CC BY
64
Al
SSM
антиоксидантным, противовоспалительным, антибактериальным и иммуномодулирующим действием [1].
Перечисленные антиоксиданты относятся к пребиоти-кам, то есть веществам, способным прямо или опосредованно влиять на фиксацию, выживание и функционирование нормальной микрофлоры кишечника. Следовательно, лист F. viridis может в перспективе пополнить арсенал средств, применяемых для профилактики нарушений микробиоценоза кишечника.
Препараты на основе листа земляники зеленой впервые исследуются на антистафилококковую активность, и результаты антибактериальных испытаний свидетельствуют о перспективности использования данного лекарственного растительного сырья для разработки биологически активных добавок, пищевых продуктов, а также для повышения срока годности товаров косметической и пищевой промышленности. На фоне появления антибиотикоустой-чивых форм золотистого стафилококка расширение номенклатуры бактериостатических антистафилококковых средств исследованное сырье представляет интерес для практической медицины, ветеринарии и пищевой промышленности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гусев Н.Ф. Биологические особенности и перспективы использования растений рода Veronica L. (сем.. Scrophulariaceae Juss.) лесостепного и степного Предуралья: автореф. дисс. ... докт. наук. Оренбург. 2010. 542 с.
Gusev N.F. Biologicheskiye osobennosti i perspektivy ispolzovaniya rasteniy roda Veronica L. (sem.. Scrophulariaceae Juss.) lesostepnogo i stepnogo Preduralia: avtoref. diss.... dokt. nauk. Orenburg. 2010. 542 s.
2. Тиньков А.А. и др. Сравнительный анализ влияния растений семейства подорожниковые на рост E. coli in vitro // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2014. №. 2. С. 1-16.
Tinkov A.A. i dr. Sravnitelnyy analiz vliyaniya rasteniy semeystva podorozhnikovyye na rost E. coli in vitro //Byulleten Orenburgskogo nauchnogo tsentra UrO RAN. 2014. №. 2. S. 1-16.
3. Докучаева Ю.А., Машкова А.А. Биоморфологические особенности Fragaria viridis Duch.(Weston.) оренбургского Предуралья. Наука Красноярья. Биология. Экология. 2012. С. 37.
Dokuchayeva Yu.A., Mashkova A.A. Biomorfologicheskiye osobennosti Fragaria viridis Duch.(Weston.) orenburgskogo Preduralia. Nauka Krasnoyaria. Biologiya. Ekologiya. 2012. S. 37.
4. Simirgiotis M.J., Schmeda-Hirschmann G. Determination of phenolic composition and antioxidant activity in fruits, rhizomes and leaves of the white strawberry (Fragaria chiloensis spp. chiloensis form chiloensis) using HPLC-DAD-ESI-MS and free radical quenching techniques. Journal of Food Composition and Analysis. 2010. Т. 23. № 6. С. 545-553.
5. Докучаева Ю.А., Немерешина О.Н., Гусев Н.Ф. Содержание витаминов в листьях Fragaria viridis Duch.(Weston) степной зоны оренбургского Предуралья. Известия оренбургского государственного аграрного университета. 2015. № 1 (51). С. 140-142.
Dokuchayeva Yu.A., Nemereshina O.N., Gusev N.F. Soderzhaniye vitaminov v listiakh Fragaria viridis Duch.(Weston) stepnoy zony orenburgskogo Preduralia. Izvestiya orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. 2015. № 1 (51). S. 140-142.
6. Jiajun L. et al. Fragaria viridis Duch. distributed in China was certified by classificatory observation and RAPD analysis. Acta Horticulturae Sinica. 2001. Т. 28. № 2. С. 119-122.
7. Wang S.Y., Lin H.S. Antioxidant activity in fruits and leaves of blackberry, raspberry, and strawberry varies with cultivar and developmental stage. Journal of agricultural and food chemistry. 2000. Т. 48. № 2. С. 140-146.
8. Ревякина В.А. Атопический дерматит у детей. Осложненные формы. Лечащий врач. 2003. Т. 3. С. 53-56.
Revyakina V.A. Atopicheskiy dermatit u detey. Oslozhnennyye formy. Lechashchiy vrach. 2003. T. 3. S. 53-56.
9. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам. М.: Медицина.1982.
Birger M.O. Spravochnik po mikrobiologicheskim i virusologicheskim metodam. M.: Meditsina.1982. i-riv
УДК: 615.32:547.97 Код специальности ВАК: 14.04.02
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ И ИССЛЕДОВАНИЕ СЛАБИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ГУСТОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ПЛОДОВ СЕННЫ АЛЕКСАНДРИЙСКОЙ
В.А. Куркин, А.А. Шмыгарева, А.Н. Саньков,
ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович - e-mail: [email protected]
Разработана технология получения густого экстракта плодов сенны александрийской (Senna alexandrina Mill.) и решены вопросы его стандартизации. Проведено исследование слабительного действия густого экстракта из плодов сенны александрийской, полученного с использованием ресурсосберегающих технологий. В результате изучения условий экстракции антрагликозидов из плодов сенны александрийской определены оптимальные параметры: методом экстрагирования выбрана перколяция, соотношение «сырье - экстрагент» - 1:10, экстрагент - спирт этиловый 40%.
Ключевые слова: сенна александрийская, Senna alexandrina Mill., растительное сырье, антрагликозиды, густой экстракт.
The developed technology of manufacturing of thick fruit extract of Senna alexandrina Mill. and the questions of his standardization are decided. The study of the laxative action of the thick extract of Senna alexandrina fruits, produced using resource-saving technologies was carried out. As result of the study of the extraction conditions of anthraglycosides from Senna alexandrina fruits the optimal parameters were determined: selected method of extraction is percolation, the ratio of raw materials - extractant is 1:10, extractant - ethyl alcohol 40%.
Key words: Senna alexandrina Mill., herbal drugs, anthraglycosides, phytopharmaceuticals, thick fruit extract.
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Введение
На сегодняшний день ассортимент слабительных средств растительного происхождения насчитывает около 20 наименований [1]. В качестве растительного сырья для получения слабительных препаратов можно отметить кору крушины Cortex Frangulae, корни ревеня Radix Rhei, листья сенны Folium Sennae, масло касторовое Oleum Ricini, слоевища морской капусты Laminaria saccharina [2]. При этом доминирующим источником получения указанных препаратов являются листья сенны александрийской Senna alexandrina Mill. Родиной сенны является Северная Африка. В странах СНГ она возделывается как однолетняя культура. В Центральной Азии, преимущественно в специализированных хозяйствах Южного Казахстана (Чимкентская область) и Туркменистана, культивируется в РФ [3]. Сырьем сенны александрийской являются не только листья, но и плоды [4]. Ранее нами проведено исследование по определению содержания суммы антраценпроиз-водных в плодах и листьях сенны александрийской, в плодах содержание составляет от 1,30 до 1,50%, в листьях -от 1,21 до 1,88% (в пересчете на сеннозид В) [5]. Соответственно плоды и листья сенны александрийской имеют приблизительно одинаковый уровень содержания антраценпроизводных. В связи с этим актуальной является проблема разработки новых лекарственных препаратов на основе плодов сенны александрийской.
Цель исследования: разработка технологии получения и стандартизация густого экстракта из плодов сенны александрийской (Senna alexandrina Mill.), а также изучение слабительной активности нового лекарственного препарата «Густой экстракт сенны александрийской».
Материал и методы
Объектом исследования служили образцы плодов сенны александрийской, собранные в период плодоношения (октябрь, 2014 г.) в Индии.
Электронные спектры измеряли на спектрофотометре «UNIC0-2800» в кюветах с толщиной слоя 10 мм.
Упаривание проводили под вакуумом с использованием испарителя ротационного марки «ИР-1 ЛТ».
Экстрагирование плодов сенны александрийской проводили разными методами (модифицированной мацерацией, перколяцией и реперколяцией) из навесок одной и той же выборки сырья, при одинаковых условиях, соотношение сырье / экстрагент составляет 1:10. Извлечения представляли собой темную, мутную жидкость, а при отстаивании образовывался осадок. В качестве экстрагента использовали спирт этиловый 40% (как показавший преимущества в фармакологических экспериментах).
Модифицированная мацерация. Сырье делили на три равные части. Первую часть настаивали 12 часов, вторую -6 часов, третью - 30 мин на кипящей водяной бане. Далее сырье отжимали, извлечение отстаивали двое суток на холоде (при температуре 8°С) для осаждения балластных веществ, затем отфильтровывали [6-8].
Перколяция. Метод перколяции включает три последовательно протекающие стадии: намачивание сырья (набухание сырья), настаивание, собственно перколяция. Экстракция осуществлялась с использованием лабораторного перколятора. Перколяцию проводили по методике ГФ СССР XI издания [6].
0.01_:_;_;_;_
200 300 400 500 600 700
Wavelength(nm)
РИС. 1.
Электронные спектры исходного раствора (1) и щелочно-аммиачного раствора (2) густого экстракта плодов сенны александрийской.
0.0|_:_:_:_:_
200 300 400 500 600 700 Wavelength(mn)
РИС. 2.
Электронные спектры исходного раствора (1) и щелочно-аммиачного раствора (2) сеннозида В.
▲1
5щ
Реперколяция. Проводили с использованием батареи из трех лабораторных перколяторов по методике ГФ СССР XI издания [6].
Оценку слабительного эффекта проводили с помощью следующей методики. Белые беспородные крысы-альбиносы обоих полов массой 300 г, накормленные последний раз за 6 часов до эксперимента (стандартный рацион вивария), были помещены отдельно в клетки, застеленные чистой фильтровальной бумагой. Опытные и контрольные группы были составлены из 10 животных каждая. Исследуемые препараты вводили животным в опытных группах внутрижелудочно в объемах, эквивалентных дозировкам 25 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг, 300 мг/кг в пересчете на антрацен-производные (таблаца 3). В случае большого объема вводимых препаратов (более 8 мл) густой экстракт разводили в меньшем объеме воды (таблица 4). Параллельно проводился контроль (вода - для изучения слабительного действия водных извлечений антра-ценсодержащих растений).
Через 18 часов после введения изучаемых образцов под-считывалось общее количество фекалий от каждого животного всех анализируемых групп. Процент увеличения кала и доли влажных фекалий от их общего количества считался слабительным эффектом.
Результаты и их обсуждение
На основании проведенных исследований выбран метод экстрагирования - перколяция, и подобраны оптимальные условия экстрагирования из плодов сенны александрийской (таблица 1).
Полученное очищенное извлечение упаривали под вакуумом для отгонки экстрагента на роторном испарителе модели «ИР-1 ЛТ» для получения густого экстракта из плодов сенны александрийской с влажностью не более 25%.
В ходе разработки методики количественного определения суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской изучены УФ-спектры густого экстракта и стандартного раствора сеннозида В. Исследование УФ-спектров показало, что максимум поглощения щелочно-аммиачного раствора густого экстракта плодов сенны александрийской в длинноволновой области спектра находится при 530+2 нм (рис. 1), что соответствует спектральным характеристикам и других антраценпроизводных [9].
В длинноволновой области электронного спектра щелоч-но-аммиачного раствора сеннозида В также наблюдается четкий максимум поглощения при 530+2 нм (рис. 2). Следовательно, в качестве аналитической длины волны может быть использовано значение 530 нм, а стандартным образцом может служить доминирующий антрагликозид -сеннозид В, причем в случае отсутствия стандарта в расчетной формуле может быть использовано теоретическое значение удельного показателя поглощения (Е) - 240.
Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской.
Около 0,2 г (точная навеска) густого экстракта плодов сенны александрийской растворяют при нагревании в 30 мл 40% спирта этилового в колбе емкостью 100 мл. Полученный раствор переносят количественно в мерную
колбу на 50 мл, доводят объем до метки 40% спиртом этиловым и перемешивают (раствор А).
1 мл раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 530 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Примечание: Приготовление раствора сеннозида В-стандартного образца. Около 0,02 г (точная навеска) сеннозида В помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем
ТАБЛИЦА 1.
Результаты количественного содержания суммы антраценпроизводных в извлечении плодов сенны александрийской на спирте этиловом 40% (1:10) в зависимости от способа получения
№ Метод экстрагирования Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на сеннозид В, %
1 Мацерация 0,18±0,002
2 Перколяция 0,22±0,003
3 Реперколяция 0,12±0,002
ТАБЛИЦА 2.
Метрологические характеристики методики количественного определения содержания суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской
п f X S Р, % t (РЛ) дх Е, %
11 10 10,2 0,201 95 2,23 ±0,45 ±4,40
ТАБЛИЦА 3.
Характеристика лекарственного препарата на основе плодов сенны александрийской, вводимых животным
Название лекарственного препарата Содержание антраценпроизводных в пересчете на сенно-зид В (сенна), в % Объем вводимого препарата, г (препарат предварительно растворялся в необходимом объеме воды) Доза вводимого препарата в пересчете на антраценпроизвод-ные
Густой экстракт плодов сенны александрийской 10,2 0,014 5 мг/кг
0,03 10 мг/кг
0,04 15 мг/кг
0,06 20 мг/кг
0,07 25 мг/кг
ТАБЛИЦА 4.
Результаты изучения слабительного действия фитопрепарата на основе плодов сенны александрийской
Название лекарственного препарата Средняя масса фекалий, г
Доза вводимого препарата (в пересчете на антраценпроизводные)
5 мг/кг 10 мг/кг 15 мг/кг 20 мг/кг 25 мг/кг
Контроль (с водной нагрузкой 3 мл) 1,242
Густой экстракт плодов сенны александрийской 2,65 4,26 4,44 4,83 4,28
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А сен-нозида В). 1 мл раствора А сеннозида В помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 530 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Содержание суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской в процентах (X) в пересчете на сеннозид В вычисляют по формуле:
Л. —-,
Д, * т * 50 * 1 * 25
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
Do - оптическая плотность раствора РСО сеннозида В;
т - масса густого экстракта, г;
т0 - масса РСО сеннозида В, г;
При отсутствии стандартного образца сеннозида В для расчета содержания суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской в процентах (X) может быть использована упрощенная формула расчета:
/)*50*50
Л — -,
т* 240*1
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
240 - удельный показатель поглощения () щелочно-аммиачного раствора РСО сеннозида В при 530 нм.
Содержание суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны (пересчете на сеннозид В) варьирует от 10,0±0,02 до 10,3±0,02%.
Результаты статистической обработки проведенных опытов показывают, что ошибка единичного определения суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,40%.
Метрологические характеристики метода количественного определения суммы антраценпроизводных в густом экстракте плодов сенны александрийской представлены в таблице 2.
Результаты исследования слабительного действия густого экстракта плодов сенны александрийской свидетельствуют о выраженном фармакологическом эффекте. Так, на фоне действия препарата на основе плодов сенны александрийской максимальный слабительный эффект достигается в дозе 20 мг/кг (таблица 3).
Выводы
1. Изучены условия экстракции антрагликозидов из плодов сенны александрийской; определены оптимальные условия: методом экстрагирования выбрана перколяция, соотношение сырье / экстрагент» - 1:10, экстрагент - спирт этиловый 40%.
2. Разработана технология получения густого экстракта плодов сенны александрийской и решены вопросы его стандартизации.
3. В ходе фармакологических экспериментов установлена статистически значимая слабительная активность густого экстракта плодов сенны александрийской.
ЛИТЕРАТУРА
1. Справочник РЛС: лекарственные средства и препараты. Инструкция, применение, описание [Электронный ресурс]. Электрон. дан. 2011. Режим доступа: http://www.rlsnet.ru - Загл. с экрана.
Spravochnik RLS: lekarstvennye sredstva ipreparaty. Instruktsiya, primenenie, opisanie [Elektronnyy resurs]. Elektron. dan. 2011. Rezhim dostupa: http:// www.rlsnet.ru - Zagl. s ekrana.
2. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. 963 с.
Kurkin V.A. Osnovy fitoterapii: Uchebnoe posobie dlya studentov farmatsevticheskikh vuzov. Samara: «Ofort»; GOU VPO «SamGMU Roszdrava», 2009. 963 s.
3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. Изд. 2-е, перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. 1239 с.
Kurkin V.A. Farmakognoziya: uchebnik dlya studentov farmatsevticheskikh vuzov. 2-e izd., pererab. I dop. Samara: «Ofort», GOU VPO «SamGMU Roszdrava», 2007. 1239 s.
4. European Pharmacopoeia. 6-th Ed. Rockville: United States Pharmocopoeial Convention, Inc., 2008.
5. Куркин В.А., Шмыгарева А.А. Новые подходы к стандартизации листьев сенны. Химия растительного сырья. 2016. № 1. С. 71-77.
Kurkin V.A., Shmygareva A.A. Novye podkhody k standartizatsii list'yev senny. Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 2016. № 1. S. 71-77.
6. Государственная фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. Вып. 2. М. 1990. 400 с.
Gosudarstvennaya farmakopeya SSSR. Odinnadtsatoe izdanie. Vyp. 2. M. 1990.400 s.
7. Государственная фармакопея Российской Федерации: Вып. 3. МЗ РФ. 13-е изд. М.: Медицина, 2015. 1294 с.
Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii: Vyp. 3. MZ RF. 13-e izd. M.: Meditsina, 2015. 1294 s.
8. Чуешов В.И., Чернов М.Ю., Хохлова Л.М. Промышленная технология лекарств: учебник для вузов: в 2-х т. Т. 2. Харьков, 2002. 650 с.
Chueshov V.I., Chernov M.Yu., Khokhlova L.M. Promyshlennaya tekhnologiya lekarstv: uchebnik dlya vuzov: v 2-kh t. T. 2. Kharkov, 2002. 650 s.
9. Зайцева Н.В. Сравнительное исследование химического состава различных органов щавеля конского. Аспирантский вестник Поволжья. 2012. № 5-6. С. 279-281.
Zaytseva N.V. Sravnitel'noe issledovanie khimicheskogo sostava razlichnykh organov shchavelya konskogo. Aspirantskiy vestnik Povolzh'ya. 2012. № 5-6. S. 279-281.
