CC BY
6
158
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
На сегодняшний день иммунотерапия рака нацелена на использование противоопухолевого CD8 + цитотокси-ческого Т-клеточного ответа, но все больше свидетельств, что инфильтрирующие опухоль В-клетки и плазматические клетки (именуемые В-лимфоциты, инфильтрирующие опухоль (TIL-B) играют решающую синергетическую роль в контроле опухоли [1].
TIL-B проявляют новые терапевтические возможности благодаря своему способу презентации антигена Т-клеткам; их роль в сборке и поддержании им-мунологически «горячего» микроокружения опухоли с участием Т-клеток, миелоидных клеток и естественных клеток-киллеров.
Основной проблемой в изучении функций опухолевых В-лимфоцитов является их двойственность, так как B-клетки способны быстро сменяться между анти- и проопухолевым фенотипами в окружающем микроокружении. Так, В-клетки становятся иммуносу-прессивными в GBM и составляют ~1G% инфильтрирующих иммунных клеток [2]. Однако, есть данные, что инфильтрирующие опухоль В-клетки действительно проявляют противоопухолевый эффект при различных видах рака [З]. Их функция была связана с продукцией противоопухолевых антител [4] и активацией эффек-торных Т-клеток [5].
Путем стимулирования опухолеспецифического CD8 T-клеточного иммунитета мы изучали способность TIL- B ингибировать рост GBM при их внутривенном введении мышам с моделированной ортотопической глиобластомой.
Через 1G дней после моделирования глиомы, мышей под глубоким наркозом обезглавили, извлекли головной мозг с опухолью. По модифицированному протоколу были выделены TILs и проанализированы на специфические маркеры В-клеток (CD5+ CD2G+ CD19+ CD22+ CD35+) и CD69-экспрессирующих CD8 + Т-клеток до и после активации. Цитофлуориметрический анализ TIL проводили с помощью проточного цитофлуориметра MACSQuant 1G, имеющего три лазера с длинами волн 4G5, 488 и 635 нм. Полученные данные обрабатывали в программе FlowJo (версия vX.G.7).
Выделенную субпопуляцию B-TILs размножали в специализированной среде с добавлением CD4G и IL4. На 5-7 сутки однократно вводили суспензию TIL-B в объёме 100мкл. Противоопухолевая эффективность TIL-B оценивалась методом динамического МРТ исследования смоделированной глиомы мыши, а также методом интравитальной микроскопии. Полученные результаты позволят разработать индивидуальные подходы лечения к пациентам с онкологией. Работа выполнена в рамках гранта РНФ (№ 21-74-2G11G) «Прижизненный анализ миграции иммунных и опухоль-ассоциированных стро-мальных клеток в очаг опухолей».
Литература:
1. Céline M Laumont et all. Nature Reviews Cancer 2G22. V. 22.
P. 414.
2. C. Lee-Chang, Aida Rashidi et all. Cancer Immunol Res D. 2G19.
V.7. P. 1928.
3. Peiling Tsou, Hiroyuki Katayama et all. Cancer Res O. 2G16.
V.76. P. 5597.
4. Soizic Garaud, Laurence Buisseret et all. JCI Insight. S. 2G19. V.
4. e129641.
5. Tullia C. Bruno, Peggy J. Ebner et all. Cancer Immunol Res. O.
2G17. V. 5. P. 898.
РЕАКЦИЯ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ТОПОГРАФИЮ ПОВЕРХНОСТИ КОМПОЗИТНЫХ МАТРИЦ НА ОСНОВЕ POLY-D-L-LACTIDE-CO-GLYCOLIDE
С.В. Надеждин, Д.В. Маклаков, М.П. Фомина, Г.А. Новиков
ОФГАОУ ВО Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, Россия
e-mail: nadezhdin@bsu.edu.ru
Ключевые слова: мезенхимные стволовые клетки, топография поверхности, адгезия, миграция, пролиферация, дифференцировка.
Топография поверхности имплантатов определяет биологические реакции клеток и скорость процесса регенерации тканей. Сегодня костнопластические материалы представляют собой композиты, состоящие как из сплавов металлов, так и полимеров обогащенных различными остеоиндуктивными факторами. Цель исследования — оценить адгезию, миграцию, пролиферацию и диффе-ренцировку МСК в остеогенном направлении при культивировании на композитных матрицах, обладающих различными физико-химическими характеристиками.
Методом мокрого формования были изготовлены композитные матрицы (КМ) на основе poly-D-L-lactide-co-glycolide (PLGA — 75/25) без и с фосфатами кальция/ гидроксиапатитом (PGLA+ФК/ГА).
Мезенхимные стволовые клетки (МСК) крысы культивировались статическим методом на КМ в лунках 24-х луночных планшетов 10 дней в питательной среде DMEM/F12 с 10% эмбриональной сывороткой (ООО «ПанЭко», РФ) в стандартных условиях. Методом конфокальной лазерной микроскопии оценивали адгезию, миграцию, пролиферацию и дифференцировку МСК в остеогенном направлении при помощи реагентов: «AM Calcium Green-1» (Invitrogen, США), «RUNX2», «Osterix» и «Vinculin» со вторичными антителами (Abcam, Великобритания). Статистическую обработку выполняли на ПО «Statistica» 6.0.
Методами растровой сканирующей электронной и атомно-силовой микроскопии было установлено, что более развитой рельеф поверхности, пористость и шероховатость поверхности имеют КМ из PGLA+ ФК/ГА, по сравнению с КМ из PLGA.
В ходе исследования in vitro было установлено, что МСК культивированные на КМ из PGLa+ФК/ГА сильнее прикрепляются к поверхности и мигрируют в глубину материала, что подтверждается экспрессией винкулина. Также выявлено увеличение пролиферации и дифферен-цировки МСК в остеогенном направлении, которое проявляется увеличением концентрации Ca2+ и экспрессией факторов транскрипции RUNX2 и Osterix по сравнению с МСК культивированными на КМ из PGLA.
Проведенное исследование показало, что МСК активно реагируют на топографию поверхности КМ, при этом ключевыми факторами обеспечивающими остео-кондуктивные и остеоиндуктивные свойства являются: пористо-волокнистая структура материала, наноразмер-ная шероховатость поверхности (менее 70 нм) и наличие фосфатов кальция/гидроксиапатита. Исследование выполнено в рамках соглашения № 14.575.21.0164, идентификатор RFMEFI57517X0164.
Гены & Клетки XVII, №3, 2G22
