CC BY
172
ISSN 0202-5493. МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вып. 2 (151-152), 2012
РАЗРАБОТКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА
СНИЖЕНИЯ ВРЕДОНОСНОСТИ ФУЗАРИОЗА НА СОЕ
Л.В. Маслиенко,
доктор биологических наук Д.А. Курилова, научный сотрудник
ГНУ ВНИИМК Россельхозакадемии
Россия, 350038, г. Краснодар, ул. Филатова, д. 17
тел.: (861) 275-85-19, e-mail: biometod@yandex.ru
Ключевые слова: фузариоз, соя, антагонисты, грибы, бактерии, микробиопрепараты, скрининг, штаммы, ростостимуляция, антибиотическая активность, периодическое культивировоние
УДК 632.937:633.853.52
Введение. Соя поражается грибными, бактериальными и вирусными болезнями. В нашей стране особой вредоносностью отличаются болезни всходов и увядания растений, одним из возбудителей которых является Fusarium spp. [1; 2; 3]. На посевах сои фузариоз встречается повсеместно. Согласно литературным данным использование живых культур микроорганизмов в борьбе с фузариозными заболеваниями растений является наиболее интересным подходом. Этот метод микро-биозащиты не только менее опасен с точки зрения защиты окружающей среды, но и более обоснован с позиции эволюционного осмысления соотношения паразитических и сапрофитных свойств фузариев. Поскольку грибы рода Fusarium являются почвообитающими факультативными паразитами, способными длительное время вести сапрофитное существование, то интродукция антагонистов должна создавать дополнительное давление в сторону элиминирования агрессивных рас [4; 5].
Стратегия биологического метода защиты растений от болезней не ставит задачу полного уничтожения вредных организмов, а ориентируется на регулирование популяции патогена на уровне ниже экономического порога вредоносности [6]. Грамотное и своевременное применение микробиологических средств защиты растений на фоне высокой агротехники может значительно улучшить фитосанитарную обстановку посевов и значительно увеличить урожай, поскольку микробиологические средства защиты растений оказывают положительное влияние на растения и других членов агроце-нозов.
Целью данной работы являлась разработка эффективного и экологически допустимого микробиологического метода снижения вредоносности фузариоза на сое.
Материалы и методы. Объектом исследований служили: штаммы грибов и бактерий-антагонистов возбудителей болезней масличных культур, тест-культура возбудителя фузариоза сои, лабораторные образцы микробиопрепаратов. Грибы и бактерии, проявляющие антагонизм в отношении патогенных фузариозных грибов, были взяты из коллекции микроорганизмов лаборатории биометода ВНИИМК. В качестве тест-объекта для испытания антагонистической активности штаммов грибов и бактерий был выбран наиболее патогенный и агрессивный для сои изолят гриба Fusarium sporotrichiella Bilai var. poae (Pk.) Wr. emend Bilai, выделенный из корневой системы сои.
Определение антагонистической активности грибных и бактериальных штаммов проводили методом двойных (встречных) культур [7; 8] на картофель-но-сахарозном агаре (КСА) или среде Кинга В, при двух температурных режимах: 25 и 10 оС. Изучали характер взаимоотношений антагониста и патогена: наличие или отсутствие стерильных зон, их размер, изменение цвета, плотности, толщины и направления роста мицелия патогена. Все активные штаммы грибов
при совместном культивировании с возбудителем фузариоза изучали по пяти типам взаимоотношений [9]. Взаимоотношения бактерий с возбудителем фуза-риоза изучали по образованию стерильных зон антибиотического действия или обладающих высоким показателем подвижности [10].
Определение фитотоксичности штаммов проводили методом обработки семян сои опытными партиями микробиопрепаратов и методом погружения подрезанной корневой системы здоровых 7-дневных проростков сои в суспензию штаммов антагонистов. Для изучения ростостиму-лирующего влияния перспективных штаммов на проростки сои, семена обрабатывали опытными партиями микробиопрепаратов и помещали на проращивание в рулоны из фильтровальной бумаги (в течение 7 дней при температуре 25 оС). Параметрами для последующего анализа служили длина и масса корня и побега.
Защитный эффект жидких культур (ЖК) и водных суспензий (ВС) штаммов антагонистов прорастающего семени и подбор оптимальных норм их применения определяли на фоне искусственного заражения семян сои Е. sporotrichiella уаг. роае в лабораторных условиях во влажной камере методом агаровых блоков [11]. Контроль - чистые семена без нанесения инфекции и с нанесением инфекции. Опыт проводился при 25 оС. Активные штаммы антагонистов наращивали на подобранных средах. Перед обработкой семян определяли титр микробиопрепаратов. Титр ЖК и ВС во всех опытах определяли методом Коха [12].
Биологическую эффективность биопрепарата определяли по формуле [13]:
_ 100 х (а-Ь)
а '
где С - биологическая эффективность;
а - количество больных растений в контроле;
Ь - количество больных растений в варианте.
Для определения колонизирующей активности и защитного эффекта штаммов
антагонистов корней проростков сои использовали методические рекомендации по оценке и отбору растений подсолнечника на устойчивость к фузариозной корневой гнили [14]. Оценку степени поражения проростков возбудителем фузариоза производили согласно разработанной нами 6-балльной шкале.
Для создания искусственного фона заражения почвы фузариозом в лабораторных условиях на основе общепринятых методик [15; 16] нами были испытаны различные способы и нормы внесения инфекционного начала фитопатогена [17]. Учеты производили на 7 и 10-й день после посева.
Изучение физиологических особенностей перспективного штамма антагониста 14-3 Pseudomonas sp. проводили на жидкой питательной среде Кинга В. Культивирование микроорганизма осуществляли глубинным способом на качалке со скоростью вращения 195 об./мин, в колбах Эрленмейера (750 мл) при объеме среды 150 мл. Оптимальные параметры физиологических признаков определяли по количеству колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1,0 мл жидкой культуры (титр). Повторность в каждом опыте - 3-кратная. Для определения оптимальной температуры культивирования, штамм бактерии выращивали при температурах 20, 25, 30 и 35 °С. Для определения оптимальной кислотности среды, pH устанавливали в пределах 3, 5, 6, 7, 8, и 10, добавляя лимонную кислоту или щелочь (4Н раствор NaOH). Устанавливали оптимальные источники углеродного и азотного питания. Источниками углеродного питания служили глюкоза, сахароза, глицерин и меласса. Источниками азотного питания служили азотнокислый натрий, пептон, дрожжевой и кукурузный экстракты. При подборе оптимальных питательных сред для выращивания перспективного штамма бактерии испытывали ряд сложных питательных сред: мясо-пептонный бульон (МПБ), Кинга В, Чапека для бактерий, пептонодрожжевая, в состав которых вхо-
дят минеральные соли, сахара, микроэлементы, кукурузный и дрожжевой экстракты.
Для изучения динамики периодического роста, глубинное культивирование штамма бактерии осуществляли при оптимальных условиях в течение 4 суток, с предварительным внесением посевной (маточной) культуры (2 % от объема питательной среды). Для выращивания культуры использовали питательную среду Кинга В. Пробы для анализа брали через 8, 16, 24, 36, 48 и 72 часа после начала культивирования.
Антибиотическую активность определяли методом диффузии в агар [8].
Определение совместимости штаммов-продуцентов микробиопрепаратов с перспективными пестицидами проводили, используя модифицированный метод диффузии в агар, разработанный для определения антибиотической активности микроорганизмов [18; 19].
Результаты и обсуждения. На первом этапе скрининга тестировали 20 грибных штаммов из коллекции перспективных штаммов антагонистов фитопатогенов масличных культур лаборатории биометода ВНИИМК, представленных родами Trichoderma, Penicillium, Chaetomium, Trichothecium, Sordaria, Talaromyces и классом Basidiomycetes; и 26 бактериальных штаммов, представленных родами Bacillus и Pseudomonas.
В результате первичного скрининга штаммов грибов и бактерий антагонистов к возбудителю фузариоза сои F. sporo-trichiella var. poae при двух температурных режимах 25 и 10 °С наибольшую эффективность показали 12 штаммов антагонистов, среди которых 5 штаммов грибов: Tk-1 Trichoderma koningii, T-4 Trichoderma sp., Sm-1 Sordaria macro-spora, A-1 Basidiomycetes, Xk-1 Chaetomium olivaceum, и 7 штаммов бактерий: 12-2 Pseudomonas sp., 14-3 Pseudomonas sp., Sgrc-1 P. fluorescens, Far 8 Bacillus sp., 111 Bacillus sp., Б-5 B. liche-niformis, Б-12 B. licheniformis [20].
Следующим этапом скрининга стало исследование возможного токсического воздействия активных штаммов антагонистов на культуру сои. Анализ данных
показал, что тестируемые штаммы не оказывают негативного влияния на всхожесть семян и не вызывают увядания проростков. Более того, отмечено повышение всхожести семян по сравнению с контролем на 9,0-20,0 % [21].
Изучение ростостимулирующего влияния перспективных штаммов антагонистов на проростки сои показало, что наиболее сильное влияние штаммы оказывали на длину и массу корня. Максимальное увеличение длины корня (на 22,0-25,2 %) наблюдалось у штаммов грибов Xk-1 Ch. olivaceum, Tk-1 T. konin-gii. Максимальное увеличение массы корня (на 13,3-20,0 %) наблюдалось в вариантах с грибом Xk-1 Ch. olivaceum и бактериями 12-2 и 14-3 Pseudomonas sp. Влияние штаммов антагонистов на длину и массу стебля также отмечено, но в меньшей степени (2,6-11,5; 8,5-9,8 % соответственно) [21].
Определение защитного эффекта перспективных штаммов антагонистов прорастающего семени сои от фузариоза, а также отработку оптимальных норм расхода опытных образцов биопрепаратов проводили во влажной камере, используя метод агаровых блоков. Для бактериальных штаммов испытывались нормы от 0,5 до 3,0 л/т, для грибных штаммов от 2,0 до 4,0 л/т. Оптимальными были признаны: для бактериальных штаммов рода Pseudomonas 12-2 и Sgrc-1 - 1,0 л/т, для 14-3 -2,0 л/т; для грибных штаммов Xk-1 Ch. olivaceum и Pv-3 P. verrucosum - 3,0 л/т; для Sm-1 S. macrospora, Tk-1 Tr. koningii и А-1 Basidiomycetes - 4,0 л/т. Максимальная биологическая эффективность на фоне поражения фузариозом в контроле 58,6 % установлена у штаммов: 12-2 Pseudomonas sp. (65,9 %), Xk-1 Ch. olivaceum (59,0 %), 14-3 Pseudomonas sp. (52,2 %), Tk-1 T. koningii (49,8 %), Sm-1 S. macrospora и Sgrc-1 Pseudomonas sp. (47,6 %).
Изучение колонизирующей активности, а одновременно и защитного эффекта, показало, что на жестком (100 %) фоне заражения F. sporotrichiella var. poae максимальную эффективность проявили штаммы: 14-3 Pseudomonas sp., Pv-3 P. verru-
cosum, Б-5 B. licheniformis, Sgrc-1 P. fluo-rescens, 12-2 Pseudomonas sp., Sm-1 S. macrospora и Xk-1 Ch. olivaceum. В этих вариантах от 40,0 до 100 % проростков оказались жизнеспособными, тогда как в контрольном варианте жизнеспособных проростков не обнаружено.
Максимальная биологическая эффективность на фоне искусственного заражения семян сои фузариозом в почве отмечена у штаммов Xk-1 Ch. olivaceum (33,9 %), Tk-1 T. koningii (27,2 %) и 14-3 Pseudomonas sp. (20,3 %), при поражении в контроле 79,7 % [17].
Принимая во внимание положение о том, что успешный биоагент должен обладать комплексом положительных свойств на растение [22; 23], мы объединили весь спектр данных, полученных по скринингу активных штаммов антагонистов (рис. 1).
Рисунок 1 — Защитный эффект и колонизирующая активность на фоне искусственного заражения Fusarium sporotrichi-ella var. poae, а также ростостимулирую-щее действие микробиопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов при обработке семян сои: П — защитный эффект во влажной камере;
О — колонизирующая активность во
влажной камере; П — защитный эффект в почве; И — ростостимулирующее действие
перспективных штаммов антагонистов на проростки сои.
В результате анализа полученных экспериментальных данных в качестве продуцентов микробиопрепаратов для
защиты растений сои от фузариоза были отобраны штаммы Xk-1 Chaetomium olivaceum Cook et Ellis и 14-3 Pseudomonas sp. Данные штаммы не только обеспечивали эффективную защиту семян и проростков сои на жестком фоне искусственного заражения возбудителем фуза-риоза, но и активно колонизировали корень, одновременно оказывая росто-стимулирующее действие на культуру сои.
Согласно видовой идентификации штамма 14-3 Pseudomonas sp., проведённой в Центре «Биоинженерия» (г. Москва), изолят 14-3 является штаммом вида Pseudomonas chlororaphis.
Так как гриб Ch. olivaceum является продуцентом микробиопрепарата Хетомин, разработанного ранее в лаборатории биометода, основная часть дальнейших исследований проводилась по изучению бактериального штамма 14-3 P. chlororaphis.
Существенное значение для роста микроорганизмов имеет такой фактор внешней среды, как температура (табл. 1).
Таблица 1
Влияние температуры на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 P. chlororaphis в процессе периодического культивирования
Штамм Титр ЖК, КОЕ/мл
маточная культура температура, °С
20 25 30 35
14-3 P. chlororaphis 6,2х1010 1,4х109 2,9х1012 5,7х1012 2,3х1010
Максимальный титр клеток отмечен при 25 и 30 °С (2,9-5,7 х 1012). Следовательно, данный температурный диапазон является оптимальным для роста штамма 14-3 P chloгoгaphis.
Одним из важных факторов, определяющих нормальный рост бактерий, является реакция рН среды. При изменении ее в неблагоприятную сторону микроорганизм перестает расти даже в тех случаях, если все остальные условия окружающей среды будут оптимальными [25].
Максимальный титр штамма 14-3 отмечался при рН среды 5,0 (5,3 х 1014), достаточно высокий при рН 6,0-10,0 (от 3,2 х 1012 до 2,1 х 1013) (табл. 2). Лимитирующим оказалось значение реакции среды 3,0, при котором выживали лишь единичные клетки. Следовательно, для штамма 14-3 Р. chlororaphis оптимальным является достаточно широкий диапазон реакции среды - 5,0-10,0.
Таблица 2
Влияние реакции рН среды на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 в процессе периодического культивирования
Титр ЖК, КОЕ/мл
маточ- рН
Штамм ная
куль- 3,0 5,0 6,0 7,0 8,0 10,0
тура
14-3
Р. сЫс-rora- 4,7 х 1014 8,0 х 103 53 х 1014 2,1 х10в 6,0 х 1012 84 х1012 3,2 х1012
рЫя
Для определения оптимальных источников углеродного и азотного питания штамм 14-3 Р. chlororaphis выращивали при температуре 25,0 °С и рН среды 5,0. Максимальный титр штамма-продуцента отмечен в вариантах с добавлением глюкозы, глицерина и сахарозы (2,8-8,3 х 1012 КОЕ/мл). Также хорошее развитие культура бактерии получила в варианте с мелассой (2,1 х 1010 КОЕ/мл) (табл. 3).
Таблица 3
Влияние источников углерода на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 в процессе периодического культивирования
Штамм Титр ЖК, КОЕ/мл
маточная культура источник углерода
глицерин глюкоза сахароза меласса
14-3 Р. chloro-raphis 4,9х1014 4,0х1014 2,8х1014 8,3х1014 2,1х1012
При испытании источников азота установлено, что добавление кукурузного экстракта в среду приводит к полной гибели клеток. На питательной среде с добавлением азотнокислого натрия отмечен низкий титр штамма (3,5 х 10 КОЕ/мл). Тогда как
высокий титр штамма 14-3 наблюдался при использовании пептона и дрожжевого экстракта (2,1-4,4 х 1012 КОЕ/мл) (табл. 4).
Таблица 4
Влияние источников азота на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 в процессе периодического культивирования
Штамм Титр ЖК, КОЕ/мл
маточная культура источник азота
пептон дрожже -вой экстракт азотнокислый натрий кукурузный экстракт
14-3 Р. chloro-raphis 2,9х1014 2,1х1014 4,4х1014 3,5х105 0
Определение оптимальных питательных сред для культивирования штамма 14-3 P. chlororaphis проводили на сложных синтетических и органосинтетиче-ских средах (табл. 5).
Таблица 5
Влияние питательных сред на рост штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 в процессе периодического культивирования
Штамм Титр ЖК, КОЕ/мл
маточная культура с реда
Кинга В Чапека для бактерий пептоно-дрожжевая мясо-пептон- ный бульон
14-3 Р. cЫoro трЫ. 3,2х1014 3,5х1012 2,2х1010 4,8х1012 2,9х107
Максимальный титр отмечен при культивировании бактериального штамма на пептон-дрожжевой и среде Кинга В (3,54,8 х 101 КОЕ/мл). Также хорошее развитие культура получила на среде Чапека для бактерий (2,2 х 1010 КОЕ/мл). На МПБ был получен низкий титр (2,9 х 10 КОЕ/мл). При этом, принимая во внимание титр маточной культуры (3,2 х 1014 КОЕ/мл) и посевной объем (3,0 мл на 150 мл стерильной питательной среды), можно сделать вывод о том, что бактерии не размножались, а находились в состоянии покоя, сохраняя жизнеспособность.
Изучение кинетики роста штамма 14-3 Р. chlororaphis показало, что лучшими сроками культивирования данной бактерии являются 36-48 часов. Образцы жидкой культуры биопрепарата в этот период характеризовались высоким титром (1,6-
1,7 х 1013 КОЕ/мл) (табл. 6).
Таблица 6
Рост штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 в процессе периодического культивирования
Время культивирования, час Титр жидкой культуры штамма, КОЕ/мл
8 3,0 х 106
16 4,2 х 109
24 7,8 х 1012
36 1,6 х 1013
48 1,7 х 1013
72 1,8 х 1012
96 4,3 х 1010
Антибиотическую активность штамма-продуцента определяли в зависимости от срока периодического культивирования методом диффузии в агар. Установлено, что максимальная антибиотическая активность штамма 14-3 Р. chlororaphis к возбудителю фузариоза сои, которая оказывала стойкое сдерживающее действие на патоген, наблюдалась через 72-96 часов культивирования (табл. 7).
Таблица 7
Антибиотическая активность штамма бактерии-антагониста 14-3 Р. сЫототарЫ8 к возбудителю фузариоза Е. sporotrichiella уат. роае при периодическом культивировании
Вариант Срок культи- Срок выращивания Fusarium sporotrichiella var.
вирования poae, сут.
штам- рост мицелия патогена, балл
ма, час 2 3 4 5 6 7 10 15
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Контроль 14-3 Р. chlor- 8 2 5 6 6 6 6 6 6
oraphis 2 6 6 6 6 6 6 6
Контроль 14-3 Р. ^Ь- 16 2 5 6 6 6 6 6 6
roraphis 2 6 6 6 6 6 6 6
Контроль 14-3 Р. chloro- 24 2 6 6 6 6 6 6 6
raphis 2 6 6 6 6 6 6 6
Контроль 14-3 Р. chloro- 36 2 6 6 6 6 6 6 6
raphis 3 6 6 6 6 6 6 6
Продолжение таблицы 7
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Контроль 14-3 Р. chloro- 48 2 5 6 6 6 6 6 6
raphis 2 6 6 6 6 6 6 6
Контроль 14-3 Р. chloro- 72 3 6 6 6 6 6 6 6
raphis 2 4 5 5 5 5 5 5
Контроль 14-3 Р. chloro- 96 3 6 6 6 6 6 6 6
raphis 2 4 4 5 5 5 5 5
Примечание: 2 балла - рост мицелия патогена на 15,0-25,0 % площади питательной среды; 3 балла - рост мицелия патогена на 30,0-40,0 % площади питательной среды; 4 балла - рост мицелия патогена на 45,0-60,0 % площади питательной среды; 5 баллов - рост мицелия патогена на 65,0-80,0 % площади питательной среды; 6 баллов - рост мицелия патогена на 85,0-100,0 % площади питательной среды.
Таким образом, для штамма 14-3 Р. chlororaphis установлены оптимальные условия (1 - 25-30 оС, рН - 5-10) и сроки культивирования (с учетом синтеза максимальной концентрации антибиотических веществ) - 72 часа.
Для установления возможности совместного применения грибного штамма Хк-1 СК. о1^асвит и бактериального штамма 14-3 Р. chlororaphis определяли их совместимость методом встречных культур (рис. 2).
Рисунок 2 - Совместимость перспективных штаммов-продуцентов микробиопрепаратов на 10 сутки инкубации: а - штамм 14-3 Р. chlororaphis; б - штамм Хк-1 СК. о!^асвит.
На 7-е сутки инкубации наблюдалась явная антагонистическая активность штамма 14-3 Р. chlororaphis по отношению к штамму Хк-1 ^. olivaceum, которая выражалась в образовании антибиотической зоны (14 мм), тогда как в чистой культуре гриб занял всю площадь питательной среды чашки Петри. На 10-е сутки совместного культивирования расстояние между штаммами сократилось до 8 мм, однако вблизи зоны мицелий штамма Хк-1 был тонкий, паутинистый, плодовые тела отсутствовали. На 14-е сутки инкубации изменений не произошло. Таким образом, нами установлено, что штаммы Хк-1 и 14-3 несовместимы между собой, что исключает их совместное применение.
Следующим этапом исследований стало определение совместимости разработанных лабораторных образцов микробиопрепаратов и химических фунгицидов, разрешённых к применению на сое, с целью определения возможности их совместного применения в интегрированной системе защиты сои от комплекса болезней. Установлено, что штамм 14-3 Р. chlororaphis совместим со всеми фунгицидами, рекомендуемыми в настоящее время для обработки семян сои: ТМТД, ВСК (тирам, 400 г/л), Максим, КС (флу-диоксонил, 25 г/л), Фундазол, СП, (бено-мил, 500 г/кг). Это делает возможным его применение в сложных композиционных составах для обработки семян сои. Грибной штамм Хк-1 ^. olivaceum оказался совместим только с ТМТД, ВСК (тирам, 400 г/л), который оказывал на него незначительное ингибирующее действие. Такие препараты, как Максим, КС (флу-диоксонил, 25 г/л) и Фундазол, СП, (беномил, 500 г/кг) существенно задерживали рост гриба, что исключает их совместное применение [26].
Выводы. По итогам ступенчатого скрининга отобраны перспективные штаммы-продуценты микробиопрепаратов: Хк-1 СЫ. olivaceum и 14-3 Р. chloro-raphis, обеспечивающие эффективную
защиту семян и проростков сои на жёстком фоне искусственного заражения фу-зариозом во влажной камере и в почве, активно колонизирующие корень, одновременно оказывающие стимулирующее влияние на культуру сои.
Для штамма 14-3 Р. chlororaphis установлены оптимальные условия (температура 25,0-30,0 оС, рН 5-10) и сроки культивирования (с учетом синтеза максимальной концентрации антибиотических веществ) - 72 часа, элементы питания (источники углерода - глюкоза, глицерин, сахароза и меласса; источники азота - пептон и дрожжевой экстракт), питательные среды (пептон-дрожжевая и Кинга В).
При изучении совместимости лабораторных образцов микробиопрепаратов и химических фунгицидов была определена возможность их совместного применения в интегрированной системе защиты сои от комплекса болезней (14-3 Р. chloro-raphis - с ТМТД, ВСК, Максим, КС, Фундазол, СП; Хк-1 Chaetomium olivaceum - с ТМТД, ВСК). Совместное же применение штаммов Хк-1 и 14-3 не представляется возможным.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ № 09-08-00726-а и программы У.М.Н.И.К., государственный контракт №14046.
Список литературы
1. Соя / Под ред. Ю.П. Мякушко, В. Ф. Баранова. - М: Колос, 1984. - 332 с.
2. Подкина, Д.В. Использование комбинированных инфекционных фонов при оценке устойчивости сои к корневой гнили / Д.В. Подкина, И.А. Котлярова // Научн.-техн. бюл. ВНИИМК. - Краснодар, 1988. - № 3. - С. 25-27.
3. Заостровных, В.И. Вредные организмы сои и система фитосанитарной оптимизации её посевов / В.И. Заостровных, Л.К. Дубовицкая (под ред. В.А. Чулки-ной). - Новосибирск, 2003. - 528 с.
4. Ван дер Планк, Я.Е. Устойчивость растений к болезням / Я.Е. Ван дер Планк. - М.: Колос, 1972. - 255 с.
5. Калько, Г.В. Биологическое обоснование создания биопрепаратов, эффективных в отношении фузариозных заболеваний сельскохозяйственных культур / Галина Валентиновна Калько // Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - СПб, 1996. - 22 с.
6. Cook, R.J. The nature and practice of biological control of plant pathogens / R.J. Cook, K.F. Baker // St. Paul (Minn.): Amer. Phytopathol. SoCh. - 1983. - 539 р.
7. Егоров, Н.С. Выделение микробов-антагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С. Егоров. - М.: Изд-во Московского университета, 1957. - 79 с.
8. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров. - М.: Изд-во МГУ; Наука, 2004. - 528 с.
9. Пестинская, Т.В. О взаимоотношениях грибов обитающих в почве / Т.В. Пестинская // Ботан. журн. - 1958. - Т. 43, № 9. - С. 1270-1277.
10. Асатурова, А.М. Скрининг штаммов бактерий, проявляющих антагонизм к возбудителям фузариоза подсолнечника / А.М. Асатурова, Л.В. Маслиенко // Болезни и вредители масличных культур (сб. науч. работ ВНИИМК). - Краснодар, 2006. - С. 82-89.
11. Зайчук, В.Ф. Об устойчивости подсолнечника к гнилям / В.Ф. Зайчук // Масличные культуры. - М., 1983. - № 1. -С. 16-17.
12. Практикум по микробиологии / Ф.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. За-харчук [и др.]. - М.: Издательский центр «Академия», 2005. - 608 с.
13. Груздев Г.С. Практикум по химической защите / Г.С. Груздев- М.: Колос, 1983. - 230 с.
14. Антонова, Т.С. Методические рекомендации по оценке и отбору растений подсолнечника на устойчивость к фуза-риозной корневой гнили, вызываемой Fusarium sporotrichiella var. sporotri-
М^ёе. Sherb / Т.С. Антонова, С.Л. Сау-кова. - Краснодар: ВНИИМК, 2005. - 20 с.
15. Подкина, Д.В. Вопросы защиты сои от болезней и вредителей и создание устойчивых сортов / Д.В. Подкина // Науч. -техн. бюл. ВАСХНИЛ. - Новосибирск, 1987. - № 29. - С. 16-20.
16. Корнейчук, Н.С. Методические аспекты оценки однолетних кормовых люпинов на устойчивость к фузариозу и антракнозу / Н.С. Корнейчук // Тезисы докладов. - Минск, 1991. - С. 222.
17. Курилова, Д.А. Создание искусственного фона заражения почвы в лабораторных условиях для определения эффективности перспективных штаммов антагонистов возбудителей фузариоза сои / Д.А. Курилова // Сборник материалов 6-й Международной конференции молодых учёных и специалистов «Инновационные направления исследований в селекции и технологии возделывания масличных культур» (24-25 февраля 2011 г.) - Краснодар, 2011. - С. 153-157.
18. Егоров, Н.С. Выделение микробов-антагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С. Егоров. - М.: Изд-во МГУ, 1957. - 79 с.
19. Маслиенко, Л.В. Биологический метод защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от болезней / Л.В. Маслиенко // Агро XXI. - 1999. - № 8. - С. 9.
20. Маслиенко, Л.В. Первичный скрининг штаммов грибов и бактерий антагонистов к возбудителю фузариоза сои / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, А.М. Асатурова, Е.Ю. Шипиевская // Масличные культуры: Науч. -техн. бюл. ВНИИМК. - Краснодар, 2009. - Вып. 1 (140). - С. 114-119.
21. Маслиенко, Л.В. Влияние лабораторных образцов биопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов фитопатогенов на проростки сои / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, А.М. Асату-рова, Е.Ю. Шипиевская // Масличные культуры: Науч.-техн. бюл. ВНИИМК. -
ISSN 0202-5493. МАСЛИЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Научно-технический бюллетень Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур. Вып. 2 (151-152), 2012
Краснодар, 2010. - Вып. 1 (142-143). -С.104-108.
22. Боронин, А.М. Ризосферные бактерии рода Pseudomonas, способствующие росту и развитию растений / А.М. Боронин // Соросовский образовательный журнал. - 1998. - № 10. - С. 25-31.
23. Биопрепараты в защите растений / М.В. Штерншис, Ф.С. Джалилов, И.В. Андреева [и др.]. - Новосибирск: Агро-Лит, 2003. - 140 с.
24. Свешникова, Е.В. Новые бактерии рода Pseudomonas - антагонисты фитопа-тогенов и перспективы их использования в сельскохозяйственной практике / Елена Витальевна Свешникова // Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Уфа, 2003. - 22 с.
25. Ваксман, З.А. Антагонизм микробов и антибиотические вещества / З.А. Ваксман. - М.: Гос. изд-во иностр. лит., 1947. - 391 с.
26. Маслиенко, Л.В. Влияние микробиопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов возбудителей фу-зариоза на культуру сои в полевых условиях / Л.В. Маслиенко, Д.А. Курилова, Е.Ю. Шипиевская, В.Л. Махонин // Масличные культуры: Науч. -техн. бюл. ВНИИМК. - Краснодар, 2011. - Вып. 2 (148-149). - С. 145-148.
