CC BY
26
ИММУНОЛОГИЯ
ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 578.82/.83.083.3
Марданлы С.Г., Авдонина А.С.
РАЗРАБОТКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА G К ОТДЕЛЬНЫМ АНТИГЕНАМ ВИРУСА КРАСНУХИ МЕТОДОМ ИММУННОГО БЛОТТИНГА В ФОРМАТЕ «WESTERN BLOT»
ЗАО «ЭКОлаб», 142530, г. Электрогорск, Московская область, Россия
Разработана отечественная тест-система для выявления антител класса G к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western Blot». Новая тест-система предназначена для проведения подтверждающих и дифференцирующих исследований в диагностике краснушной инфекций. Она имеет чувствительность и специфичность, не уступающие чувствительности и специфичности своего аналога - тест-системы «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» («EUROIMMUNAG», Германия).
Ключевые слова: краснушная инфекция; вирус краснухи; антитела класса G; иммунный блоттинг. Для цитирования: Марданлы С.Г., Авдонина А.С. Разработка набора реагентов для выявления антител класса G к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot». Клиническая лабораторная диагностика. 2018; 63 (11): 696-701 DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-ll-696-701
Mardanly S.G., AvdoninaA.S.
DEVELOPMENT OF A TEST KIT FOR THE DETECTION OF IGG-ANTIBODIES TO INDIVIDUAL ANTIGENS OF RUBELLA VIRUS BY IMMUNOBLOTTING (WESTERN BLOT)
Closed Joint stock Company «EKOlab», 142530, Elektrogorsk, Moscow region, Russian Federation
A Russian test kit for detecting IgG-antibodies to individual antigens of Rubella virus by immunoblotting (Western Blot) was designed. The new test kit is intended for confirmation ofpositive screening results and for differentiation of stages of infection. It has .sensitivity and .specificity not conceding one ofits analogues, the «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» («EUROIMMUN AG», Germany).
Keywords: Rubella; Rubella virus; IgG-antibodies; immunoblotting.
For citation: Mardanly S.G., Avdonina A.S. Development of a test kit for the detection of IgG-antibodies to individual antigens
of Rubella virus by immunoblotting (Western blot). Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory
Diagnostics). 2018; 63 (11): 696-701 (inRuss.). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-696-701
For correspondence: Avdonina Alexandra Sergeevna, the head of Research and Production Department «STI», vice-head of the
Advanced technology ; e-mail: ekolab-avdonina@mail.ru
Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests.
Acknowledgment. The work was carried out within the framework of scientific work on the basis of Closed Joint Stock Company «EKOlab».
Received 30.10.2018 Accepted 06.11.2018
Последние десятилетия ознаменовались резким снижением заболеваемости краснухой во всех регионах Земли, в которых была организована и регулярно проводится вакцинация детей против этой инфекции. Однако, ее медико-социальная значимость по-прежнему велика, а потребность в эффективных методах ее лабораторной диагностики не только не уменьшилась, но даже увеличилась в связи с необходимостью дифференциации иммунологического статуса, вызванного первичной инфекцией, от поствакцинальных состояний.
Для корреспонденции: Авдонина Александра Сергеевна, нач. научно-производственного отделения «ИППП», зам. нач. отдела перспективных разработок; e-mail: ekolab-avdonina@mail.ru
Для такой дифференциации может быть недостаточно использования иммуноферментных тест-систем (ИФТС), определяющих наличие в исследуемых образцах антител разных классов к возбудителю, их содержание и аффинитет. В ряде случаев результаты таких исследований не дают оснований для однозначного заключения о наличии или отсутствии инфекционного процесса, тем более что, по данным ВоиЬу Е. et а1. [2], оценки одних и тех же исследуемых образцов, полученные с использованием тест-систем разных производителей, могут не только количественно отличаться друг от друга, но быть прямо противоположными даже в качественном отношении.
В связи с этим существенно возрастает диагностическое значение иммунного блоттинга (ИБ), позволя-
ющего проводить исследование наличия антител к отдельным антигенам возбудителя, поскольку динамика антителообразования независимо от присутствия соответствующих клинических проявлений тесно связана как с возникновением и развитием краснушной инфекции, так и с поствакцинальными процессами в организме [3, 5, 6, 8, 11, 13, 14, 17- 19, 22-24, 26, 27].
В вирионе краснухи выделены три иммунологиче-ски значимых антигена - капсидный (С-белок) и два поверхностных гликопротеина оболочки (Е1 и Е2) [9, 12, 21, 25].
Антиген С - негликозилированный белок, молекулярная масса которого зависит от условий электрофореза: при электрофорезе в восстановленных условиях (в присутствии ß-меркаптоэтанола) она составляет 33 килодальтон (кДа), а в невосстановленных условиях выделяется его димер с молекулярной массой около 66 кДа [4, 16].
Молекулярная масса Е1 - 58 кДа, молекулярная масса Е2 - 42-48 кДа [10, 20].
Wilson K. M., Di Camillo C., Doughty L., and Dax E. M. [27], исследуя в ИБ (в формате «Western blot») сыворотки сероконверсионной панели, которая состояла из девяти образцов, полученных через 19, 37, 43, 50, 57, 71, 80, 88 и 107 дней после появления симптомов крас-нушной инфекции, показали очевидную зависимость наличия и интенсивности окрашивания зон, соответствующих отдельным антигенам возбудителя, от стадии инфекционного процесса, во время которой получены исследуемые образцы (рис. 1). Иначе говоря, подтверждена значимость ИБ для диагностики краснухи и оценки стадии текущего инфекционного процесса.
Однако на сегодняшний день для ИБ при диагностике краснухи могут быть использованы только импортные тест-системы - наборы производства фирм «EUROIMMUN AG» (Германия) и «Microgen» (Германия), что делает безусловно актуальной задачу разработки и внедрения в практику их отечественного аналога.
Целью данной работы явилась разработка имму-ноферментной тест-системы (на основе нативного ли-зата вируса краснухи) для выявления антител класса G к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot».
Материал и методы. Для получения иммуносор-бента использовали лизат вируса краснухи фирмы «Biokit» (Испания). В качестве твердой фазы при изготовлении иммуносорбента была использована нитро-целлюлозная мембрана фирмы «Sartorius» (Германия).
При получении иммуносорбента применяли следующие методы:
1. Вертикальный электрофорез лизата вируса краснухи в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-электрофорез, денатурирующие условия по Laemmli U.K. [15]) и ß-меркаптоэтанола (восстановленные условия), приводящий к разделению белков (антигенов) по молекулярному весу.
2. Электроперенос разделенных антигенов лизата вируса краснухи из геля на нитроцеллюлозную мембрану (блоттинг).
3. Выявление нанесенных на мембрану антигенов
IMMUNOLOGY kDa
Hill!:
57 71 80 88 107 Дни после появления симптомов
Рис.1. Результаты иммунного блоттинга сывороток сероконверсионной панели [27].
с помощью иммунного блоттинга с последующей визуальной оценкой результатов исследования.
Для детекции вирусспецифических IgG, связавшихся с антигенами иммуносорбента, использовали козьи антитела против IgG человека, конъюгиро-ванные со щелочной фосфатазой, фирмы «Jakson» (США). Для индикации реакции использовали окрашивающий раствор фирмы «Kem-En-Tec» (Дания), содержащий 5-бром-1-хлор-3-индолилфосфат и ни-троголубой тетразолий.
В качестве референсного материала при оценке чувствительности разработанной тест-системы были исследованы сыворотки стандартной панели положительных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», содержащих IgG к отдельным антигенам вируса краснухи (СОП+-Краснуха^ - 12 образцов). В качестве референсного материала при оценке специфичности разработанной тест-системы были исследованы сыворотки стандартной панели отрицательных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», не содержащих антитела к вирусу краснухи (СОП-Краснуха - 12 образцов). Образцы данных панелей изготавливали из сывороток, полученных в коммерческой лаборатории «ИНВИТРО» (г. Москва) и предварительно исследованных на наличие или отсутствие IgG к вирусу краснухи и подтвержденных в тест-системе «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» фирмы «EUROIMMUN AG» (Германия). Дополнительным критерием отбора сывороток явилось отсутствие в них антител к возбудителю сифилиса - Treponema pallidum, вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1,2), гепатитов В и С, а также антигенов p24 ВИЧ-1 и HBsAg по результатам скринингового исследования в ИФА.
В качестве клинического материала при оценке диагностической чувствительности и специфичности разработанной тест-системы были использованы сыворотки, полученные из Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора (г. Москва). Сыворотки были предварительно протестированы на наличие IgG к вирусу краснухи с помощью тест-системы «ИФА-Краснуха-IgG» фирмы ЗАО «ЭКО-лаб» (Россия).
Статистическая обработка полученных результатов выполнена в соответствии с рекомендациями по стати-
19 37 43 50
ИММУНОЛОГИЯ
са белков на нитроцеллюлозную мембрану;
- определение условий последующей обработки мембраны;
- оптимизация состава остальных компонентов тест-системы (буферные растворы для промывания стрипов и разведения сывороток, конъюгат и окрашивающий раствор);
- подбор оптимальных условий проведения анализа (разведение образца, время инкубаций).
Первый этап в разработке новой тест-системы был связан с отработкой технологии изготовления имму-носорбента.
Электрофоретический анализ антигенного состава лизата вируса краснухи ф. «Biokit» (Испания) показал наличие в нем всех основных высокоспецифичных антигенов: димера поверхностных гликопротеинов Е1 и Е2 (молекулярная масса 96-98 кДа), поверхностного гликопротеина Е1 (58 кДа), поверхностного гли-копротеина Е2 (42 кДа) и мономера капсидного белка вируса С (33 кДа). Результаты данного исследования представлены на рис. 2.
В ходе испытаний было установлено, что для более четкого электрофоретического разделения белков по молекулярному весу необходимо использование двухфазного ПААГ с концентрацией акриламида 11,5 % в нижней фазе и 4% в верхней фазе.
На втором этапе были подобраны оптимальный состав реагентов для проведения анализа (раствор для разведения сывороток, промывочный раствор, конъю-гат) и отработана схема постановки ИБ. Были определены оптимальное разведение исследуемого образца, время инкубации стрипов иммуносорбента с сывороткой, конъюгатом и окрашивающим раствором.
Итогом разработки явилась тест-система «ИФА-Блот-Краснуха-IgG» следующего состава:
1. Иммуносорбент - полоски (стрипы) из ни-троцеллюлозной мембраны с сорбированными на них методом электропереноса отдельными антигенами вируса краснухи: gp 98 - gp 96 (димер гликопротеинов Е1-Е2), §р 58 (гликопротеин Е1), §р 42 (гликопротеин Е2), p 33 (С-белок); в виде контрольной линии нанесены антитела против IgG человека.
Таблица 1
Интерпретация результатов ИБ в тест-системе «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
Наличие IgG к антигенам вируса краснухи Обозначение Результат
Выявлены антитела хотя бы к одному из гликопротеинов + Положительный
Не выявлены антитела ни к одному из антигенов - Отрицательный
Выявлены антитела к антигену р 33 при отсутствии антител к гликопротеинам +/- Неопределенный
Таблица 2
Клиническая интерпретация результатов ИБ в тест-системе «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
Наличие IgG к поверхностным гликопротеинам Интерпретация
Е1 Е2
- - Отрицательный результат, возможна недавняя первичная инфекция или вакцинация
+ - Ранняя стадия краснухи или недавняя вакцинация. Не исключена поздняя стадия заболевания с задержкой, низким уровнем или отсутствием образования ^О к Е2
+ + Перенесенная краснушная инфекция или вакцинация. Исключена ранняя стадия заболевания
+/- +/- Неопределенный результат. Необходимы дополнительные исследования через 2 недели
Рис. 2. Результаты электрофоретического анализа антигенного состава лизата вируса краснухи.
1 - белковый маркер молекулярного веса; 2 - результат ИБ мембраны с нанесенными антигенами лизата вируса краснухи при исследовании сыворотки, положительной по наличию IgG к вирусу краснухи.
стическои оценке результатов клинических испытании медицинских изделий для in vitro диагностики [1].
Результаты и обсуждение. Для разработки новой тест-системы потребовалось решение следующих задач:
- определение оптимального количества лизата вируса краснухи для нанесения на поверхность ПААГ;
- подбор условий электрофореза и электроперено-
IMMUNOLOGY
Таблица 3
Результаты исследования сывороток стандартной панели положительных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб» «СОП+-Краснуха-G» в тест-системах «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» и «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
№ образца Результаты исследования в тест-системе...
«Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
наличие антител к антигенам. | оценка наличие антител к антигенам. | оценка
1 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
2 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
3 Е1, С положительный Е1, С положительный
4 Е1, С положительный Е1, С положительный
5 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
6 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
7 Е1, С положительный Е1, С положительный
8 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
9 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
10 Е1, С положительный Е1, С положительный
11 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
12 Е1, Е2, С положительный Е1, Е2, С положительный
Таблица 4
Результаты исследования сывороток стандартной панели отрицательных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб» «СОП-Краснуха-G» в тест-системах «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» и «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
Результаты исследования в тест-системе.
№ образца «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» «ИФА-Блот-Краснуха-IgG»
наличие антител к антигенам. оценка наличие антител к антигенам. оценка
1 - отрицательный - отрицательный
2 - отрицательный - отрицательный
3 - отрицательный - отрицательный
4 - отрицательный - отрицательный
5 - отрицательный - отрицательный
6 - отрицательный - отрицательный
7 - отрицательный - отрицательный
8 - отрицательный - отрицательный
9 - отрицательный - отрицательный
10 - отрицательный - отрицательный
11 - отрицательный - отрицательный
12 - отрицательный - отрицательный
2. Конъюгат - козьи антитела против IgG человека, конъюгированные со щелочной фосфатазой.
3. Окрашивающий раствор - 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат и нитроголубой тетразолий.
4. 5-кратный концентрат промывочного раствора [ПР(х5)].
5. Раствор для разведения сывороток (РРС).
6. Референс-стрип (или его фотография) - стрип с проявленным белковым профилем антигенов вируса краснухи: gp 98 - gp 96 (димер гликопротеинов Е1-Е2), §р 58 (гликопротеин Е1), §р 42 (гликопротеин Е2), p 33 (С-белок).
Результаты теста оцениваются визуально, интерпретация результатов для каждого исследованного образца осуществляется в зависимости от того, к каким антигенам были выявлены антитела (табл. 1).
Дифференциация первичной и ранее перенесенной инфекций достигается путем определения специфических IgG к поверхностным гликопротеинам Е1 и Е2 вируса краснухи. IgG к Е1 обнаруживаются через 4-6
дней после инфицирования, в то время как выявление IgG к Е2 возможно только через 3-4 месяца после начала инфекции (табл. 2).
В случае подозрения на инфекцию, вызванную вирусом краснухи во время беременности, необходимы дальнейшие серодиагностические исследования, например определение специфических IgM и авидно-сти специфических IgG. Выявление высокоавидных антител исключает возможность протекания острого инфекционного процесса в последние 4-6 недель.
Чувствительность разработанной тест-системы вначале была оценена на сыворотках стандартной панели положительных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», содержащих IgG к отдельным антигенам вируса краснухи (СОП+^раснуха-G - 12 образцов). В качестве тест-системы сравнения была использована тест-система «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» фирмы «EUROIMMUN AG» (Германия). Результаты данного исследования приведены в табл. 3.
Специфичность разработанной тест-системы бы-
ИММУНОЛОГИЯ
Таблица 5
Результаты оценки диагностической чувствительности (с доверительной вероятностью 95%) тест-системы «ИФА-Блот-Краснуха-
Исследованные образцы Число исследованных образцов Результаты исследования в ИБ Диагностическая чувствительность, %, не менее
Положительный Отрицательный
Сыворотки, содержащие IgG к вирусу краснухи 764 764 0 99,60
Таблица 6
Результаты исследования диагностической специфичности (с доверительной вероятностью 95%) тест-системы «ИФА-Блот-
Краснуха-IgG»
Исследованные образцы Число исследованных образцов Результаты исследования в ИБ Диагностическая специфичность, %, не менее
Положительный Отрицательный
Сыворотки, не содержащие IgG к вирусу краснухи 31 0 31 90,78
Таблица 7
Результаты сравнительных испытаний тест-систем «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» фирмы «EUROIMMUN AG» (Германия) и «ИФА-Блот-Краснуха-IgG» фирмы ЗАО «ЭКОлаб» на сыворотках, неопределенных по содержанию IgG к вирусу краснухи
Тест-система фирмы Результат ИБ
№ образца Наличие антител к антигенам... Оценка образца
димер Е1-Е2 Е1 Е2 С
EUROIMMUN 1 +/- + - + Положительный
ЭКОлаб +/- + - + Положительный
EUROIMMUN 2 +/- + - - Положительный
ЭКОлаб +/- + - - Положительный
EUROIMMUN 3 +/- + - - Положительный
ЭКОлаб +/- + - - Положительный
EUROIMMUN 4 +/- + - - Положительный
ЭКОлаб +/- + - - Положительный
EUROIMMUN 5 +/- + - + Положительный
ЭКОлаб +/- + - + Положительный
ла оценена на сыворотках стандартной панели отрицательных образцов предприятия ЗАО «ЭКОлаб», не содержащих антитела к вирусу краснухи (СОП-Краснуха - 12 образцов). Результаты данного исследования приведены в табл. 4.
Результаты, приведенные в табл. 3 и 4, показывают полное совпадение оценок сывороток панелей, полученных в исследовании, с их исходными характеристиками, что является свидетельством высокой диагностической чувствительности и специфичности разработанной тест-системы (нижние значения доверительных интервалов полученных при этом значений показателей диагностической чувствительности и специфичности для вероятности 0,95 составили 0,79).
Для более представительной оценки диагностической (клинической) чувствительности и специфичности тест-системы «ИФА-Блот-Краснуха-^О» были исследованы 800 сывороток, полученных в Федеральном центре гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора (г. Москва). Предварительное исследование на наличие ^О к вирусу краснухи в скрининговой тест-системе «ИФА-Краснуха-^О» фирмы ЗАО «ЭКОлаб» показало наличие ^О в 764 образцах и отсутствие ^О в 31 образце. 5 образцов были неопределенными (оптическая плотность в ИФА в пределах «серой зоны»).
Результаты оценки диагностической чувствительности и специфичности разработанной тест-системы приведены в табл. 5 и 6.
5 сывороток, неопределенных по содержанию IgG к вирусу краснухи в ИФА, были исследованы в разработанной тест-системе с целью оценки ее диагностической эффективности в качестве подтверждающего теста. Исследование проводили в сравнении с тест-системой «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» фирмы «EUROIMMUN AG» (Германия). Полученные результаты представлены в табл. 7.
Как следует из представленных в табл. 7 данных, все образцы, получившие в ИФА неопределенную оценку по наличию IgG к вирусу краснухи, в ИБ в обеих использованных тест-системах были оценены как положительные.
Таким образом, образцы, неопределенные в ИФА, получили в тест-системе «ИФА-Блот-Краснуха-IgG» окончательные оценки по наличию IgG к вирусу краснухи, полностью совпадающие с оценками, полученными в тест-системе «Anti-Rubella virus (IgG) WESTERNBLOT» фирмы «EUROIMMUN AG» (Германия), что подтверждает высокую диагностическую эффективность разработанной тест-системы как подтверждающего теста.
Выводы. Полученные результаты позволяют сде-
лать вывод о том, что разработанная тест-система «ИФА-Блот-Краснуха-IgG», предназначенная для выявления антител класса G к отдельным антигенам вируса краснухи методом иммунного блоттинга в формате «Western blot», имеет высокую диагностическую эффективность, не уступающую характеристикам импортного аналога.
Разработанная тест-система может быть использована для проведения подтверждающих и дифференцирующих исследований в диагностике краснушной инфекции.
Финансирование. Работа выполнена в рамках научной работы на базе ЗАО «ЭКОлаб».
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 2 - 27 см. REFERENCES)
1. Антонов В.С. Вопросы статистической оценки результатов клинических испытаний медицинских изделий для in vitro диагностики [Электронный ресурс]. - URL: http://www.ap-skld.ru/ Risunki/Antonov.pdf (дата обращения: 30.10.2018).
REFERENSES
1. Antonov V.S. Questions of statistical evaluation of the results of clinical trials of medical products for in vitro diagnostics. URL: http://www.ap-skld.ru/Risunki/Antonov.pdf (date of the application: 30.10.2018). (in Russian)
2. Bouthry E., Furione M., Huzly D., Ogee-Nwankwo A., Hao L., Adebayo A., Icenogle J., Sarasini A., Grazia Revello M., Grang-eot-Keros L., Vauloup-Fellousa Ch. Assessing Immunity to Rubella Virus: a Plea for Standardization of IgG (Immuno) assays. Journal of Clinical Microbiology. 2016; 54 (7): 1720-5.
3. Chaye H.A.H., Mauracher Ch.A., Tingle A.J., Gillam Sh. Cellular and Humoral Immune Responses to Rubella Virus Structural Proteins El, E2, and C. Journal of Clinical Microbiology. 1992; 30: 2323-9.
4. Clarke D.M., Loo T.W., Hui I. et al. Nucleotid sequence and in vitro expression of rubella virus 24S subgenomic mRNA encoding the structural proteins E1, E2 and C. Nucl. Ac. Res. 1987; 15: 1531-47.
5. Cusi M.G., Metelli R., Valensin P.E. Immune responses to wild and vaccine rubella viruses after rubella vaccination. Arch. Virol. 1989; 106: 63-72.
6. Cusi M.G., Rossolini G.M., Cellesi C., Valensin P.E. Antibody response to wild rubella virus structural proteins following immunization with RA 27/3 live attenuated vaccine. Archives of Virology. 1988; 101 (1-2): 25-33.
7. deMazancourt A., Waxham M.N., Nicolas J.C., Wolinsky Y.S. Antibody response to the rubella virus structural proteins in infants with the congenital rubella syndrome. J. Med. Virol. 1986; 79: 111-22.
8. Dimech W., Grangeot-Keros L., Vauloup-Fellousb Ch. Standardization of Assays That Detect Anti-Rubella Virus IgG Antibodies. Clinical Microbiology Reviews. 2016; 29 (1): 163-74.
9. Dorsett P.H., Miller D.C., Green K.Y., Byrd F.I. Structure and function of the rubella virus proteins. Rev. Infect. Dis. 1985; 7: 150-6.
IMMUNOLOGY
10. Ho-Terry L., Cohen A. The role of glycosylation on hemaggluti-nation and immunological reactivity of rubella virus. Arch. Virol. 1984; 79: 139-46.
11. Hornstein L., Levy U., Fogel A. Clinical rubella with virus transmission to the fetus in a pregnant woman considered to be immune. N. Engl. J. Med. 1988; 319: 1415-6.
12. Kalkkinen N., Oker-Blom K., Pettersson R.F. Three Genes Code for Rubella Virus Structural Proteins E1, E2a, E2b and C. J. Gen. Virol. 1984; 65: 1549-57.
13. Kangro H.O., Grint P.C.A., Hardiman A.E., Ho-Terry L., Terry G.M., Londesborough P. Abnormal antibody response against the rubella virus haemagglutinin. Serodiag. Immunother. Infect. Dis. 1989; 3: 161-5.
14. Katow S., Sugiura A. Antibody response to individual rubella virus proteins in congenital and other rubella virus infections. J. Clin. Microbiol. 1985; 21: 449-51.
15. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 . Nature. 1970; 227: 680-5.
16. Mauracher C.A., Mitchell L.A., Shukin R., Tingle A.G. pH-depen-dent solubility shift of rubella virus capsid protein . Virology. 1991; 181: 773-7.
17. Mauracher C.A., Mitchell L.A., Tingle A.J. Differential IgG avidity to rubella virus structural proteins. Journal of Medical Virology. 1992; 36 (3): 202-8.
18. Meurman O. Detection of antiviral IgM antibodies and its problems (a review). Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1983; 104:101-31.
19. Nedeljkovic J., Jovanovic T., Mladjenovic S., Hedman K., Peitsa-ro N., Oker-Blom Ch. Immunoblot analysis of natural and vaccine-induced IgG responses to rubella virus proteins expressed in insect cells . J. Clin. Virology. 1999; 14 (2): 119-31.
20. Oker-Blom C., Kalkkinen N., Kaariainen L. et al. Rubella virus contains one capsid protein and three envelope glycoproteins, E1, E2a and E2b. J. Virol. 1983; 46: 964-73.
21. Petterson R.F., Oker-Blom C., Kalkkinen N., Kallio A., Ulmanen I., Kaariainen L., Partanen P., Vaheri A. Molecular and anti-genic characteristics and synthesis of rubella virus structural proteins. Rev. Infect. Dis. 1985; 7: 140-9.
22. Serdula M.K., Halstead S.B., Wiegenga N.H., Herrman K.L. Serological response to rubella revaccination. JAMA. 1984; 251: 1974-7.
23. Tingle A.J., Chantler J.K., Pot K.H., Paty D.W., Ford D.K. Post-partum rubella immunization: association with development of prolonged arthritis, neurological sequelae and chronic rubella viremii. J. Infect. Dis. 1985; 152: 606-12.
24. Wandinger K-P., Saschenbrecker S., Steinhagen K., Scheper Th., Meyer W., Bartelt U., Enders G. Diagnosis of recent primary rubella virus infections: Significance of glycoprotein-based IgM serology, IgG avidity and immunoblot analysis. Journal of Virological Methods. 2011; 174 (1-2): 85-93.
25. Waxham M.N., Wolinsky J.S. A model of the structural organization of rubella virions. Rev. Infect. Dis. 1985; 7: 133-9.
26. Williams L.L., Wolinsky J.S., Cao S.N., Shannon B.T., Leguire L.E. Antibody response to rubella virus antigen and structural proteins in retinitis pigmentosa . J. Infect. Dis. 1992; 166 (3): 525-30.
27. Wilson K.M., Di Camillo C., Doughty L., Dax E.M. Humoral Immune Response to Primary Rubella Virus Infection. Clinical and Vaccine Immunology. 2006; 13 (3): 380-6.
Поступила 30.10.18 Принята к печати 06.11.18
