CC BY
11
УДК 619:[637:614.3]
РЕАКЦИЯ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РИГА) И ЭКСПРЕСС-ТЕСТ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА СВИНЕЙ ПРИ УБОЕ
Новак МуЦ., Назарова СЛ.
ФГБОУ ВО "Рязанский государственный агротехнологический университет им. П.А. Костычева" (peacelOO@mail.ru)
Введение. Токсоплазмоз широко распространен среди сельскохозяйственных животных и является опасным зоонозом. В большинстве случаев заражение человека происходит не ооцистами Toxoplasma gondii от кошки, а пролиферативными стадиями возбудителя через термически не обезвреженные продукты животного происхождения (молоко, мясо, яйца) [2,3].
В Российской Федерации с целью изучения эпизоотической, эпидемической ситуации по токсоплазмозу и ретроспективной диагностики применяют серологические методы РСК, РНГА, ИФА, а в зарубежных странах разработаны экспресс тесты для выявления антигенов и антител токсоплазм в молоке, мышечной ткани, паренхиматозных органах, сердце и головном мозге
[2, 4, 5].
Наборы для экспресс-диагностики токсоплазмоза (производства Голландии и др.) дорогостоящие и их приобретение лимитировано санкциями ЕС. Поэтому целесообразно, особенно в рамках программы импортозамещения, производить подобные диагностические препараты в нашей стране.
На мясокомбинатах, бойнях, а также на предприятиях по вторичной переработке продукции животноводства экспресс тесты можно использовать для исследования образцов тканей от животных, доставленных на убой из неблагополучных по токсоплазмозу хозяйств, а также выборочно при скрининге на антигены токсоплазм проб фарша, сырокопченых изделий из свинины. Результаты исследований отечественных ученых свидетельствуют о наиболее широком распространении токсоплазмоза в свиноводческих хозяйствах.
Кроме того, серологические методы, экспресс тесты можно применять для диагностики токсоплазмоза мелких домашних животных (собак, кошек) [1].
Материалы и методы. Корпускулярные и растворимые антигены Т. gondii получали из пролиферативных форм штамма RH, культивируемых на лабораторных мышах при их внутрибрюшинном заражении. Отмытые в фосфатно-солевом буферном растворе (рН=7,2-7,4) трофозоиты токсоплазм с концентрацией 80-130 в поле зрения микроскопа (ок. 10х об. 40) разрушали под действием детергента с последующим многократным центрифугированием в фосфатно-солевом буфере. Таким образом, выделяли растворимый мембранный антиген токсоплазм. Для приготовления эритроцитарных антигенных
токсоплазменных диагностикумов (РНГА) применяли только растворимый антиген Т. gondii.
Экспериментальная апробация вышеуказанных диагностических препаратов включала проверку эффективности антигенных иммунореагентов с иммунными кроличьими сыворотками в РНГА и экспресс тесте с использованием контрольных позитивных и негативных референтных сывороток.
Апробацию полученных иммунореагентов в РНГА и экспресс тесте проводили, используя 50 сывороток крови от свиней (15 свиноматок и 35 подсвинков на откорме) из товарной фермы. При помощи РНГА выявляли антитела и определяли их титр, а в экспресс тесте (два варианта) устанавливали как антитела, так и антигены без их количественной характеристики.
Результаты. В процессе приготовления антигенных эритроцитарных диагностикумов для РНГА определяли оптимальную сенсибилизирующую дозу растворимого токсоплазменного антигена с учетом концентрации белка в 1 мл. При разработке экспресс-теста экспериментально устанавливали максимальные разведения антигена и антител к Т. gondii, а также концентрацию красителя, позволяющие выявлять специфические IgG, AgTox.g. в сыворотках крови, образцах тканей, органов, полученных от животных при убое. Большое внимание уделялось, таким параметрам диагностических тестов, как позитивный и негативный контроли, концентрация красителя. Использование одного и того же красителя с одинаковой концентрацией во всех случаях скрининга положительных на токсоплазмоз сывороток крови свиней показало аналогичную окраску носителя по цвету, четкости контура и интенсивности, кардинально отличающуюся от таковой при исследовании отрицательных образцов и негативных референтных сывороток.
С помощью РНГА токсоплазменные антитела выявлены в 6 из 15 (40 %) сывороток крови свиноматок и в 10 из 35 (28,5 %) - подсвинков. Исследования с использованием экспресс теста показали следующие результаты: 1. носитель + антиген AgTox.g. + краситель и носитель + токсоплазменные антитела IgG + краситель - среди свиноматок позитивны соответственно 7 из 15 (46 %) и 2 из 15 (13,3 %); 2. носитель + антиген AgTox.g. + краситель и носитель + токсоплазменные антитела IgG + краситель - подсвинки на откорме положительны в 8 из 15 (53,3 %) и 13 из 35 (37 %) случаев. Данные РНГА и экспресс теста на антитела к Т. gondii при исследовании сывороток крови от свиноматок соотвествовали на 85,7 %, от подсвинков на откорме - на 77 %. На антигены Т. gondii у свиноматок получен положительный результат экспресс теста только в 2 случаях из 15, а у подсвинков - в 13 из 35, что подтверждает соответственно латентное и острое или подострое течение токсоплазмоза.
Заключение. Показана возможность применения экспресс теста для выявления антител к Toxoplasma gondii и антигенов токсоплазм в сыворотке крови, образцах тканей и органов свиней и в перспективе вместе с РНГА - для распознавания формы заболевания (латентное носительство, субклиническое и острое течение, случаи реактивации и рецидива).
Литература: 1.Катков С.С. Автореф. дисс....канд. вет. наук//Ставрополь. -2017. - 22 с. 2.Кузьмин Ю.А., Каральник Б.В., Кирющенко Т.В.//Труды НИИ эпидемиол., микробиол. и инф. бол. - Алма-Ата - 1989. - В. 38. - С. 114-117. З.Лукьянова Т.А.//Педиатрия. - М. - 1996.- № 4.- С. 30-32. 4.Hagiwara Т., Katsube Y.//Japan. J. Veter. Sc.-1981. - V.43. - N 5. - P. 763-765. 5.Melo Fabio G., Rossi Claudio L.// Rev. Inst. med. trop. Sao Paulo.- 1997.- 39, № 4.- C. 235-236.
Reaction of indirect hemagglutination (IRHA) and express test for diagnostics of toxoplasmosis in pigs at slaughter. Novae M.D., Nazarova S.A. Ryazan State Agrotechnologycal University.
Summary. One demonstrated possibility of application express test and in prospect together with IRHA for detection of antibodies to Toxoplasma gondii and Toxoplasma antigens in blood serum, in samples of pig tissues and organs and for identification of disease form (latent, subclinical or acute course, cases of reactivation and recurrence).
