CC BY
20
tle Supporting Information // Proceedings of the National Academy of Sciences.- 2012. - №109. - Р. 7693-7698
3. Zio, D. De, Maiani, E., Cecconi, F. Apaf1 in embryonic development - shaping life by death, and more // Journal of Developmental Biology. - 2015. - № 59. - Р. 33 - 39
УДК 636.22/.28.082.2
РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА В ЛОКУСЕ IGF-I КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА DEVELOPMENT OF THE TEST SYSTEM FOR DETECTING POLYMORPHISM IN THE IGF-I LOCUS IN CATTLE
Ковалюк Наталья Викторовна, д-р биол. наук, Сацук Владимир Федорович, канд. биол. наук, Мачульская Елена Витальевна, канд. биол. наук, Шахназарова Юлия Юрьевна,
ФГБНУ КНЦЗВ, Российская Федерация, г. Краснодар Kovalyuk Natalia Viktorovna, Dr. Biol. Sci. Satsuk V.F., Cand. Biol. Sci., Machulskaya Elena Vitalievna, Cand. Biol. Sci. Shakhnazarova Yulia Yurievna,
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation
Аннотация: разработана функциональная тест - система на основе ПЦР/ПДРФ для выявления полиморфизма локуса IGF1r10 в гене IGF-1. Планируется использовать тест-систему для генотипирования животных с целью выявления связи между определенными полиморфными вариантами и хозяйственно-полезными признаками.
Ключевые слова: локус IGF1r10; ген IGF-1; тест-система; частота встречаемости.
Abstract: a functional test system was developed based on PCR / RFLP to identify the polymorphism of the IGF1r10 locus in the IGF-1 gene. It is planned to use a test system for genotyping ani-
mals to identify the connection between certain polymorphic variants and economic traits.
Key words: Locus IGF1r10; IGF-1 gene; test system; frequency of occurrence.
Инсулиноподобный фактор роста IGF-1 играет важную физиологическую роль в регуляции роста, развития, обмена веществ и лактации у крупного рогатого скота [4].
Он регулирует дифференциацию в различных тканях и в специфических типах клеток. IGF-1 также стимулирует анаболическую и митогенную активности гормона роста в различных тканях [3]. Синтезируется IGF-1 преимущественно в печени [1].
Системный эффект различных полиморфных вариантов IGF-1 связан с разнообразием репродуктивных характеристик крупного рогатого скота, включая возраст первого отела, послеродовое возобновление овариальной цикличности, предимплан-тационное развитие эмбриона [6].
Также исследованиями установлено, что некоторые нук-леотидные полиморфизмы в промоторной области и полиморфизмы, локализованные между 3-4 экзонами, оказывают влияние на ростовые качества скота [2].
Кроме того, была доказана связь шести нуклеотидных полиморфизмов с качественными характеристиками молока, продуктивным долголетием, размером и кондициями животных. Так, удалось установить, что SNP, идентифицированные в 3' регионе гена IGF-1, достоверно влияют на время продуктивной жизни [5].
Цель проведенных исследований - разработать тест - систему на основе ПЦР/ПДРФ для выявления полиморфизма локуса IGF1r10 в гене IGF-1.
Методика. Исследования проведены на базе лаборатории биотехнологии ФГБНУ КНЦЗВ. Объектом исследования являлись образцы спермы от 20 быков-производителей голштинской породы (образцы спермы предоставлены ООО НПО «Юг-Плем»). Для выделения ДНК из образцов использовали наборы реагентов Diatom™ DNA Prep 100 (ООО «Лаборатория Изоген», г. Москва). Для постановки реакций использовали наборы реа-
гентов Gene Pak PCR Core (ООО Лаборатория «Изоген», г. Москва) и праймеры следующей последовательности: R10.1 5 'AGAGGAAATAACTGTGGC3', R10.2 5 'TTGTTGTTGTTTAGTCGC3'. Обработку ПЦР-продуктов эндонуклеазой Bst2UI проводили без предварительной очистки. Визуализацию ПЦР-продуктов проводили в 2 % агарозном, а фрагментов рестрикции - в 12 % полиакриламидном геле.
Результаты исследований и их обсуждение. В базе данных GenBank на 5 хромосоме, ген IGF-1, в области 3' региона была идентифицирована последовательность, содержащая полиморфизм IGF1r10 (TPA_asm: Bos taurus breed Hereford chromosome 5 7180001926640, whole genome shotgun sequence GenBank: DAAA02013700.1 (16810-17130))
SNP аллели: (CACAGAGCCA[C/T]CTGGGAAACC). Праймеры R10.1 и R10.2, подобранные с использованием программы Primer Premier, позволили амплифицировать область гена IGF-1 протяженностью 281пара нуклеотидов.
Анализ последовательности гена IGF-1 в области мутации показал, что исследуемая мутация C^T приводит к исключению одного из сайтов рестрикции эндонуклеазы Bst2UI (CCWGG) (СибЭнзим). В случае генотипа CC образуется 6 фрагментов -79, 63, 56, 39, 26,18 пн; CT - 135, 79, 63, 56, 39, 26,18 пн; ТТ-135, 63, 39, 26, 18 пн. Электрофореграмма продуктов рестрикции представлена на рисунке 1.
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Рисунок 1. Электрофореграмма рестрицированных Bst2UI ПЦР-продуктов при выявлении полиморфизма локуса IGF1r10 в гене IGF-1.
Дорожки 1,2, 4-8 - рестрицированные Bst2UI ПЦР-продукты от животных с генотипом СС;
Дорожка 3 - молекулярный маркер весов (шаг 50 пн);
Дорожка 9 - рестрицированные Bst2UI ПЦР-продукты от животных с генотипом СТ.
Генотипирование 20 быков - производителей голштин-ской породы позволило выявить одного носителя генотипа СТ (частота встречаемости генотипа 0,05).
Выводы. Таким образом, создана функциональная тест-система для выявления полиморфизма локуса IGF1r10 в гене IGF-1.
В дальнейшем планируется провести генотипирование животных айрширской породы и достаточное для выявления определенных закономерностей, количество животных гол-штинской породы.
Список литературы
1. Etherton, T. D. Somatotropic function: the somatomedin hypothesis revisited /T. D. Etherton // J. Anim. Sci.-2004. - 82. -
Р. 239-244
2. Ge, W. Association of a genetic marker with blood serum insulin-like growth factor-I concentration and growth traits in Angus cattle / W. Ge, M. E. Davis, H. C. Hines, K. M. Irvin and R. C. Sim-men // J.Anim. Sci. -2001.-79, P. 1757-1762
3. Laron, Z. Insulin-like growth factor 1 (IGF-1): a growth hormone / Z. Laron // Mol. Pathol.- 2001. -54, 311-316
4. Lucy, M. C. Functional differences in the growth hormone and insulin like growth factor axis in cattle and pigs: implications for post-partum nutrition and reproduction / M. C. Lucy // Reprod. Dom-est. Anim. - 2008. - 43 (Suppl. 2) -Р. 31-39.
5. Mullen, MP Single Nucleotide Polymorphisms in the Insulin-Like Growth Factor 1 (IGF1) Gene are Associated with Performance in Holstein Friesian Dairy Cattle / Mullen MP, Berry DP, Howard DJ, Diskin MG, Lynch CO, Giblin L, Kenny DA, Ma-gee DA, Meade KG, Waters SM // Front Genet.- 2011.- Feb 16;2:3. doi: 10.3389/fgene.2011.00003
6. Velazquez, M. A. The usefulness of a single measurement of insulin-like growth factor-1 as a predictor of embryo yield and pregnancy rates in a bovine MOET program / M. A. Velazquez, M. Newman, M. F. Christie, P. J. Cripps, M. A. Crowe, R. F. Smith, and H. Dobson // Theriogenology. - 2005.-64, P. 1977-1994
УДК 636.32/.38.082.3
МНОГОПЛОДИЕ И ТИП РОЖДЕНИЯ ПОТОМСТВА У МЕРИНОСОВЫХ И РОМАНОВСКИХ ОВЕЦ И ИХ ПОМЕСЕЙ ОТ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО СКРЕЩИВАНИЯ MULTIPAROUS CHARACTERISTICS AND BIRTH-TYPE OF THE PROGENY IN MERINO AND ROMANOV SHEEP AND THEIR CROSSES FROM REPRODUCTIVE CROSSING
Кравченко Николай Иванович, д-р с.-х. наук,
Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии,
Российская Федерация, г. Краснодар
Kravchenko Nikolai Ivanovich, Dr. Agr. Sci.
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary
Medicine, Russian Federation
Аннотация: рассмотрены многоплодие овцематок и распределение по типам рождения потомства от различных вариантов подбора родительских пар с использованием полукровных помесей от романовской породы с мериносами кавказской породы при их воспроизводительном скрещивании в сравнении с чистопородными овцами исходной породы с целью создания нового генотипа многоплодных овец.
Ключевые слова: овцы; мериносы; романовская порода; полукровные помеси; воспроизводительное скрещивание; многоплодие; типы рождения.
Abstract: the paper considers multiparous characteristics of ewes and the distribution according to the types of birth of the offspring from various variants of selection of parental pairs using half-blooded crosses from the Romanov breed with the merinos of
