CC BY
8У1ЦШНА ежемесячный научно-практический медицинский журнал
Кыргызстана
разработка подходов к проведению зтиотропной терапии инфекций, вызываемых псевдомонадами, образующими биоплёнки
С.Е. Сарсенбаев
Военный клинический госпиталь Министерства обороны Республики Казахстан, г. Алматы, Казахстан
Биопленка пайда кылуучу псевдомонаддар чыгаруучу инфекцияны этиотроптук дарылоонун
жолдорун иштеп чыгуу.
С.Е.Сарсенбаев
Developing approaches to etiotropic therapy of infections caused by biofilm-forming
pseudomonades
S.E. Sarsenbaev
Military Clinical Hospital of the Ministry of Defense of the Republic of Kazakhstan, Almaty
Resume. We studied in vitro activity of antibacterial drugs getting into cells of eukaryotes (azithromycin, laevofloxacin, ciprofloxacin), separately and in combination with the enzyme preparation papain against biofilm-forming pseudomonades. It is established that in the presence of the antibacterial preparations acting intracellularly, the formation of biofilms with clinical isolates of pseudomonades decreases. Papain increases the action of antibacterial preparations related to depression of the biofilms formation by pseudomonades.
Псевдомонады - грамотрицательные, не ферментирующие глюкозу, оксидазоположительные бактерии, обусловливающие как внутрибольнич-ные, так и экстрагоспитальные инфекции. Данная группа бактерий широко распространена на территории Казахстана, особенно в водной среде, в том числе на предметах больничной обстановки, в растворах лекарственных препаратов и даже дезинфектантов [1].
Большинство псевдомонад — это прежде всего госпитальные микроорганизмы, которые наиболее часто колонизируют секреты дыхательных путей (особенно у военнослужащих, находящихся под ИВЛ) и мочу, а также кожу рук персонала.
Устойчивость к антибактериальным препаратам у псевдомонад является важной терапевтической проблемой. В отличие от энтеробакте-рий, у бурхольдерий она может быть как хромосомной (B. cepacia имеет 2 хромосомы), так и плазмидной (выработка пенициллиназ и цефа-лоспориназ). Кроме того, устойчивость к антибактериальным препаратам у данного вида может быть обусловлена изменениями в клеточной мембране или во внутриклеточной среде. Способность псевдомонад образовывать биоплёнки значительно повышает их резистентность к антибактериальным препаратам [2]. В то же время известно, что некоторые препараты, например, левофлоксацин, активны в отношении псевдомонад, как находящихся в планктонной форме, так и образующих биоплёнки [3].
В этой связи целью настоящего исследования явилось изучение in vitro активности антибактериальных препаратов, проникающих в
клетки эукариотов (азитромицин, левофлоксацин, ципрофлоксацин), изолированно и в сочетании с ферментным препаратом папаин в отношении образующих биоплёнки псевдомонад.
Материалы и методы
Антибактериальные препараты
Выбор антибактериальных препаратов был обусловлен, во-первых, их хорошей биодоступностью, в частности, способностью проникать внутрь клеток макроорганизма, а во-вторых, практикой их клинического применения у больных муковисцидозом и нозокомиальными псев-домонадозами. В исследование был включён один антибиотик (азитромицин) и два фторхи-нолона (левофлоксацин и ципрофлоксацин), полученные из аптеки Военного клинического госпиталя Министерства Обороны Республики Казахстан (ВКГ МО РК).
Штаммы псевдомонад
В исследование были включены клинические изоляты, полученные от больных терапевтического и хирургического профиля, находившихся на стационарном лечении в ВКГ МО РК, всего 1019 культур, в том числе 429 — полученных от пациентов с соматической патологией и 590 — от пациентов с хирургической патологией.
Видовой состав использованных штаммов был следующим: Pseudomonas aeruginosa — 601 изолят (58,98%), P. cepacia — 249 (24,44%), P. maltophilia — 89 (8,73%), P. putida — 46 (4,51%), P. stutzeri — 29 (2,85%), P. alcaligenes — 3 (0,29%), P. diminuta — 2 (0,20%).
Оценка выживаемости псевдомонад после
РАЗРАБОТКА ПОДХОДОВ К ПРОВЕДЕНИЮ ЭТИОТРОПНОй ТЕРАПИИ ИНФЕКЦИЙ..
воздействия антибактериальных препаратов
осуществлялась в 24-часовых биоплёнках в присутствии противомикробного агента изолированно и в сочетании с ферментным препаратом (папаин) по изменению оптической плотности и образованию колониеобразующих единиц (КОЕ) на твёрдой питательной среде. КОЕ определяли, снимая материал со дна 10 лунок пластиковых планшетов с биоплёнками псевдомонад, который объединяли в один пул и высевали на плотные питательные среды после двукратного разведения. Контролем служил интактный пул, получаемых из 10 лунок без добавления антибактериальных препаратов и ферментов.
результаты исследования и их обсуждение
Все использованные штаммы обладали культу-ральными и тинкториальными свойствами, характерными для данного вида микроорганизмов, согласно «Определителю бактерий Берджи» (2004). При выращивании на плотных питательных средах псевдомонады образовывали колонии, колоние-подобные сообщества, смешанные сообщества, а в лунках планшет - и биоплёнки. Биоплёнки изученных штаммов через 24 часа роста покрывали всю поверхность дна использованной посуды непрерывным «ковром» с зонами утолщения, образованными многослойными скоплениями клеток и участками, в которых при световой микроскопии бактерии не выявляются.
Минимальные подавляющие концентрации (МПК) у различных видов псевдомонад находились примерно в одном диапазоне и колебались от 0,2 до 50,0 мг/л; МПК50 определялась как медиана из 25 измерений и составила 2,0 — 8,0 мг/л.
формирование микробных сообществ псевдомонад в присутствии папаина и действие фермента на уже сформированные биоплёнки
Добавление папаина в питательную среду одновременно с засевом псевдомонад для получения микробных сообществ у всех изученных штаммов вызывало снижение оптической плотности биоплёнок (100%). Действие папаина на бактериальные биоплёнки оценивали, добавляя одновременно с засевом бактерий растворы, содержащие фермент в количестве от 0,25 мкг / мл до 500 мкг / мл (концентрации 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 5,0; 10,0; 15,0; 50,0; 100,0; 125,0; 250,0; 500,0 мкг / мл). Состояние биоплёнки определяли через 24 часа инкубации при 37°С. Оптическая плотность биоплёнок, выращенных при добавлении папаина в количестве от 5 до 15,0 мкг/мл, не отличалась от контрольных, при более высоких концентрациях фермента отмечалось снижение их оптической плотности.
В присутствии папаина в биоплёнке зарегистрировано также снижение числа КОЕ. Вместе с тем, имеется несоответствие в степени снижения оптической плотности биоплёнки и уменьшения
в ней числа КОЕ. В целом папаин, добавленный в низких концентрациях (от 15,0 до 50,0 мкг / мл, вызывает уменьшение оптической плотности биоплёнки более чем на 20%, не приводя к изменениям числа КОЕ. Максимальное снижение числа КОЕ в биоплёнках у различных видов псевдомонад было схожим и наблюдалось при концентрации папаина свыше 50,0 мкг/мл. Дальнейшее увеличение концентрации фермента не приводило к дополнительному, существенному уменьшению числа КОЕ, однако оптическая плотность биоплёнки продолжала снижаться.
При действии на сформированные биоплёнки, папаин также вызывает снижение их биомассы. Уменьшение оптической плотности 24-часовых биоплёнок псевдомонад достигало 64% и зависело от концентрации фермента.
действие на биоплёнки псевдомонад антибактериальных препаратов, способных проникать внутрь клетки
Действие на биоплёнки антибактериальных препаратов, способных проникать в клетки эукариот, было исследовано на примере ципрофлоксацина, левофлоксацина и азитромицина. Полученные результаты свидетельствуют, что данные препарты в количествах от 1 до 100 МПК, влияют на формирование, а также действуют на уже сформированные биоплёнки испытанных штаммов. Полного угнетения образования биоплёнок не происходит ни в одном случае, что можно объяснить наличием в биоплёнке гетерогенной бактериальной популяции, представители которой отличаются активностью энергетических процессов, транспортных систем и т.п. Можно говорить, что азитромицин и фтор-хинолоны проникают через липидсодержащую поверхностную оболочку биоплёнок псевдомонад различных видов, вызывая снижение её оптической плотности.
Совместное действие папаина и антибактериальных препаратов было изучено добавлением последних при засеве пула псевдомонад в субингибирующих концентрациях (ниже МПК в 5 раз). Антибактериальные препараты, добавленные при посеве снижали оптическую плотность образовавшейся биопленки в среднем на 10-15% (азитромицин) и 25-35% (фторхинолоны). При совместном действии фермента и антибактериального препарата зарегистрировано усиление угнетения формирования биоплёнок Комплексы препаратов с папаином снижали оптическую плотность биоплёнки на 60-70%.
выводы
1. В присутствии антибактериальных препаратов, проникающих внутриклеточно, снижается образование биоплёнок клиническими изолятами псевдомонад.
2. Папаин потенцирует действие антибактериальных препаратов, направленное на снижение образования биоплёнок псевдомонадами.
МЕДИЦИНА
ежемесячный научно-практическии медицинским журнал
Кыргызстана
литература:
Китаров Б.А. Инфекционный контроль в профилактике нозокомиальныхинфекций: Автореф. ... к.м.н. -Алматы, 2003. - 28 с.
Bacterial biofilms / Ed. Tony Romero. - Springer-Verlag:
Berlin; Heidelberg, 2008. - 296p. 3. Moskowitz S.M., Foster J.M., Emerson J., Burns J.L. Clinically feasible biofilm susceptibility assay for isolates of Pseudomonas aeruginosa from patients with cystic fibrosis // J. Clin. Microbiol. - 2004. - V. 42. - P. 1915-1922
УДК 616.25-002 5-07
дифференциальная диагностика туберкулезного
плеврита
Сейилканов Б. К.
Национальный центр фтизиатрии, г. Бишкек, Кыргызская Республика
опко чел кабыгынын кургак учук дартын, айырмалап дарт аныктоосу
Сейилканов Б. К.
Опко чел кабыгынын кургак учук дарты, баардык опко чел кабык ооруларынын арасынан биринчи орунду ээлейт жана 30%-70% тузот. Опко чел кабыгынын кургак учук дартын аныкташ азыркы учурда оор бойдон калууда.
озгочо создор: кургак учук, опко чел кабыгынын дарты, торакоскопия.
Differential diagnostics of tuberculous pleurisy
Seilkanov B. K.
National Centre for Phthisiology, Bishkek, Kyrgyz Republic
Tuberculous pleurisy is one the most important etiological factors of pleural effusions and accounts for 30%-70 % of cases. At present the differential diagnostics of tuberculous pleurisy is a complicated task.
Key words: tuberculosis, pleurisy, thoracoscopia.
Актуальность: В структуре общей заболеваемости, частота синдрома плеврального выпота достигает 3,8%. В клинике внутренних болезней частота синдрома от 2,7% до 10% больных находящихся в стационаре, а у хирургических больных этот показатель составляет 10%. В этиологической структуре плевральных выпотов одно из первых мест занимает туберкулезный плеврит и составляет 30% - 70% случаев. Несмотря на богатый опыт, накопленный отечественной и зарубежной медициной по диагностике, тактике введения и лечения экссудативных плевритов, они по-прежнему остаются проблемой в плане установления их этиологической принадлежности. В клинической практике до настоящего времени при экссудатив-ном плеврите в большинстве стационаров чаще всего выполняется разгрузочная плевральная пункция с эвакуацией жидкости, в лучшем случае проводится проба Ривольта, реже цитологическое исследование экссудата без полноценного анализа цитоза. Поздняя диагностика этиологии экссуда-тивного плеврита с частой аспирацией жидкости для верификации природы выпота может приводить к осложнению-формированию и усилению спаечного процесса, развитию эмпиемы плевры, при которых требуется хирургического вмеша-
тельство. В настоящее время дифференциальная диагностика туберкулезного плеврита остается сложной задачей.
Туберкулезный плеврит может быть как самостоятельной формой туберкулеза, так и осложнением любой формы туберкулеза легких. Это обусловлено анатомической и функциональной связью между плевральными листками, лимфатическими узлами средостения и легких.
Туберкулезная этиология плеврита в большинстве случаев устанавливается только на основании лимфоцитарного характера экссудата, часто без комплексного обследования больного, как показывает практика не всегда себя оправдывает.
Целью улучшения диагностики плевритов туберкулезной этиологии, проводилось комплексное обследование больных по следующему алгоритму:
I. Анамнез заболевания, клиническое обследование, рентгенография органов грудной клетки (в прямой и боковой проекциях).
II. УЗИ, ЛФД («Спектролюкс-МБ»), ЭКГ (подозрение на транссудат). Бактериоскопия мокроты.
III. Диагностическая торакоскопия с прицельной биопсией.
