕ ГЕНОМА В ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА: ВОЗМОЖНОСТИ И ОГРАНИЧЕНИЯ
Зотова А.1, 3, Лопатухина Е.1, 3, Мазуров Д.1, 2 3
1 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 ГНЦ«Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Россия
3 Институт биологии гена РАН, Москва, Россия
Программируемые эндонуклеазы вносят разрыв в определенном участке ДНК, который подвергается репарации в клетках по механизму негомологичного со-
единения концов (NHEJ), что, как правило, приводит к нокаутированию гена, или по механизму гомологичной рекомбинации (HDR), если присутствует ДНК-донор, который точно замещает участок поврежденного генома (knock-in). Редактирование генома лимфоидных клеток человека представляет собой сложную задачу из-за низкой трансфекционной способности этих клеток. Дополнительные трудности вносит неэффективная репарация ДНК-разрывов путем HDR. Тем не менее, интерес к редактированию генома лимфоидных клеток не угасает, что связано, прежде всего, с необходимостью лечения различных наследственных иммунодефицитов и ВИЧ-инфекции.
Перед нами стояла задача оценить эффективность и динамику получения нокаута и нокина в линиях T- и B-клеток человека посредством изменения матрицы для репарации ДНК, локусов ДНК-мишеней и типов геномных нуклеаз. Используя нуклеазу, содержащую домены «цинковых пальцев» (ZFN), мы сконструировали клеточные линии Jurkat и CEM с геномом вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), интегрированным в локус AAVS1. При дополнительной трансфекции вспомогательными векторами такие клетки стабильно производят вирусные частицы. Также было показано, что применение как ZFN, так и CRISPR/Cas9 технологии в равной степени эффективно для получения нокаутов в лимфоидных клетках. Однако нами было отмечено значительное снижение on-target активности высокоточной нуклеазы eCas9 1.1, работающей как никаза. Таким образом, для изучения функциональной роли генов в лимфоидных клетках необходимо учитывать баланс между эффективностью нукле-азы в отношении целевого гена и ее off-target (побочной) активностью.
Работа была выполнена при поддержке гранта РНФ «Поиск новых факторов рестрикции ВИЧ-1, ограничивающих репликацию вируса в условиях его межклеточной трансмиссии, путем скрининга библиотеки нокаутов GeCKO» 15-15-00135.
ОЦЕНКА УРОВНЕЙ ЦИТОКИНОПОДОБНЫХ ВЕЩЕСТВ В СУПЕРНАТАНТАХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ
Зурочка А.В.1, 2, Зурочка А.В.1, 2, Дукардт В.В.1, Зуева Е.Б.1, Добрынина М.А.1, Тяпаева Я.В.3, Гриценко В.А.3, 4
1ФГБУН«Институт иммунологии и физиологии» УрО РАН, Екатеринбург, Россия
2 ФГАОУ ВО «Южно-Уральский государственный университет» (Национальный исследовательский университет), Челябинск, Россия
3 ФГБУН«Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза» УрО РАН, Оренбург, Россия
4 ФГБУН «Оренбургский научный центр» УрО РАН, Оренбург, Россия
Введение. Инфицирование тканей макроорганизма бактериальными агентами сопровождается развитием воспалительной реакции, в регуляции которой участвуют различные цитокины, вырабатываемые клетками иммунной системы. В то же время в опытах in vitro нами было показано, что бактерии и супернатанты их бульонных культур при контакте с нейтрофилами существенно влияют на продукцию фагоцитами ци-токинов, причем направленность (стимулирование/ ингибирование) и выраженность этих эффектов зависели от видовой принадлежности микроорганизмов
