Развитие энергетического аппарата клеток Пуркинье мозжечка крысы в постнатальном онтогенезе Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 611.817.1.018.82:591.3]-092.9

О. А. КАРНЮШКО, В. Р. КОТ, С. М. ЗИМАТКИН

РАЗВИТИЕ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА КЛЕТОК ПУРКИНЬЕ МОЗЖЕЧКА КРЫСЫ В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

Гродненский государственный медицинский университет, Гродно, Республика Беларусь

O. A. KARNYUSHKO, V. R. KOT, S. M. ZIMATKIN

DEVELOPMENT OF ENERGY APPARATU CELLS IN DURING THE ONTOGENESIS

Grodno State Medical University, Grodno, Republic Belarus

РЕЗЮМЕ

Цель - оценить развитие энергетического аппарата в клетках Пуркинье (КП) мозжечка крыс в постнатальном онтогенезе (2-45-е сутки).

Методика. Исследование выполнено на 52 беспородных белых крысах разных возрастных групп: 2-, 7-, 15-суточные (ранний постнатальный период), 45-суточные (пубертатный период). Для исследования брали участки коры мозжечка и фиксировали в цинк-этанол-формальдегиде для иммуногистохи-мического исследования, замораживали в жидком азоте для гистохимического исследования и фиксировали в тетраоксиде осмия для электронно-микроскопического исследования. На парафиновых срезах с помощью первичных моноклональных мышиных антител Anti-ATP5A определяли им-мунореактивность АТФ-синтазы в цитоплазме КП. Для изучения окислительного метаболизма нейронов в криостатных срезах выявляли активность оксидоредуктаз, связанных с циклом Кребса: сукцинатдегидрогеназы (СДГ); с гликолизом - лак-татдегидрогеназы (ЛДГ). Изучение структуры митохондрий в КП и их морфометрию проводили на ультратонких срезах. Полученные цифровые значения обрабатывались методами непараметрической статистики (критерий Манна - Уитни).

Результаты. При электронно-микроскопическом исследовании установлено, что у крыс в постнатальном онтогенезе со вторых по 45-е сутки после рождения по мере дифференцировки КП уменьшается количество митохондрий на 1 мкм2 цитоплазмы, но прогрессивно увеличиваются их размеры и длина крист. В цитоплазме КП возрастает активность сукцинатдегидрогеназы (к 7-м

IN THE RAT CEREBELLUM PURKINJE

суткам), а активность лактатдегидрогеназы снижается (со 2-х по 45-е). Содержание АТФ-синтазы значительно возрастает к 7-м суткам, а затем снижается к 45-м суткам.

Заключение. Развитие энергетического аппарата КП происходит в раннем постнатальном онтогенезе, что сопровождается изменением количества, размеров, формы митохондрий, длины их крист и в цитоплазме увеличением активности маркерного фермента митохондрий сукцинатдегидрогеназы и содержания фермента синтеза АТФ - АТФ-синтазы.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: МОЗЖЕЧОК, МИТОХОНДРИИ, СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА, АТФ-СИНТАЗА, КРЫСА, КЛЕТКИ ПУРКИНЬЕ, ПОСТНАТАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ.

SUMMARY

Purpose. Examine the development of energy apparatus in rat cerebellum Purkinje cells (PC) in postnatal ontogenesis (2nd-45th days).

Methods. The study was performed on 52 white rats of different age groups: 2-, 7-, 15-daily (early postnatal period), 45-daily (pubertyperiod). The cerebellum samples were taken and fixed in zinc-ethanol-formaldehyde for immunohistochemistry, frozen in liquid nitrogen for histochemistry and fixed in osmium tetroxide for electron microscopy. In paraffin sections, the immunoreactivity of ATP synthase in the PC cytoplasm was determined by Anti-ATP5Aprimary monoclonal mouse antibodies. To study the oxidative metabolism of neurons in cryostat sections the activity of Krebs cycle-related oxidore-ductases: succinate dehydrogenase (SDG) was detected;

with glycolysis - lactate dehydrogenase (LDG). Studying of mitochondria structure and their morphometry was carried out on ultrathin sections. The mean values obtained for every animal were processed with nonpara-metric statistics (Mann - Whitney U-test).

Results. In electron microscopic study, it was found that in rats in postnatal ontogenesis from the second to the 45th day after birth, the number of mitochondria per 1 fim2 cytoplasm in is reduced as the PC are differentiated, but their size and length of crista are increased. In PC cytoplasm the activity of succinate dehydrogenase increases (by 7th days), and the activity of lactate dehydrogenase decreases (from 2nd to 45th days). ATP synthase content significantly increases by 7th days and then decreases by 45th days.

Conclusion. The development of the energy apparatus of PC occurs in early postnatal ontogenesis, which is accompanied by a change in the number, size, shape of mitochondria, the length of their crista and an increase in the activity of the mitochondrial marker enzyme succinate dehydrogenase and the content of the ATP synthase in the cytoplasm.

KEY WORDS: CEREBELLUM, MITOCHONDRIA, SUCCINATE DEHYDROGENASE, ATP SYNTHASE, RAT, PURKINJE CELLS, POSTNATAL DEVELOPMENT.

ВВЕДЕНИЕ

Клетки Пуркинье (КП) - это высокодифферен-цированные ГАМК-ергические нейроны, обеспечивающие обработку информации, поступающей в мозжечок по афферентным волокнам. Они являются единственными нейронами коры мозжечка, осуществляющими по своим аксонам выход информации к нейронам ядер мозжечка. КП у крыс образуются в эмбриогенезе (13-16-е сутки). Их дифференцировка происходит в течение первых постнатальных недель жизни, что сопровождается выравниванием их в монослой (с 4-х по 8-е сутки), ростом перикарионов, их дендритов и синаптиче-ских связей с параллельными волокнами (аксонами зернистых нейронов) и лазящими волокнами [2].

Морфогенетические процессы в созревающих КП а также поддержание трансмембранного потенциала, синтез медиаторов и синаптическая

передача в зрелых КП, требуют большого количества энергии АТФ. В нейронах АТФ образуют преимущественно митохондрии путем окислительного фосфорилирования. В их внутреннюю мембрану встроено пять (I-V) комплексов дыхательной цепи. Сукцинатдегидрогеназа (СДГ), фермент цикла Кребса, является компонентом комплекса II митохондриальной дыхательной цепи и маркером митохондрий, так же как и фермент, ответственный за последний этап митохондри-ального окислительного фосфорилирования -АТФ-синтаза (комплекс V) [1, 5, 7]. Для более эффективного энергоснабжения нейронов, митохондрии способны к перемещению, а также делению и слиянию [4]. Митохондрии играют ключевую роль в регуляции таких внутриклеточных процессов, как апоптоз, образование активных форм кислорода, гомеостаз кальция [11]. Нарушения функционирования митохондрий в КП может стать причиной дисфункции мозжечка, что определяет важность изучения их в постнатальном онтогенезе [3].

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - изучить развитие энергетического аппарата в клетках Пуркинье мозжечка крыс в постнатальном онтогенезе (245-е сутки).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование выполнено на 52 беспородных белых крысах с учетом «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и разрешения комитета по биомедицинской этике Гродненского государственного медицинского университета. Животных декапи-тировали на 2-, 7-, 15-, 45-е сутки после рождения. Образцы мозжечка фиксировали в цинк-этанол-формальдегиде при +4 ° С (на ночь), а затем заключали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм паравермальной части мозжечка готовили с помощью микротома (Leica RM 2125 RTS, Германия), монтировали на предметные стекла. Для иммуногистохимического выявления АТФ-син-тазы применяли первичные моноклональные мышиные антитела Anti-ATP5A antibody фирмы Abcam (Великобритания, ab. 14748) в разведении 1: 2400 (из ряда разведений 1: 100-1: 3000 выбрано как оптимальное по соотношению сигнал/

шум), при +4 °С, экспозиция 20 ч, во влажной камере. Для выявления связавшихся первичных антител использовали набор EXPOSE Mouse and Rabbit specific HRP/DAB detection IHC kit Abcam (Великобритания, ab. 80436). В качестве отрицательного контроля использовали препараты, при изготовлении которых вместо первичных антител срезы обрабатывали их разбавителем.

Для изучения активности дегидрогеназ образцы мозжечка замораживали в жидком азоте, изготавливали криостатные срезы, которые затем обрабатывали на выявление активности оксидоредуктаз, связанных с циклом ^ебса: сукцинатдегидрогеназы (СДГ); с гликолизом -лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Kоличecтвeннyю оценку активности СДГ и ЛДГ проводили, определяя оптическую плотность полученного осадка хромогена в цитоплазме нейронов, на максимуме поглощения окрашенных продуктов реакций. Относительную активность ферментов выражали в единицах оптической плотности.

Изучение гистологических препаратов, их микрофотографирование проводили с помощью микроскопа Axioscop 2 plus (Zeiss, Германия), цифровой видеокамеры (Leica DFC320, Германия) и программы компьютерного анализа изображения Image Warp (Bitflow, США).

Для электронно-микроскопического исследования кусочки мозжечка сразу после их взятия помещали в 1 % осмиевый фиксатор на буфере Миллонига (рН = 7,4) на 2 часа при температуре +4 °C. Далее их промывали в смеси буфера Миллонига и сахарозы, обезвоживали и затем заключали в заливочную смолу. На ультрамикротоме Leica EM UC7 (Германия) готовили полутонкие срезы толщиной 3S0 нм и окрашивали метилено-вым синим. Препараты просматривали в световом микроскопе с целью уточнения локализации KП палеоцеребеллюма. Затем изготавливали ультратонкие срезы толщиной около 3S нм на ультрамикротоме Leica EM UC7 (Германия), собирали на опорные медные сеточки, контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Полученные препараты изучали в электронном микроскопе JEM-1011 (JEOL, Япония), фотографировали цифровой камерой Olympus Mega View III (Olympus

Soft Imaging Solutions, Германия). Ультраструктурную морфометрию проводили с помощью программы для обработки изображения iTEM (JEOL, Япония).

Полученные результаты обрабатывали методами непараметрической статистики с помощью лицензионной компьютерной программы Statistica 6.0 для Windows (StatSoft, Inc., США). В описательной статистике для каждого показателя определяли значения медианы (Ме) и интерквартильного диапазона (IQR). Сравнение групп по одному признаку проводили с помощью критерия Манна - Уитни для независимых выборок (Mann - Whitney U-test). Различия между группами считали статистически значимыми, если вероятность ошибочной оценки не превышала 5 % (p < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Установлено, что количество митохондрий на единицу площади цитоплазмы КП изменяется волнообразно. Так, на вторые сутки постнаталь-ного онтогенеза у крыс количество митохондрий наибольшее, при этом они имеют небольшие размеры, короткие кристы, а некоторые из них имеют электронно-плотный матрикс. По мере роста перикариона КП со вторых по седьмые сутки их количество снижается, к 15-м суткам несколько возрастает, по сравнению с семисуточными крысами, и к 45-м суткам вновь снижается, становясь в два раза меньше, чем у двухсуточных крыс. При этом со 2-х по 45-е сутки прогрессивно увеличиваются размеры митохондрий (рис. 1, табл. 1). Площадь, занимаемая митохондриями в цитоплазме КП, варьирует в разные сроки от 6 до 10 %. Округлая форма данных органелл характерна для раннего периода постнатального онтогенеза (2-15-е сутки), затем меняется на более удлиненную (45-е сутки) (рис. 1, табл. 1). Со вторых по 45-е сутки относительное количество крист на 1 мкм2 площади митохондрии почти не изменяется, но при этом к 45-м суткам в 1,5 раза увеличивается их длина (рис. 1, табл. 1).

Установлено, что активность маркерного фермента митохондрий сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в клетках Пуркинье мозжечка крыс выявляется по темно-синему осадку продукта гистохимической реакции диформазана. Активность

СДГ в клетках Пуркинье крысы имеет различия она минимальна, наиболее интенсивный рост в разные возрастные периоды. На вторые сутки активности фермента был обнаружен в раннем

Рисунок 1 - Митохондрии клеток Пуркинье мозжечка крыс в постнатальном онтогенезе: а - 2-е, б - 7-е, в - 15-е, г - 45-е сутки после рождения. Электронограмма. Ув. 40 000

Таблица 1 - Результаты морфометрии митохондрий в клетках Пуркинье мозжечка в разные сроки постнаталь-ного развития у крыс (Ме ± ЩВ.)

Показатель 2-е сутки 7-е сутки 15-е сутки 45-е сутки

Количество митохондрий на 1 мкм2 цитоплазмы 2,60 ± 1,25 1,19 ± 0,05* 1,37 ± 0,16*# 1,07 ± 0,24*+

Средняя площадь митохондрий, мкм2 0,04 ± 0,01 0,06 ± 0,04 0,07 ± 0,03* 0,09 ± 0,01*#

Фактор элонгации митохондрий 1,46 ± 0,55 1,55 ± 0,52 1,78 ± 0,62 2,62 ± 0,85*#

Фактор-формы митохондрий 0,87 ± 0,10 0,83 ± 0,07 0,83 ± 0,15 0,68 ± 0,14*#

Количество крист на 1 мкм2 митохондрии 55,21 ± 10,07 51,22 ± 19,64 42,38 ± 5,83* 56,77 ± 13,51+

Длина крист на 1 мкм2 митохондрии 7,50 ± 1,36 8,87 ± 1,59 8,91 ± 1,96 11,29 ± 4,69*#+

Площадь, занимаемая митохондриями в цитоплазме, % 8,18 ± 4,29 6,68 ± 4,72 10,35 ± 4,91 9,75 ± 3,25#

Примечания: * - р < 0,05 по сравнению со вторыми сутками; # - р < 0,05 по сравнению с седьмыми сутками; + - р < 0,05 по сравнению с 15 сутками.

постнатальном периоде, и к седьмым суткам активность этого фермента значительно возрастала. К 45-м суткам наблюдалось некоторое снижение активности данного фермента (табл. 2). Напротив, активность ЛДГ в цитоплазме КП мозжечка крыс со вторых по 45-е сутки после рождения снижается (табл. 2).

Результаты иммуногистохимического исследования показали, что у двухсуточных крыс в КП выявляется лишь низкая иммунореактивность маркера митохондрий АТФ-синтазы в узком ободке цитоплазмы вокруг ядра. На 7-е сутки в КП иммунореактивность АТФ-синтазы увеличивается преимущественно в апикальной части клетки, а в базальной остается низкой. На 15-е сутки наблюдалась равномерная иммунореактивность

АТФ-синтазы в перикарионах КП вокруг имму-нонегативных ядер и в дендритах, хорошо визуализирующихся на фоне светлого нейропиля молекулярного слоя. К 45-м суткам иммуноре-активность АТФ-синтазы в цитоплазме перика-рионов и, особенно, в дендритах КП снижалась (рис. 2, табл. 2). При этом динамика содержания АТФ-синтазы в телах КП очень напоминала изменения активности СДГ.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

В данной работе представлена динамика постнатального развития энергетического аппарата КП, полученная с помощью комплекса гистологических методов. При электронно-микроскопическом исследовании показано, что в процессе созревания КП крысы (2-45-е сутки

¿л'-...л < тРлпЬ^\* V

, I • V

* ч -

Л V

Г '

аь'5 .V $ ■ \viSE ¿р-"' у

1 ,

.....

V

и ¿1 . .. /-. ■ ■ ■

.. . ■ ■ г ■ ■ ■ -л- -г

' ■ Ч ■ - . . . * . у.? - '■ •• -Л1^,

Рисунок 2 - Локализация и содержание АТФ-синтазы в клетках Пуркинье мозжечка крыс

в постнатальном онтогенезе: а - 2-е, б - 7-е, в - 15-е, г - 45-е сутки после рождения. Иммуногистохимическаяреакция на АТФ-синтазу. Ув. 400. Цифровая микрофотография

Таблица 2 - Активность дегидрогеназ и содержание АТФ-синтазы (ед. опт. пл.) в цитоплазме клеток Пуркинье мозжечка крыс в разные сроки постнатального развития (Ме ± ЩВ.)

Показатель 2-е сутки 7-е сутки 15-е сутки 45-е сутки

Активность сукцинатдегидрогеназы 0,10 ± 0,02 0,21 ± 0,03* 0,22 ± 0,02* 0,21 ± 0,02*

Активность лактатдегидрогеназы 0,23 ± 0,03 0,24 ± 0,02 0,20 ± 0,01*# 0,20 ± 0,02*#

Содержание АТФ-синтазы 0,11 ± 0,02 0,23 ± 0,02* 0,24 ± 0,06* 0,21 ± 0,02*#

Примечания: * - р < 0,05 по сравнению со вторыми сутками; # - р < 0,05 по сравнению с седьмыми сутками.

после рождения) митохондрии претерпевают морфологические изменения: увеличивается площадь митохондрий и длина их крист, изменяется форма с округлой на более удлиненную. При этом количество митохондрий на единицу площади цитоплазмы КП значительно уменьшается в результате 4-кратного роста перика-рионов [2]. Однако относительная площадь, занимаемая митохондриями в цитоплазме КП на протяжении постнатального периода, колеблется незначительно - от 6 до 10 %, что связано с увеличением самих митохондрий.

Со 2-х по 45-е сутки изменяется и расположение митохондрий в перикарионе. Так, на 2-7-е сутки они располагаются преимущественно в апикальной части клетки, месте формирования дендрита, а на 15-45-е сутки митохондрии равномерно располагаются в ободке цитоплазмы вокруг ядра и в дендритах. По литературным данным, размеры, количество и форма митохондрий в клетках подвержена изменениям благодаря их способности к делению, слиянию, изменению внутриклеточного распределения, для обеспечения их энергетических потребностей. Изменения в морфологии митохондрий во время клеточной дифференцировки обычно связывают с необходимой адаптацией клетки для активации окислительного метаболизма [8, 9, 10, 12].

Гистохимически установлено, что у крыс в пост-натальном онтогенезе в цитоплазме КП увеличивается активность СДГ. Сукцинатдегидрогеназа связывает трикарбоновый цикл с цепью транспорта электронов в митохондриях, следовательно, активность этого фермента может отражать распределение данных органелл в нейронах [6]. Напротив, в постнатальном периоде активность ЛДГ постепенно уменьшается, что свидетельствует

об ослаблении более древнего, внемитохондриаль-ного источника энергии - анаэробного гликолиза. Таким образом, разнонаправленное изменение активности этих ферментов свидетельствует о становлении более совершенного, митохон-дриального окислительного метаболизма в КП в постнатальном онтогенезе.

Результаты иммуногистохимического исследования показали, что содержание маркера митохондрий АТФ-синтазы в КП мозжечка выявляется в цитоплазме и их отростках, совпадая с внутриклеточным распределением этих органелл. Так, на вторые сутки в цитоплазме КП мозжечка крыс содержание АТФ-синтазы была низкой, на 7-е сутки значительно возрастало в апикальной части КП (месте роста дендритов), на 15-е сутки - в самих дендритах, а после завершения роста дендритов она в них снижалась. Этот период развития КП характеризуется активной их дифференцировкой, дендрито- и синаптогенезом. Увеличение содержания АТФ-синтазы свидетельствует об увеличении их фосфорилирующей способности и образования АТФ, необходимой для созревания и функционирования нейрона.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, развитие энергетического аппарата КП происходит в раннем постнаталь-ном онтогенезе, что сопровождается изменением количества, размеров, формы митохондрий, длины их крист и в цитоплазме увеличением активности маркерного фермента митохондрий сукцинатдегидрогеназы и содержания фермента синтеза АТФ - АТФ-синтазы.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Бунеева, О. А. Нарушение функций митохондрий при болезни Паркинсона / О. А. Бунеева,

А. Е. Медведев. - Текст: непосредственный // Биомедицинская химия. - 2011. - Т. 57, вып. 3. - С. 246-281.

2. Зиматкин, С. М. Мозжечок крысы: строение, функции, онтогенез / С. М. Зиматкин, О. А. Карнюшко. - Гродно : ГрГМУ, 2019. - 132 с. -Текст : непосредственный.

3. Chrysostomou, A. Investigating complex I deficiency in Purkinje cells and synapses in patients with mitochondrial disease / A. Chrysostomou [et al.]. - Text: immediate //Neuropathology and applied neurobiology. - 2016. - Vol. 42, № 5. - Р. 477-492. doi:10.1111/ nan.12282

4. Devine, M. J. Mitochondria at the neuronalpresynapse in health and disease /M. J. Devine, J. T. Kittler. - Text: immediate // Nat. Rev. Neurosci. - 2018. - Vol. 19, № 2. - Р. 63-80. doi: 10.1038/nrn.2017.170

5. Friedman, J. R. Mitochondrial form and function / J. R. Friedman, J. Nunnari. - Text: immediate // Nature. - 2014. - Vol. 505, № 7483. - Р. 335-343. doi:10.1038/nature12985

6. Hajos, F. Electron histochemical observation of succinic dehydrogenase activity in various parts of neurons / F. Hajos, S. Kerpel-Fronius. - Text: immediate // Experimental Brain Research. - 1969. - Vol. 8, Is 1. -P. 66-78.

7. Jonckheere, A. I. Mitochondrial ATP synthase: architecture, function and pathology/ A. I. Jonckheere, J. A. Smeitink, R. J. Rodenburg. - Text: immediate // J. Inherit. Metab. Dis. - 2011. - Vol. 35, № 2. - P. 211-225.

8. Khacho, M. Mitochondrial dynamics in the regulation of neurogenesis: From development to the adult brain / M. Khacho, R. S. Slack. - Text: immediate// Dev. Dyn. -2018. - Vol. 247, № 1. - P. 47-53. doi:10.1002/dvdy.24538

9. Lin, M. Y. Regulation of mitochondrial transport in neurons /M. Y. Lin, Z. H. Sheng. - Text: immediate //Exp. Cell Res. - 2015. - Vol. 334, № 1. - P. 35-44.

10. Son, G. Roles of mitochondria in neuronal development / G. Son, J. Han. - Text: immediate // BMB Rep. - 2018. - Vol. 51, № 11. - P. 549-556. doi:10.5483/ BMBRep.2018.51.11.226

11. Srividhya, R. Mitochondrial alterations in aging rat brain: effective role of (-)-epigallo cate-chin gallate / R. Srividhya [et al.]. - Text: immediate // Int. J. Dev. Neurosci. - 2009. - Vol. 27, № 3. - P. 223231. doi: 10.1016/j.ijdevneu.2009.01.003.

12. Xavier, J. M. Mitochondria: Major Regulators of Neural Development / J. M. Xavier, C. M. Rodrigues, S. Sola. - Text : immediate // Neuroscientist. - 2016. - Vol. 22, № 4. - P. 346-358. doi:10.1177/1073858415585472

УДК 591.463.2:[577.114/. 115:579.842.11]:599.323.4

Е. А. ПОПЛАВСКАЯ, Д. Ю. ПОПЛАВСКИЙ, В. В. ДАНИЛЮК, Е. Н. ХИЛЬМАНОВИЧ

СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ СЕМЕННИКОВ КРЫС В ОТДАЛЕННОМ ПЕРИОДЕ ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЛИПОПОЛИСАХАРИДА E. COLI

Гродненский государственный медицинский университет, Гродно, Республика Беларусь

E. A. POPLAVSKAJA, D. JU. POPLAVSKIJ, V. V. DANILYUK, E. N. HILMANOVICH

STRUCTURAL FEATURES OF RATS TESTIS IN THE DISTANT PERIOD AFTER THE EXPOSURE OF LIPOPOLYSACCHARIDE ESCHERICHIA COLI

Grodno State Medical University, Grodno, Republic of Belarus

РЕЗЮМЕ

За последнее время нарушение репродуктивной функции у мужчин приобрело особую медицинскую и социальную значимость. Демографические показатели во многих странах мира свидетельствуют об увеличении числа мужчин с нарушенной

фертильностью, составляющей в среднем 30-50 % от всех причин бесплодия браков. Причины этого состояния и структура до сих пор излагаются нечетко и противоречиво, несмотря на уже изученный внушительный перечень факторов, нарушающих сперматогенез.