CC BY
27
3. М е д в е д е в, Г. Ф. Частота проявления, лечение и профилактика болезней мет-ритного комплекса // Актуальные проблемы ветеринарного акушерства и репродукции животных: материалы международной научно-практической конференции (Горки, 1012 октября 2013). - Горки, 2013. - С. 465-473.
4. C o h e n, R. O. Isolation and antimicrobial susceptibility of actinomyces pyogenes recovered from the uterus of dairy cows with retained fetal membranes and postparturient endo-metritis / R. O. Cohen, M. Bernstein, G. Ziv // Theriogenology, 1975. - V. 43: 1389-1397.
5. Defining and diagnosing postpartum clinical endometritis and its impact on reproductive performance in dairy cows / S. I. LeBlanc, T. F. Duffield, K. E. Leslie et al. // Journal of Dairy Science, 2002. - V. 85. - Issue 9. - P. 2223-2236.
6. Defining postpartum uterine disease in cattle / I. M. Sheldon [et al.] // Theriogenology, 2006. - V. 65. - P. 1516-1530.
7. G r i f f i n, J. F. T. Nonspecific uterine infection end bovine fertility / J. F. T. Griffin, P. J. Hartigan, W. R. Nunn // Theriogenology, 1974. - V. 1. - P. 91-106.
8. H i l l m a n, R. Reproductive diseases / Robert Hillman and Robert O. Gilbert // Rebhun's Diseases of dairy cattle. Second edition. Thomas J. Divers, Simon F. Peek. - Copyright © 2008, Elsevier Inc. - P. 395-446.
9. N o a k e s, David E. Veterinary Reproduction and Obstetrics. Ninth Edition / Edited by. David E. Noakes, Timothy J. Parkinson, Gary C.W. England // W. B. Saunders Elsevier. Ltd., 2009. - P. 407-425, 198-201.
10. The effect of treatment of clinical endometritis on reproductive performance in dairy cows / S. I. LeBlanc, T. F. Duffield, K. E. Leslie et al. // Journal of Dairy Science, 2002. -V. 85. - Issue 9. - P. 2237-2249.
УДК [619:616.995/122]:636.22/.28
РАЗРАБОТКА, МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА «ГИСТЕРОСАН МК» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОРОВ С МЕТРИТНЫМ КОМПЛЕКСОМ
Г. Ф. МЕДВЕДЕВ, Н. И. ГАВРИЧЕНКО, И. А. ДОЛИН УО «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия», г. Горки, Могилевская обл., Республика Беларусь, 213407
А. А. СИВАКОВ, А. И. ЕВСЕЕНКОВА ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования» г. Минск, Республика Беларусь, 220013
(Поступила в редакцию 01.02.2015)
Введение. Предложено много лекарственных средств для лечения коров с воспалительными процессами репродуктивных органов (мет-ритным комплексом). Но нередко их применение осуществляется без учета разнообразия и особенностей этих заболеваний.
73
Метритный комплекс включает задержание последа, метрит, эндометрит и пиометру. У этих болезней общие этиологические факторы, для них характерны переход одной болезни в другую и в значительной мере однотипные способы лечения [1].
При эндометрите отмечается ограниченное инфицирование спон-гиозного слоя эндометрия, отсутствие системных признаков заболевания, наличие гнойных выделений (клинический эндометрит) или присутствие лейкоцитов в маточных или цервикальных выделениях. Чаще заболевание возникает после задержания последа, двойневой беременности и токсического послеродового метрита.
Обширное инфицирование глубоких слоев матки, включая серозную оболочку, вызывает развитие периметрита. При поражении широких маточных связок возникает параметрит [1, 2].
Септический (острый послеродовой, токсический) метрит развивается в результате травм и инфицирования эндометрия и глубоких слоев матки, проявляется системными признаками заболевания, включая токсемию, в течение 1-10 дней после родов. Хроническая инфекция поверхностных листков или глубоких слоев матки с накоплением в ее полости гнойного экссудата характерна для пиометры. Системные признаки болезни отсутствуют, в яичниках сохраняется желтое тело. Маточные железы кистозно перерождаются и выделяют большое количество секрета, который превращается в гнойный экссудат [2, 6].
Анализ источников. Реально в период лактации эндометрит проявляется в 7,5-8,9 % случаев [2]. Однако, основываясь на результатах ректального исследования и выявления гнойно-слизистых вагинальных выделений, заболевание регистрируют у 40-95 % животных [2-5]. Так, из 140 включенных в опыт первотелок воспалительные процессы в матке и/или во влагалище различной тяжести развились у 134 (95,7 %) [3]. У коров привязного содержания болезни метритного комплекса проявлялись у 52,5 % животных, в т. ч. задержание последа у 12,7 %; при беспривязном содержании проявление патологии зарегистрировано у 47,4 % животных [4]. Это несоответствие можно объяснить тем, что для послеродовой матки характерен проходящий воспалительный процесс. Выздоровление животных может происходить без лечения. Способствуют этому полноценное кормление, адекватные гигиенические условия, своевременное восстановление половой цикличности. Но в практике для диагностики и основания начала лечения коров используются результаты наблюдения и ректального исследования [2-8].
74
На наличие заболеваний коров эндометритом в стаде могут указывать более высокая частота убоя (в 1,7 раза больше, чем при отсутствии заболевания) и снижение числа оплодотворенных животных (на 27 %). Меньше и величина интервала от отела до оплодотворения: для нормальных коров до 120 дней, с заболеванием - 150 дней или более. Сроки первого осеменения изменяются не сильно, но оплодотворяе-мость уменьшается на 27-40 % [2, 4].
Степень инфицирования матки и развитие воспалительного процесса в основном зависит от степени загрязнения в период отела. Оказание акушерской помощи, разрыв промежности, задержание последа, негигиенические условия содержания и приема родов, жировое перерождение печени, гипокальцемия и залеживание способствуют попаданию микроорганизмов в матку [2-6]. Недостаточное и избыточное кормление, недостаток микроэлементов (селена), задержка циклической активности яичников (более 37 дней) также предрасполагают к маточной инфекции и развитию эндометрита [2, 6].
Разнообразие видового состава и патогенности микроорганизмов, выделяемых из матки коров, указывает на необходимость разработки эффективных терапевтических ветеринарных средств.
Цель работы - разработать состав, методы контроля и определить терапевтическую эффективность антибактериального препарата при заболеваниях метритного комплекса и влияние его на репродуктивную способность коров.
Материал и методика исследований. Препарат разработан на кафедре биотехнологии и ветеринарной медицины УО БГСХА, а методы контроля его состава - в научно-исследовательской лаборатории ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования» (БелМАПО). В составе препарата («Гистеросан МК») три антибиотика: норфлоксацина никотинат, спектиномицина сульфат тетрагидрат и гентамицина сульфат.
Норфлоксацин - противомикробный препарат из группы хиноло-нов, уроантисептик. Обладает широким спектром бактерицидного действия. Активен в отношении многих грамотрицательных микроорганизмов: E. coli, Salmonella spp., Klebsiella spp., Shigella spp., Proteus spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae и др., а также в отношении микроорганизмов, продуцирующих бета-лактомазы, и микоплазм.
Два других вещества: спектиномицин и гентамицин - антибиотики из группы аминогликозидов. Спектиномицин и гентамицин действуют
бактерицидно в отношении грамотрицательных микроорганизмов, дополняют друг друга. На анаэробов, инфицирующих матку, аминогли-козиды действуют слабо, но этот недостаток компенсируется действием норфлоксацина.
Определение активных фармацевтических ингредиентов в препарате «Гистеросан МК» выполняли методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии. Аналитическая система «Agilent 1200/6410» с дегазатором, системой градиентного элюирования, устройством автоматического ввода пробы, термостатом колонок и масс-спектрометрическим детектором. Колонка ZORBAX SB C18 2,1x30 мм, размером частиц 3,5 мкм. Подвижная фаза ацетонитрил - 5 % (об./об.), муравьиная кислота; режим элюирования - градиентный. В качестве стандартных образцов использовали химически чистые антибиотических веществ, входящих в состав препарата. Растворы сравнения и испытуемые растворы готовили путем растворения в воде. Приготовленные растворы хранили в холодильнике при температуре 3-8 °С. Срок хранения 1 сутки.
Терапевтическая эффективность препарата и его влияние на репродуктивную способность коров изучена на фермах РУП «Учхоз БГСХА». Проведено 3 опыта. В первом опыте 35 коров с послеродовым метритом и эндометритом (в т. ч. 15 с задержанием последа) лечили гистеросаном МК. Вводили препарат в матку в 50 мл дистиллированной воды от 1 до 9 раз (соответственно 3, 10, 5, 4, 5, 3, 2, 2 и 1 животных) с интервалом в 4-5 дней. Во втором опыте 20 коровам с послеродовым метритом и эндометритом делали от 1 до 6 внутримато-чных введений препарата (соответственно 1, 5, 3, 4, 3 и 4 животных). В этом опыте учтено только 11 осемененных коров. В третьем опыте 17 животным с послеродовым метритом и эндометритом (в т. ч. 6 с задержанием последа) делали от 2 до 8 внутриматочных введений препарата (соответственно 1, 2, 4, 6, 2, 1 и 1 животных). Трем животным с задержанием последа и двум - с послеродовым метритом на 2 день после отела вводили суппозитории ЛС/ТГ.
Одновременно с лечением осуществляли контроль состояния матки и яичников. Прекращали лечение, если при очередном клиническом исследовании не обнаруживали выделения воспалительного экссудата или же выделения из половых путей представляли собой светлую, прозрачную слизь, а шейка матки была хорошо сформирована. Осеменяли животных не ранее 42-х дней после отела. Материалы исследований обработаны с использованием Microsoft office Excel.
76
Результаты исследований и их обсуждение. Использованы экспериментальные серии препарата «Гистеросан МК», выпущенные по одной и две дозы в стеклянных флаконах вместимостью 10 см3, 20 см3.
Препарат содержит три субстанции, причем субстанция гентами-цина не является индивидуальным веществом, а представляет собой смесь из 5 веществ. Использование фармакопейных методик для определения каждой субстанции оказалось нецелесообразным, поскольку близкие физико-химические свойства веществ не давали надежды на то, что стандартные методики обеспечат приемлемую специфичность.
В связи с этим был разработан простой и специфичный метод, позволяющий определять все действующие вещества, входящие в состав препарата «Гистеросан МК», в одном анализе. Метрологические характеристики разработанной методики представлены в табл. 1.
Т а б л и ц а 1. Предварительные нормативы внутреннего контроля
Компонент Ед. изм. Диапазон применения Правильность, % Повторяемость, % Внутрилабо- раторная точность, %
Гентамицина сульфат МЕ/ флакон 65000 -195000 3 3 5
Норфлоксацина никотинат г/ флакон 0,275 -0,825 1 2 3
Спектиномицина гидрохлорид МЕ/ флакон 105000315000 2 3 4
Растворы сравнения готовили вместе с испытуемыми растворами и поочередно подвергали хроматографическому анализу не менее 5 раз в режиме градиентного элюирования. Поток: 0,5 мл/мин.; градиент:
Время, мин. 5 % HCOOH, % MeCN, %
0 95 5
10 40 60
11 95 5 15 95 5
Объем инъекции: 5 мкл.
Аналитические сигналы регистрировали при помощи масс-спектрометрического детектора с источником ионизации электроспрей (ESI) в режиме SIM. Температура осушающего газа 300 °C, поток
77
7 L/min, распылитель 30 psig, напряжение капилляра +2000 В, время задержки 100 msec.
Компонент Полярность Фрагментор (V) Регистрируемый ион Ион, m/z
Гентамицин Положительная 125 [M+H]+ 464,3
Норфлоксацин Положительная 130 [M+H]+ 320,1
Спектиномицин Положительная 118 [М+НзО]+ 351,2
Обработку ионных хроматограмм и интегрирование площадей пиков выполняли при помощи программы «МаББНиШег». Количественный расчет проводили методом внешнего стандарта.
Для подтверждения подлинности активных фармацевтических ингредиентов раствор сравнения и испытуемый раствор анализировали в условиях количественного определения в режиме МЛМ. Масс-спектры ингредиентов в испытуемом растворе должны совпадать со спектрами ингредиентов из раствора сравнения. Настройки масс-спектрометра, родительские и дочерние ионы представлены ниже:
Компонент Формула Масса Родительский ион, т^ Дочерний ион, m/z Относ. отклик* Фрагментор, V Ячейка, V
322,1 100 2
Гентамицин C20H41N5O7 463,3 464,3 112,0 28 125 38
160,0 95 18
302,0 100 14
Норфлоксацин C16H18FN3O3 319,13 320,1 231,0 20 130 42
276,1 37 14
333,1 100 14
Спектиномицин C14H24N2O7 332,16 351,2 112,0 19 118 30
122,0 23 26
*- величина относительного отклика может изменяться в пределах 20 %.
Результаты испытаний стабильности препарата «Гистеросан МК» серии № 12082011, изготовленной 12.04.2011 г., приведены ниже:
78
Наименование показателя испытаний Нормируемое значение (характеристика) Результат испытаний Вывод о соответствии
Содержание норфлокса-цина никотината в 1 дозе препарата, г 0,55 ± 0,11 0,54 Соответствует
Содержание спектино-мицина в 1 дозе препарата, МЕ 210000 ± 42 000 200986 Соответствует
Содержание гентамицина в 1 дозе препарата, МЕ 130000 ± 26 000 115129 Соответствует
Подлинность норфлокса-цина никотината, спек-тиномицина дихлорида пентогидрата (спектиномицина гидрохлорида) и гентамицина сульфата Должен выдерживать испытания Испытания выдерживает Соответствует
Стабильность препарата подтверждена испытаниями образцов двух экспериментальных серий. Содержание действующих веществ находилось в пределах, установленных техническими условиями. Образцы выдержали экспериментальный срок хранения, что соответствует заявленному сроку хранения - 2 года. После утверждения ТУ и инструкции по применению препарат «Гистеросан МК» зарегистрирован в Государственном комитете по стандартизации Республики Беларусь.
Результаты одного из этапов производственных испытаний эффективности Гистеросана МК в качестве терапевтического средства для лечения коров с метритным комплексом приведены в табл. 2.
Для выздоровления подопытных животных необходимо было сделать в среднем от 2,8 до 4 внутриматочных введений Гистеросана МК. Продолжительность лечения колебалась от 10,8 до 14,4 дней. Учитывая тяжесть заболевания у многих животных, это является удовлетворительным результатом.
Показатели репродуктивной способности подопытных животных сравнены с показателями клинически здоровых коров. У 59 животных без патологии интервал от отела до первого осеменения в среднем составил 84,7±5,6 дней, а до плодотворного - 96,9±7,3 дней. Оплодотво-ряемость после 1-го осеменения 76,3 %, число осеменений на стельность 1,29±0,10. Выбыло 8,4 % животных, стельными из оставленных для продуктивного использования было 88,2 %.
Т а б л и ц а 2. Показатели терапевтической эффективности Гистеросана МК и репродуктивной способности коров с заболеваниями метритного комплекса
Показатели ( ы 1 1 ы 3т ) 1 Опыт 2 (п = 11) Опыт 3 (п = 17)
х ± х х ± " х х ± " х
Срок начала лечения после отела, дн. 8,1 ± 1,0 7,2 ± 1,5 16,6 ± 1,6
Число лечебных процедур 4,0 ± 0,4 3,7 ± 0,4 2,8 ± 0,1
Продолжительность лечения, дн. 14,4 ± 1,8 12,8 ± 4,6 10,8 ± 2,6
От последнего введения до первого осеменения, дн. 24,1 ± 3,8 24,1 ± 3,8
От отела до 1-го осеменения, дн. 111,0 ± 9,6 46,2 ± 6,3 51,5 ± 7,4
Оплодотворилось после 1-го осеменения, % 29,0 30,0 50,0
Индекс осеменения 1,77 ± 0,17 1,80 ± 0,15 1,58 ± 0,15
От отела до плодотворного осеменения, дн. 129,9 ± 12,4 102,5 ± 10,3 137,4 ± 8,4
Стельных коров, п (%) 19 (70,4) 8 (80,0) 12 (80,0)
Выбыло коров, п/% 8 / 22,8 1 (9,1) 2(11,7)
Показатели репродуктивной способности коров с заболеваниями метритного комплекса ниже. И это в большей мере связано с тяжестью заболевания и более поздним первым осеменением. Во всех трех опытах среди подопытных животных у многих наблюдалось полное задержание последа (особенно в 1 и 3 опытах), после мануального отделения оболочек проявлялся острый метрит или периметрит. По этой причине в первом опыте выбыло животных больше, чем в двух других опытах или из числа животных без патологии.
Во втором опыте тяжесть заболевания у коров была ниже (не было животных с задержанием последа). Продолжительность лечения была несколько меньше. Все показатели воспроизводительной способности, за исключением оплодотворяемости после первого осеменения, были сопоставимы с показателями коров без патологии.
В третьем опыте из семнадцати больных животных у 6 было задержание последа. До начала лечения гистеросаном МК пяти животным (трем с задержанием последа и двум - с послеродовым метритом) на второй день после отела вводили суппозитории ЛС/ТГ. Поэтому число введений гистеросана для выздоровления было меньше - 2,8 и продол-
жительность лечения составила 10,8 дней. Показатели воспроизводительной способности животных (за исключением интервала от отела до оплодотворения) были сопоставимы с показателями коров без патологии.
Заключение. Разработан препарат для лечения коров с заболеваниями метритного комплекса. Действующими веществами препарата являются антибиотики норфлоксацина никотинат, спектиномицина сульфат тетрагидрат и гентамицина сульфат.
Препарат растворяется в дистиллированной воде (одна доза в 50 мл) и вводится в матку больным животным каждые 3-5 дней до выздоровления. Число введений зависит от тяжести заболевания и варьирует от 1 до 9, в среднем 2,8±0,1-4,0±0,4; продолжительность лечения - от 10,8±2,6 до 14,4±1,8 дней. Процент выбраковки коров в двух опытах был близок стандарту, в третьем опыте превысил стандарт (до 10 %) и составил 22,8 %. В целом при использовании препарата достигается удовлетворительная репродуктивная способность животных: интервал от отела до оплодотворения не превышает максимально допустимый - 140 дней.
Разработан аналитический метод определения подлинности и массовой концентрации антибиотиков, входящих в состав препарата. Утверждены ТУ и инструкции по применению и ветеринарный препарат с коммерческим названием «Гистеросан МК» зарегистрирован в Государственном комитете по стандартизации Республики Беларусь.
ЛИТЕРАТУРА
1. В и л ь к е в и ч, А. С. Распространение акушерско-гинекологической патологии и видовой состав микроорганизмов при воспалительных процессах у коров / А. С. Вильке-вич, С. Б. Позняк // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства: сб. науч. тр. гл. редактор М. В. Шалак. - Горки: БГСХА, 2005. - Вып. 8. - Ч. 1. - С. 87-88.
2. М е д в е д е в, Г. Ф. Влияние заболеваний метритного комплекса и функциональных расстройств яичников на воспроизводительную способность коров при различных способах содержания / Г. Ф. Медведев, Н. И. Гавриченко, И. А. Долин // Животноводство и ветеринарная медицина. - 2013. - № 2. - С. 33-38.
3. М е д в е д е в, Г. Диагностика и лечение субклинического и хронического эндометрита / Г. Медведев, Н. Гавриченко, Т. Экхорутомвен // Ветеринарное дело. - 2013. -№ 11. - С. 35-40.
4. М е д в е д е в, Г. Причины, диагностика, лечение и профилактика метритного комплекса / Г. Медведев, Н. Гавриченко // Ветеринарное дело. - 2013. - № 10. - С. 37-40.
5. Рост, развитие и воспроизводительная функция первотелок голштинской селекции / Г. Ф. Медведев [и др.] // Ученые записки УО «Витебская ордена «Знак почета» Государственная академия ветеринарной медицины», 2011. - Т. 47. - Вып. 2. - Ч. 2. -С. 44-47.
6. Defining postpartum uterine disease in cattle / I. M. Sheldon [et al.] // Theriogenology, 2006. - V. 65. - P. 1516-1530.
7. H i l l m a n, R. Reproductive diseases / Robert Hillman and Robert O. Gilbert // Rebhun's Diseases of dairy cattle. Second edition. Thomas J. Divers, Simon F. Peek. - Copyright © 2008, Elsevier Inc. P. 395-446.
8. N o a k e s, David E. Veterinary Reproduction and Obstetrics. Ninth Edition / Edited by. David E. Noakes, Timothy J. Parkinson, Gary C.W. England // W. B. Saunders Elsevier. Ltd., 2009. - P. 407-425, 198-201.
УДК 619:616.5-002.828:636.2.053:612.017.1
ИММУННАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ТЕЛЯТ И ЕЕ КОРРЕКЦИЯ С ПОМОЩЬЮ БАЦИНИЛА ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ИХ ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ
Б. Т. МУРАД МААЛУФ, В. Н. АЛЕШКЕВИЧ УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 30.01.2015)
Введение. В комплексе мероприятий по борьбе с трихофитией ведущую роль отводят специфической профилактике. Однако иммунизация молодняка крупного рогатого скота не всегда дает ожидаемые результаты, ввиду иммунодепрессивного состояния иммунной системы из-за влияния на организм различных неблагоприятных факторов, связанных в первую очередь с неудовлетворительным кормлением животных и содержанием их в антисанитарных условиях.
Для повышения эффективности иммунизации, наряду с улучшением условий содержания и кормления животных, важное значение имеет стимуляция поствакцинального иммунитета иммуностимулирующими препаратами. Они нормализуют физиологическое и функциональное состояние иммунной системы и обеспечивают полноценный иммунный ответ у вакцинированных телят, что ведет к формированию у животных напряженного и длительного иммунитета.
У животного микрофлора желудочно-кишечного тракта играет важную роль в физиологическом и иммунологическом развитии, а также в общем метаболизме. Она стимулирует иммунную систему быстро реагировать на внедрение патогенов и через бактериальный антагонизм ингибировать колонизацию кишечника вредными или патогенными бактериями. При нарушении равновесия между полезной нейтральной микрофлорой и потенциально патогенными бактериями защитные функции организма ослабляются, возникают заболевания.
